挥发性脂肪酸总量的比色测定法
VFA测定操作规程-比色法
VFA分析操作规程------比色法VFA是厌氧发酵中微生物代谢的重要中间产物，甲烷菌利用VFA形成甲烷，属于产甲烷的原料，但厌氧反应器中过多积累VFA抑制甲烷菌的活性，测定VFA 含量作为分析厌氧发酵好坏的重要指标一.实验原理含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。
在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物——挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。
二.试验药品1. 1：1硫酸浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配制。
2. 4.5mol/L的氢氧化钠称取180g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水稀释至1L3. 10%硫酸羟胺溶液称取硫酸羟胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸馏水中。
4. 酸性氯化铁试剂将20.0g分析纯FeCl3 ·6H2O溶于500mL水中，准确加入20.0 mL浓硫酸并以蒸馏水稀释至1L。
5. 乙二醇分析纯乙二醇三. 试验仪器及设备800B型离心机25ml比色管电炉752紫外分光光度计PH计容量瓶、移液管、烧杯四、测定步骤1、采样测定脂肪酸的样品应特别注意样品的代表性，采集的样品应尽快分析测定，如需放置，应密闭储存在4℃冷藏冰箱中，保存时间不能超过24h。
2、步骤2.1 乙酸标准液的配制及标准曲线的绘制2.1.1 精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.0%）1.010g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。
2.1.2 准确吸取10 mg/mL乙酸标准溶液1.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL、25.0mL、30.0mL，分别置于100.0mL容量瓶内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得100mg/L、500 mg /L、1000 mg /L、1500 mg /L、2000 mg /L、2500 mg /L、3000 mg /L的乙酸标准系列液。
VFA的测定方法
VFA的测定方法一、药品：1、10%NaOH溶液2、NaOH标准溶液，0.1000mol/l3、10%磷酸溶液（或15%硫酸）4、酚酞指示剂二、步骤：1、于蒸馏瓶中放入100ml废水水样（其VFA不超过1800mg/l），加入几滴酚酞。
2、加入10%NaOH溶液使水样呈碱性，并使NaOH微过量。
开始蒸馏至蒸馏瓶中剩余液体为50-60ml为止。
3、冷却，加蒸馏水至蒸馏瓶中液体100ml左右。
用10ml10%磷酸溶液酸化，在接收瓶中（或烧杯）放入10-20ml蒸馏水，并使接收瓶与蒸馏瓶上的冷凝管连接，导入管应浸入接收瓶液面以下，蒸馏至瓶中液体为15-20ml为止，待蒸馏瓶冷却后加入50ml蒸馏水再次蒸馏至15-20ml为止（这次蒸馏结果差别不大时可以不做）。
4、用NaOH标准溶液滴定馏出液至淡粉色不消失为止。
三、计算：VFA（mg/l）=式中：VNaOH—滴定时消耗的NaOH标准溶液（ml）C¬—NaOH标准溶液的浓度（mol/l）Vs—废水水样的体积（ml）挥发性脂肪酸（VFA）的测定挥发性脂肪酸（VFA）是厌氧消化过程的重要中间产物，甲烷菌主要利用VFA形成甲烷，只有少部分甲烷由CO2和H2生成。
但CO2和H2的生成也经过高分子有机物形成VFA的中间过程。
由此看来，形成甲烷的过程离不开VFA 的形成，但是VFA在厌氧反应器中的积累能反映出甲烷菌的不活跃状态或反应器操作条件的恶化，较高的VFA（例如乙酸）浓度对甲烷菌有抑制作用。
因此在反应器运行中，出水VFA用作重要的控制指标。
在VFA测定中，常进行VFA总量测定，其单位以mmol/l或换算为按乙酸计，以单位mg/l表示，对VFA中各种低级脂肪酸（乙酸、丙酸等）的分别定量分析也是重要的，有时常需要知道以COD表示的VFA的量（即VFA以单位mgCOD/l）表示，此时也需要知道VFA中各种有机酸的含量，因此它们换算为COD的换算系数是不同的。
挥发性脂肪酸的测定——5种方法
5 VFA的滴定法分析（1）原理本法原理是将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH溶液滴定馏出液。
废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮，如果要同时测定氨态氮，以硼酸溶液吸收后滴定之。
因此此法可用于氨态氮和VFA的联合测定。
（2）药品①10%NaOH溶液②NaOH标准溶液，0.1000mol/l③10%磷酸溶液，取70ml密度1.7mg/cm3的磷酸用水稀释至1L。
④酚酞指示剂，1%的乙酸溶液。
（3）测定步骤于蒸馏瓶中放入50—200ml待测废水，其VFA含量不超过30mmol。
如水样体积不足100ml，可以蒸馏水稀释至100ml。
放入几滴酚酞指示剂。
加入10%NaOH溶液，使溶解呈碱性，并使NaOH略过量。
开始蒸馏，至蒸馏瓶中剩余的液体为50—60ml为止。
用蒸馏水将蒸馏瓶剩余液体稀释至原来的体积，用10ml10%的磷酸酸化，在接受瓶中放入10ml蒸馏水并使接受瓶与蒸馏瓶上的冷凝管连接，导入管应浸入接受瓶的液面以下。
蒸馏至瓶中液体为15—20ml为止。
待蒸馏瓶冷却后，加入50ml蒸馏水再次蒸馏，至剩余10—20ml液体为止。
为了除去二氧化碳、硫化氢、二氧化硫等干扰物，可向馏出液中通入高纯氮气10—15min，然后加入10滴酚酞，用NaOH标准溶液滴定至淡粉色不消失为止。
（4）计算挥发性脂肪酸含量计算如下：VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)式中：V(NaOH)-----滴定消耗的NaOH标准溶液的体积，ml;c ------ 滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度，mol/L;挥发性脂肪酸(VFA)的测定挥发性脂肪酸是厌氧硝化过程的中间产物，甲烷菌主要利用VFA形成甲烷，只有少部分甲烷由CO2和H2生成。
VFA在厌氧反应器中的积累能反映出甲烷菌的不活跃状态或反应器操作条件的恶化，较高的VFA浓度对甲烷菌有抑制作用。
脂肪酸含量的测定
脂肪酸含量的测定1. 引言在食品和农业领域中，脂肪酸含量的测定对于评估产品的质量和营养成分至关重要。
脂肪酸是构成脂肪的主要成分，它们不仅为机体提供能量，还对细胞生理过程具有重要作用。
了解食品中脂肪酸的含量，有助于合理配置人们的膳食结构，以及评估食品中的营养价值和功效。
本文将介绍常见的脂肪酸含量测定方法，包括气相色谱法和高效液相色谱法。
2. 气相色谱法测定脂肪酸含量气相色谱法是目前广泛应用于脂肪酸含量测定的一种方法。
其基本原理是通过气相色谱仪将样品中的脂肪酸分离，利用比色检测器对其进行定量测定。
具体步骤如下：1. 样品准备：将待测样品制备成试剂，并进行必要的前处理步骤，如提取或酯化。
2. 样品注射：将经过前处理的样品注入气相色谱仪中。
3. 色谱条件设置：根据样品特性和测试要求，设置合适的温度、流速和柱子类型。
4. 色谱分离：样品通过色谱柱后，不同脂肪酸化合物会按照其挥发性和亲和性不同分离出来。
5. 检测与定量：使用比色检测器对分离出的脂肪酸进行定量测定，并计算出含量。
气相色谱法的优点是分离效果好，分析速度快，定量结果准确可靠。
然而，该方法也存在一些局限性，比如需要专业的设备和操作技术，同时对样品的前处理也要求较高。
3. 高效液相色谱法测定脂肪酸含量除了气相色谱法，高效液相色谱法也被广泛应用于脂肪酸含量的测定。
与气相色谱法不同的是，高效液相色谱法的分离基于样品在液相中的亲和性差异。
以下是该方法的基本步骤：1. 样品准备：将样品制备成试剂，并进行适当的前处理步骤，如提取。
2. 样品注射：将前处理后的样品通过自动进样器注入高效液相色谱仪中。
3. 色谱条件设置：根据样品特性和测试要求，设置合适的流速、柱子类型和溶剂体系。
4. 色谱分离：样品在液相色谱柱中根据分子的亲和性和相对极性的不同，进行分离。
5. 检测与定量：通过紫外检测器对分离出的脂肪酸进行定量，并计算出含量。
高效液相色谱法的优点是操作相对简单，能够便捷地对包含多种脂肪酸的样品进行分析。
VFA(厌氧挥发酸)的测验方法及步骤
VFA（挥发酸）的做法试剂：0.1N NaOH溶液、10%磷酸溶液、0.5%酚酞指示剂。
做法：(1) 取500mL原液；(2) 取50mL样品加入500mL烧瓶中，加入6mL磷酸（10%），加入300mL蒸馏水；(3) 连接好设备加热，直到蒸出300mL蒸馏液；(4) 蒸馏液加入3滴酚酞，用NaOH滴定，记录数：挥发酸(mg/L)=(V-C)*V1*60*1000/50备注：V---滴定数；V1—NaOH浓度；C----空白数配制0.1N NaOH溶液带着小烧杯、NaOH、500ml容量瓶一张滤纸去直接用小烧杯测2.08gNaOH，用蒸馏水稀释一下倒进容量瓶，继续稀释倒进容量瓶，直到刻度即可。
0.5%酚酞指示剂的配制方法：①0.5g 酚酞溶于75mL体积分数为95%的乙醇中，并加人20mL水，然后再加入约0. lmol/L的氢氧化钠溶液，直到加入一滴立即变成粉红色，再加入水定容至l00ml （GB604 酸碱指示剂pH变色域测定通用方法时使用的配制方法，用来测定酚酞的显色范围的）②1g酚酞, 溶解于100mL95％的乙醇（GB603用来做酸碱滴定用）网上其他的VFA 的测定方法常见的VFA 测定方法有滴定法和气相色谱法。
由于条件限制，本实验采用滴定法。
滴定法的原理是将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH 溶液滴定馏出液。
废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。
药品:a.10%NaOH 溶液;b.NaOH 标准溶液，O.1000mo1/L;c.10%磷酸溶液，取70m1密度1.7g/cm ，的磷酸用水稀释至1L;d.酚酞指示剂。
测定步骤:于蒸馏瓶中放入50～200m1的待测废水，其VFA 含量不超过30mmo1。
如水体积不足100m1，可以蒸馏水稀释至100m1。
放入几滴酚酞指示剂。
（我一般用100ml ） 加入10%NaOH 溶液，使溶液成碱性，并使NaOH 略过量。
挥发性脂肪酸VFA测定步骤与方法
挥发性脂肪酸的测定一、GC（Gas chromatograph）工作条件仪器：GC-14B型气相色谱仪（日本岛津公司）毛细柱：NUKOLTM Capillary Column ( Supelco )；Column No.34292-07B30m×0.32mm×0.25μm film thickness气相色谱仪参数：色谱柱采用毛细吸管柱，柱温130℃，汽化温度180℃，采用氢离子火焰检测器，检测温度180℃，载气为氮气，压力为60 KPa，氢气压力为50 KPa，氧气压力50 KPa，灵敏度（档）为101，衰减 3.0二、样品制备1．试剂制备（1）配制25%w/v 的偏磷酸溶液，将25g偏磷酸溶在100mL双蒸水中（2）巴豆酸的配制，在100ml的偏磷酸溶液中加入0.6464g的巴豆酸，定容到100mL。
（可先用80 ml双蒸水，加热溶解偏磷酸，然后定容至100 ml）（3）标准样品，准确称取色谱标准级乙酸0.9100 g、丙酸0.3700 g、丁酸0.1765 g、异丁酸0.1765g、戊酸和异戊酸分别为0.1985g，分别溶于双蒸水中，再各自定容至100 mL。
2．样品制备(1) 发酵液取（或过滤瘤胃液）VFA测定1ml样品到离心管中，再加入0.2 ml的偏磷酸巴豆酸混合溶液，－20℃冰箱保存过夜，解冻后12000rpm离心5min，取上清液保存，测定前再12000rpm离心5min(或少许通过0.22μm针式滤器，滤液直接进样用 1.0微升微量进样器瞬时注入色谱仪，进样量为0.2－1.0μL。
(2) 食糜及粪样VFA测定取1g置于离心管中，加入5－10倍的双蒸水，混合均匀。
取1mL上清夜，加偏磷酸巴豆酸0.2mL/mL。
其它步骤同上。
3．保留时间的确定与样品处理相同，在 1 ml标准样品中加入0.2mL偏磷酸与巴豆酸的混合样，上样测出乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸的保留时间。
挥发性脂肪酸测定
四、挥发性脂肪酸的比色测定法：测定原理：含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。
在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物——挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。
⑴试剂①1：1硫酸：浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配制。
②4.5mol/L的氢氧化钠：称取180g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水稀释至1L。
③10%硫酸羟胺溶液：称取硫酸羟胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸馏水中。
④酸性氯化铁试剂：将20.0g分析纯FeCl3·6H2O溶于500mL水中，准确加入20.0mL浓硫酸，并以蒸馏水稀释至1L。
（配置好后应该静置过夜，除去沉淀）⑤乙二醇：分析纯⑵测定步骤①乙酸标准液的配制。
精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.0%）1.010g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。
②乙酸标准曲线绘制：准确吸取10 mg/mL乙酸标准溶液1mL、5mL、10mL、15mL、20mL、25mL、30mL，分别置于100ml容量瓶内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得100、500、1000、1500、2000、2500、3000mg/L的乙酸标准系列液。
吸取0.5mL乙酸标准液置于比色管中，同时吸取0.5ml蒸馏水作空白管，每管中准确加入1.5ml乙二醇和0.2ml稀硫酸，充分混合，于沸水浴中加热3min，应避免试管与加热器壁直接接触。
然后立即将试管置于冷水中冷却。
加入0.5mL硫酸羟胺和2ml 4.5mol/L的氢氧化钠，并混匀，放置1min。
然后各个管中加入10mL 酸性氯化铁试剂，用蒸馏水定容到25mL，并充分摇匀，静置5min，用分光光度计以500nm波长测定光密度，以纵坐标表示浓度值，横坐标表示光密度值绘制标准曲线。
2 反相高效液相色谱测定厌氧反应上清液中挥发性脂肪酸_孙绪顺
净水技术 WATER PURIFICATION TECHNOLOGY
Vol. 28, No. 5, 2009
October 25th, 2009
用于非挥发性脂肪酸的测定。 气相色谱是现在应用比较普遍的一类测量挥发
性脂肪酸的方法。 在毛细管色谱柱技术发展之前使 用气相色谱法测定脂肪酸时， 常常因为脂肪酸的高 极性、 高沸点， 难气化而需要对其进行繁琐的预处 理，将挥发性脂肪酸酯化，然后通过测定酯的含量来 间接的测定脂肪酸的含量[4]。 这种方法的缺点是酯 化时间漫长，影响了测量的时间，同时增加了测试 前的步骤，增加了误差产生的概率，精确度得不到 保证 。 [3、5] 随着毛细管色谱柱技术的发展 ，使用气相 色谱测定挥发性脂肪酸可以不经过衍生、 酯化而直 接进行测定。虽然免去了繁琐复杂的预处理，气相色 谱 测 定 挥 发 性 脂 肪 酸 还 存 在 以 下 几 种 困 难 ：（1）选 择 特定检测器以消除样品中水对测定结果的影响，测 定 挥 发 性 脂 肪 酸 一 般 选 用 氢 火 焰 离 子 检 测 器 。（2）因 为挥发性脂肪酸的具有强极性，容易产生拖尾问题。 为了解决拖尾问题， 一般选用程序升温控制温度并 且选用合适的极性色谱柱。（3）挥发性脂肪酸具有强 烈的挥发性，因此要使用弱酸酸化待测样品。且选用 弱酸不破化色谱柱为原则[3]。 由此我们可以得出，虽 然气相色谱测定挥发性脂肪酸已经不需要太过繁琐 的预处理，相对于传统的测定方法已经比较快速，可 是在使用气相色谱过程中还有太多的限制。
挥发性脂肪酸（volatile fatty acids, VFA）是厌氧 过程酸化阶段的主要产物， 是厌氧过程中一种重要 的中间产物。有机物在厌氧过程中首先经过水解、发 酵作用产生挥发性脂肪酸， 产甲烷菌利用厌氧反应 过程中产生的挥发性脂肪酸产生甲烷。 有研究显示 在厌氧过程中产甲烷菌利用脂肪酸产生甲烷的过程 是 厌 氧 反 应 的 一 个 重 要 的 控 制 过 程[1]，因 此 在 厌 氧 反应系统中系统的失衡常常伴随着挥发性脂肪酸的 积 累[2]，即 在 厌 氧 反 应 过 程 中 适 时 的 监 控 系 统 中 脂 肪酸的含量可以有效了解系统中甲烷菌的活跃程度 和反应器的运行情况[3]。 所以在厌氧反应中，挥发性 脂肪酸是反应系统的一个重要的指标。
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挥发性脂肪酸总量的比色测定法
一、实验原理
含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。
在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物——挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。
二、实验仪器
容量瓶、吸量管、比色管、分光光度计
三、实验试剂
●1：1硫酸：浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配
制。
●酸性乙二醇试剂：取30.0mL乙二醇(C.P.)与4.0mL配制的稀硫酸混合。
● 4.5mol/L的氢氧化钠：称取18g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水
稀释至100ml。
●10%盐酸羟胺溶液：称取盐酸羟氨10.0g，溶于100mL蒸馏水中。
●羟胺试剂：量取40.0 mL4.5mol/L的氢氧化钠，与10.0mL10%的硫酸羟
胺相混合。
●酸性氯化铁试剂：将20.0g分析纯FeCl3 ·6H2O溶于500mL水中，准确
加入20.0 mL浓硫酸，并以蒸馏水稀释至1L。
●乙酸标准液的配制。
精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.5%）
1.0050g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。
四、颜色实验
取10ml乙酸标准液于50ml比色管中，并定容。
吸取0.5mL样液置于比色管中，准确加入1 mL酸性乙二醇试剂，充分混合，于沸水浴中加热3min，应避免试管与加热器壁直接接触。
然后立即将试管置于冷水中冷却。
加入2mL羟胺试剂，并混匀，放置1min。
然后各个管中加入10mL酸性氯化铁试剂，用蒸馏水定容到25mL，并充分摇匀，静置5min。
观察其现象。
比色管中有棕红色络合物产生，故试剂正常，颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物的含量成正比，故可用比色法测定挥发性脂肪酸。
五、实验步骤
(1)乙酸标准曲线绘制：
准确吸取10 mg/mL乙酸标准溶液0.5mL、1mL、3mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL、12.0mL、15mL，分别置于50.0mL比色管内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得0.1、0.2、0.6、1.0、1.6、2.0、2.4、3.0mg/mL的乙酸标准系列液。
吸取0.5mL样液置于比色管中，准确加入1 mL酸性乙二醇试剂，充分混合，于沸水浴中加热3min，应避免试管与加热器壁直接接触。
然后立即将试管置于冷水中冷却。
加入2mL羟胺试剂，并混匀，放置1min。
然后各个管中加入10mL酸性氯化铁试剂，用蒸馏水定容到25mL，并充分摇匀，静置5min，用分光光度计以500nm波长测定光密度。
同样操作做空白试验1份。