顶空气相色谱内标法测定血液中乙醇含量

计算式中 Ｗ１、Ｗ２ 为２份检材平行定量测 定 的 结 果 ，Ｗ 为 ２份检材平均值。 １．４．２ 将 检 测 的 蜂 面 积 代 入 公 式 计 算 ２ 结 果 ２．１ 乙 醇、正 丙 醇、叔 丁 醇 的 保 留 时 间 分 别 为 １．２７、１．６９、 ２．２３ ｍｉｎ。 ２．２ 取３种不同浓度的标准溶液（２０、８０、４００ｍｇ／ｍＬ）进 行 分 析，在０．０～４００．０ ｍｇ／１００ ｍＬ 乙 醇 浓 度 范 围 内 线 性 良 好 。 根 据３倍基线噪声所对应的标准物质的浓度，计算出该方法的 检 出 限 为 ０．１ ｍｇ／１００ ｍＬ。 ２．３ 取混 合 的 血 样 进 行 加 标 回 收 试 验 。 加 入 的 乙 醇 浓 度 为 ８０ｍｇ／ｍＬ。每份血样分装 成 ４ 份 平 行 样 品，其 中 １ 份 用 以 测 定样品 的 本 底 值，其 余 ３ 份 加 入 乙 醇 标 准 溶 液 后 进 行 测 定 ，计 算 其 加 标 回 收 率 为 ９８．５％ ，回 收 率 良 好 。 ［３－４］ ２．４ 取１ｍｇ／ｍＬ 的乙醇、叔丁醇混合标准溶液，加入１０ 个 检 测瓶，连续测定１０次，以 乙 醇、叔 丁 醇 的 峰 面 积 分 别 计 算 标 准 差和变异系数，乙醇、叔丁醇 的 变 异 系 数 分 别 ２．５６％、２．７４％。 在本精密度试验中得到的值 均 小 于 １０％，查 相 关 文 献 得 知，精 密 度 良 好［５］。 ３ 讨 论 ３．１ 柱温的选 择 柱 温 是 影 响 气 相 色 谱 分 离 的 重 要 因 素 之 一。本实验在４０～８０ ℃范 围 内 考 察 了 柱 温 对 分 离 的 影 响，并 在 不 同 柱 温 下 ，对 和 乙 醇 结 构 近 似 的 常 见 低 级 醇 类 ，如 甲 醇 、异 丙醇、正丙醇、叔丁醇配制了混合溶液进行了试验。结果表 明， 与 乙 醇 最 接 近 的 峰 为 甲 醇 和 异 丙 醇 ，因 此 以 它 们 的 分 离 情 况 作 为考察指标，温度越 高，乙 醇 与 甲 醇、异 丙 醇 保 留 时 间 越 接 近， 分离不好。进行多次 研 究 发 现，在 作 者 设 定 的 色 谱 条 件 下，４０ ℃时乙醇与甲醇和异 丙 醇 的 分 离 情 况 和 峰 形 最 好 ，其 余 物 质， 如正丙醇、叔丁醇亦不 会 产 生 干 扰，因 此 试 验 最 后 选 定 柱 温 为 ４０ ℃。甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、叔 丁 醇 的 保 留 时 间 分 别 为 １．００、１．２７、１．４９、１．６９、２．２３ ｍｉｎ［６－７］。 ３．２ 内标物质的选择 内标法可在一定程度上消除操作条 件
【摘要】 目的 建立顶空气相色谱内标法测定血 液 中 乙 醇 含 量 的 快 速 分 析 方 法 。方 法 取 加 入 正 丙 醇、叔 丁 醇内标液的待检测的全血样品０．５０ｍＬ ２份和加入乙醇、正丙醇、叔丁 醇 混 合 内 标 液 的 空 白 全 血 ０．５０ ｍＬ ２ 份，直 接顶空进样。在选定的色谱条件下，血中的乙醇能与样品中可能存在的主要干扰成分实现基线分离，空白全血中 的 乙醇、正丙醇、叔丁醇分别作为对照［５］。结果 顶空气相色谱内标法采用醇类的易挥发性，以叔丁醇作为内标，用 顶 空气相色谱、火焰离子化检测器进行检测；经与平行操作的醇类标准品比较，以保留时间定性、峰面积定量来对醇 类 进行分析，用内标法以醇类对内标物的峰面积比进行定量。在０．１～４００．０ｍｇ／１００ｍＬ 范 围 内 线 性 良 好，检 出 限 为 ０．１ ｍｇ／１００ ｍＬ。结 论 顶 空 气 相 色 谱 内 标 法 直 接 顶 空 进 样 ，不 受 进 样 误 差 干 扰 ，结 果 稳 定 ，操 作 方 便 ，分 析 时 间 短 、 线 性 关 系 良 好 、灵 敏 度 高 ，适 用 于 全 血 中 乙 醇 含 量 的 测 定 。
【关 键 词 】 乙 醇 ； 自 动 顶 空 进 样 ； 气 相 色 谱 ； 内 标 法 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１１．２２．０３６ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－９４５５（２０１１）２２－２７６１－０２
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｗｉｔｈ ｈｅａｄｓｐａｃｅ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ） ＺＯＵ Ｌｉ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ Ｊｉｎｇｚｈｏｕ Ｃｉｔｙ，Ｈｕｂｅｉ ４３４０００， Ｃｈｉｎａ）
检 验 医 学 与 临 床 ２０１１ 年 １１ 月 第 ８ 卷 第 ２２ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．２２
顶空气相色谱内标法测定血液中乙醇含量
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·论 著·
邹 黎 （湖 北 省 荆 州 市 中 医 医 院 检 验 科 ４３４０００）
１．２ 仪 器 工 作 条 件 １．２．１ 顶空进样条件 （１）玻 璃 瓶 ７０ ℃；（２）定 量 环 温 度 ８０ ℃；（３）传输管温度９０ ℃；（４）气相循环时间１５ｍｉｎ；（５）顶空瓶 平衡时间１０ ｍｉｎ；（６）加 压 时 间 ０．２ ｍｉｎ；（７）填 充 定 量 环 时 间 ０．２ ｍｉｎ；（８）定 量 环 平 衡 时 间 ０．０５ ｍｉｎ；（９）进 样 时 间 ０．２ ｍｉｎ。 １．２．２ 色谱条件 （１）柱温４０ ℃；（２）检测器 ＦＩＤ ３００ ℃；（３） 汽化室温度２５０ ℃；（４）分流 比 １０∶１；（５）载 气 流 速，氮 气 为 ２ ｍＬ／ｍｉｎ，氢 气 为 ３０ ｍＬ／ｍｉｎ，空 气 为 ４００ ｍＬ／ｍｉｎ。 尾 吹：２３ ｍＬ／ｍｉｎ。 １．３ 试 验 方 法 １．３．１ 样 品 制 备 准 确 吸 取 待 测 全 血 ０．５ ｍＬ ２ 份 ，分 别 加 入 ２个２０ｍＬ 样品瓶内，加１００μＬ（１ ｍｇ／ｍＬ）正 丙 醇、叔 丁 醇 内 标液，用密 封 钳 加 封 铝 帽，混 匀。 另 取 空 白 全 血 ０．５ ｍＬ ２ 份， 加入１００μＬ 乙醇、正丙 醇、叔 丁 醇 混 合 内 标 液，乙 醇、正 丙 醇、 叔 丁 醇 浓 度 均 为 １ ｍｇ／ｍＬ，按 上 述 方 法 平 行 操 作 ［２］。 １．３．２ 检测 将空 白 瓶、样 品 瓶、标 准 瓶 放 入 自 动 顶 空 进 样 器后，在选定好的仪器工作条件下进行测定。乙醇、正丙 醇、叔
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｐｒｏｐｏｓｅ ａ ｒａｐｉｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｂｙ ｈｅａｄｓｐａｃｅ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＳＧＣ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｅ ｔｏｏｋ ０．５０ ｍＬ ｏｆ ｔｗｏ ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｗｉｔｈ １－ｐｒｏ－ ｐａｎｏｌ，ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ａｎｄ ０．５０ ｍＬ ｏｆ ｔｗｏ ｂｌａｎｋ ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ｅｔｈａｎｏｌ，１－ｐｒｏｐａｎｏｌ， ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ，ｔｈｅｎ ｄｉｄ ｔｈｅ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｈｅａｄｓｐａｃｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ＨＳＧＣ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｅｔｈａ－ ｎｏｌ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｂａｓｅｌｉｎｅ ｓｅｐａｒａ－ ｔｉｏｎ．Ｅｔｈａｎｏｌ，１－ｐｒｏｐａｎｏｌ，ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ ｏｆ ｂｌａｎｋ ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｔｒａｓｔｅｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ＨＳＧＣ （ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ）ｔｏｏｋ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｖｏｌａｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌｓ ａｎｄ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ ａｓ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ，ａｎｄ ｕｓｅｄ ＨＳＧＣ，ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｏｆ ｆｌａｍｅ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｔｏ ｄｏ ｔｈｅ ｔｅｓｔ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌｓ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｐａｒａｌｌｅｌｌｙ， ｔｈｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｏｆ ｐｅａｋ ａｒｅａ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ａｌｃｏｈｏｌｓ．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｐｅａｋ ａｒｅａ ｏｆ ｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ．Ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｏｆ ０．１－４００．０ ｍｇ／１００ ｍＬ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｒａｃｅ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ ｉｎ ｂｌｏｏｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｓ ｎｏｔ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｅｒｒｏｒ ｏｆ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．
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检 验 医 学 与 临 床 ２０１１ 年 １１ 月 第 ８ 卷 第 ２２ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏｌ．８，别 为 １．２７、１．６９、２．２３ ｍｉｎ。 １．４ 结 果 计 算 １．４．１ 计算公式 （１）计 算 相 对 校 正 因 子 （ｆ）＝ （空 白 检 材 中 醇添加量×内标物蜂面积平均值）／（空白检材中内标添加量 × 醇蜂面积平均值）；（２）计算检材中醇含量（Ｗ）（ｍｇ／１００ ｍＬ）＝ ［ｆ×检材中的醇 蜂 面 积 平 均 值 × 内 标 添 加 量 （μｇ）×１００］／（检 材中内标 物 蜂 面 积 平 均 值 × 检 材 量 ×１ ０００）；（３）相 对 相 差 （％ ）＝ （Ｗ１ － Ｗ２）×１００／Ｗ。