艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的性能评估
艰难梭菌感染实验室诊断的研究进展_
㊃专题㊃基金项目:河北省重点研发计划项目(国际科技合作专项,183977118D );河北省自然科学基金资助项目(2013206450)通信作者:赵建宏,E m a i l :z h a o jh _2002@y a h o o .c o m 艰难梭菌感染实验室诊断的研究进展杨 靖,赵建宏(河北医科大学第二医院河北省临床检验中心,河北石家庄050000) 摘 要:艰难梭菌是一种专性厌氧革兰阳性芽孢杆菌,一般认为是环境和人类肠道中的正常菌群㊂过度应用抗生素㊁免疫抑制剂或化疗药物使耐药的艰难梭菌产毒株过度繁殖并释放毒素是导致艰难梭菌感染(C l o s t r i d i o i d e sd i f fi c i l e i n f e c t i o n ,C D I )的主要因素㊂C D I 的发病率在全球范围内不断增加,尤其是高产毒株在北美地区造成了医院内的暴发流行,引起了世界范围的关注㊂在此对艰难梭菌的致病机制和实验室诊断方法的研究进展进行阐述,为艰难梭菌相关性腹泻的早期诊断和治疗提供新思路㊂关键词:梭菌感染;诊断中图分类号:R 517.5 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2018)05-0373-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2018.05.002P r o g r e s s o f l a b o r a t o r y d i a gn o s i s o f C l o s t r i d i o i d e s d i f f i c i l e i n f e c t i o n Y a n g J i n g ,Z h a o J i a n h o n gC e n t e r o f H e b e iP r o v i n c i a lM e d i c a lL a b o r a t o r y ,t h eS e c o n d H o s p i t a l o fH e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y ,S h i j i a z h u a n g 050000,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :Z h a oJ i a n h o n g ,E m a i l :z h a o j h _2002@ya h o o .c o m A B S T R A C T :C l o s t r i d i o i d e sd i f f i c i l e i sa g r a m -p o s i t i v e ,a n a e r ob i cs p o r e -f o r m i n g b ac i l l u sc o mm o n l y f o u nd i nt he e n v i r o n m e n t a n dh u m a n g u t .O v e r u s e of a n t i b i o t i c s ,i mm u n o s u p p r e s s i v e ag e n t s a n d ch e m o t h e r a p y d r u g s a l lm a yl e a d t ot h eo v e r g r o w t ho f t h et o x i cs t r a i no f C .d i f f i c i l e w i t hh i g hr e s i s t a n c e ,w h i c hi st h e m a i nf a c t o rr e s p o n s i b l ef o r C .d i f fi c i l e i n f e c t i o n (C D I ).T h e g l o b a l l y i n c r e a s i n g i n c i d e n c e o fC D I ,e s p e c i a l l y t h e o u t b r e a ko f n o s o c o m i a l i n f e c t i o n c a u s e db y t h eh y p e r v i r u l e n t s t r a i n i nN o r t hA m e r i c a ,h a sa r o u s e dw o r l d w i d ea t t e n t i o n .T o p r o v i d en e wi n s i gh t s i n t o t h e e a r l y d i a g n o s i s a n d t r e a t m e n t o f d i a r r h e a a s s o c i a t e d w i t h C .d i f f i c i l e ,t h i s r e v i e w s u mm a r i z e s t h el a t e s t d e v e l o p m e n t o n p a t h o g e n e s i s a n d l a b o r a t o r y d i a g n o s i s o f C .d i f fi c i l e .K E Y W O R D S :C l o s t r i d i o i d e s i n fe c t i o n s ;d i a g n o s i s 赵建宏,男,日本自治医科大学医学博士(P h .D.),主任检验师,教授㊂现任河北省临床检验中心主任和河北医大检验系常务副主任(主持工作)及河北医大二院检验科副主任,硕士生导师㊂致力于临床微生物的致病和耐药机制㊁分子诊断及临床实验室管理研究㊂近年着重于艰难梭菌感染的流行病学㊁实验诊断㊁分型等研究㊂承担国家科技基础平台重点项目子课题㊁河北省自然科学基金㊁河北省科技平台项目等项目㊂并参与了国家自然科学基金㊁国家高技术研究发展计划(863计划)子课等项目部分研究工作㊂发表论文90余篇,S C I 15篇㊂中国研究型医院分子诊断医学专委会副主任委员,中国医院协会临床实验室管理委员会常务委员,中国生化与分子生物学会临床应用生化与分子生物学分会常务理事, 卫生部抗生素合理应用全国普及计划 专家,全国细菌耐药监测网专家委员会学术委员,河北省微生物学会临床微生物学分会主委,河北医学会医学遗传学分会侯任主委,河北检验医学协会副主委,河北医学会检验分会副主委,吴阶平医学基金会检验医学基金副主委,中国实验室认可委评审员(I S O 15189㊁17043)㊂担任编委及审稿专家,如S c i e n t i f i cR e p o r t s ㊁J A C ㊁‘临床检验杂志“㊁‘中华检验医学杂志“㊁‘中华临床实验室管理学杂志“和‘分子诊断与治疗杂志“等㊂主编了‘革兰阳性球菌与临床感染“㊁‘医学标本收集指南“㊁‘病原生物学检验“㊁‘临床实验室管理学“和‘临床检验基础“专著和统编教材㊂作为副主编或编委编写了‘临床微生物标准化操作“㊁‘非结核分枝杆菌与临床感染“㊁‘实验诊断学“(统编教材)㊁‘智能化临床实验室建设与设计指南“和‘实验室生物安全“(研究生统编教材)等㊂艰难梭菌(C l o s t r i d i o i d e sd i f f i c i l e )是一种专性厌氧革兰阳性芽孢杆菌,一般认为是人类肠道的正常菌群㊂大量应用广谱抗生素㊁免疫抑制剂或化疗药物后可导致该菌过度繁殖,引起艰难梭菌感染(C .d i f f i c i l e i n f e c t i o n ,C D I )㊂近年来在欧洲和北美一些国家出现了一种艰难梭菌高产毒株027/N A P 1/B I 的暴发流行,所致的C D I 复发率和死亡率高,耐药性强,在发达国家已成为一种严重的医疗相关性感染,造成了巨大的经济损失,引起了世界范围的广泛关注[1-3]㊂对于艰难梭菌及其毒素的早期诊㊃373㊃‘临床荟萃“ 2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s ,M a y 5,2018,V o l 33,N o .5Copyright ©博看网. All Rights Reserved.断和治疗可以有效降低C D I 的发病率㊁死亡率,避免不必要的医疗资源浪费㊂目前,美国食品和药物管理局(F D A )已经批准了一些用于诊断C D I 的实验室检测试剂㊂近十年来,C D I 的流行病学发生了很大变化[4],因此迫切需要建立一套适合临床的诊断方法,来准确区分C D I 与艰难梭菌定植(C .d i f fi c i l e c o l o n i z a t i o n ,C D C )㊂因此,本文对艰难梭菌的致病机制㊁实验室诊断方法及其进展作一综述㊂1 艰难梭菌的致病机制艰难梭菌致病的主要因素为产生A ㊁B 两种毒素[5]㊂A 毒素是肠毒素,使肠壁出血坏死,液体蓄积;B 毒素为细胞毒素,可以直接损伤肠壁细胞㊂这两种毒素的编码基因t c d A 和t c d B 存在于该菌的致病性决定区(p a t h o g e n i c i t y l o c u s ,P a L o c ),此外该决定区域还存在负向调节基因t c d C ,正向调节基因t c d R 和增加细胞膜孔,促使毒素蛋白释放的膜孔蛋白基因t c d E [6-7](图1a )㊂除了毒素A ㊁B 外,6%~12%的菌株可产生二元毒素(b i n a r y to x i n ),由致病性决定区外的染色体基因c d t A 和c d t B 编码[7](图1b)㊂二元毒素可能通过增强细胞毒性和艰难梭菌在体内的黏附而使其毒力增强㊂艰难梭菌的传播形式是芽孢,芽孢可以在体外存活很长时间,并且可以耐受乙醇和紫外线等物理或化学消毒剂,导致其在医院环境长期存在并传播,造成院内感染㊂图1 艰难梭菌致病决定区主要基因和二元毒素基因 a .艰难梭菌致病决定区主要基因;b .艰难梭菌二元毒素基因2 诊断方法目前,没有一种单独的检测方法可以作为诊断C D I 的参考方法㊂推荐用于C D I 的诊断方法有:产毒艰难梭菌培养(t o x i n o g e n i c c u l t u r e ,T C ),细胞毒性中和试验(c e l l c y t o t o x i c i t y n e u t r a l i z a t i o na s s a y,C C N A ),毒素检测(A ,B 毒素)和(或)谷氨酸脱氢酶(G D H )的酶免疫测定(E I A )以及核酸扩增检测(n u c l e i c a c i da m p l i f i c a t i o n t e s t s ,N A A T s )㊂在这些方法中,产毒艰难梭菌培养和细胞毒性中和试验在过去30年中一直被认为是诊断C D I 的金标准[8]㊂2.1 产毒艰难梭菌培养 艰难梭菌为专性厌氧菌,需要专门的培养基,对培养条件要求严格,所以临床实验室日常检测很少应用这种方法㊂培养得到的细菌可以进一步进行毒素分析㊁细菌分型㊁耐药分析等,对流行病学调查有很重要的意义㊂目前应用最多的是传统的培养方法,即将标本用 热休克 或 酒精休克 进行预处理直接接种于环丝氨酸-头孢西丁-果糖琼脂(C C F A )培养基上厌氧培养来把艰难梭菌从粪便标本中筛选出来㊂目前,报道了一种新的培养方法[9],即先用加有牛磺胆酸钠的环丝氨酸头孢西丁果糖肉汤(T C C F B )富集芽孢,然后取富集芽孢后的肉汤培养物用等体积无水乙醇处理,离心取沉淀再接种于C C F A 培养基中厌氧培养㊂我们曾对乙醇直接处理法和富集芽孢培养法进行比较,发现这两种方法的培养阳性率没有区别,但富集芽孢培养法最大限度的减少了粪便中其他微生物的生长污染[10]㊂培养完成后,通过菌落形态,革兰染色,吲哚生化试验(斑点吲哚阳性)和L -脯氨酸萘酰胺水解试验( P R O D i s k 阳性)等特殊表征来挑取可疑菌落,最后通过V I T E K 2A N C 厌氧菌鉴定卡㊁16S r D N A 测序或基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MA L D I -T O F M S )最终鉴定为艰难梭菌㊂然而,艰难梭菌培养阳性还不能确定是否为产毒株或者诊断为C D I,因为有4%的健康成人会有艰难梭菌定植,且20%~25%的艰难梭菌是非产毒株[11]㊂因此,培养得到的艰难梭菌分离株需要再通过C C N A 和(或)毒素E I A 测定其产毒能力,或用N A A T 来检测毒素A /B 基因来确定是否为产毒株[12]㊂2.2 细胞毒素培养中和试验 C C N A 是检测单层培养细胞(如人成纤维细胞)由毒素所致的变性㊁坏死㊁凋亡等细胞病变效应,并且50%以上的病变细胞在48小时内可以被艰难梭菌抗毒素中和[13]㊂该方法可以检测到1p g 水平的毒素㊂但由于其操作复杂,主观性强,对实验环境和条件要求苛刻,故不作为临床实验室的常规方法[13]㊂C C N A 对毒素B 敏感性较高,毒素B 一直以来被认为是C D I 临床诊断的良好标志物㊂然而,C C N A 的结果判定依赖于分析前的因素和操作者的经验,有时会出现假阴性㊂结果的解释需具有一定的专业知识且主观性强,可能会导致在不同的实验室的重复性差[14]㊂无论是C C N A 还是T C 都需要耗费大量时间和精力㊂艰难梭菌检测时间的延长将导致对C D I 治疗的拖延,使患者症状加重,甚至死亡㊂因此临床医生需要实验室提供更加快速而准确的诊断方法㊂2.3 酶免疫分析方法(E I A ) E I A 可以检测G D H 和毒素A ㊁B ㊂目前,已有一些商品试剂盒引入市场,㊃473㊃‘临床荟萃“ 2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s ,M a y 5,2018,V o l 33,N o .5Copyright ©博看网. All Rights Reserved.E I A测定G D H的产品有C.D i f fC h e k-60和C.D i f fQ u i kC h e k(T e c h L a b,I n c.),测定毒素的产品有P r o S p e c T T o x i n A/B(R e m e l P r o d u c t s,T h e r m o F i s h e r S c i e n t i f i c)和C.d i f f i c i l e T o x A/B I I (T e c h L a b,I n c.)㊂总的来说,这些产品的单次检测成本较低,但敏感性和特异性不高[15]㊂G D H为艰难梭菌表面大量表达的抗原性蛋白,尽管用E I A测定G D H来筛查艰难梭菌具有较好的敏感性和阴性预测值(N P V),但是这些方法不能区别产毒株和非产毒株,因为它们都会产生G D H㊂此外,G D H-E I A不能特异性检测艰难梭菌,其他梭菌会产生相似的酶而发生交叉反应[16]㊂目前国内外应用最广泛的是毒素A和(或)毒素B快速检测,商品试剂盒分为单双毒素两种,方法主要有胶乳凝集法㊁酶联免疫吸附法㊁酶联荧光分析法和免疫层析法㊂不同酶免疫方法测定毒素的特异性差别很大,其阳性预测值(P P V s)不足以用于临床诊断[16]㊂因此,结合了G D H-E I A和毒素-E I A的E I A s被研发出来㊂2009年,T e c h L a b公司研发了C.D i f f Q u i k C h e k C o m p l e t e来同时检测G D H和毒素A/B㊂这种联合检测为C D I的诊断提供了快速㊁经济有效且易操作的方法㊂G D H-E I A的特异性可以达到98%,30分钟内可以得到结果,不需其他实验阴性结果即可排除C D I㊂2.4核酸扩增检测(N A A T s)随着分子生物技术的发展,越来越多的分子诊断技术开始应用于C D I 的诊断㊂近年来实时荧光定量P C R因其高敏感性㊁高特异性㊁高自动化开始广泛应用于临床病原诊断,尤其是商品试剂盒的出现,可以实现粪便标本的直接检测,不必依赖菌株的培养分离,大大缩短了检测时间,所以利用分子生物学方法进行艰难梭菌检测显示出更加快速有效的特点㊂20世纪90年代早期, N A A T s就用于检测腹泻粪便标本中的艰难梭菌㊂N A A T具有一系列优点,如敏感性和特异性高,操作简单,检测时间短等㊂作为C D I的标准诊断方法, N A A T对于艰难梭菌毒素基因的检测优于毒素-E I A 检测方法㊂因此,N A A T被认为是诊断C D I最简单快速的方法㊂大多数N A A T的靶向基因为T c d B, T c d A和(或)二元毒素的编码基因㊂多重N A A T可以同时检测来自粪便样品的艰难梭菌菌株和毒素编码基因[17]㊂目前,已有几种应用N A A T的商品试剂盒,包括实时聚合酶链反应(R T-P C R)测定和环介导等温扩增(l o o p-m e d i a t e di s o t h e r m a la m p l i f i c a t i o n a s s a y,L AM P)测定,两者均具有总体高敏感性(80%~100%)和特异性(87%~99%)[18]㊂目前市场上最新推出的艰难梭菌快速分子检测有B D G e n e O h m实时荧光定量P C R和G e n e X p e r t C.d i f f i c i l e商品检测试剂盒㊂K v a c h等[19]对B D G e n e O h m实时荧光定量P C R方法和两步法(即先用E L I S A方法检测G D H,然后用免疫层析法检测毒素A和B)进行比较,发现该方法的敏感性明显高于两步法,因此作者认为G e n e O h m是一个快速灵敏的艰难梭菌分子检测方法㊂而C e p h e i d公司推出的G e n e X p e r t C.d i f f i c i l e快速分子检测试剂盒,整个检测过程仅需要30分钟㊂X p e r t C.d i f f i c i l e a s s a y检测毒素B基因,而且可以同时检测027型高产毒株的t c d C缺失㊂与现有的P C R检测㊁细胞毒素测定㊁酶免疫等各种检测方法比较,具有较高的敏感性㊂因此,相比之下,G e n e X p e r t C.d i f f i c i l e检测是一种更加快速㊁灵敏的检测方法[20]㊂而i l l u m i g e n e (M e r i d i a nB i o s c i e n c e,C i n c i n n a t i,O H)是唯一获得美国食品药品管理局(F D A)批准可用于检测儿童标本的分子生物学方法,也是唯一采用L AM P方法来扩增毒素A基因保守区域的方法㊂该方法也可以检测毒素A阴性㊁毒素B阳性的菌株㊂与产毒艰难梭菌培养方法相比,其敏感性和特异性分别是91.8%~ 98%和98%~99%[18]㊂另外,目前已经开发了几种多重N A A T从粪便标本中检测包括艰难梭菌在内的病原体㊂第一种是L u m i n e x x T A G G P P(L u m i n e x M o l e c u l a r D i a g n o s t i c s I n c.),可以针对11种不同的粪便病原体(7种细菌,2种病毒和2种寄生虫)进行检测;第二种是基于嵌套多重P C R的F i l m A r r a y T M胃肠道病原体检测板(B i o F i r eD i a g n o s t i c s),可检测23种粪便病原体(14种细菌,5种病毒和4种寄生虫)㊂这两种检测艰难梭菌方法的敏感性和特异性分别为91%和100%,95%和99%[21-22]㊂尽管N A A T方法优于其他C D I的诊断方法,但N A A T s也有一定的局限性,因为N A A T只检测毒素的编码基因,而不是直接检测粪便中的毒素㊂因此,该方法不能准确区分患者是艰难梭菌定植还是C D I,就会造成过度诊断甚至导致过度治疗,延误对其他原因腹泻病原体的检测㊂同时,还会造成治疗C D I的抗生素的不必要暴露以及高估医院C D I 率[23]㊂因此,需要结合多种检测方法的结果并综合考虑患者的临床症状和体征进行C D I的最终确诊㊂2.5 C D I诊断两步法两步法检测有助于减少N A A T引起的C D I的过度诊断㊂欧洲临床微生物学和传染病学会(E S C M I D)推荐从N A A T s或G D H-E I A检测开始使用两步法来进行诊断㊂㊃573㊃‘临床荟萃“2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s,M a y5,2018,V o l33,N o.5Copyright©博看网. All Rights Reserved.N A A T s或G D H-E I A试验结果阴性的样本可报告为C D I阴性,但结果阳性的样本应再次通过毒素-E I A检测进行确认㊂通过第二次毒素-E I A检测阳性的样品可报告为C D I阳性[24]㊂3展望目前,C D I仍然是抗生素相关性腹泻的主要病原菌㊂高产毒株的流行及临床上严重病例的增加,促使实验室要刻不容缓的正确评价和使用艰难梭菌检测的方法,并不断发展敏感㊁准确㊁快速的实验室诊断方法㊂比较其它方法时,艰难梭菌产毒株培养仍被认为是金标准㊂因此,需要不断改进培养方法,选取一种操作简单,培养阳性率高的方法在临床艰难梭菌培养中推广;免疫学方法虽敏感性不高,但因其简单㊁经济㊁快速可以作为C D I诊断的初筛试验;分子生物学方法的出现尤其是更加快速㊁灵敏的商品试剂盒的不断更新给艰难梭菌快速准确诊断带来了新的曙光㊂临床实验室应根据实际条件选择相应的方法对C D I做出早期诊断,为早期治疗提供依据㊂参考文献:[1] L e f f l e rD A,L a m o n t J T.C l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n[J].NE n g l JM e d,2015,372(16):1539-1548.[2] N a p o l i t a n oL M,E d m i s t o nC E J r.C l o s t r i d i u md i f f i c i l e d i s e a s e:d i a g n o s i s,p a t h o ge n e s i s,a n dt r e a t m e n tu p d a t e[J].S u r g e r y,2017,162(2):325-348.[3]S h i n J H,C h a v e s-O l a r t eE,W a r r e nC A.C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n[J].M i c r o b i o l,2016,4(3).[4] L e s s a F C,G o u l d C V,M c D o n a l d L C.C u r r e n t s t a t u s o fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n e p i d e m i o l o g y[J].C l i n I n f e c tD i s,2012,55(S u p p l2):S65-S70.[5] G e r i cB,R u p n i k M,G e r d i n g D N,e t a l.D i s t r i b u t i o n o fC l o s t r i d i u md i f f i c i l e v a r i a n t t o x i n o t y p e s a n d s t r a i n sw i t h b i n a r yt o x i n g e n e s a m o n g c l i n i c a l i s o l a t e s i n a nA m e r i c a nh o s p i t a l[J].JM e d M i c r o b i o l,2004,53(P t9):887-894.[6]S a r a hA K,S t e p h e nT C,J o h nT H,e t a l.T h e r o l e o f t o x i nAa n dt o x i n Bi n C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n[J].N a t u r e,2010,467(7316):711-713.[7] R u p n i k M,W i l c o x MH,G e r d i n g D N,C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n:n e wd e v e l o p m e n t s i ne p i d e m i o l o g y a n d p a t h o g e n e s i s[J].N a tR e vM i c r o b i o l,2009,7(7):526-536.[8] M u r a dYM,P e r e z J,Y b a z e t aG,e t a l.F a l s en e g a t i v e r e s u l t si nC l o s t r i d i u md i f f i c i l e t e s t i n g[J].B M CI n f e c tD i s,2016,16(1):430.[9] A r r o y oL G,R o u s s e a u J,W i l l e y B M,e t a l.U s e o f a s e l e c t i v ee n r i c h m e n tb r o t ht or e c o v e rC l o s t r i d i u m d if f i c i l ef r o m s t o o ls w a b s s t o r e du n d e rd i f f e r e n t c o n d i t i o n s[J].JC l i n M i c r o b i o l,2005,43(10):5341-5343.[10]温海楠,田甜甜,赵建宏,等.粪便中艰难梭菌三种培养方法的比较[J].中国微生态学杂志,2017,29(3):351-353,356.[11] D u n w o o d y R,S t e e lA,L a n d y J,e ta l.C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ea n d c y s t i c f ib r o s i s:m a n a g e m e n t s t r a t e g i e s a n d t h e r o l e o f f a ec a lt r a n s p l a n t a t i o n[J].P a e d i a t rR e s p i r R e v,2018,26:16-18.[12] C r o b a c h M J,P l a n c h eT,E c k e r t C,e t a l.E u r o p e a nS o c i e t y o fC l i n i c a lM i c r o b i o l o g y a n dI n f e c t i o u sD i s e a s e s:u p d a t eo ft h ed i a g n o s t i c g u i d a n ce d o c u m e n tf o rC l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n[J].C l i n M i c r o b i o l I n f e c t,2016,22(S u p p l4):S63-S81. [13] R e l l e rM E,L e m aC A,P e r tT M,e t a l.Y i e l do f s t o o l c u l t u r ew i t h i s o l a t e t o x i n t e s t i n g v e r s u s a t w o-s t e p a l g o r i t h mi n c l u d i n g s t o o lt o x i n t e s t i n g f o r d e t e c t i o n o f t o x i g e n i c C l o s t r i d i u md i f f i c i l e[J].JC l i n M i c r o b i o l,2007,45(11):3601-3605.[14] K o c i o l e k L K.S t r a t e g i e s f o r o p t i m i z i n g t h e d i a g n o s t i cp r e d i c t i v ev a l u eo fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e m o l e c u l a rd i a g n o s t i c s[J].JC l i n M i c r o b i o l,2017,55(5):1244-1248.[15] B u r n h a m C A,C a r r o l lK C.D i a g n o s i so fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n:a n o n g o i n g c o n u n d r u mf o rc l i n i c i a n sa n df o rc l i n i c a ll a b o r a t o r i e s[J].C l i n M i c r o b i o l,2013,26(3):604-630.[16]S u r a w i c zC M,B r a n d tL J,B i n i o n D G,e ta l.G u i d e l i n e sf o rd i a g n o s i s,t re a t m e n t,a n d p r e v e n t i o no fC l o s t r i d i u m d if f i c i l ei n f e c t i o n s[J].A mJG a s t r o e n t e r o l,2013,108(4):478-498.[17]S m i t s WK,L y r a s D,L a c y D B,e ta l C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n[J].N a tR e vD i s,2016,2:16020.[18] M a r t i n e z-M e l e n d e zA,C a m a c h o-O r t i zA,M o r g i n-O t e r oR,e ta l.C u r r e n t k n o w l e d g e o n t h e l ab o r a t o r y d i a g n o s i s o fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n[J].W o r l d J G a s t r o e n t e r o l,2017,23(9):1552-1567.[19] K v a c hE J,F e r g u s o nD,R i s k aP F,e ta l.C o m p a r i s o no fB DG e n e O h m C d i f f r e a l-t i m e P C Ra s s a y w i t h a t w o-s t e p a l g o r i t h ma n d a t o x i n A/B e n z y m e-l i n k e d i mm u n o s o rb e n t a s s a y f o rd i a g n o s i s o f t o x i ge n i cC l o s t r i d i u md if f i c i l e i n f e c t i o n[J].JC l i nM i c r o b i o l,2010,48(1):109-114.[20] B a b a d y N E,S t i l e sJ,R u g g i e r o P,e ta l.E v a l u a t i o no ft h eC e p h e i dX p e r tC l o s t r i d i u m d i f f i c i l eE p i a s s a y f o rd i a g n o s i so fC l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n a n d t y p i n g o f t h eN A P1s t r a i n a ta c a n c e r h o s p i t a l[J].JC l i n M i c r ob i o l,2010,48(12):4519-4524.[21]S t o c k m a n nC,R o g a t c h e v aM,H a r r e l B,e t a l.H o ww e l l d o e sp h y s i c i a ns e l e c t i o n o f m i c r o b i o l o g i ct e s t s i d e n t i f y C l o s t r i d i u md i f f i c i le a n do t h e r p a t h o g e n s i n p a e d i a t r i cd i a r r h o e a I n s i g h t su s i n g m u l t i p l e x P C R-b a s e d d e t e c t i o n[J].C l i n M i c r o b i o lI n f e c t,2015,21(2):179,e15.[22] B e c k m a n nC,H e i n i n g e rU,M a r t iH,e ta l.G a s t r o i n t e s t i n a lp a t h o g e n s d e t e c t e d b y m u l t i p l e x n u c l e i c a c i d a m p l i f i c a t i o n t e s t i n g i n s t o o l s o f p e d i a t r i c p a t i e n t sa n d p a t i e n t sr e t u r n i n gf r o mt h e t r o p i c s[J].I n f e c t i o n,2014,42(6):961-970.[23] K o c i o l e k L K,B o v e e M,C a r t e r D,e t a l.I m p a c t o f ah e a l t h c a r e p r o v i d e r e d u c a t i o n a li n t e r v e n t i o n o n f r e q u e n c y o fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n t e s t i n gi n c h i l d r e n:a s e g m e n t e d r e g r e s s i o n a n a l y s i s[J].J P e d i a t rI n f e c t,2017,6(2):142-148.[24] P e n g Z,L i n g L,S t r a t t o n C W,e t a l.A d v a n c e si n t h ed i a g n o s i s a n d t re a t m e n t o fC l o s t r i d i u m d if f i c i l e i n f e c t i o n s[J].E m e r g M i c r o b e s I n f e c t,2018,7(1):15.收稿日期:2018-05-10编辑:武峪峰㊃673㊃‘临床荟萃“2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s,M a y5,2018,V o l33,N o.5Copyright©博看网. All Rights Reserved.。
艰难梭菌感染的临床特征与药物治疗进展_
㊃专题㊃通信作者:杨红,E m a i l :h o n g y72@163.c o m 艰难梭菌感染的临床特征与药物治疗进展金 梦,杨 红(中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科,北京100730) 摘 要:艰难梭菌是医源性感染的常见病原菌之一,可引起抗生素相关腹泻,甚至诱发中毒性巨结肠㊁休克㊂其临床检测手段以针对毒素和产毒菌株的检测为主,联合检测时灵敏度㊁特异度更高㊂一旦确诊感染,首先需停用相关抗生素,推荐一线治疗方案包括万古霉素㊁非达霉素和甲硝唑,多次复发患者可考虑粪菌移植㊂关键词:梭菌感染;诊断;治疗中图分类号:R 517.5 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2018)05-0381-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2018.05.004P r o gr e s s o f c l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s a n d t r e a t m e n t o f C l o s t r u d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n J i n M e n g ,Y a n g H o n gD e p a r t m e n t o f G a s t r o e n t e r o l o g y ,P e k i n g U n i o n M e d i c a lC o l l e g eH o s p i t a l ,P e k i n g U n i o n M e d i c a lC o l l e ge ,C h i n e s eA c a d e m y of M e d i c a lS c i e n c e s ,B e i j i ng 100730,C h i n a C o r r s p o n d i n g a u t h o r :Y a n g H o n g ,E m a i l :h o n g y72@163.c o m A B S T R A C T :C l o s t r u d i u md i f f i c i l e (C D )i sa m a j o rc a u s eo fh o s p i t a l a c q u i r e di n f e c t i o n .I t c a nc a u s ea n t i b i o t i c -a s s o c i a t e dd i a r r h e a a n de v e ni n d u c et o x i c m e g a c o l o na n ds h o c k .S y m p t o m so fC Di n f e c t i o n (C D I )r a n gef r o m m i l d d i a r r h e a t o l i f e -t h r e a t e n i n g p s e u d o m e m b r a n o u s c o l i t i s ,t o x i cm e g a c o l o n ,e v e n d e a t h .T h e t e s t i n g o f C Du s u a l l y r e q u i r e s am u l t i s t e p a l g o r i t h m (i e ,g l u t a m a t e d e h y d r o g e n a s e p l u s t o x i nAa n dBe n z y m e i mm u n o a s s a y s ).T h e f i r s t t h e r a pe u t i c s t e p o fC D I i s t od i s c o n t i n u e t h e a d m i n i s t r a t i o nof t h e i n c i t i ng a n t i b i o t i c a g e n t s a s s o o na s p o s s i b l e .A n dv a n c o m yc i n ,f id a x o m i c i na n dme t r o n i d a z o l e a r e r e c o mm e n d e da s t h em o s t ef f e c t i v e t h e r a p i e so fC D I .A s t o p a t i e n t s s u f f e r i ng fr o m C D I r e c u r r e n c e ,f e c a lm i c r o b i o t a t r a n s pl a n t a t i o n i s r e c o mm e n d e d K E Y W O R D S :C l o s t r u d i u mi n fe c t i o n s ;d i a g n o s i s ;t r e a t m e nt 杨红,女,北京协和医院消化内科副教授,副主任医师㊂2004年毕业于北京协和医学院(博士学位),2006-2008年于美国国立卫生院从事博士后研究㊂目前担任中华医学会炎症性肠病学组委员兼秘书,中华医学会临床流行病学分会青年委员会副主任委员,北京医学会消化病分会青年委员会副主任委员㊂主持并参与多项国家自然基金课题㊂擅长炎症性肠病诊治及相关临床㊁基础㊁流行病学研究㊂艰难梭菌(C l o s t r u d i u m d i f f i c i l e ,C D )是主要院内感染病原菌之一,严重者可危及生命,受到临床医生的高度重视㊂近年来C D 的诊断㊁治疗理念不断更新,如多步法检测C D ㊁非达霉素的临床研究和粪菌移植等㊂2018年美国感染病协会(I n f e c t i o u sD i s e a s e sS o c i e t y ofA m e r i c a ,I D S A )亦发表了新版C D 感染(C l o s t r u d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n ,C D I )诊治指南[1]㊂本文将结合近年进展对C D I 的临床表现和诊治进行阐述,以期指导临床治疗㊂1 C D I 流行病趋势早在1935年,H a l l 和O 'T o o l e 等就从健康新生儿粪便中分离出C D 并命名,但当时学者并未发现其致病性㊂1978年,G e o r g e 等第一次报道C D 与伪膜性肠炎有关㊂我国首例C D I 报道来自陈民钧等总结的北京协和医院11例抗生素相关结肠炎,并从中分离到C D ㊂20世纪90年代起,C D 成为重要医源性感染之一,占抗生素相关性腹泻的20%~25%[2]㊂21世纪以来,C D I 发病率随着广谱抗生素的广泛应用仍在快速上升㊂文献报道加拿大C D I 发病率从1997年的5.8/ɢ出院患者上升到2005年的20.7ɢ住院患者[3],并于2003年在北美㊁欧洲等地发生多起严重院内爆发,可能与B I /N A P I /027这一高毒力菌株有关㊂目前C D I 在美国每年造成约33万例感染,1.4万例死亡和近49亿美元的医疗开销,威胁全球公共卫生安全[4]㊂2009年中国流行病学研究显示C D I 的发病率为17.1/万住院患者日,住院腹泻患者中C D I 比例约11%~22%,I C U 中C D I 比例升至10%~32%[5],亦为我国公共卫生事业带来严重负担㊂Copyright ©博看网. All Rights Reserved.2C D I的临床特点2.1 C D I的临床症状 C D是一种革兰阳性产芽孢厌氧杆菌,属条件致病菌,产毒株与非产毒株在一定条件下都可以在肠道内定植(无症状携带),但宿主无腹泻等相应的临床症状㊂C D感染后潜伏期为2~ 3天,临床表现从无症状携带到爆发型肠炎均可出现㊂C D I常见临床表现为腹泻,大多数呈水样泻,部分可有脓血便,可伴有腹痛㊁发热㊁里急后重等㊂重症患者可导致严重腹泻㊁伪膜性肠炎㊁中毒性巨结肠㊁肠穿孔甚至死亡[6]㊂其严重程度评判主要依据临床症状和实验室检查,如白细胞(W B C)ȡ15ˑ109/L或血肌酐(S C r)ȡ1.5m g/d l则为重度C D I;如合并低血压㊁休克㊁中毒性巨结肠等则为爆发型C D I㊂文献报道C D I患者整体病死率4.5%~ 5.7%[7],暴发流行期间可升至16.9%,而爆发型C D I 患者病死率甚至可高达36.4%[8],故而对该病的早期识别㊁判断㊁治疗至关重要㊂2.2 C D的实验室检测手段 C D I检查方法包括以下3类:对C D本身的检测;对毒素的检测;产毒素C D的检测㊂2.2.1对C D本身的检测检测方法包括C D分离培养和谷氨酸脱氢酶(g l u t a m a t ed e h y d r o g e n a s e, G D H)抗原检测或培养㊂C D分离培养的缺点为存在假阳性率,因有10%或者更多的住院患者存在C D 定植,需结合毒素检测对C D检测结果进行判定㊂此外,C D培养对标本的收集㊁运输及选择性培养基的质量控制等环节均有严格要求㊂G D H是C D的固有酶,不同菌株都能产生大量G D H,容易在粪便中检测㊂2016年一项M e t a分析显示G D H检测灵敏度为91.1%,有较高的阴性除外价值[9]㊂但与单纯培养一样,该方法无法区分定植菌和致病菌,因此指南推荐其作为初筛试验㊂2.2.2对毒素的检测采用酶联免疫吸附方法对粪便进行C D感染毒素A/B的检测或者毒素中和实验㊂C D有毒株至少能产生2种毒素,毒素A及毒素B㊂毒素A是主要的毒力因子,具有很强的肠毒素活性㊂通过黏膜上皮细胞的c AM P系统使水和盐分泌增加导致分泌性腹泻,甚至引起黏膜出血㊂毒素B 为细胞毒素,其细胞毒性是毒素A的1000倍,可直接损伤肠壁细胞,引起炎性反应,纤维素㊁黏蛋白深处形成伪膜,导致渗出性腹泻㊂目前已有不少针对C D毒素检测的商品化试剂盒,灵敏度约为63%~94%,特异度为75%~100%[10],临床应用较为广泛㊂但仅进行毒素A检测的不能准确代表C D I,因为3%的C D I毒素A为阴性,且易受粪便留取到检测时间长短和保存温度影响,故推荐联合检测毒素A和毒素B㊂2.2.3产毒素C D的检测目前最常用核酸扩增实验(n u c l e i ca c i da m p l i f i c a t i o nt e c h n o l o g y,N A T)检测毒素基因,具有检测快速㊁灵敏度高的优点,但有一定假阳性率,不能区分定植与感染㊂指南推荐该法仅用于出现腹泻的患者,一般多建议N A T与酶联免疫方法进行联合检测㊂目前尚无公认的一种单独检测作为诊断C D I的方法,多推荐采用两步诊断法或多步法诊断C D I,文献报道多步诊断法的灵敏度为68%~100%,特异度为92%~100%[11]㊂二步法检测一般首选G D H或N A T,如G D H阴性或N A T阴性可排除C D I,G D H 阳性或N A T阳性则进一步采用酶联免疫方法检测毒素来诊断C D I㊂而多步法检测是:首先进行G D H 和毒素检测,当G D H检测阳性㊁毒素检测阴性时,再进行N A T检测毒素基因,即三步诊断法诊断C D I㊂此外,指南不推荐对无腹泻症状的患者常规筛查,亦不推荐7日内对同一次发作进行重复检查㊂2.3 C D I诊断标准 2018年I D S A指南提出[1],C D I诊断应基于临床症状和以下任意一项阳性:①粪便毒素检测阳性;②分离出产毒菌株;③内镜或病理学检查支持伪膜性肠炎㊂一般来说,内镜下伪膜性肠炎仅在少数严重患者中出现,故而临床应用有限㊂3C D I的治疗无症状的携带者不推荐治疗㊂诊断C D I后首要治疗为停用相关抗生素,并进行抗C D I治疗㊂治疗C D I方案选择主要应该考虑3个方面:临床类型㊁严重程度和既往治疗效果㊂3.1非重度C D I甲硝唑和万古霉素是治疗非重度C D I的主要药物㊂既往指南推荐非重度C D I治疗首选甲硝唑,当甲硝唑治疗无效或出现药物禁忌证时采用万古霉素治疗㊂但这些推荐主要基于20世纪两项小样本R C T研究(小于50例)㊂21世纪以来陆续发表几项临床研究则均显示万古霉素疗效优于甲硝唑(81.1%v s72.7%,P=0.02)[12]㊂万古霉素口服后基本不吸收,采用125m g口服4次/d,粪便中药物浓度次日达67~760m g/g,第4日则可达152~880m g/g,且药物浓度稳定,全身不良反应较Copyright©博看网. All Rights Reserved.小㊂此外,近年研究显示非达霉素对C D I有效㊂非达霉素是一种不易被吸收的大环内酯类抗生素,对C D有杀菌活性,但对其他革兰阳性菌疗效有限㊂2011年非达霉素的三期临床试验的结果发现其与万古霉素相比临床治愈率没有差别,而非达霉素组的复发率远低于万古霉素组[28]㊂因此,非达霉素已作为初发型C D I治疗的一线治疗,但由于其价格昂贵,临床推广受限㊂2018年I D S A指南推荐[1],非重度C D I治疗首选万古霉素(125m g,口服,每日4次,疗程10天)或非达霉素(200m g,口服,每日2次,疗程10天),如果前述两种药物无法获得,可选甲硝唑(500m g,口服,每日3次,疗程10天)[1]㊂但结合我国国情,万古霉素价格昂贵且可能增加耐万古霉素肠球菌的产生,非达霉素尚未广泛进入市场,故而甲硝唑仍具有一定临床优势,需结合患者病情和经济实力综合考虑㊂3.2重度或爆发型C D I对于重度C D I首选万古霉素治疗,如有条件也可选择非达霉素,对于部分复杂患者可联合万古霉素灌肠,或联用甲硝唑静脉治疗(500m g/次,每8小时静脉滴注)㊂静脉注射免疫球蛋白(150~400m g/k g)的保守免疫疗法可用于对其他疗法不敏感的患者[1]㊂对爆发型C D I患者,除药物治疗外,需密切监测并维持生命体征,警惕休克㊁中毒性巨结肠㊁肠穿孔等严重并发症发生㊂若出现下列情况之一者需考虑手术:①需要血管加压维持的患者;②脓毒症或器官(肾或肺)衰竭患者;③合并肠穿孔患者;④中毒性巨结肠患者;⑤复杂性C D I规范治疗5天后仍无明显效果㊂手术方式上,由于急诊手术病死率㊁围手术期并发症发生率较高,回肠造口+结肠灌洗是一种创伤轻㊁快速且可保留结肠的选择,与传统的结肠切除术相比可改善患者生存率(50%v s19%,O R= 0.24,P=0.006)[13]㊂3.3复发性C D I的治疗首次复发的治疗方案取决于初次治疗,如初次治疗为甲硝唑,则复发可选择万古霉素或万古霉素延长疗法㊂万古霉素延长疗法的用法为125m g,口服,每日4次,疗程10~14天ң125m g,口服,每日2次,疗程1周ң125m g,口服,每日1次,疗程1周ң125m g,口服,隔日1次,疗程2~8周[1]㊂但如初次治疗采用万古霉素,则复发时建议非达霉素的治疗㊂而对于多次复发的患者,则建议万古霉素延长疗法+利福昔明治疗,或非达霉素,或粪菌移植疗法㊂3.4粪菌移植(F e c a lm i c r o b i o t at r a n s p l a n t a t i o n,F MT) F MT近年受到广泛关注,研究显示新鲜粪菌移植和粪便肠溶胶囊都对C D I治疗有效,甚至优于传统甲硝唑㊁万古霉素药物治疗㊂动物实验表明C D I患者粪便菌群的多样性和物种丰富性均降低,肠球菌科㊁肠杆菌科比例增加[14]㊂F MT可以帮助患者重建肠道正常菌群,特别是对多次复发的C D I患者㊂1958年首次用于治疗伪膜性肠炎,M e t a分析显示F MT的治愈率接近90%,不良反应轻微[11]㊂其治疗机制被认为与改善粪便菌群结构有关,研究发现F MT后患者肠道菌群拟杆菌门增多㊁变形菌门减少,并可通过恢复次级胆汁酸水平增强对C D的定植抵抗能力[15]㊂目前指南主要推荐F MT用于复发3次及以上的C D I[1]㊂然而患者的心理接受程度,所捐献的粪便以及捐献者感染性疾病的筛查,收集粪便的过程,移植的途径均会影响治疗效果,且其治疗疗效尚需大样本研究证实㊂综上所述,C D作为抗生素相关腹泻最常见的病因之一,带来严重公共卫生负担,增加住院腹泻患者死亡率㊂临床工作中应早期识别高危患者,最大限度减少抗菌物使用频率和抗菌药物处方的数量以及缩短治疗持续时间,注意手卫生和环境消毒㊂对于高度怀疑感染的患者,合理采用毒素检测㊁细菌检测手段,并可采取二步检测法提高灵敏度㊁特异度㊂一旦诊断及时停用抗生素并开展治疗,如有条件首选万古霉素或非达霉素治疗C D I患者,F MT可用于多次复发患者治疗㊂参考文献:[1] M c D o n a l d L C,G e r d i n g D N,J o h n s o n S,e t a l.C l i n i c a lP r a c t i c eG u i d e l i n e s f o rC l o s t r i d i u md i f f i c i l e I n f e c t i o n i nA d u l t sa n dC h i l d r e n:2017U p d a t eb y t h e I n f ec t i o u sD i s e a s e sS o c i e t yo fA m e r i c a(I D S A)a n dS o c i e t y f o rH e a l t h c a r eE p i d e m i o l o g yo fA m e r i c a(S H E A)[J].C l i nI n f e c tD i s,2018,66(7):987-994.[2] M a g i l l S S,E d w a r d s J R,B a m b e r g W,e t a l.M u l t i s t a t e p o i n t-p r e v a l e n c e s u r v e y o fh e a l t hc a r e-a s s o c i a t e di n f e c t i o n s[J].NE n g l JM e d,2014,370(13):1198-1208.[3] G i l c aR,H u b e r tB,F o r t i nE,e t a l.E p i d e m i o l o g i c a l p a t t e r n sa n dh o s p i t a l c h a r a c t e r i s t i c s a s s o c i a t e dw i t h i n c r e a s e d i n c i d e n c eo f C l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n i nQ u e b e c,C a n a d a,1998-2006[J].I n f e c tC o n t r o lH o s p E p i d e m i o l,2010,31(9):939-947.[4] E v a n sC T,S a f d a rN.C u r r e n t t r e n d s i nt h ee p i d e m i o l o g y a n do u t c o m e s o fC l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n[J].C l i n I n f e c tD i s,Copyright©博看网. All Rights Reserved.2015,60(S u p p l2):S66-71.[5] H u a n g H,F a n g H,W e i n t r a u b A,e ta l.D i s t i n c tr i b o t y p e sa n d r a t e s o f a n t i m i c r ob i a l d r u g r e s i s t a nc e i n C l o s t r id i u md i f f i c i l ef r o m S h a n g h a ia n d S t o c k h o l m[J].C l i n M i c r o b i o lI n f e c t,2009,15(12):1170-1173.[6] K a r a s J A,E n o c hD A,A l i y uS H.Ar e v i e wo fm o r t a l i t y d u e t oC l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n[J].J I n f e c t,2010,61(1):1-8.[7] K w o n J H,O l s e n MA,D u b b e r k e E R.T h e m o r b i d i t y,m o r t a l i t y,a n d c o s t s a s s o c i a t e d w i t h C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n[J].I n f e c tD i sC l i n N o r t h A m,2015,29(1):123-134.[8] R o k a sK E,J o h n s o n J W,B e a r d s l e y J R,e t a l.T h e a d d i t i o no fi n t r a v e n o u s m e t r o n i d a z o l et o o r a lv a n c o m y c i ni s a s s o c i a t e dw i t h i m p r o v e d m o r t a l i t y i n c r i t i c a l l yⅢp a t i e n t s w i t hC l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n[J].C l i nI n f e c tD i s,2015,61(6):934-941.[9] A r i m o t o J,H o r i t aN,K a t oS,e t a l.D i a g n o s t i c t e s t a c c u r a c yo f g l u t a m a t e d e h y d r o g e n a s e f o r C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e: s y s t e m a t i cr e v i e w a n d m e t a-a n a l y s i s[J].S c iR e p,2016,6: 29754.[10] N e u e n d o r fM,G u a d a r r a m a-G o n z a l e zR,L a m i k B,e ta l.Ap r o s p e c t i v e s t u d y o f t w o i s o t h e r m a l a m p l i f i c a t i o n a s s a y sc o m p a r e dw i t h r e a l-t i m e P C R,C C N Aa nd t o x i ge n i c c u l t u r ef o rt h ed i a g n o s i s o f C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o n[J].B M CM i c r o b i o l,2016,16:19.[11] B a g d a s a r i a nN,R a oK,M a l a n iP N.D i a g n o s i sa n dt r e a t m e n to fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n a d u l t s:as y s t e m a t i cr e v i e w[J].J AMA,2015,313(4):398-408.[12]J o h n s o n S,L o u i e T J,G e r d i n g D N,e t a l.V a n c o m y c i n,m e t r o n i d a z o l e,o r t o l e v a m e r f o rC l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n: r e s u l t s f r o mt w o m u l t i n a t i o n a l,r a n d o m i z e d,c o n t r o l l e dt r i a l s[J].C l i n I n f e c tD i s,2014,59(3):345-354.[13] N e a l M D,A l v e r d y J C,H a l l D E,e t a l.D i v e r t i n g l o o pi l e o s t o m y a n d c o l o n i c l a v a g e:a na l t e r n a t i v e t o t o t a l a b d o m i n a lc o l e c t o m y f o r t h e t r e a t m e n t o f s e v e r e,c o m p l i c a t e dC l o s t r i d i u m d i f f i c i l ea s s o c i a t e dd i s e a s e[J].A n nS u r g,2011,254(3):423-427.[14] A n t h a r a m V C,L iE C,I s h m a e lA,e t a l.I n t e s t i n a l d y s b i o s i sa n dd e p l e t i o no fb u t y r o g e n i cb ac t e r i ai n C l o s t r id i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o na n dn o s o c o m i a l d i a r r h e a[J].JC l i n M i c r o b i o l,2013,51(9):2884-2892.[15] Q u r a i s h iMN,W i d l a k M,B h a l aN,e ta l.S y s t e m a t i c r e v i e ww i t h m e t a-a n a l y s i s:t h e e f f i c a c y o f f a e c a l m i c r o b i o t a t r a n s p l a n t a t i o n f o rt h et r e a t m e n to fr e c u r r e n ta n dr e f r a c t o r yC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o n[J].A l i m e n tP h a r m a c o lT h e r,2017,46(5):479-493.收稿日期:2018-05-09编辑:张卫国Copyright©博看网. All Rights Reserved.。
诊断试剂盒评估报告
诊断试剂盒评估报告报告目的：本评估报告旨在对一款诊断试剂盒进行全面评估，包括性能、准确性、可靠性以及与现有市场上类似产品的比较等方面的评估，为其在医疗领域的应用提供参考。
报告内容：一、产品概述该诊断试剂盒是一种用于疾病诊断的快速检测工具。
它基于xx技术原理，可以在短时间内迅速检测出其中一种特定疾病的存在与程度。
该试剂盒具有简便、快速、准确的特点，适用于临床、实验室等不同场景下的使用。
二、性能评估1.灵敏度：通过一系列浓度递减的标准物质进行实验，评估试剂盒对于低浓度目标物的检测能力。
结果显示，该试剂盒对于低至xx浓度的目标物具有较好的灵敏度。
2.特异性：为了评估试剂盒对于非目标物的特异性，我们使用多种潜在干扰物样本进行测试。
结果显示，该试剂盒对于非目标物没有明显的交叉反应，具有较好的特异性。
3.精确度：通过多次重复实验，评估试剂盒的测量结果的重复性和一致性。
结果显示，该试剂盒具有较好的重复性和一致性，其测量结果的偏差较小。
三、准确性评估为了评估试剂盒的准确性，我们与已有的黄金标准进行对比分析。
结果显示，该试剂盒与黄金标准的结果具有较好的一致性，其准确性可以得到有效保证。
四、可靠性评估1.试剂稳定性：我们对试剂盒进行了长期存储试验，并测试了存储不同时间后的试剂的性能。
结果显示，该试剂盒具有较好的稳定性，能够在常规储存条件下保持较长时间的有效性。
2.运输适应性：为了评估试剂盒在运输过程中的适应性，我们模拟了运输过程中的不同环境条件，并测试了不同环境条件下试剂盒的性能。
结果显示，试剂盒在极端温度和湿度条件下仍能保持较好的性能。
五、市场竞争分析我们对市场上类似产品进行了调研和对比分析。
结果显示，该试剂盒相对于其他产品具有更快的检测速度、更高的准确性以及更低的成本，具有较强的竞争优势。
六、结论及建议综合以上评估结果，我们认为该诊断试剂盒具有良好的性能、准确性和可靠性，适用于临床、实验室等不同场景下的使用。
建议公司加强宣传推广，提高市场认知度，并与相关机构合作，进行更大范围的临床验证，以进一步验证其应用效果。
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求huayu
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒（α-酮戊二酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中谷氨酸脱氢酶的活性。
1.1 产品型号/规格试剂1：1×30 ml，试剂2：1×10 ml；试剂1：2×30 ml，试剂2：2×10 ml；试剂1：4×30 ml，试剂2：4×10 ml；试剂1：8×30 ml，试剂2：8×10 ml；试剂1：1×45 ml，试剂2：1×15 ml；试剂1：2×45 ml，试剂2：2×15 ml；试剂1：3×50 ml，试剂2：2×25 ml；试剂1：1×60 ml，试剂2：1×20 ml；试剂1：2×60 ml，试剂2：2×20 ml；试剂1：2×90 ml，试剂2：2×30 ml；试剂1：2×90 ml，试剂2：3×20 ml；试剂1：4×90 ml，试剂2：4×30 ml；试剂1：2×15 ml，试剂2：2×5 ml ；试剂1：4×15 ml，试剂2：4×5 ml ；试剂1：8×15 ml，试剂2：8×5 ml ；试剂1：16×15 ml，试剂2：16×5 ml。
校准品：1 ml/瓶×1瓶（选配）1.2 主要组成成分试剂1：三乙醇胺缓冲液50 mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA） 3.0 mmol/L醋酸铵120 mol/L二磷酸腺苷（ADP）≥1.35 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）0.25 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH）≥2 U/L试剂2：三乙醇胺缓冲液8.0 mmol/Lα-酮戊二酸 40 mmol/L校准品（选配）：Tris缓冲液100 mmol/L Proclin-300 0.5‰谷氨酸脱氢酶目标浓度100.00U/L注：校准品浓度具有批差异性，具体浓度见校准品瓶签。
艰难梭菌感染实验室诊断方法的研究进展
艰难梭菌感染实验室诊断方法的研究进展潘月华;李从荣【期刊名称】《安徽医学》【年(卷),期】2016(037)002【总页数】3页(P246-248)【关键词】艰难梭菌;实验室诊断;毒素 A 基因;毒素 B 基因【作者】潘月华;李从荣【作者单位】430060 湖北武汉武汉大学人民医院检验科;430060 湖北武汉武汉大学人民医院检验科【正文语种】中文艰难梭菌(clostridium difficile，CD)是一种专性厌氧的革兰阳性粗大杆菌，肠道内的正常菌群。
当打破肠内菌群平衡时，CD可大量繁殖。
其主要是通过产生艰难梭菌A毒素(clostridium difficile toxin A，TcdA)或艰难梭菌B毒素(clostridium difficile toxin B，TcdB)致病[1]，TcdA为肠毒素，可与肠黏膜受体结合，引起局部肠黏膜血管的通透性增加，致绒毛损害，黏膜出血、坏死；TcdB是一种高致病的细胞毒素，能解聚肠黏膜肌动蛋白，破坏细胞骨架[2-3]，对肠道产生更大的破坏。
CD可导致抗菌药物相关性腹泻、医院性腹泻及假膜性肠炎等感染性疾病[4-5]。
近年来，随着抗生素的广泛应用、免疫抑制剂或化疗药物的增加，导致医院感染源、易感人群和感染途径大大增加，使医院感染呈日益严重、变化的趋势[6]，以及高产毒菌株027/NAP1/BI的出现，在欧美国家相继导致医院内及社区流行，且严重程度和发病率不断增加，已经成为重要的医院内感染病原菌之一[7-8]。
因此，准确而又快速的实验室检查结果对艰难梭菌感染(clostridium difficile infection，CDI)诊断和治疗显得尤为重要。
现国内外有多种检测CDI的方法[9-11]，主要是针对艰难梭菌的A毒素和B毒素或毒素基因进行检测，它们各有优势和局限性。
本文将对各种实验室诊断方法的最新研究进展进行综述，以期为选择合适的CD实验室诊断方法提供依据。
试剂盒评估报告模板
试剂盒评估报告模板【试剂盒评估报告模板】标题：某某试剂盒评估报告一、背景介绍在科学研究、医学诊断以及其他实验室工作中，试剂盒被广泛应用于样品处理、分析检测等过程中。
试剂盒的质量直接影响着实验结果的准确性和可靠性。
本报告旨在评估某某试剂盒的性能和可靠性，为使用者提供选择和购买的参考。
二、评估项目及方法1. 试剂盒性能评估本评估项目通过以下基本指标来评估试剂盒的性能：（1）精确性：通过与标准物质进行比对，比较试剂盒检测结果的准确性。
（2）重复性：通过反复测定相同样本，比较试剂盒检测结果的一致性。
（3）特异性：通过测定其他相关物质，检验试剂盒的特异性。
（4）稳定性：通过检测试剂盒的储存条件和有效期来评估其稳定性。
2. 试剂盒操作评估本评估项目通过以下指标来评估试剂盒的操作性：（1）简易性：评估试剂盒操作步骤的简便程度。
（2）时间效率：评估试剂盒在一定时间内完成样本处理和检测的能力。
（3）实验工作量：评估试剂盒所需手工操作和仪器操作的程度。
三、评估结果及分析1. 试剂盒性能评估（1）精确性：经对比分析，试剂盒的检测结果与标准物质结果相符合，具备较高的精确性。
（2）重复性：在多次反复测定同一样本的实验中，试剂盒的结果具有较高的一致性，重复性良好。
（3）特异性：通过对其他相关物质的测定结果，发现试剂盒能够准确区分目标物质和其他物质，具备一定的特异性。
（4）稳定性：试剂盒经过存储条件和有效期评估，结果显示其稳定性较好，能够长期储存和使用。
2. 试剂盒操作评估（1）简易性：试剂盒操作步骤简单，易于理解和掌握，适用于不同技术水平的使用者。
（2）时间效率：试剂盒的操作快速且高效，可以在较短时间内完成样本处理和检测工作。
（3）实验工作量：试剂盒操作主要是手工操作，仪器操作相对较少，减轻了使用者的工作负担。
四、评估结论及建议1. 评估结论本次试剂盒评估结果显示，该试剂盒性能可靠，具有良好的精确性、重复性、特异性和稳定性。
液体双试剂谷氨酸脱氢酶检测试剂盒的评价
液体双试剂谷氨酸脱氢酶检测试剂盒的评价发表时间：2016-04-11T16:41:02.343Z 来源：《健康世界》2014年24期供稿作者：石久江1 晏志国2[导读] 1.北京市怀柔区中医医院 101400；2.北京市怀柔区雁栖医院 101407 九强新推出的液体双试剂谷氨酸脱氢酶（GLDH）检测试剂盒分析性能及稳定性良好，抗干扰能力强，在性能及稳定性上均优于进口Randox干粉试剂，可以定量分析样本中的谷氨酸脱氢酶，也更加方便检验科医生使用。
1.北京市怀柔区中医医院 101400；2.北京市怀柔区雁栖医院 101407摘要：目的：对一种新的液体双试剂谷氨酸脱氢酶检测试剂盒（GLDH）进行方法学评价。
方法：评价北京九强生物技术股份有限公司新型液体双试剂及英国Randox公司干粉谷氨酸脱氢酶检测试剂盒的精密度、线性、干扰因素、最低检测限、相关性以及稳定性。
结果：1）九强及Randox试剂的批内精密度和室内精密度良好；2）在1-120U/L检测范围内，九强及Randox试剂稀释线性良好；3）抗坏血酸、血红蛋白、结合胆红素对测定均无明显干扰，抗丙酮酸干扰性能九强优于Randox；4）两种试剂的最低检测限可以满足临床需求；5）九强与Randox试剂在0.7-120U/L，回归方程为 y（九强）= 1.006x（Randox）-0.108，相关系数为0.999，；6）九强试剂开盖一个月，测定质控稳定性良好，而Randox试剂有明显下降趋势。
结论：九强新推出的液体双试剂谷氨酸脱氢酶（GLDH）检测试剂盒分析性能及稳定性良好，抗干扰能力强，在性能及稳定性上均优于进口Randox干粉试剂，可以定量分析样本中的谷氨酸脱氢酶，也更加方便检验科医生使用。
关键词：谷氨酸脱氢酶；精密度；线性谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GLDH；EC1.4.1.3）是一种主要存在于细胞线粒体基质中的酶，人体中以肝脏含量最高，其次为肾脏、胰腺、脑、小肠粘膜及心脏等器官。
艰难梭菌核酸DNA检测试剂盒实时荧光PCR法技术参数
艰难梭菌核酸(DNA)检测试剂盒(实时荧光PCR法)技术参数
1.检测方法：实时荧光定量PCR法
2.检测项目：快速检测产毒型艰难梭菌B(tcbB)毒素基因
3.检测时间：从样品处理开始到结果报告，应在45min以内完成
4.操作步骤：样本可直接上机，无需人工提取核酸，直接报告可读结果。
5.生物安全性：闭管检测，减少实验室污染，避免假阳性的出现
6•质量控制：应具备样本质控体系、试剂盒质控体系，用来监测试剂的有效性及反应过程的有效性
7.投标产品应在国内前100家三甲医院有过使用记录。
艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的性能评估
艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的性能评估秦娟秀;张灏旻;刘倩;夏强;李敏【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2017(032)012【摘要】目的对新产品艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒(免疫层析法,C.DIFF QUICK CHEK COMPLETE)进行性能评估.方法收集临床腹泻患者粪便标本130份,对腹泻粪便标本同时进行艰难梭菌毒素A/B检测试剂盒、艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒和毒素培养检测,以金标准毒素培养法结果作为参比标准,评价各种检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,从而对艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒进行性能评估.结果毒素培养法检测艰难梭菌的阳性率为13.8%(18/130).与金标准方法相比,艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为55.6%、98.2%、83.3%和93.2%,艰难梭菌毒素A/B检测试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为50.0%、95.6%、64.3%和92.1%.结论艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒特异性高,阳性预测值较高,且检测周期短,无需特殊仪器平台,可作为医院门、急诊艰难梭菌感染的初筛试剂盒.【总页数】4页(P1152-1155)【作者】秦娟秀;张灏旻;刘倩;夏强;李敏【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院检验科,上海 200127;上海交通大学医学院附属仁济医院检验科,上海 200127;上海交通大学医学院附属仁济医院检验科,上海 200127;上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科,上海 200127;上海交通大学医学院附属仁济医院检验科,上海 200127【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.艰难梭菌毒素A/B、BD-PCR毒素基因及GDH检测对艰难梭菌相关性腹泻的诊断价值 [J], 邵婧;丁宸;徐萍萍2.艰难梭菌毒素致病基因调控机制和抗毒素治疗 [J], 林倩云;费稼希;陈烨3.艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒对艰难梭菌感染诊断价值的Meta 分析 [J], 祁琪;茅一萍;李阳;刘纪;高洁;杨阳;郑伟4.抗艰难梭菌毒素B抗体可以预防艰难梭菌感染复发 [J], 丁百兴;王明贵;Gupta SB;Mehta V;Dubberke ER5.五种艰难梭菌检测方法性能评估 [J], 伍众文;郭鹏豪;陈怡丽;魏斯琪;廖康因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
基金项目：15年种子基金项目（RJZZ15-017） 作者简介：秦娟秀，女，1989年生，硕士，技师，主要从事病原微生物的致病机制研究。 通信作者：李 敏，联系电话： 021-68383297。
Abstract：Objective To evaluate the performance of C. DIFF QUICK CHEK COMPLETE，which can be used to determine Clostridium difficile glutamate dehydrogenase antigen and toxin. Methods A total of 130 clinical diarrheal stools were collected. C. DIFF QUICK CHEK COMPLETE，VIDAS Clostridium difficile Toxin A/B and Clostridium difficile toxin culture were performed according to the manufacturers' instructions. The sensitivities， specificities，positive predictive values and negative predictive values were evaluated. The performance was evaluated，and the results of toxin culture were as standard. Results There were 18 positive cases（13.8%） by toxin culture，and the sensitivity，specificity and positive and negative predictive values were 55.6%，98.2%， 83.3% and 93.2%，respectively. For C. DIFF QUICK CHEK COMPLETE，the sensitivity，specificity and positive and negative predictive values were 50.0%，95.6%，64.3% and 92.1%，respectively. Conclusions C. DIFF QUICK CHEK COMPLETE has high specificity and positive predictive value，with short turn-around time，which can be used for screening Clostridium difficile infection.
·1152·
检验医学 2017 年 12 月第 32 卷第 12 期 Laboratory Medicine，December 2017，Vol. 32，No. 12
文章编号 ：1673-8640（2017）12-01152-04 中图分类号 ：R446.61 文献标志码 ：A DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2017.12.019
Key words：Clostridium difficile；Diagnosis；Glutamate dehydrogenase；Toxin A/B
艰难梭菌是一种专性的革兰阳性厌氧杆菌， 是抗菌药物相关腹泻的重要致病菌。其引起的临 床症状可以是无症状，也可以是中度的肠炎、重
度的伪膜性肠炎甚至是死亡[1-2]。近年来，出现 了艰难梭菌核糖体027型，其以高毒力、高耐药 性和高致死率的特点在欧美国家广泛传播，引
艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的性能评估
秦娟秀1， 张灏旻1， 刘 倩1， 夏 强2， 李 敏1
（1.上海交通大学医学院附属仁济医院检验科，上海 200127；上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏 外科，上海 200127）
摘要：目的 对新产品艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒（免疫层析法，C.DIFF QUICK CHEK COMPLETE）进行性能评估。方法 收集临床腹泻患者粪便标本130份，对腹泻粪便标本同时进行艰 难梭菌毒素A/B检测试剂盒、艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒和毒素培养检测，以金标准毒素 培养法结果作为参比标准，评价各种检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值，从而对艰难 梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒进行性能评估。结果 毒素培养法检测艰难梭菌的阳性率为13.8% （18/130）。与金标准方法相比，艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测 值和阴性预测值分别为55.6%、98.2%、83.3%和93.2%，艰难梭菌毒素A/B检测试剂盒的敏感性、特异性、阳 性预测值和阴性预测值分别为50.0%、95.6%、64.3%和92.1%。结论 艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测 试剂盒特异性高，阳性预测值较高，且检测周期短，无需特殊仪器平台，可作为医院门、急诊艰难梭菌感染 的初筛试剂盒。
关键词：艰难梭菌；诊断；谷氨酸脱氢酶；毒素A/B
Performance of C. DIFF QUICK CHEK COMPLETE QIN Juanxiu1，ZHANG Haomin1，LIU Qian1，XIA Qiang2，LI Min1. （1.Department of Laboratory，Renji Hospital，Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 200127，China；2.Hepatic Surgery，Renji Hospital，Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 200127，China）