实验三 植物组织RNA的提取与分析
木本植物组织总rna提取的要点与原理
木本植物组织总rna提取的要点与原理木本植物组织总RNA提取是研究植物生物学非常重要的一项技术。
通过总RNA提取，我们能够了解植物的基因表达情况，揭示其分子机制，并且可以用于后续的转录组学和蛋白质组学研究。
以下是木本植物组织总RNA提取的要点和原理。
一、要点：1.样品的选择：首先要选择新鲜且健康的植物组织作为样品，如嫩茎、叶片等。
避免使用受感染、受损或者老化的组织。
2.样品的处理：样品应尽快处理，避免长时间保存。
在处理之前，应该用无菌水清洗样品，并用无菌酒精消毒。
同时，还需要将工作台、仪器和试剂消毒，保持无菌状态。
3.细胞破碎方法：根据木本植物的组织特点，常用的细胞破碎方法包括机械破碎、液氮破碎和酶解破碎。
机械破碎可以利用研钵、搅拌器或者高压细胞破碎机，液氮破碎是将样品冷冻在液氮中后用研钵研磨，酶解破碎则利用酶的作用溶解细胞壁。
4. RNA保护剂的添加：为了保护RNA免受RNase酶的降解，常常在提取过程中加入RNA保护剂，如二硫磷酸二丙酯(DTT)、碟加硫磺酰亚胺(DMSO)等。
5. RNA提取试剂盒的选择：提取总RNA的常用试剂盒有Trizol试剂盒、RNeasy试剂盒和Column试剂盒等。
根据实验需求和样品特点选择适合的试剂盒。
6.RNA的纯化和浓缩：通常会通过反转录酶链反应合成cDNA，去除DNA质粒和RNA小分子杂质，然后利用酒精沉淀或硅胶柱层析等方法将总RNA纯化和浓缩。
二、原理：总RNA提取的原理主要包括样品细胞壁破碎、蛋白质和DNA去除以及RNA的纯化和浓缩。
1.细胞壁破碎：首先需要将植物组织破碎，破碎的方法可以选择机械、酶解和液氮等方法。
机械破碎是利用机械力使细胞壁破裂，液氮破碎则通过冷冻-解冻的过程来破裂细胞壁，酶解破裂则是利用酶的作用降解细胞壁。
2.蛋白质和DNA去除：接下来需要去除蛋白质和DNA，以便提取纯净的RNA。
常用的方法有酚/氯仿提取法和磁珠分离法。
酚/氯仿提取法是利用酚提取混合溶液中的蛋白质和DNA，而磁珠分离法则是通过特定的磁珠来吸附蛋白质和DNA，然后用磁力将磁珠分离。
植物rna提取实验报告
植物rna提取实验报告植物RNA提取实验报告植物RNA提取是生物学研究中常用的实验技术之一。
通过提取植物细胞中的RNA分子，可以进一步研究植物基因的表达和调控机制。
本实验旨在探究RNA提取的方法和步骤，并对提取得到的RNA进行分析。
一、实验材料和方法1. 实验材料：- 植物样本：可以选择自然生长的植物或实验室培养的植物。
- RNA提取试剂盒：常用的试剂盒有Trizol、RNAiso Plus等。
- 高速离心机：用于离心植物组织和提取液。
- 1.5 mL离心管和离心管架：用于混合试剂和样本。
- 离心管摇床：用于混合试剂和样本。
- 离心管架：用于离心植物组织和提取液。
2. 实验方法：- 准备植物样本：选择新鲜的植物叶片或其他组织，尽量避免使用老化或受损的植物材料。
- 细胞破碎：将植物样本放入1.5 mL离心管中，加入适量的RNA提取试剂。
使用离心管摇床将样本和试剂充分混合，破碎细胞壁释放RNA。
- 提取RNA：离心混合物，将上清液转移到新的离心管中。
加入适量的异丙醇，使RNA沉淀。
再次离心，将上清液倒掉，留下RNA沉淀。
- 洗涤RNA：加入75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心后将乙醇倒掉。
重复洗涤步骤，以去除污染物。
- 干燥RNA：将离心管开盖，放置在通风处晾干RNA沉淀。
- 溶解RNA：加入适量的RNase-free水或稀释缓冲液，使RNA溶解。
二、实验结果和分析通过上述步骤，我们成功地提取到了植物样本中的RNA。
为了验证RNA的纯度和完整性，我们使用紫外-可见光分光光度计检测了提取得到的RNA溶液的吸光度。
结果显示，RNA溶液的吸光度比例A260/A280在1.8-2.0之间，符合纯RNA的标准。
这表明我们成功地去除了蛋白质和其他污染物，得到了纯净的RNA样本。
为了进一步确认RNA的完整性，我们进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
将提取得到的RNA样本与RNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，经过电泳后，用紫外灯照射，可以观察到RNA分子的带状图谱。
植物总RNA提取
植物总RNA提取实验方法原理通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
实验材料新鲜植物组织试剂、试剂盒β-巯基乙醇乙醇蛋白液RW1 漂洗液RW 蒸馏水无菌水仪器、耗材研钵离心管离心机移液枪移液管收集管吸附柱水浴锅实验步骤一、新鲜植物组织称重后取100 mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100 mg放入研钵），加入10体积（1 ml）RLT(请确定已加入β-巯基乙醇)和1体积（100 ul）PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLT立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
二、将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13 000 rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid，取450 ul 裂解物上清转到一个新离心管。
三、加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
四、将混合物(每次小于700 ul，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13 000 rpm离心60秒，弃掉废液。
五、加700 μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12 000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
如果DNA残留明显，可在加入RW1后室温放置5分钟后再离心。
六、加入500 ul漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
加入500 ul漂洗液RW，重复一遍。
七、将吸附柱RA放回空收集管中，13 000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
植物组织RNA提取的要点与技巧从植物组织中提取RNA
植物组织RNA提取的要点与技巧从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。
要进行Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR 及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。
因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。
从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。
一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。
在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA 相互作用。
酚类化合物被氧化后会与RNA 不可逆地结合，导致RNA 活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA 的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA 共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA 的化学降解和酶解。
对于这些植物材料，用常规的RNA 提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA 。
如Lбpez-Gбmez等在用常规的方法提取芒果果实的RNA 时未能成功，他们的结果分为三种情况：提出的RNA 已被降解；RNA 的得率很低；得到的RNA 不能进行体外翻译。
他们认为在果实成熟时各种酶的活性增强，其中也包含RNase，不溶性的淀粉转化为可溶性的多糖，芒果果实细胞壁中特殊的成份，以及果实中高含量的多酚化合物都是干扰RNA 提取的因素。
Tesniere等在用苯酚法和胍法提取葡萄果实的RNA 时，发现RNA 与某种未知化合物凝聚成不溶性的复合物，并且这种未知化合物在230nm和270nm处有强的光吸收，从而干扰了RNA 紫外吸收的测定。
因此能否有效地去除多糖、酚类化合物、RNase和干扰RNA 提取的其它代谢产物是提取高质量植物RNA 成败的关键。
植物总rna的提取实验报告(共4篇)
植物总rna的提取实验报告(共4篇)实验一：植物总RNA的提取摘要：本实验采用常见的RNA提取方法，结合了Trizol试剂和琼脂糖柱纯化法，成功地获得了木瓜叶片、玫瑰花瓣、菜花花瓣和绿萝叶片的总RNA。
通过比较各样品的RNA浓度和纯度，得出提取的总RNA具有较好的质量和量，适合后续实验应用。
关键词：植物总RNA提取；Trizol试剂；琼脂糖柱纯化法；RNA浓度和纯度测定。
引言：RNA是生物体内最为丰富的生物大分子之一，植物细胞内涵盖了大量的RNA。
然而，总RNA是包括所有RNA种类的总和，因此其含量比其他类型的RNA更为丰富。
提取植物总RNA 是分子生物学和遗传学中的一项基本技术，在众多的实验过程中都需要应用。
各种提取方法都存在优缺点，根据实验需要选择不同的方法。
实验目的：实验材料：1.四种植物组织：木瓜叶片、玫瑰花瓣、菜花花瓣和绿萝叶片；2.Trizol试剂；3.乙醇和0.1M氯化钠；4.琼脂糖柱纯化试剂盒；5.常规实验室用品。
实验方法：1.测定植物组织的重量，并用液氮研磨器将其研磨成粉末状；2.加入10ml Trizol试剂，1ml的粉末，颠倒瓶子多次，使其彻底混合。
放置室温下5min，加入1ml氯仿混合，轻轻地混合进行离心分离。
将上层的非水相转移到新的离心管中，并加入1ml的高度纯化乙醇；3.离心15s，将上清转移到新的离心管中。
加入0.5ml的75%热硫酸β-丙酮，颠动瓶子，将混合物混匀，放置于室温下5min，并进行离心3min。
取出上清并加入等体积的异丙醇混合离心，并重复两次。
4.最后我们使用琼脂糖柱纯化试剂盒进行纯化。
按照说明书的操作步骤进行操作，得到纯化后的RNA样本。
5.测定RNA的浓度和纯度。
实验结果：我们成功地从四种植物组织中提取到了总RNA，并通过琼脂糖柱纯化法进行了纯化。
样品的RNA浓度和纯度如下表所示。
| 样品 | OD260/280 | RNA浓度（ng/μl） ||------|-----------|--------------------|| 木瓜叶片 | 2.08 | 363.7 |该实验成功地提取了四种植物组织中的总RNA，并经过琼脂糖柱纯化制备出了高质量和高纯度的RNA样本。
RNA提取方法及原理
操作步骤
（一）动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、 动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫 克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。 RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+ 分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆
实验流程图
细胞
氯仿 水相
细胞选择
纯化 RNA 基因组DNA
离心
贴壁细胞 悬浮细胞
加入裂解液 (TRNzol-A+)
有机相
pH5.7
2.4.2 苯酚法
细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白 的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并 除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧 裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水 相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面 处形成凝胶层。
谢 谢
异硫氰酸胍—酚法提取植物组织总RNA
1） 取2g左右植物组织放入研钵中，反复加入液氮充分研磨至 粉末状。加4－5mL异硫氰酸胍溶液。转移到小离心管中，每 管0.5mL。 2） 置于冰上，顺序加入：50μl 2mol/L NaAc , 混匀，0.5mL水 饱和酚， 170μl CI，混匀。置冰上15min。 3） 各管平衡后，4℃,12 000g离心20-30min。转移上清到另一 管中，加入等体积的异丙醇，混匀，－20℃沉淀30min-1hr或 －80℃沉淀10min。4℃,12 000g离心20min回收RNA。 4） 用70％乙醇洗一次，4℃，12 000g离心5min。吸去乙醇， 空气中吹干RNA沉淀。用150μl 异硫氰酸胍溶液，65℃吹打 RNA沉淀溶解。
实验三 植物组织RNA的提取与分析
二、实验原理
Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速 抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、 降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。在氯仿抽提、 离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀 RNA。 用这种方法得到的总 RNA 中蛋白质和 DNA 污染很少， 可以用来做 Northern ，RT-PCR，分离mRNA，体外翻译和分 子克隆等。
实验三 植物组织RNA的提取与鉴定
1
一、实验目的
（1）通过本实验，了解RNA的结构和特点。
（2）学会使用Trizol法提取植物总RNA。
（3）学习和掌握总RNA的检测实验技术和实验
原理。
2
二、实验原理
RNA的提取是进行分子克隆和基因表达分析等研究的基 础。但 RNA 很容易被内源及外源的 RNase 降解，所以要得到 未被降解的、不含DNA与其它杂质的RNA是进行分子生物学 研究的前提。 目前较为成熟的分离RNA的方法有许多，用于植物细胞 总RNA的提取主要有苯酚法、异硫氰酸胍法、氯化锂沉淀法、 SDS/酚抽提法，或应用商品化的Trizol试剂和Qiagen等各类试 剂盒进行提取。但由于植物细胞具有坚硬的细胞壁，内含较 多的多糖、脂质、多酚等次生代谢物，同种植物的不同组织 和不同植物的同种组织材料，其RNA的提取方法也会有很大 差异。适宜的RNA提取材料处理方法也不尽相同。
三、仪器和试剂
1、仪器： 高速冷冻离心机、微波炉、稳压电源、水平电泳槽、 凝胶成像系统。 2、材料与试剂： 液氮、Trizol、氯仿、异丙醇、70%乙醇、DEPC处 理的蒸馏水、琼脂糖、1×TAE、上样缓冲液。
5
四、实验步骤
1、RNA的提取 （1）称取0.1g新鲜植物叶片（小麦、烟草、吊兰等均可）置 于研钵中，加入液氮，迅速研磨成均匀的粉末，快速将全部 粉末转入1.5mL的无RNA酶的离心管中。 （2 ）向离心管中快速加入 1mLTrizol ，充分混匀后室温下放 置5min。 （3）4℃，12000r/min离心10min。 （4）吸取上清液置于一个新的1.5mL的无RNA酶的离心管中， 加入200uL氯仿，剧烈震荡1min，室温放置3min。
提植物总RNA及去DNA和反转录标准方法(会给实验室一大笔提取试剂盒的经费)
Trizol法提取植物总的RNA及反转录可用于RT-PCR【中文版】一、植物总RNA 的提取抽提RNA 所用的研钵酒精灼烧5-10min或灭菌.，器皿均高温高压灭菌，以去除RNA 酶，所有试剂都保证没有RNA 酶污染。
1) 1.5ml 离心管,取0.1g 组织在液氮中研磨至粉末, 立即加入1ml Trizol，涡旋充分混匀后放置2min。
2) 加0.2体积（氯仿Chloroform），剧烈振荡15s（vortex），室温放置3min（或不放置，直接离心）。
3) 4℃，12000rpm 离心5min，样品会分成3 层，取上层水相，取上清。
4) 加等体积的异丙醇，混匀，4℃放置10min以上。
或可以-80℃过夜。
5) 4℃，12000rpm 离心20min，4℃弃上清，管底管侧形成胶状沉淀（可看到白色沉淀）。
6) 加1ml 75%乙醇，充分溶解沉淀。
4℃，12000rpm 离心5min。
倒掉上清，用移液器吸干。
7) 晾干约10 min。
(不要晾太长时间，看不到水就可以加灭菌水)8) 加50μl灭菌的超纯水，65℃溶解，-20℃（最好-80℃）保存。
（注：要是处理DNase就不能加这么多水。
可以加5μl）整个提取步骤最好咋在4℃或冰上完成二、DNase I 处理消化植物总RNA 中的基因组DNA1) 将上述全部提取的植物总RNA 5μl，然后顺序加入1μl 10×缓冲液，1μl DNase，3μl RNase-free水，总体积10μl，充分混匀后，37℃温育30 min。
2）加入300ul 灭菌水提高体积，然后加入300ul PCI，vortex；4℃，12000rpm 离心5min；3) 加入1/10 体积3M 醋酸钠(autoclaved) pH 5.2, 和2倍体积的100% EtOH；（-20℃，10-30min或可以-80℃过夜）4) 4℃，12000rpm 离心15min，6)75% EtOH, 300ul, 12000 rpm 5min7) dry （10-15min）and add 30-50 ul of ddH2O三、反转录cDNA1) 在上述总体积为11μl 反应液中加入1μl Oligo(dT)18 引物4μl 5×缓冲液，2 μl dNTP，1μl 反转录酶，1μl RNase 抑制剂，总体积20μl，充分混匀后，42℃温育1-1.5hr。
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四、实验步骤
1、RNA的提取 （5）4℃，12000r/min离心10min。 （6）吸取上清液置于一个新的1.5mL的无RNA酶的离心管中， 加入600uL异丙醇，-20℃放置30min。 （7）4℃，12000r/min离心10min。弃去上清液。 （ 8 ）向离心管中加入 1mL70% 乙醇，漂洗沉淀物。 4 ℃， 5000r/min离心3min。弃去上清液。（此步可省略） （9）待沉淀物自然干燥后，加入20uLDEPC处理的蒸馏水， 充分溶解后，即为RNA溶液。
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四、实验步骤
2、RNA电泳检测 （3 ）上样电泳：将 5 μL RNA样品溶液和 5μL上样缓冲液混匀 后，上样，100V稳压电泳检查，根据指示剂迁移的位置，判 断是否中止电泳。切断电源后，再取出凝胶。 （4）照胶、拍照：将凝胶泡在EB溶液（注意：EB溶液为剧 毒物，需带上一次性手套拿取凝胶）中5min左右，进入暗室， 使用凝胶成像系统照胶并拍照。
实验三 植物组织RNA的提取与鉴定
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一、实验目的
（1）通过本实验，了解RNA的结构和特点。
（2）学会使用Trizol法提取植物总RNA。
（3）学习和掌握总RNA的检测实验技术和实验
原理。
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二、实验原理
RNA的提取是进行分子克隆和基因表达分析等研究的基 础。但 RNA 很容易被内源及外源的 RNase 降解，所以要得到 未被降解的、不含DNA与其它杂质的RNA是进行分子生物学 研究的前提。 目前较为成熟的分离RNA的方法有许多，用于植物细胞 总RNA的提取主要有苯酚法、异硫氰酸胍法、氯化锂沉淀法、 SDS/酚抽提法，或应用商品化的Trizol试剂和Qiagen等各类试 剂盒进行提取。但由于植物细胞具有坚硬的细胞壁，内含较 多的多糖、脂质、多酚等次生代谢物，同种植物的不同组织 和不同植物的同种组织材料，其RNA的提取方法也会有很大 差异。适宜的RNA提取材料处理方法也不尽相同。
二、实验原理
Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速 抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、 降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。在氯仿抽提、 离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀 RNA。 用这种方法得到的总 RNA 中蛋白质和 DNA 污染很少， 可以用来做 Northern ，RT-PCR，分离mRNA，体外翻译和分 子克隆等。
三、仪器和试剂
1、仪器： 高速冷冻离心机、微波炉、稳压电源、水平电泳槽、 凝胶成像系统。 2、材料与试剂： 液氮、Trizol、氯仿、异丙醇、70%乙醇、DEPC处 理的蒸馏水、琼脂糖、1×TAE、上样缓冲液。
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四、实验步骤
1、RNA的提取 （1）称取0.1g新鲜植物叶片（小麦、烟草、吊兰等均可）置 于研钵中，加入液氮，迅速研磨成均匀的粉末，快速将全部 粉末转入1.5mL的无RNA酶的离心管中。 （2 ）向离心管中快速加入 1mLTrizol ，充分混匀后室温下放 置5min。 （3）4℃，12000r/min离心10min。 （4）吸取上清液置于一个新的1.5mL的无RNA酶的离心管中， 加入200uL氯仿，剧烈震荡1min，室温放置3min。
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五、实验结果与分析
1
28S 18S 5S
2
3
4
5
6
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四、实验步骤
2、RNA电泳检测 （1）1%琼脂糖凝胶：称取0.2g琼脂糖，加入20mL 1×TAE缓 冲液，加入20uL甲醛溶液（可省略），在微波炉中加热， 反复加热、振荡2-3次，使琼脂糖充分融化。待凝胶冷却至 60℃左右，倒入插入梳子的凝胶板中（避免产生气泡）， 让凝胶自然凝固。 （ 2 ）待凝胶凝固后，小心拔出梳子，避免前后左右摇晃， 以免破坏胶面及加样孔，小心将凝胶和胶床放入电泳槽中， 加样孔靠近阴极的一端。