实验7标本中未知细菌的分离和鉴定
细菌分离提纯实验报告
细菌分离提纯实验报告细菌分离提纯是一项常见的实验技术，通过这项技术可以从混合菌液中分离出单一的、纯净的细菌菌落。
这项技术在生物学、医学、环境科学等领域都有广泛的应用。
细菌分离提纯的实验步骤主要包括：取样、制备稀释液、涂布平板、培养菌落、筛选菌落、鉴定细菌。
首先，取样是细菌分离提纯的第一步。
当我们需要分离某种细菌时，我们需要从含有该种细菌的样品中取样。
比如，我们可以从水样、土壤样、食品样、人体样等中取样。
然后，制备稀释液。
我们对取样物进行稀释，使得其中的细菌数目降到一定范围内，以便于后续的细菌分离。
通常我们会选择使用生理盐水、缓冲液等来制备稀释液。
接下来，将稀释液涂布在平板上。
我们通常会使用琼脂平板来进行细菌分离提纯实验。
将稀释液均匀涂布在琼脂平板上，然后用培养皿盖好，放入恒温培养箱中进行培养，通常在适宜的温度下进行培养24-48小时。
培养过程中，我们可以观察到平板上出现的不同形态的菌落。
可以根据菌落的形态、颜色、大小等特征来进行筛选。
一般我们会选择孤立的、圆形的、透明或者白色的菌落作为目标菌落。
当我们筛选出目标菌落后，我们需要进行鉴定。
通常我们可以根据细菌的生理生化特性、抗生素敏感性、分子生物学特征等来鉴定细菌的种属。
可以使用生理生化试剂盒、PCR技术、16S rRNA测序等方法进行鉴定。
最终，根据鉴定结果，我们可以获得目标细菌的纯种菌株。
这些纯种菌株可以用于进一步的实验研究，如基因克隆、发酵生产等。
细菌分离提纯实验需要注意以下几点。
首先，取样要注意无菌操作，避免采样器具的污染。
其次，涂布平板时要注意均匀涂布，以避免菌落的融合。
另外，培养过程中要注意恒温，避免细菌在高温或低温下死亡。
总之，细菌分离提纯是一项重要的实验技术，在微生物学研究中起到了至关重要的作用。
通过细菌分离提纯技术，我们能够从混合菌液中得到纯净的细菌菌落，为后续的实验提供了可靠的菌种资源。
这项技术的应用涵盖了多个领域，对于推动生物科学的发展具有重要的意义。
微生物菌种分离和鉴定技术
在琼脂柱表面倾倒一层灭菌 液体石蜡和固体石蜡的混合物
培养后，菌落形成在琼脂柱的中间
液体培养基分离
不能在固体培养基上生长的微生物仍需要用液 体培养基分离来获得纯培养。
稀释法是液体培养基分离纯化常用的方法。
在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数 （一般应超过95%）表现为不生长。
单细胞（孢子）分离
Technology
Erko Stackebrandt, DSMZ, Braunschweig, Germany
微生物菌种鉴定技术
1923(1)、1925(2)、1930(3)、1934(4)、1939(5)、1948(6)、1957(7)、 1974(8)、1994(9)
伯杰氏鉴定细菌学手册
Bergey's Manual of Determinative Bacteriology
Systematic and Evolutionary Microbiology, 2007, 57: 1925–1932
图: Rep-PCR条码系统发育树(DiversiLab平台) Figure 2: Dendrogram of Rep-PCR Barcoding (DiversiLab Platform) . 注：图片来源于Reclassification of ATCC® 16404TM and ATCC® 9642TM as Aspergillus brasiliensis.
Sequence Analysis (MLSA)
基因型鉴定技术水平
不同指纹图谱和DNA分析技术的鉴定水平
多相鉴定实例 ATCC16404黑曲霉 Aspergillus niger
2007年 Aspergillus brasiliensis sp.nov.新种发表 2008年 ATCC 16404 鉴定为 Aspergillus brasiliensis sp.nov. 2010年 WDCM 将ATCC 16404 更名 2010年 USP 将ATCC 16404 更名
预防疾控微生物检验技术：细菌及细菌检验综合题考试题库三
预防疾控微生物检验技术：细菌及细菌检验综合题考试题库三1、单选带菌者是指（）A.病原菌潜伏在体内，不向体外排菌者B.感染后，临床症状明显，并可感染他人者C.体内带有条件致病菌者D.体内正常菌群的数量超（江南博哥）出了正常范围E.感染后，临床症状消失，但体内病原菌未被彻底清除，并不断向体外排菌者。
正确答案：E2、单选为了从患者的标本中分离到单个菌落，应将标本接种到（）A.液体培养基中B.半固体培养基中C.固体培养基中D.含抗生素的培养基中E.高渗透压培养基中正确答案：C3、单选以噬菌体为媒介的基因转移方式为（）A.转化B.转导C.接合D.原生质融合E.以上都不对正确答案：B4、单选如果肥达试验结果是H：1：640、O：1：320、PA：1：80、PB：1：80，该患者可能是（）A.甲型副伤寒沙门菌所致副伤寒B.肖氏沙门菌所致副伤寒C.伤寒沙门菌感染D.回忆反应E.预防注射正确答案：C5、多选正常菌群转化为条件致病菌的因素有（）A.条件致病菌从无毒株变为有毒株B.不适当的抗菌药物治疗C.医源性刺激D.宿主免疫功能降低或缺陷E.定位转移正确答案：B, C, D, E6、多选病原菌被吞噬细胞吞噬后，可能的结局有（）A.病原菌被吞噬细胞杀死B.病原菌不被吞噬细胞杀死C.细菌在体扩散D.造成邻近组织损伤E.杀死吞噬细胞正确答案：A, B, C, D, E参考解析：病原菌被吞噬细胞吞噬后。
其后果随细菌种类、毒力和人体免疫力不同而异。
有的病原菌被吞噬后被杀死，是为完全吞噬。
而胞内寄生菌在免疫力低下的宿主中，虽被吞噬但不被杀死，此为不完全吞噬。
有的病原菌甚至在吞噬细胞内生长繁殖，导致吞噬细胞死亡，或随吞噬细菌经淋巴液或血液扩散到其他部位，造成广泛病变。
此外，在吞噬过程中，溶酶体释放出多种水解酶，破坏邻近的正常组织细胞。
7、多选分离致病性肠杆菌科菌时，应选用的培养基是（）A.营养琼脂平板B.血平板C.选择培养基D.鉴别培养基E.厌氧培养基正确答案：C, D参考解析：粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选用具有选择和鉴别作用的培养基，如SS、伊红-美蓝平板、三糖铁培养基等，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出，并能将致病菌与非致病菌区分开来。
标本中未知细菌的分离和鉴定
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
浓汁标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
咽拭子
分离培养 血平板） （血平板）
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 石炭酸复红单染） （石炭酸复红单染）
？
粪便标本
SS平板 SS平板
结果观察
1、菌落观察 2、形态学观察
（二）生化反应 触酶试验： 触酶试验： H2o2
氧化氢酶
H2o + o2
(-) (+)
菌种：可疑菌落 菌种： 试剂：3%过氧化氢 试剂：3%过氧化氢 方法： 方法：见右图 结果： 结果：见右图
甘露醇实验
甘露醇生化反应管
药敏实验
浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果 观察
玻片凝集试验
粪便标本可疑菌生长现象及生化、 粪便标本可疑菌生长现象及生化、血清反 应结果观察
SS平板 SS平板 生长现象 形态学 特 征 单糖发酵试验 血清学试验
葡萄糖 乳糖
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
粪便标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离鉴定程序
脓血便、 脓血便、肛拭子
标本 SS平板,EMB平板 SS平板,EMB平板 平板 选择/ 选择/鉴别培基
克氏双糖铁培养基, 克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定 生化反应
玻片凝 集试验
设计性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
3.尿 3.尿 标本： 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 其他：革兰染液、靛基质试剂、 4.粪便 4.粪便 标本：肛门拭子 标本： 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 菌多价血清、
实验7标本中未知细菌的分离和鉴定
（三）实验方法与检验流程
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本
观察菌落性状、溶血性、色素
血琼脂平板
涂片、染色、镜检
挑取可疑菌落 生化反应测定
纯培养
致病性测定
血液
肉汤增
脑脊液 菌培养
（凝固酶、耐热核酸酶）
涂片染色镜检
（三）实验方法与检接涂片 革兰染色
动力 ± － ＋ ＋ ＋ ＋ －
H2S － － ＋ ＋ ± ＋ －
尿素 － － ＋ － － － －
埃希菌属 克雷伯菌属 变形杆菌
非致病 菌
乙型副伤寒
甲型副伤寒
伤寒杆菌
致病菌
痢疾杆菌
实验十
标本中未知细菌的分离和鉴定
致病菌的检验程序和常用项目
形态学检查
直接涂片 染色镜检
初步诊断
分离培养
形态特征
（常规培养或 生化试验
特殊培养）
血清学诊断
血清学试验 动物实验
药物敏感试验
明 确 诊
（沉淀反应、凝集试验、免疫标记技术等）
断
细菌的快速鉴定
(微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核 酸杂交技术、PCR技术、DNA芯片技术等）
＋/
－
＋/ － ＋
－
沙门菌
＋
－
＋
＋
－
变形杆菌 ⊕
－
＋/ － －
＋/－
肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物
2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水
方法
血清
生理盐水
肠道杆菌生化反应的结果
病原微生物第5章细菌的遗传与变异习题与答案
第5章细菌的遗传与变异一、选择题A型题1．以下微生物中，不受噬菌体侵袭的是:A．真菌B．细菌C．支原体D．螺旋体E．立克次体2．关于噬菌体的表达，以下哪项是正确的?A．具有严格的宿主特异性B．可用细菌滤器除去C．含DNA和正RNAD．对理化因素的抵抗力比一般细菌弱E．能在无生命的人工培养基上生长3．用来测量噬菌体大小的单位是:A B.mm C.μm D.nm E.dm4.噬菌体的生物学特性与以下哪种微生物相似?A.细菌B.病毒C.支原体D.衣原体E.立克次体5.噬菌体所含的核酸是:A.DNAB.RNAC.DNA和RNAD.DNA或RNAE.DNA或RNA6.溶原性细菌是指:A.带有前噬菌体基因组的细菌B.带有毒性噬菌体的细菌C.带有温和噬菌体的细菌D.带有R质粒的细菌E.带有F质粒的细菌7.能与宿主菌染色体整合的噬菌体基因组称:A.毒性噬菌体B.溶原性噬菌体C.温和噬菌体D.前噬菌体E.以上都不是8.既有溶原期又有裂解期的噬菌体是:A.毒性噬菌体B.前噬菌体C.温和噬菌体D.β噬菌体E.λ噬菌体9.噬菌体感染的特异性取决于:A.噬菌体蛋白与宿主菌外表受体分子构造的互补性B．其核酸组成与宿主菌是否相符C．噬菌体的形态D．细菌的种类E．噬菌体的核酸类型10．毒性噬菌体感染细菌后导致细菌:A．快速繁殖B．停顿繁殖C．产生毒素D．基因突变E．裂解11．细菌的HO变异属于：A.形态变异B.毒力变异C.鞭毛变异D.菌落变异E.耐药性变异12．BCG是有毒牛型结核杆菌经以下哪种变异形成的？A.形态变异B.毒力变异C.抗原变异D.耐药性变异E.菌落变异13．SR变异是指细菌的：A.形态变异B.构造变异C.耐药性变异D.抗原变异E.菌落变异14．细菌的遗传物质包括：A.染色体、核糖体、前噬菌体B.染色体、质粒、异染颗粒C.核质、核糖体、质粒D核质、质粒、转位因子E.染色体、质粒、中介体15．编码细菌对抗菌药物耐药性的质粒是：A.F质粒B.R质粒C.Vi质粒D.Col质粒E.K质粒16．关于质粒的表达，以下哪项是错误的？A.是细菌染色体以外的遗传物质B.具有自我复制的才能C.可自行丧失或经理化因素处理后消除D.是细菌必备的构造E.带有遗传信息，赋予细菌某些形状特征17．关于细菌的耐药性突变，以下表达错误的选项是：A.可以自然发生B.可经理化因素诱导发生C.细菌接触药物之前就已发生D.细菌在药物环境中逐渐适应而变为耐药株E.药物仅起挑选耐药株的作用 , , , , , , , 18．最先发现肺炎链球菌转化现象的科学家是：A. GriffithB. AveryC. LuriaD. LederbergE. Delbruck19．染色体上整合有 F 质粒的细菌称为： A. F + 菌 B. F 菌C. F’菌D. Hfr 菌E. 溶原菌 20．细菌耐药性形成的主要方式是：A. 转化B. 接合C. 转导D. 溶原性转换E. 原生质体交融21．细菌多重耐药性的形成，主要是由于：A. 染色体突变B. R 质粒的转移C. 转座子的转位D. 溶原性转换E. 插入序列的插入22．关于耐药性质粒的表达，错误的一项为哪一项：A. 由耐药传递因子(RTF)和耐药决定子组成B. B.RTF 与 F 质粒的功能相似，编码性菌毛C. 质粒的转移是造成细菌间耐药性传播的主要原因D. 细菌多重耐药性的产生是由于 R 质粒基因突变所致E. 耐药决定子可编码细菌的多重耐药性23．质粒在细菌间的转移方式主要是：A. 转化B. 接合C.转导D.溶原性转换E. 原生质体交融24．转化过程中受体菌获得供体菌遗传物质的方式是：A. 通过鞭毛B. 通过性菌毛C. 通过噬菌体D. 直接摄取E. 细胞交融25．关于转位因子的表达，错误的选项是：A. 包括插入序列、转座子和前噬菌体B. 转座子与细菌的多重耐药性有关C. 前噬菌体与编码某些细菌的毒素有关D.转位因子仅存在于质粒 DNA 上E. 转位因子能在 DNA 分子中挪动26．能将供体菌与受体菌直接沟通而传递遗传物质的构造是：A. 鞭毛B.性菌毛C.中介体D. 核糖体E. 普通菌毛27．细菌的性菌毛：A. 化学成分为多糖B. 与细菌的运动有关C.是接合时的必要构造D. 是转导时的必要构造E.是细菌吸附于易感细胞的必要构造28．Hfr 菌是：A. 含有 R 质粒的细菌B. 含有 Col 质粒的细菌C. 染色体上整合有 F 质粒的细菌D. 染色体上整合有前噬菌体的细菌E. 不产生性菌毛的细菌29．以温和噬菌体为载体，将供体菌的 DNA 转移到受体菌的过程称为：A. 转导B. 接合C. 转化D. 溶原性转换E. 原生质体交融30．细菌的转导和溶原性转换的共同特点是：A. 需 R 质粒参与B. 由温和噬菌体介导 C . 由毒性噬菌体介导 D. 需 F 质粒参 E. 由性菌毛介导31．接合与原生质体交融的共同特点是：A. 需性菌毛介导B. 需温和噬菌体参与C. 需 R 质粒参与D. 需供菌与受菌直接接触E. 需处于感受态32．Hfr 菌与 F 菌进展接合时，转移的遗传物质主要是：A. R 质粒B. 游离的 F 质粒C. F 质粒D. 染色体上的 F 质粒E. 染色体基因 33．F + 菌与 F 菌的主要区别是：A. F + 菌含性菌毛，F 菌不含性菌毛B. F 菌含性菌毛，F + 菌不含性菌毛C. F 质粒可含染色体基因，F + 菌的 F 质粒不含染色体基因D. F + 菌可与 F 菌接合，F 菌不能与 F 菌接合E. F 菌能与 F 菌接合，F + 菌不能与 F 菌接合34．普遍性转导转移的基因包括：A. 染色体及质粒上的基因B. 质粒上的基因C. 染色体上特定部位的基因D. 染色体上任何部位的基因E. 噬菌体基因35．关于流产转导的表达，以下哪项是错误的？A. 是普遍性转导的形式之一B. 外源性 DNA 不能与受体菌染色体整合 , ’ ’ ’ C. 外源性 DNA 不能自身复制 D. 产生的菌落比正常菌落小得多E. 完全转导比流产转导更多见36．以下关于局限性转导，哪项表达是错误的？A. 又称特异性转导B. 仅转导供体菌染色体上特定的基因C. 受菌获得供菌染色体 DNA 特定部位的遗传性状D. 转导发生在温和噬菌体的裂解期E. 转导频率较普遍性转导高37．溶原性转换转移的遗传物质是：A. 细菌染色体基因B. 噬菌体基因C. 转座子D. 插入序列E. 质粒38．白喉棒状杆菌染色体上整合β棒状噬菌体基因后，获得产生白喉毒素的才能，这种基因转移方式属于：A. 转化B. 接合C. 转导D. 溶原性转换E. 原生质体交融39．溶原性转换：A. 由 R 质粒参与B. 由性菌毛介导C. 由温和噬菌体参与D. 由毒性噬菌体参与E. 受菌与供菌直接交融而发生基因转换40．溶原性转换与转导的区别是：A. 前者参与的是温和噬菌体，后者参与的是毒性噬菌体B. 前者转移的是噬菌体基因，后者转移的是供体菌基因C. 前者可引起受体菌耐药性改变，而后者不能D. 前者需供菌与受菌直接接触，后者以噬菌体为载体进展基因转移E. 前者进展基因转移需受菌处于感受态，后者那么否41．细菌的转导和溶原性转换的共同特点是：A. 需质粒参与B.需处于感受态C. 需温和噬菌体参与D. 需毒性噬菌体介导E. 需性菌毛介导42．关于 R 质粒的特点，不包括以下哪一项？A. 含编码细菌耐药性的基因B. 一种 R 质粒只含有针对一种抗菌药物的耐药基因C. 为接合性质粒D. 由耐药传递因子和耐药决定子组成E. 耐药决定子上的转座子可编码细菌的多重耐药性43．原生质体交融：A. 发生于亲缘关系很近的细菌之间B. 是两细菌的细胞壁发生交融C. 交融细胞的胞质混合，但无遗传物质交换D. 细菌通过该方式传递耐药性非常常见E. 是一种人工基因转移系统44． 临床上预防耐药菌株产生和扩散的主要措施是：A. 早期、足量使用抗生素B. 少量屡次使用抗生素C. 尽量使用广谱抗生素D. 长期、大量、结合使用多种抗生素E. 在细菌药敏试验指导下使用抗生素45．以下哪种方式不能转移质粒基因？A. 转化B. 溶原性转换C. 普遍性转导D. 原生质体交融E. 接合46．以下哪种实验可用来测定致癌物质？A. Aems testB. transformation testC. fluctuation testD. replica plating testE.Widal test47．关于接合的表达，以下哪项是错误的？ A. F + 菌与 F 菌接合,转移的是 F 质粒B. Hfr 菌与 F 菌接合,转移的主要是染色体基因C. F 菌与 F 菌接合，转移的是 F 质粒D. F + 菌与 F 菌接合后, F + 菌并不失去 F 质粒E. F 菌与 F 菌接合后，F 菌失去 F 质粒48．细菌 L 型变异的特点，不包括以下哪一项？A. 属于细菌的形态变异, B. 是由于细菌的细胞壁合成受阻C. L 型细菌多为革兰染色阴性D. L 型细菌呈多形性，可通过细菌滤器E. L 型细菌在低渗高琼脂含血清的培养基上能缓慢生长49．流产转导是指噬菌体携带的供体菌 DNA 片段：A. 不能进入受体菌B. 进入受体菌后被降解C. 进入受体菌后能自身复制，但不能与染色体整合D. 进入受体菌后既不能自身复制，也不能与染色体整合E. 与受体菌染色体整合后不能表达相应的性状50．决定细菌耐药性的遗传物质是：A. R 质粒B. F 质粒C. 细菌染色体D. 噬菌体E. 插入序列51．关于接合的表达，以下哪项是错误的？A. 细菌间通过性菌毛进展接合B. 接合转移的基因主要是质粒 DNAC. R 质粒为接合性质粒D. F 质粒丧失，细菌接合的才能随之消失E. 接合是革兰阴性菌中 F 质粒的特征，革兰阳性菌中尚未发现52．关于细菌遗传变异的实际意义，以下哪项表达不正确？A. 临床别离的非典型菌株，要从细菌变异的角度去分析、鉴别B. 临床别离的致病菌，须进展药敏试验以正确选择抗生素C. 可利用细菌遗传变异的原理制备疫苗D. 可利用细菌遗传变异的原理来测定致癌物质E. 细菌的耐药质粒与耐药性有关而与毒力及致病性无关53．转位因子不包括以下哪种成分？A. 转座子B. 插入序列C. 转化因子D. 前噬菌体E. 转座噬菌体X 型题1．噬菌体的特点是:A.非细胞型微生物B.严格活细胞内寄生C.分别以细菌、真菌、螺旋体及放线菌等为 宿主D.可通过滤菌器E.对人致病2.电子显微镜下，噬菌体的形态有:A.蝌蚪形 B ．微球形C ．棒形D ．砖形E ．丝形3．溶原性细菌的特点是:A ．能正常繁殖，不产生噬菌体，但能将产噬菌体的才能传递给后代B ．溶原状态有时 自发地终止C ．能抵抗相应噬菌体的侵袭作用D ．溶原性细菌某些性状可发生改变E ．能产生细菌素4．以下细菌中，产生毒素与噬菌体有关的是:A ．大肠杆菌B ．白喉棒状杆菌C ．金黄色葡萄球菌D ．破伤风梭菌E ．肉毒梭菌5．噬菌体用于细菌的鉴定和分型是由于噬菌体:A ．能诱导细菌变异B ．能寄生在细菌内C ．寄生作用具有种、型特异性D ．能裂解 细菌E ．能使细菌成为溶原状态6．噬菌体的应用包括:A ．分子生物学研究的重要工具B ．细菌的鉴定和分型C ．检测标本中的未知细菌D ．用 于治疗某些部分感染性疾病E ．用于追踪传染源7.可产生性菌毛的细菌有： A. F + 菌 B. F 菌 C. Hfr D. 含 R 质粒的细菌 E. 雄菌8．以下基因转移与重组的方式中，哪些与细菌的耐药性形成有关？A. 转化B. 转导C. 接合D. 溶原性转换E. 原生质体交融C. F 菌与 F 菌接合时，F 质粒及染色体基因一起被转移 , ’ ’ 9．关于普遍性转导的特点，以下哪些表达是正确的？A. 由温和噬菌体介导B. 能转导供体菌染色体 DNA 的任何部位C. 能转导质粒D. 发生在温和噬菌体的裂解期E. 转导频率比局限性转导高10．以下哪些属于细菌的遗传物质：A. 染色体B. 质粒C. 插入序列D. 转座子E. 前噬菌体11．以下哪些遗传物质可通过接合的方式转移？A. 染色体基因B. F 质粒C. F 质粒D.Col 质粒E. R 质粒12．非接合性质粒可通过以下哪几种方式在细菌间转移？A. 转化B. 转导C. 接合D. 溶原性转换E. 原生质体交融13．耐药性突变的特点是：A. 产生耐药性突变的是菌群中的个别细菌B. 是由于细菌接触药物后引起的C. 突变是自发的、随机的D. 突变率可因理化因素诱导而增高E. 回复突变不一定会恢复原来的基因型14．为防止耐药菌株的出现及扩散，临床用药应采取哪些措施？A. 治疗前做药物敏感试验B. 足够剂量用药C. 几种抗生素结合使用D. 少量屡次用药E. 使用广谱抗生素15．关于转位因子，下述正确的选项是：A. 分为插入序列、转座子和前噬菌体三类B. 是细菌基因组中能改变自身位置的一段特异性 DNA 序列C. 可存在于细菌染色体或质粒 DNA 分子上D. 可在染色体与质粒、质粒与质粒之间进展转移E. 转位因子的转位可引起细菌基因突变或基因转移16．SR 变异可伴有以下哪些变异？A. 抗原变异B. 毒力变异C. 构造变异D. 耐药性变异E. 生化反响的变异17．与噬菌体有关的基因转移和重组的方式有：A. transformationB. transductionC. conjugationD. protoplast fusionE. lysogenic conversion18. 关于接合的表达，以下哪些是正确的？ A. F + 菌与 F 菌接合时，F 质粒被转移B. Hfr 菌与 F 菌接合时，染色体基因被转移 ’ D. F + 菌与 F 菌接合后，F + 菌失去 F 质粒而变为 F 菌E. F 菌与 F 菌接合后，F 菌不变为 F 菌19．以下关于转化的表达，哪些是正确的？A. 被转化的 DNA 片段称为转化因子B. 转化转移的 DNA 片段比转导要小C. 转化比转导的效率高D. 只有受体菌处于感受态才能进展转化E. Ca 2+ 与 Mg 2+ 处理，可增加感受态细菌摄取 DNA 的才能20．关于流产转导，下述正确的选项是：A. 外源性 DNA 片段不能进入受体菌B. 外源性 DNA 片段不能与受体菌染色体整合C. 外源性 DNA 片段不能自身复制D. 流产转导是普遍性转导的一种类型E. 流产转导的菌落大小与正常菌落一样21．关于局限性转导，以下表达正确的选项是：A. 由温和噬菌体介导B. 由毒性噬菌体介导C. 所转导的只限于供体菌染色体上特定的基因D. 受体菌获得供体菌 DNA 特定部位的遗传特性E. 转导频率较普遍性转导低22．关于原生质体交融的表达，正确的选项是： A. 两种细菌经溶菌酶或青霉素处理而形成B. 交融后的原生质体缺乏细胞膜C. 交融细胞的胞质可互相混合D. 交融细胞的遗传物质可互相交换E. 交融仅发生于亲缘关系很近的细菌之间23．关于质粒的表达，以下各项哪些是正确的？A. 是细菌核质外的遗传物质B. 能在胞浆中自行复制C. 一个细菌内只能含有一种质粒D. 可自行丧失或经人工处理后消除E. 是细菌生命活动必需的构造24．细菌间进展基因转移和重组的外源性遗传物质包括：A. 核质B. 核糖体C. 质粒 DNAD. 转座子E. 噬菌体基因二、填空题1．噬菌体有 、 和 三种形态，大多数噬菌体呈形。
实验十标本中未知细菌的分离和鉴定
实验十标本中未知细菌的分离和鉴定实验目的：（1）了解细菌的分离培养方法和染色技术。
（2）掌握未知细菌的分离与鉴定方法。
（3）使用基本的鉴定技术确定未知菌株的种属。
实验原理：细菌的分离和鉴定是微生物学领域中的研究重点之一，它是一项极其重要的技术，可以用于从环境中分离出未知细菌，或者为疾病的诊断和治疗提供依据。
分离和鉴定的基本步骤包括准备标本、分离、纯化、染色、形态学特征观察、生理生化特征鉴定等。
（2）菌落计数菌落计数是一种比较简单、实用的微生物数量统计方法。
其基本原理是在相应培养基中培养所需数量的细菌，将其种在匀质培养基表面上，等待一定时间后，通过肉眼观察和计数器计数，得出单位体积菌落数的统计数据。
（3）清洁措施实验室的卫生和清洁非常重要，工作区域要每日进行消毒。
要使用消毒剂擦拭实验台面和灭菌设备，保持实验环境的清洁卫生。
实验步骤：1. 标本处理：将未知标本放入对应的生长基内，摇晃并在恒温箱内培养48小时，使菌落生长到适当的大小。
2. 细菌分离：采用计数板分别涂抹标本样品，摇晃平板均匀扩散，培养48小时。
3. 排除细菌：对分离出的单个菌落进行传代培养，过渡培养10天，如果单个菌落都是一种细菌，即为纯菌。
4. 细菌染色：染色是确定未知菌株种类的重要步骤。
首先进行革兰氏染色以区分细菌的细胞壁特征。
5. 形态学特征观察：观察页面。
6. 生理生化鉴定：(1)对产酸细菌进行发酵测试，对氧化细菌进行氧化测试。
(2)对氧化酶进行试验。
(3)对盐耐性进行测试。
(4)对温度和气氛的适应性进行测试。
实验结果：通过上述步骤，我们成功地分离出未知细菌，对其进行染色、形态学特征观察和生理生化鉴定，最终确定了它的种属为大肠杆菌。
通过实验，我们掌握了未知细菌的分离和鉴定方法，成功地确定了未知细菌的种属，这对于深入研究细菌的生物学及其应用具有重要意义。
同时，本实验也提醒我们实验室的消毒及环境卫生的重要性。
临床细菌室要加强少见细菌的分离和鉴定
卡 菌外 还 有短 链 奴 卡 菌 、 疽 奴 卡 菌 、 色 奴 卡 菌 、 鼻 肉 巴西奴 卡 菌 、 越桔 奴 卡 菌 、 鼠奴 卡 菌 、 非 奴 卡 菌 豚 南
和苦 味奴 卡 菌 。 实 验 室诊 断 注 意点
标 本 直接 镜 检 ， 见革 兰 阳性 念 珠状 分 支 菌丝 。 可 抗 酸染 色 时应 用 硫 酸 脱 色 。盐 酸脱 色 常 出现抗
（ 用于艰难梭菌分离 ） 万古霉 素斯 氏琼脂 ； 建立厌氧
菌鉴 定 系统 ， 可采 用 自动化 鉴定 仪 的厌 氧 鉴定 系统 ， 如 Ｖｉ ｋ的 Ａ 卡 或 其 他 自动 化 细 菌 鉴 定 仪 ， ｔ ｅ ＮＩ 或 Ａ 鉴定 系统 或 用传 统 鉴定 系统 。在 无 鉴 定 条 件 的 ＰＩ 实验 室 可 在确 定 厌 氧 菌 存 在 的 前 提 下 ， 涂 片 革 兰 经
例 。新 型 隐球 菌 有 ３个 变种 ， 既新 生 变种 、 格特 变 种
染 的 主要 原 因之 一 ， 当深部 脓 肿 、 血症 等 常 规 细菌 败 学检 查 阴性 时 ， 往 源 于厌 氧 菌 感 染 。厌 氧 菌 感 染 往 是一 种 内源性 感 染 。病 种 遍 及 临 床 各 种 、 体 各 部 人
丢 弃 培养 物 是实 验 室 漏检 奴 卡 菌 的原 因。新 型 奴卡
菌在 ３ ℃ 、５ 均可 生 长 。 ７ ４℃ ３ 厌 氧 菌 【 ３］ ， 近年 来无 芽 胞 厌 氧杆 菌 及球 菌 已成 为细 菌性 感
道浅 黄 隐球 菌 、 白 隐球 菌 和 罗 伦 隐球 菌 引 起 的 病 浅
位 ， 种器 官 的感 染 均 可有 厌 氧 菌感 染 。 文献 报 道 ， 各
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沙门菌
＋
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变形杆菌 ⊕
－
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肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物
2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水
方法
血清
生理盐水
肠道杆菌生化反应的结果
葡萄糖 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ＋ ＋
乳糖 ⊕ ＋ ± － － － －
革兰染色
纯培养 生化反应
触酶试验
甘露醇试验
药敏试验
革兰染色的操作步骤
涂片制作
染色 镜检
革兰染色的操作步骤
初染
结晶紫1分钟
媒染
卢戈氏碘液1分钟
脱色
95%酒精30秒
复染
稀释复红30秒
脓汁标本的生化反应
1.触酶试验：区别葡萄球菌与链球菌； 2.甘露醇分解试验：区别葡萄球菌的致病菌株
与非致病菌，致病菌分解甘露醇产酸,使培养 基由紫色变黄色.
一、标本中未知病原性球菌 的分离和鉴定
（一）实验目的
1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方 法
2、掌握药物敏感试验
（二）实验器材
1、待检的脓汁标本； 2、培养基：血琼脂平板，生化反应管；普
通琼脂平板； 3、试剂：革兰染色液，生理盐水；药敏纸
片，3%过氧化氢； 4、其它：接种环、接种针、酒精灯、培养
动力 ± － ＋ ＋ ＋ ＋ －
H2S － － ＋ ＋ ± ＋ －
尿素 － － ＋ － － － －
埃希菌属 克雷伯菌属 变形杆菌
非致病 菌
乙型副伤寒
甲型副伤寒
伤寒杆菌
致病菌
痢疾杆菌
(-)
(+)
（甘—露）醇发（酵+试）验
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离和鉴定
（一）实验目的
1、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤 2、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应
（二）实验器材
1、待检的粪便标本； 2、培养基：SS平板，生化反应管；普通
琼脂平板； 3、试剂：革兰染色液，生理盐水；药敏纸
实验十
标本中未知细菌的分离和鉴定
致病菌的检验程序和常用项目
形态学检查
直接涂片 染色镜检
初步诊断
分离培养
形态特征
（常规培养或 生化试验
特殊培养）
血清学诊断
血清学试验 动物实验
药物敏感试验
明 确 诊
（沉淀反应、凝集试验、免疫标记技术等）
断
细菌的快速鉴定
(微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核 酸杂交技术、PCR技术、DNA芯片技术等）
片；沙门菌、志贺菌多价诊断血清； 4、其它：接种环、接种针、酒精灯、培养
箱、显微镜、载玻片等。
（三）实验方法与检验流程
粪便标本
SS平板
克氏双糖铁斜 面培养基
观察结果
纯培养
革兰染色
生化反应管
玻片凝集试验
药敏试验Biblioteka 肠道杆菌五管糖试验菌名
葡萄糖 乳糖
大肠埃希菌 ⊕ ⊕
志贺菌
＋
－
麦芽糖 甘乳糖 蔗糖
＋
＋
箱、显微镜、载玻片等
（三）实验方法与检验流程
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本
观察菌落性状、溶血性、色素
血琼脂平板
涂片、染色、镜检
挑取可疑菌落 生化反应测定
纯培养
致病性测定
血液
肉汤增
脑脊液 菌培养
（凝固酶、耐热核酸酶）
涂片染色镜检
（三）实验方法与检验流程
脓拭子
分离培养 （血平板）
直接涂片 革兰染色