人雌二醇(E2)ELISA试剂盒说明书
雌二醇测定标准操作规程
雌二醇测定标准操作规程1.1检验原理：采用延迟一步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中的雌二醇。
1.1将样本、样本稀释液、项目稀释液&雌二醇抗体（兔、单克隆）包被的顺磁微粒子混合。
样本中的雌二醇与雌二醇抗体包被的微粒子结合。
1.2孵育后，将娅咤酯标记的雌二醇结合物加入混合物中。
1.3进一步孵育和冲洗后，向反应混合物中加入预激发液和激发液。
1.4测量产生的化学发光反应，用相对发光单位（RLUs）表示。
样本中的孕酮含量和ARCHITECT!光学系统检测到的RLUS值成反比。
2.试剂主要组成部分：2.1试剂盒微粒子：雌二醇抗体（兔、单克隆）包被的微粒子，储存于含有蛋白（兔）稳定剂的三羟甲基氨基甲烷/双（2-羟乙基）亚氨基三（羟甲基）甲烷（TRIS/BIS-TRIS）缓冲液中。
最低浓度:0.0657%固体物质。
防腐剂:ProClin.结合物：疗咤酯标记的雌二醇抗体结合物，储存于含有表面活性剂柠檬酸盐缓冲液中。
最低浓度：63.36ng∕mL.防腐剂：ProClin.项目稀释液:雌二醇项目稀释液含有表面活性剂,储存于柠檬酸盐缓冲液中。
防腐剂：ProClin样本稀释液：雌二醇样本稀释液中，含有蛋白（牛）稳定剂的三羟基氨基甲烷（TRIS）缓冲液。
防腐剂：叠氮钠。
2.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有L32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。
防腐剂：抗菌剂。
3.样本要求：血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。
2-8°C可保存7天；如果不能在七天内检测，应将样本冻存在-20C以下。
样本应避免反复冻融。
4.检验方法：仪器法（详见雅培ilOOO标准操作规程）检验结果的解释雌二醇项目通过四参数LogiStiC曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线7.检验方法的局限性7.1将检测结果用于诊断时，应与其他数据：如症状、其他检查结果、临床表现等结合使用。
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
说明
1×22 mL
过氧化物酶阻断剂。 3%的过氧化氢，含有15 mmol/L的叠氮钠（NaN3）。
1×12 mL
1×22 mL
兔抗人HER2多克隆抗体。 即用型亲和分离的抗体,保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 1%BSA, 酒 石黄(Tartrazin), 专利蓝V(Patentblue V), 15 mmol/L NaN3, pH 7.2溶液中。 免疫原：合成的HER2蛋白的C-末端（细胞质部分）片段部分，并偶联至血蓝蛋 白上。
2×22 mL
阴性质控试剂。
与HER2抗体等价蛋白浓度下的正常兔血清免疫球蛋白成分，保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3, pH 7.2，并含有1%BSA稳定剂的溶液 内。
1×1mL
DAB底物缓冲液。 50 mM咪唑, 1mM N, N'-乙基双 (2-[2-羟基苯基]甘氨酸) (EDHPA), 0.1%乙基苯基 聚乙二醇（Nonidet P-40）, 0.02% 过氧化氢, 0.01% 氯化苯二甲烃铵, pH 7.5。
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
雌二醇定量检测试剂盒说明书
检验方法的局限性
干扰物质
不能使用溶血的，黄疸的或高血脂的样本，但血色素 (4 mg/ml), 胆红素 (0.5 mg/ml) 和甘油三酸酯
(30 mg/ml) 不影响实验结果。
药物干扰
目前没有物质(药物)影响雌二醇测量。
产品性能指标
1. 批内精密度 ≤10 %
2. 批间误差 ≤15 %
3. 回收率 85～120 %
3. 含叠氮纳化物不能用于酶反应。
检验方法
1. 实验前所有的试剂、样本和微孔板条达到室温（18～25°C）
2. 双蒸水 1:40 稀释浓缩的洗液(稀释的洗液储存在 2～8°C 可保存 2 周)
3. 每孔加 25 μl 标准品、质控品、样品（96 孔板要求在 3 分钟内加样完毕）。
4. 每孔加 200 μl 的酶结合物，充分混合 10 秒钟，室温孵育 120 分钟。
主要组成成分
1. 单克隆抗体包被的可拆卸的 96（12×8）孔微孔板 1 块 塑封袋
2. E2 标准品（0, 25; 100; 250; 500; 1000; 2000 pg/ml） 1ml×7 瓶 无色玻璃瓶
3. 多克隆抗体－酶结合物
25 ml×1 瓶 白色塑料瓶
4. 底物
14 ml×1 瓶 棕色塑料瓶
等等, pp. 331-85. Raven Press, New York (1988).
3. Hall, P.F., 睾类固醇合成: 结构和调节: 再生生理学, Ed.: Knobil, E., 和 Neill, J. 等等., pp 975-98. Raven Press, New York (1988). 4. Siiteri, P.K. Murai, J.T., Hammond, G.L., Nisker, J.A., Raymoure, W.J. 和 Kuhn, R.W., 类固醇激素清 液运输, Rec. Prog. Horm. Res. 38:457 - 510 (1982). 5. Martin, B., Rotten, D., Jolivet, A. 和 Gautray, J-P-.卵巢卵泡液蛋白限制类固醇，《临床内分泌学与新 陈代谢》. 35: 443-47 (1981). 6. Baird, D.T., 女性卵巢类固醇分泌物和新陈代谢：卵巢的内分泌功能：James, V.H:T., Serio, M. 和 Giusti, G. pp. 125-33, 纽约学术出版社 (1976). 7. McNastty, K.P., Baird, D.T., Bolton, a., Chambers, P., Corker, C.S. 和 McLean, H., 人卵巢静脉血浓度 和月经周期卵泡液，内分泌学 71:7785 (1976). 8. Abraham, G.E., Odell, W.D., Swerdloff, R.S., 和 Hopper, K., 月经周期血浆中的 FSH, LH,孕，17-羟 脯氨酸和雌二醇-17 同时进行放射性免疫测定，《临床内分泌学与新陈代谢》34:312-18 (1972). 9. March, C.M., Goebelsmann, U., Nakumara, R.M., 和 Mishell, D.R., 在激素黄体化中期，雌二醇和孕 酮的作用和卵泡刺激素增高，《临床内分泌学与新陈代谢》 49:507-12 (1979). 10. Simpson, E.R., 和 McDonald, P.C., 怀孕 内 分 泌 : 内分 泌 学 教 材 , Ed.: Williams, R.H. pp412-22, Saunders Company, Philadelphia (1981). 11. Jenner, M.R., Kelch, R.P.,等等, 青春期前儿童激素的变化, 青春期女性和早熟，性腺发育不全和儿 童女性化肿块，临床内分泌学 34: 521 (1982). 12. Goldstein, D. 等等, 黄体不足，雌二醇和孕酮的关联性. 37: 348-54 (1982). 13. Odell, W.D. 和 Swerdloff, R.D.,男性性腺功能异常,《临床内分泌学》8:149-80 (1978). 14. McDonald, P.c., Madden, J.C., Brenner, P.F., Wilson, J.D. 和 Siiteri, P.K. 正常男性和女性雌二醇的基 源，《临床内分泌学与新陈代谢》 49:905 (1979). 15. Taubert, H.d. 和 Dericks-Tan, J.s.E., 克罗米酚对排卵的诱导作用结合服用高剂量雌激素和 LH-RH 搐鼻法：排卵 Crosignandi, P.G. 和 Mishell, D.R., pp.265-73, 纽约学术出版社 (1976). 16. Fishel, S.B., Edwards, R.G., Purdy, J.M., Steptoe, P.C., Webster, J. Walters, E., cohen, J. Fehilly, C. Hewitt, J., 和 Rowland, G., 月经自然周期或克罗米酚卵泡刺激和尿促性素，胚胎移植, 堕胎，体外受 精生育， 体外受精胚胎移植 1:24-28 (1985). 17. Wramsby, H., Sundstorm, P- 和 Leidholm, P., 妊娠率跟体外受精代替卵分裂的关系，雌二醇和孕 酮水平成为唯一指数，人类生殖 2: 325-28 (1987). 18. Ratcliff, W.A.., Carter, G.D., 等等 , 雌二 醇实验：临床生化技术的应用和指导，临床生化， 25:466-483 (1988). 19. Tietz, N.W. 临床化学教材, 1986. 生产企业 企业名称：德国 DRG 诊断设备有限公司 地址：德国 玛堡市斐恩贝塔思路 18 号 邮政编码：35069 电话：49（6421）17000 传真：49（6421）170050 网址：www.drg-diagnostics.de 售后服务单位名称：北京协和洛克生物技术研究开发中心 地址：北京市海淀区恩济庄 18 号院 4－2－302 邮政编码：100036 电话：010-51295656 传真：010-88140690 网址： 医疗器械生产许可证编号 京药管械生产许 20040085 号 医疗器械注册证书编号
E2 II中文说明书
０３００００７９ １００ 人份用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆中雌二醇ＩＩ的含量。
电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０、２０１０和Ｅ１７０（Ｅｌｅｃｓｙｓ模块）免疫测定分析仪。
概述：生物活性最强的雌激素是１７β－雌二醇。
主要由卵巢产生。
睾丸和肾上腺皮质也产生少量的雌激素。
妇女怀孕期，雌激素主要由胎盘产生。
检测雌二醇可用于解释下丘脑－脑垂体－性腺调节功能紊乱、男子女性型乳房、产生雌激素型的卵巢和睾丸肿瘤和肾上腺皮质增生等。
另外还可用于生育治疗中的疗效监测以及体外受孕中排卵时间的确定。
原理：采用竞争法原理，整个过程１８分钟完成。
・ 第１步：３５ｍｌ标本与生物素化的抗雌二醇抗体混匀，形成复合物，其数量取决于标本中待测物的浓度。
・ 第２步：加入链霉亲和素包被的微粒和钌（Ｒｕ）标记的雌二醇衍生物。
游离的、未结合生物素化抗体即与此衍生物结合，并且通过生物素、链酶亲和素之间的球上。
让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
・ 第３步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
・检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过２点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
试剂：Ｍ：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），１瓶，６．５ｍｌ。
粒子浓度０．７２ｍｇ／ｍｌ，生物素结合能力： ４７０ｎｇ生物素／ｍｇ粒子。
含防腐剂。
Ｒ１：生物素化的兔抗雌二醇抗体（灰盖），１瓶，８ｍｌ。
浓度４５ｎｇ／ｌ、甲二氢睾酮１３０ｎｇ／ｍｌ；ＭＥＳ缓冲液０．０５ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ６．０。
含防腐剂。
Ｒ２：Ｒｕ（ｂｐｙ）３２＋标记的雌二醇－多肽（黑盖），１瓶，８ｍｌ。
浓度２．７５ｎｇ／ｍｌ；ＭＥＳ缓冲液０．０５ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ６．０。
含防腐剂。
储存和稳定性：存放在２－８ 度，切莫倒置。
未开封，可稳定至标明的保质期。
大鼠雌二醇(E2)说明书
大鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T3ng/L -80ng/L使用目的：本试剂盒用于大鼠血清，血浆及相关液体样本中雌二醇（E2）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠雌二醇（E2）水平。
用纯化的大鼠雌二醇（E2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇（E2）再与HRP标记的雌二醇（E2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠雌二醇（E2）浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
牛雌二醇酶免试剂盒 说明书
1牛雌二醇酶免试剂盒EDI ™Bovine Estradiol Elisa Test KitEnzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA )for the measurement ofBovine Estradiol Levels in Serum or plasma美国Epitope Diagnostics,Inc.For Research use onlyEB B 1005牛雌二醇酶免试剂盒【预期用途】牛雌二醇（Bovine Estradiol,E2）酶免试剂盒是用来定量检测牛血清、血浆、牛奶、组织提取液中的17ß雌二醇（E2）的浓度。
本试剂盒仅供专业人员操作。
【检测原理】牛雌二醇酶免试剂盒以固相酶联免疫吸附测定为基础。
将待测样本、标准品、质控品加入到微孔板中，然后加入已标记的E2抗原。
标记的抗原与未标记抗原和包被在微孔板上的E2抗体竞争性结合。
微孔板洗净后，添加基质溶液，孵育。
用酶标仪测量450nm处的吸光度。
减去空白对照值获得标准品的校正吸光度，绘制标准曲线。
该试剂盒可以直接检测待测样本的雌二醇含量。
样本中标记的抗原数量与未标记抗原的数量成负相关。
通过与标准品绘制的标准曲线进行平行比较，获得未知样本的浓度值。
【试剂盒组成】编号产品名称规格1抗体包被的微孔板96孔2酶标试剂（HRP-E2）12mL3TMB显色剂12mL4终止液（2N HCl）6mL5洗涤液，20倍20mL6样本稀释液20mL7E2标准品x7(0,10,25,100,500,2500,10,000pg/mL)0.5ml/瓶8QC1(~100pg/mL)QC2(~500pg/mL) 9说明书1份【必需材料（未提供）】编号材料名称1半自动移液器：20uL,200uL2一次性移液枪头3振动器4酶标仪5挡板6吸水纸737℃孵育器8封口膜9蒸馏水【注意事项】1.建议所有的标准品、质控品和未知样本均作两管。
elisa试剂盒实验说明书
PRRSV N蛋白抗体检测间接ELISA方法的建立1 材料：1.1 蛋白、血清、酶标二抗原核表达PRRSV N蛋白；标准阳性血清和阴性血清，待检血清；自制HRP标记兔抗猪IgG；1.2 主要试剂和溶液包被液（50 mmol/L pH9.6的碳酸盐缓冲液）Na2CO3 1.59 gNaHCO3 2.93 g准确称取后，溶于950 mL的蒸馏水中，调pH值为9.6，定容到1 L；PBS-T洗涤液1000 mL 10 mmol/L pH7.4的PBS中加入0.5 mL Tween-20；封闭液和血清稀释液含10%小牛血清的PBS-T缓冲液，10%马血清的PBS-T缓冲液，含5%BSA的PBS-T缓冲液，含10%BSA的PBS-T缓冲液，含5%脱脂奶的PBS-T缓冲液；底物溶液100 mmol/L的柠檬酸溶液（21 g柠檬酸C6H6O7•H2O溶于去离子水，定容至1 L）24.3 mL，200 mmol/L Na2HPO4•12H2O（71.6 g Na2HPO4•12H2O溶于去离子水，定容至1 L）25.7 mL混匀，加入50 mg的四甲基联苯胺（TMB），临用前加入50 μL的30% H2O2；终止液（2 mol/L H2SO4）每200 mL终止液，由蒸馏水177.8 mL和浓硫酸22.2 mL 混和而成。
1.3 主要仪器设备电热恒温培养箱；4℃冰箱；酶标仪。
2 步骤：2.1抗原包被浓度和二抗稀释度的确定将原核表达的N蛋白分别作2.0 μg/mL，1.0 μg/mL，0.5 μg/mL，0.25 μg/mL，0.1μg/mL，0.05 μg/mL连续稀释6个稀释度，每个稀释度重复两孔，100 μL/孔，4℃包被酶标反应板过夜。
将自制HRP标记的兔抗猪二抗分别做1:50、1:100、1:200和1:400一系列倍比稀释，南京金益柏生物技术有限公司Tel:025-********Fax*************每个稀释度重复两孔，100 μL/孔，组成方阵确定重组蛋白的最佳包被浓度和二抗稀释度。
雌二醇含量的测定方法
雌二醇含量的测定方法
雌二醇（estradiol-17β，E2）是生物活性最强的一种雌激素，主要由卵巢分泌，具有促进女性生殖上皮、乳腺、子宫、长骨的生长及第二性征的发育，以及参与脂代谢、调节血管平滑肌和内皮细胞的功能等。
其含量测定方法有以下几种：
-酶联免疫吸附法：利用抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用，通过酶标记物的颜色变化或发光强度，对待测样本中雌二醇的含量进行定性或定量分析。
-化学发光免疫分析法：利用化学发光物质标记抗原或抗体，通过抗原抗体反应后产生的化学发光信号，对待测样本中雌二醇的含量进行检测。
-色谱法：利用不同物质在色谱柱上的保留时间和峰面积的差异，对待测样本中雌二醇的含量进行分离和检测。
-荧光免疫分析法：利用荧光物质标记抗原或抗体，通过抗原抗体反应后产生的荧光信号，对待测样本中雌二醇的含量进行检测。
不同的测定方法具有不同的优缺点和适用范围，具体选择哪种方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等因素。
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人雌二醇(E2)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中雌二醇(E2)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人雌二醇(E2)水平。
用纯化的人雌二醇(E2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇(E2)，再与HRP标记的雌二醇(E2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的雌二醇(E2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人雌二醇(E2)浓度。
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备
用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为48pmol/L，32pmol/L ，16pmol/L，8pmol/L，4pmol/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
检测范围：
40 pg/ml-1000 pg/ml
灵敏度：
25 pg/ml
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。