【CN109557065A】一种检测土壤中-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法【专利】
_葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展
第26卷第2期2007年3月 食品与生物技术学报Journal of Food Science and Biotechnology V o l.26 N o.2M ar. 2007 文章编号:1673-1689(2007)02-0107-08 收稿日期:2006-12-29.作者简介:李华(1959-),男,重庆梁平人,教授,博导,主要从事分子生物学及葡萄与葡萄酒方面研究.Email :putj@β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展李华, 高丽(西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100)摘 要:介绍了葡萄和葡萄酒中β-葡萄糖苷酶的研究概况,理化性质、酶活测定方法,以及不同来源的酶活检测的研究概况,并且经过分析提出以对硝基苯基β-D -葡萄糖苷(pN PG )为底物检测葡萄浆果中的β-葡萄糖苷酶酶活的关键影响因素:粗酶液的制备、酶最适反应温度、最佳反应时间、缓冲液类型和pH 及最佳吸收波长。
关键词:葡萄;β-葡萄糖苷酶;活性中图分类号:Q 55文献标识码:AResearch Advance on Methods of determining β-Glucosidase ActivityLi Hua , GAO Li(Colleg e of Enolo gy ,N o rthwest Univ ersity of A g riculture &Fo restry ,Yangling 712100,China )Abstract :Aro ma is one o f the impor tant factors that determining the character and quality o f w ine.β-g lucosidase is a kind of key enzy me w hich releasing aroma precurso rs.In this manuscript ,the prog re sses of the chemical pro perties ,determination methods ,and the source o f β-g lucosidase w ere review ed.On the o ther hand ,the key facto rs that involv e in the β-gluco sidasedetermination method w ith p -Nitrophenyl -β-D -gluco py ranoside as substrate as follow :tem perature ,reactio n tim e ,buffe r type ,pH and abso rb w avelength.Key words :g rape ;β-glucosidase ;activities 典型的葡萄酒风味主要源于葡萄中的挥发性化合物,然而葡萄浆果中存在着游离态和结合态两大类呈香物质。
土壤酶活性测定方法【最新】
土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。
三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。
培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法[发明专利]
![一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/8ea15b224531b90d6c85ec3a87c24028915f85be.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810891591.4(22)申请日 2018.08.07(71)申请人 浙江农林大学地址 311300 浙江省杭州市临安市环城北路88号(72)发明人 梁辰飞 赵均宁 赵安英 卜爱爱 刘亦荐 陆潇 (74)专利代理机构 安化县梅山专利事务所43005代理人 夏赞希(51)Int.Cl.G01N 21/31(2006.01)(54)发明名称一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法(57)摘要本发明属于土壤检测领域，具体的说是一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖；步骤B、过滤葡萄糖浸提液；步骤C、DNS试剂制取；步骤D、样品测定：通过测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量，在使用葡萄糖的土壤培养实验中，可以不用同位素标记的方法即可测出土壤中存留的葡萄糖余量，而且比较精确，回收率高。
权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 108956499 A 2018.12.07C N 108956499A1.一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖：用电子天平称取15g鲜土样品装入30mL的离心管中，再加入15mL蒸馏水，放在25℃的震荡仪中以150r/min震荡30min后，然后放在3000r/min的速度离心机中离心10min；步骤B、过滤葡萄糖浸提液：用15mL的针筒吸取步骤A离心所得的上清液，再用0.22μ的水系的针头过滤器过滤，将滤液收集在灭菌的10mL离心管中待测；步骤C、DNS试剂制取：将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200mL 2mol/L NaOH溶液中，再加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，缓慢混匀后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL放置在暗处保存备用；步骤D、样品测定：在25ml的比色管里加入步骤B过滤后的葡萄糖浸提液1mL，再加入1mL 蒸馏水和步骤C制取的2mL DNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量。
一种检测凋落物β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法[发明专利]
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专利名称：一种检测凋落物β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法专利类型：发明专利
发明人：刘兵,耿莉,刘怡,徐杰,曲朝磊,杨艺红,孙辉
申请号：CN202010062495.6
申请日：20200119
公开号：CN112210586A
公开日：
20210112
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测凋落物β‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，涉及凋落物酶活性检测的技术领域。
该方法包括以下步骤：1)在凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到酶活测试液；并制备灭活对照酶液；2)制作MUB浓度与吸光值之间关系的标准曲线；3)将酶活测试液和灭活对照酶液分别添加到酶活测试孔和阴性孔，然后加入4‑MUB‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；4)根据标准曲线，计算β‑葡萄糖醛酸苷酶比酶活。
本发明酶液耗量少、操作强度小；灵敏度呈数量级提高；且测试液pH对上机数据没有影响，能够真实反映凋落物中酶活性。
申请人：南京林业大学
地址：210037 江苏省南京市玄武区龙蟠路159号
国籍：CN
代理机构：南京申云知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：邱兴天
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d-葡萄糖底物uv分光光度法 酶活测定方法
葡萄糖底物UV分光光度法是一种用于测定酶活的常见方法。
本文将介绍葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及其在生物化学和生物医学研究中的应用。
一、原理1. 葡萄糖酶（也称葡萄糖氧化酶）能够催化葡萄糖与氧气在水溶液中发生氧化反应，生成葡萄糖内酯和过氧化氢。
这个氧化反应是可以通过UV分光光度法测定的。
2. 葡萄糖底物UV分光光度法的原理是通过测定在酶催化下葡萄糖与氧气反应所产生的过氧化氢的浓度变化来间接测定酶的活性。
二、步骤1. 样品处理：将待测样品中的葡萄糖与底物混合，使底物的浓度在一定范围内，以确保底物的过量不会影响酶的活性测定。
2. 加入酶液：将一定量的葡萄糖酶加入混合液中，并在一定温度下孵育一段时间，使酶与底物发生反应。
3. 反应停止：加入一种化学试剂使反应停止，同时转化过氧化氢形成一种有色产物。
4. 测定吸光度：使用紫外-可见分光光度计测定产生的有色产物的吸光度，根据标准曲线计算出反应体系中的过氧化氢的浓度。
5. 计算酶活：根据过氧化氢的浓度变化和所加的酶的蛋白质含量等数据，计算出酶的活性。
三、应用1. 生物化学研究中的应用：葡萄糖底物UV分光光度法广泛应用于酶动力学研究中，可以用来测定各种酶的活性及其对底物的亲和力。
2. 生物医学研究中的应用：在生物医学研究中，葡萄糖底物UV分光光度法可以用来研究酶与疾病的关联性，例如糖尿病患者血清中的葡萄糖酶活性与血糖水平的关系。
结论葡萄糖底物UV分光光度法是一种简单、敏感、精确的酶活测定方法，具有广泛的应用前景和重要的科研意义。
通过对葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及应用进行了解和掌握，可以更好地指导实验操作并推动生物化学和生物医学领域的研究进展。
近年来，随着生物技术的不断发展，葡萄糖底物UV分光光度法在生物医学研究中的应用越发广泛。
除了用于酶动力学研究和疾病相关性分析外，葡萄糖底物UV分光光度法还在其他领域展现出了巨大的潜力。
1. 新药研发在新药研发过程中，葡萄糖底物UV分光光度法被用于筛选潜在的药物候选化合物。
一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法[发明专利]
![一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ca3a29bc3c1ec5da51e2701f.png)
专利名称：一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法专利类型：发明专利
发明人：洪军,耿方勇,肖保林
申请号：CN201610142392.4
申请日：20160314
公开号：CN105586388A
公开日：
20160518
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法，具体为：1）配置pH值为5.8的磷酸盐缓冲液，然后室温下依次加入辣根过氧化物酶液、葡萄糖氧化酶液、愈创木酚和葡萄糖溶液；2）采用紫外可见光分光光度计进行时间扫描，获得产物四邻甲氧基连酚的吸光值随时间的变化数据；3）根据朗伯比尔定律将四邻甲氧基连酚的吸光值换算为浓度，然后以时间为横坐标，浓度为纵坐标，在excel中作散点图，添加趋势线，趋势线斜率即为四邻甲氧基连酚的生成速率，该生成速率乘以系数4即得到葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的反应速率，再根据酶活力单位定义进行换算即得到葡萄糖氧化酶酶活性。
该方法具有操作简便，反应现象明显，灵敏度高，重复性好等优点。
申请人：河南大学
地址：475001 河南省开封市明伦街85号
国籍：CN
代理机构：郑州联科专利事务所(普通合伙)
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土壤酶活活性测定方法
土壤月尿酶（urease^）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脉酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用丁脉酶活性的测定。
（二）试剂D甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7） : 184克和147.5克氢氧化钾溶丁蒸僻水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7,用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L） : 62.5克苯酚溶丁少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A）,存丁冰箱中；27克NaOH溶丁100毫升水（B）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸僻水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铉溶丁水并稀释至1000mL,得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL,定容至100mL,即稀释了10倍，吸取1, 3, 5, 7, 9, 11, 13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL,再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL 次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟，用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上丁578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脉酶活性的测定称取10 g 土壤置丁100mL容量瓶中。
用2mL甲苯处理15分钟。
往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。
仔细混合后，将瓶放在37C包温箱中，放置3 ho与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。
培养结束后，用热至38C的水稀释至刻度。
摇匀，将悬液过滤。
吸取1mL 滤液丁50mL容量瓶中，用蒸僻水加至10mL。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)检测
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）检测
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Soil N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）是一种酸性水解酶，主要分布于土壤微生物的溶酶体中，其活性变化与机体某些病理状态密切相关。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶的测定原理：S-NAG分解对硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶活性。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶活性变化。
此外，我们还提供其他土壤酶类检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶活性信息。
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( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910035291 .0
(22)申请日 2019 .01 .08
(71)申请人 吉林省农业科学院 地址 130033 吉林省长春市生态大街于德斌 饶德民 闫日红 丛博韬 颜秀娟 李明姝 王新风
权利要求书1页 说明书3页
CN 109557065 A
CN 109557065 A
权 利 要 求 书
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1 .一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法，其特征在于，包括如下步骤： 配制50mM醋酸缓冲液，取4 .1g醋酸钠、161μl冰醋酸和无菌去离子水水定容至1000ml并 调节PH至5 .5； 配制200μM的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液，称取6 .762mg的4-甲基伞形酮和 30μl二甲基亚砜溶解溶解，加无菌去离子水稀释定容至100ml； 配制10μM标准品溶液，称取1 .762mg的4-甲基伞形酮和30μl二甲基亚砜溶解，再定容至 1000ml，制得10μM标准品溶液； 将标准品溶液用蒸馏水分别稀释成浓度为0、0 .025μM、0 .05μM、0 .125μM、0 .25 .0μM、0 .5 μM的标准溶液 ，制得标样液 ，分别用移液枪吸取50μl至96孔板中 ，后分别加入200μl醋酸缓 冲液，再分别加入20μl的1M NaOH溶液，然后进行荧光检测，如此重复制作3条标准曲线； 称取2份0 .3g的土壤鲜样于5ml离心管中，其中1份用于烘干测土壤含水量W，另1份加入 3mL醋酸缓冲液均质混匀，在涡旋仪上高速震荡5分钟，再4℃低温4000R离心5分钟； 吸取3份容量为200μl的经离心后的土壤鲜样与醋酸缓冲液混合物的上清液至96黑孔 板中，其中一份再加50μl醋酸缓冲液，一份加50μl的10μM的标样液，另一份加50μl的4-甲基 伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液； 在37℃培养2h后向黑孔板中每孔加入20μl的1M的NaOH溶液，终止反应； 在荧光检测仪读板温度37℃、酶标板震荡时间1min、激发波长350nm、发射波长450nm的 条件下，测定每孔的荧光强度值； 以标样液浓度和测定的吸光值A制作标准曲线，得到斜率b； 通过如下公式计算得酶活性： 酶活性＝[(RS-BU)*(SA-SC)/(QS-SC)]-(NC-BU)]*b*2*3000/(0 .3*W*200)， 其中 ，SC为上清液+50μl的醋酸缓冲液所 测荧光强度值 ，QS为上清液+50μl的标样液所 测荧光强 度值 ，SA为上清液+50μl的 4-甲 基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液所 测荧光强 度 值，BU为200μl的醋酸缓冲液+50μl醋酸缓冲液所测荧光强度值，RS为200μl的醋酸缓冲液+ 50μl的标准品溶液所测荧光强度值，NC为200μl的醋酸缓冲液+50μl的4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值。 2 .如权利要求1所述的一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法，其特征在于， 1M的NaOH溶液通过20gNaOH+蒸馏水定容至50ml制得。
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CN 109557065 A
说 明 书
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一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法
技术领域 [0001] 本发明涉及酶活性检测技术领域，特别涉及一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性 的分析方法。
背景技术 [0002] 土壤胞外酶在生态系统中扮演着重要角色，其活性高低反映土壤微生物新陈代谢 状况，对于保持土壤肥力和植物生产力极其重。β-D-葡萄糖苷酶，一种更准确检测土壤中βD-葡萄糖苷酶活性的分析方法是目前研究最广泛的一种土壤酶，深度参与土壤有机质的转 化过程 ，主要是由以 纤维素为底物的 微生物分泌 ，水解纤维二糖 和其他水溶性的纤维 糊精 产生形成葡萄糖 ，供微生物自 身生长利 用，能 够指示以 土壤中有机或无机碳为底物的 异养 型呼吸强度，在有机质分解中起重要作用。总的说来，土壤β-D-葡萄糖苷酶的活性反映了土 壤形成的生物气候及生态学条件、土壤生物化学过程的强度及土壤肥力水平。在进行土壤 肥力评价时 ，常常需要测定在不同条件下的β-D-葡萄糖苷酶活性进行说明 ，因此 ，建立一种 相对快速准确的β-D-葡萄糖苷酶活性的检测方法具有很重要的意义。 [0003] 目前在酶检测领域发展成熟的一种方法是以伞形酮作为底物的内置荧光团结合 β-消除反应的检测法，伞形酮又称7-羟基香豆素，是一种强荧光染料，以伞形酮标记底物作 为探针 ，在酶催化作 用下产物发生分子内β- 消除 反应而使底物上的 伞形酮脱落 ，通过荧光 强度的变化反映酶活。该方法被广泛应用于检测多种酶。 [0004] 由于当前多功能酶标仪对荧光强度的检测具有很高的灵敏度，因此缓冲液、土壤、 底物以 及荧光基团 与他 们之间 相互影响的 背景值 ，对与检 测结果的 准 确性具有很大影响。 现今广泛运 用的酶活荧光检 测技术 ，仅仅通过无土对照和无底物对照 ，排除 了土壤及底物 的 背景值 ，对于荧光检 测这种相当灵敏的 检测方法 ，任何的 背景干扰对于结果的 准 确性都 具有相当影响。
(51)Int .Cl . G01N 21/64(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109557065 A (43)申请公布日 2019.04.02
( 54 )发明 名称 一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分
析方法 ( 57 )摘要
本发明公开了一种检测土壤中β-D-葡萄糖 苷酶活性的分析方法 ，属于酶活性检测技术领 域。该装置包括如下步骤 ：酶活性＝[( RS-BU )* ( SA-SC )/( QS-SC )]-( NC-BU )]*b*2*3000/( 0 .3* W*200 )，其中，SC为上清液+50μl的醋酸缓冲液 所测荧光强度值，QS为上清液+50μl的标样液所 测荧光强度值，SA为上清液+50μl的4-甲基伞形 酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值，BU 为200μl的醋酸缓冲液+50μl醋酸缓冲液所测 荧光强度值，RS为200μl的醋酸缓冲液+50μl的 标准品溶液所测荧光强度值，NC为200μl的醋酸 缓冲液+50μl的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷 底物溶液所测荧光强度值。本发明可以减小背景 值 ，能排除 样品 与荧光基团互 作的 背景值 ，排除 缓冲液对标准品的背景值，提高测量结果的准确 性，样品及药品用量少。