血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1. 掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2. 定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法, 叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素, 是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如: 丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后, 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构, 有强渗透性, 厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前, 醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
三、操作方法一、仪器和薄膜的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿的选择: 将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内, 使它漂浮在液面。
若迅速润湿, 整条薄膜色泽深浅一致, 则表明薄膜质地均匀；若润湿时, 薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等, 则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为, 纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如, 膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
将选用的薄膜用镊子轻压, 使它全部浸入缓冲液内, 待膜完全浸透（约半小时）后取出, 夹在清洁的滤纸中间, 轻轻吸去多余的缓冲液, 同时分辨出光泽面和无光泽面。
2．制作“滤纸桥”：剪裁尽寸合适的滤纸条。
取双层附着在电泳槽的支架上, 使它的一端与支架的前沿对齐, 而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。
然后, 用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡, 使滤纸紧贴在支架上, 即为“滤纸桥”。
按照同样的方法, 在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。
二、点样在薄膜无光泽的一面点样。
点样区距负极端1.5㎝处。
点样时, 先用血色素吸管将2～3微升的血清均匀地涂在点样器表面, 再用点样器“印”在薄膜的点样区内（见图4－1）。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳__ENT 5血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理和方法。
实验目的支持介质醋酸纤维素是把纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,将其涂布得到的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。
这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象；膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，分离速度快，电泳时间短；样品用量少，5μg的蛋白质可得到满意的分离效果。
因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。
醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。
实验原理蛋白质名称白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白等电点(pI) 4.8 5.06 5.06 5.12 6.85-7.3 相对分子质量__ 2022年00 __ __-__ __-__本实验是以醋酸纤维素薄膜为支持物的区带电泳。
在PH8.6的缓冲液中，各蛋白均带负电荷，在电场中向正极泳动。
由于血清中不同蛋白质所带的电荷数量及分子量不同，因此泳动速度不同，从而彼此分离。
电泳薄膜经染色和漂洗，可清晰呈现五条区带！经洗脱比色或者薄膜经透明处理后扫描可以测定各蛋白组分的相应百分含量。
操作点样将醋酸纤维素薄膜小条浸泡于PH8.6的巴比妥缓冲液中，使之完全浸泡透。
将浸泡的薄膜取出，用滤纸吸去多余的水分，让薄膜的无光泽面向上，用有机玻片末端蘸取少量血清在距一末端 1.5cm处点样。
电泳将点样的薄膜无光泽面向下，置于电泳槽支架上，点样端置于负极。
槽架上用4层滤纸做桥垫，膜条与滤纸必须贴紧，平衡5min后通电，电压110v电泳1h。
染色电泳结束后，用镊子将膜取出，直接浸于氨基黑10B中染1min,后置于漂洗液中反复漂洗至背景干净为止。
用滤纸吸干薄膜。
结果观察一般在染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
从正极端起，依次为清蛋白、α1球蛋白、α2 球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
(3) 加样量 : 加样品量的多少与电泳条件、样品性质、染 色方法与检测手段灵敏度密切相关。作为一般原则，检 测方法越灵敏，加样量越少，对分离更有利。如加样量 过大，则电泳后区带分离不清楚，甚至相互干扰，染色 也较费时。 点样好坏是获得理想图谱的重要环节之一，以印章 法加样时，动作应轻、稳，用力不能太重，以免将薄膜 弄破或印出凹陷而影响电泳区带分离效果。 (4) 电量选择 : 电泳过程应选用合适的电流强度，一般为 0.3 ～ 0.5 mA ／ cm 宽膜。电流强度高，则热效应高，可 能引起蛋白质变性或由于缓冲液蒸发造成膜片干涸。电 流过低，则样品泳动速度慢且易扩散。 (5) 染色液的选择 : 染色液应根据样品的特点加以选择。 其原则是染料对被分离样品有强的着色力，背景易脱色， 应尽量采用水溶性染料，不宜选择醇溶性染料，以免使 薄膜溶解。
图ll一1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 1为清蛋白；2，3，4，5分别为α 1-，α 2-，β -及γ -球蛋白；6为点样原点
Hale Waihona Puke 此法由于操作简单快速、分辨率高及重复性好等优 点，目前已成为临床生化检验的常规操作之一。它不仅可 用于分离血清蛋白，还可用于分离脂蛋白、血红蛋白及同 工酶的分离测定。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
1.学习醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理。 2.了解醋酸纤维素薄膜电泳的操作技术。 3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。
二、实验原理
醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持 物的电泳方法。醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化形 成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、 氯乙烯、乙酸乙酯等)后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋 酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构，有强渗 透性，对分子移动无阻力，厚度为120um。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳【原理】由于不同的蛋白分子在同一环境中解离情况不同、分子大小不同等差异，电泳时可将其分离。
醋酸纤维素薄膜电泳具有分离速度快，区带清晰，操作简便等优点。
血清含多种蛋白质，用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带，经固定染色后不仅可看到清晰的色带，而且可定量测定，计算出各种蛋白质的百分含量，其正常值如下：A(白蛋白) 57～72%α1球蛋白 2～5%α2球蛋白 4～9%β球蛋白 6.5～12%γ球蛋白 10～20%某些肝、肾疾病上述蛋白含量发生改变。
【仪器】电泳仪 721型分光光度计染液盘漂洗盘镊子(或竹夹子)【试剂】1．巴比妥缓冲液(pH8.6，离子强度0.06)：巴比妥纳12.7g，巴比妥1.66g，先加水少量，小心加热溶解，最后用蒸馏水定容为1 000ml，4℃保存。
2．氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.5g，甲醇50ml，冰醋酸1.0ml，蒸馏水40ml，混匀。
3．漂洗液：95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，按比例混匀。
4．0.4N NaOH溶液。
【操作】1. 点样：将醋酸纤维薄膜切成8cm×2cm条状，浸于巴比妥缓冲液，待完全浸透后，取出置于滤纸上，轻轻吸去多余的缓冲液，再于薄膜的无光泽面的一端2.5cm处，用小玻片蘸取少许血清，垂直印于膜上，待样品浸入膜后，将薄膜有样品的一面向下(以防蒸发干)贴在电泳槽架上，两端用数层浸湿的滤纸（或纱布）作盐桥贴紧。
（其他样品同样处理，若需标记，只能用铅笔书写于有光泽面的两端。
）2．通电：一般电压用90～120V，电流约0.4～0.6mA／cm，通电45至60分钟，待电泳区带展开约25～35mm后关闭电源。
3．染色：通电完毕，将薄膜直接浸于染色液中，3～5分钟后取出放入另一盘中，用漂洗液浸洗数次,每次3分钟，至脱色使背景无色为止。
染色完毕，将染色液倒回原瓶，漂洗液注入回收瓶。
4．定量：将漂洗完毕的薄膜吸干，剪下每种蛋白质色带，另于空白处剪一窄条薄膜，分别放入有4m1 0.4N NaOH的中试管内，振摇数次，使染料色泽浸出，30分钟后，分别于650nm处读吸光度(空白薄膜条浸出液作空白对照)。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验报告结果
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验报告结果1. 实验背景说起血清蛋白，大家可能觉得这听起来像是医生的专业术语，其实它和我们的日常生活有着密切的关系。
血清蛋白就像是我们身体里的“搬运工”，负责运输各种营养物质、激素和废物。
想象一下，它们就像是一个个小快递员，在血液这条大街上忙忙碌碌，辛勤工作，保持我们的身体正常运转。
哎，真是个不容易的职业！为了更好地了解血清蛋白，我们常常用到醋酸纤维薄膜电泳这项技术。
虽然听起来复杂，但其实就是把血清蛋白“分门别类”，让它们各自展现自己的风采。
2. 实验过程2.1 准备工作实验开始前，咱们得先准备好材料。
这可不是随便拉拉家里的东西就能搞定的。
我们需要高质量的血清样本，还有醋酸纤维膜、缓冲液等等，听起来就像是在准备一场盛大的宴会。
每一个小细节都不能马虎，毕竟“千里之行，始于足下”。
做好准备，咱们就可以开始了。
2.2 实验步骤先把血清样本滴在醋酸纤维膜上，嘿，就像给它们来个小小的“泡泡浴”。
然后，我们把膜放进电泳槽，电流一打开，哇！就像给这场聚会打上了光速，血清蛋白们开始“分开舞动”，每种蛋白根据大小和电荷的不同，表现出不同的迁移速度，简直是一场精彩的“舞蹈比赛”。
最后，咱们用染料将它们染色，瞬间，整个膜上就像开满了五彩缤纷的花朵，各种颜色交织在一起，真是美丽得让人心醉！3. 实验结果3.1 观察到的现象看着膜上那些不同颜色的条带，心里不禁感慨万千。
这些条带就像是一幅复杂的画卷，每一条都代表着一种不同的血清蛋白，真是让人忍不住想一探究竟。
我们能够清楚地看到每种蛋白的相对浓度，甚至还可以发现一些隐藏的“明星蛋白”。
这些小家伙可是咱们健康的重要守护者，它们的数量和状态直接影响着我们的身体。
3.2 数据分析接下来就是分析数据了。
通过定量分析，我们可以得出不同蛋白的浓度比。
这就像是在选拔赛中，评委们仔细打分，谁是冠军，谁又是陪跑的，都一目了然。
根据不同的情况，比如炎症、营养不良等，咱们也能从这些数据中找到线索。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理哎呀，这可是个大课题啊！不过别着急，咱们一步一步来，先来聊聊醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验的原理。
其实，这个实验就是让蛋白质在醋酸纤维薄膜上“跑”起来，然后根据它们的运动速度和方向来区分不同的蛋白质。
听起来好像很高深的样子，但其实很简单，就像我们在学校里做的那些实验一样。
咱们要准备一些东西。
除了醋酸纤维薄膜、电泳仪、缓冲液等基本材料外，还需要一些血清蛋白样品。
血清蛋白是血液中的一类重要成分，它们可以帮助我们了解身体的健康状况。
这些蛋白质可不是随便取的，得是新鲜的、高质量的才行。
接下来，咱们就要开始实验了。
要把血清蛋白样品加入到缓冲液中，这样可以给它们提供一个合适的环境。
然后，把缓冲液倒入电泳仪中，让它开始工作。
这时候，醋酸纤维薄膜就会变得非常有活力，因为它上面有很多小的孔隙，可以让小分子穿过。
当电场作用在醋酸纤维薄膜上时，这些小分子就会被推着在薄膜上移动。
而血清蛋白呢？它们就像一群顽皮的孩子，总是喜欢在一起玩耍。
当电场作用在它们身上时，它们就会跟着一起跑起来。
那么问题来了，怎么才能知道这些蛋白质跑得快还是慢呢？这就需要用到电泳迁移率了。
所谓迁移率，就是指蛋白质在电场作用下移动的速度。
不同的蛋白质，它们的迁移率是不一样的。
比如说，血红蛋白的迁移率就比较低，而胰岛素的迁移率就比较高。
所以，通过观察蛋白质在醋酸纤维薄膜上的迁移情况，我们就可以判断出它们的身份了。
这个实验还有很多细节需要注意。
比如说，样品的质量、浓度、pH值等因素都会影响到实验结果。
而且，有时候还会遇到一些干扰因素，比如气泡、杂质等。
但是只要我们认真操作，仔细观察，就一定能得出准确的结果。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验是一种非常有趣且实用的方法。
它可以帮助我们了解身体内部的各种蛋白质成分，从而更好地维护我们的健康。
所以啊，大家一定要认真学习这个实验哦！。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量
G=α1＋α2＋β＋γ
血清蛋白电泳结果的临床意义：
可能相关疾病 骨髓瘤 肾病综合症 肾炎 肝硬化 急性肝坏死 传染性肝炎 急性感染初期 慢性炎症/感染后期 低球蛋白血症
清蛋白
α1球蛋白
↓
↓
↓*
↑
↓பைடு நூலகம்
↑*
α2球蛋白
↑* ↑*
↑ ↑* ↑*
β球蛋白
↑* ↑
γ球蛋白
蛋白质的理化性质
❖ 蛋白质的两性电离及等电点； ❖ 蛋白质的沉淀； ❖ 蛋白质的变性； ❖ 蛋白质的胶体性质； ❖ 蛋白质的水解； ❖ 蛋白质的颜色反应；
分离蛋白质的方法
分离方法
沉淀法 层析法 电学法
盐析法 有机溶剂沉淀法
电泳法 等电聚焦 超速离心法
离子交换层析 吸附层析 凝胶过滤（分子筛） 亲和层析
实验原理-2
血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量
血清蛋白质 清蛋白
α1－球蛋白 α2－球蛋白 β－球蛋白 γ－球蛋白
等电点 4.64 5.06 5.06 5.12 6.85～7.3
分子量 69,000 200,000 300,000 90,000～150,000 156,000～950,000
占总蛋白的％ 57～72 2～5 4～9 6.5～12 12～20
实验结果
❖ 电泳结果图
（-）
（+）
实验结果
❖ 光密度计扫描图：
实验结果
❖ 数据记录
测定次数
白蛋白
各管吸光值A620 α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白
γ-球蛋白
1
2
3
各管平均值
A 620
生化试验教材实验二：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
实验误差分析和注意事项
误差来源
实验误差可能来源于电泳操作、染色操作、读数等方面。
注意事项
实验过程中应注意保持操作规范，避免交叉污染，同时注意观察实验现象，及 时处理异常情况。
05 实验结论
总结实验结果
实验结果显示，血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳可以将血清蛋 白分为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白等区 带，分离效果良好。
α1球蛋白增加常见于慢性肝炎、 肝硬化或肝癌等疾病。
β球蛋白增加
β球蛋白增加可能与急性感染、 组织损伤或免疫系统疾病等有 关。
白蛋白减少
白蛋白减少可能提示肝功能异 常、营养不良或肾病综合征等。
α2球蛋白增加
α2球蛋白增加可能提示骨髓瘤、 巨球蛋白血症或妊娠等。
γ球蛋白增加
γ球蛋白增加常见于慢性肝炎、 肝硬化或自身免疫性疾病等。
和疾病状态。
通过醋酸纤维素薄膜电泳分离血 清蛋白质，可以对不同蛋白质成 分进行分析和鉴定，有助于临床
诊断和治疗。
02 实验原理
血清蛋白质的组成和性质
血清蛋白质是由多种蛋白质组成的混合物，包括白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、 β-球蛋白和γ-球蛋白等。这些蛋白质具有不同的电荷和分子量，是电泳分离的基础。
通过实验，我们观察到了不同蛋白质的迁移率和分布情况， 为后续的蛋白质分析和鉴定提供了基础数据。
实验结论与实际应用的联系
本实验所采用的醋酸纤维素薄膜电泳技术在实际应用中具 有广泛的应用价值，例如在临床医学中用于检测和诊断某 些疾病，如肝病、肾病等。
通过本实验，我们了解了醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理 和操作方法，为今后在相关领域的研究和应用奠定了基础 。
03 实验步骤
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血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳，是一种分析和测定蛋白质的方法。
下面将介绍一些相关的参考内容，以帮助您更深入了解这一方法。
1. 应用和原理
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（SER-PAGE）是一种常用的蛋
白质电泳分析方法，可以用于分离和检测血清蛋白及其亚类。
其原理是基于蛋白质在电场中的迁移速率与其电荷质量比有关。
在薄膜电泳中，蛋白质样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离，然后通过染色等方法进行定量或定性分析。
2. 薄膜电泳装置和操作步骤
薄膜电泳装置包括电源、原电极、测电极、薄膜和样品槽。
操作步骤通常包括制备样品和电解液，加载样品和电解液到薄膜中，接通电源，进行电泳分离，然后进行染色和分析。
3. 应用领域
SER-PAGE广泛应用于生物化学、生物医药和临床诊断等领域。
在生物化学中，SER-PAGE可用于研究蛋白质结构与功能的关系。
在生物医药中，SER-PAGE可用于血清蛋白分析、监测蛋白质药物的纯度和一致性。
在临床诊断中，SER-PAGE可用于检测血清中的异常蛋白质，辅助癌症、心脏和免疫系统相关疾病的诊断。
4. SER-PAGE与其他电泳方法的比较
相比较传统的PAGE方法，SER-PAGE具有操作简单、不需
要注入胶、迁移速度快等优点。
与SDS-PAGE相比，SER-PAGE适用于纯化量较小的样品，并且对样品中的蛋白质亚基分离效果更好。
与凝胶电泳相比，SER-PAGE不需要特殊仪器设备，成本较低。
5. 发展趋势与进展
SER-PAGE作为一种传统的电泳技术，仍在不断发展和改进。
比如，一些新的薄膜材料和成像技术的引入，使得分离和检测的灵敏度得到提高。
同时，一些研究也在调整电解液组成和pH值，以优化蛋白质的分离和迁移。
总结起来，血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的方法。
通过了解其原理、操作步骤和应用领域，可以更好地理解和应用这一技术。
随着技术的不断进步和改进，SER-PAGE有望在生物化学、生物医药和临床诊断等领域发挥更大的作用。