5种新型化学杀菌剂对辣椒疫霉病菌的毒力与药效

第44卷 第6期河南农业大学学报V o.l 44 N o .62010年 12月Journa l of H enan A gricultural Un iversityD ec .2010收稿日期:2010-08-12基金项目:河南省重点科技攻关资助项目(082102350006)作者简介:宋天有,1983年生,男,河南方城人,硕士研究生,主要从事生物农药与植物保护研究.通讯作者:周 琳,1971年生,女,河南南阳人,博士,副教授,硕士生导师.文章编号:1000-2340(2010)06-0675-045种新型化学杀菌剂对辣椒疫霉病菌的毒力与药效宋天有1,周 璞2,万红娟1,高 飞1,程永战1,周 琳1(1.河南农业大学植物保护学院,河南郑州450002;2.河南省舞钢市畜牧局,河南舞钢462500)摘要:为筛选辣椒疫霉病的有效防治药剂,采用菌丝生长速率法、游动孢子释放抑制法和室内盆栽,对5种新型化学杀菌剂(双炔酰菌胺、银法利、普力克、安博和阿米西达)进行了室内毒力测定和盆栽防效试验.室内毒力测定结果表明,双炔酰菌胺对辣椒疫霉病菌菌丝生长抑制作用最强,其EC 50值为0.06mg L -1;银法利次之,其EC 50值为1.41mg L -1.银法利对辣椒疫霉病菌游动孢子释放抑制作用最强,其EC 50值为11.73m g L -1;双炔酰菌胺次之,EC 50值为30.78mg L -1.盆栽试验结果表明,稀释1000倍液的5种杀菌剂中,687.5g L -1银法利悬浮剂对辣椒疫霉病的盆栽防效最好,平均防效为76.92%;其次为25%双炔酰菌胺悬浮剂和50%安博可湿性粉剂,平均防效均为69.23%.关键词:辣椒疫霉病菌;杀菌剂;杀菌活性;防治效果中图分类号:S482.2 文献标志码:AThe toxicities and effects of five fungici des onPhytopht hor a capsici Leoni anSONG T ian you 1,Z HOU Pu 2,WAN H ong j u an 1,GAO Fe i 1,C HENG Yong zhan 1,Z HOU Lin 1(1.Co llege of Plan t Pr o tection ,H enan A griculturalUn i v ersity ,Zhengzhou 450002,Ch i n a ;2.L i v estock Bureau o fW ugang C ity ,W ugang 462500,Ch i n a )Abst ract :W ith the purpose o f screening fung icides to contro l effecti v e l y Phy tophthora cap sici Leon i a n,the m ycelial li n ear gro w t h rate m ethod ,release i n h i b iti n g m ethod of the zoospo res ,and potted plants testw ere adopted to test the contr o l effect o f fi v e f u ng ici d es on P.cap sici .The results indicated t h at m andipropa m id had the best i n hibiti n g effect on the hypha gro w th o f pathogen w it h the EC 50value of 0.06m g L -1.The effect of Y i n fali(Prev icur-N +F l u opicolide)fo ll o w ed w ith the EC 50va l u e of 1.41m g L -1.W h ile i n the re l e ase i n h i b iting experi m ent o f the zoospores of P.capsici sporang i u m,Y i n fali exh i b ited the strongest fung icida l activitiesw it h the EC 50va l u e o f 11.73m g L -1.The second w as m and i p ropa m i d w ith the EC 50value o f 30.78m g L -1.The resu lts i n po t experi m ents show ed 687.5g L -1Y i n fali SC w it h 1000-fold d il u tion had the best control effect be i n g 76.92%,fo ll o w ed by 25%m and i p ropa m i d SC and 50%th ira m W P w ith 69.23%con tro l e ffec.t K ey w ords :Phy tophthora cap sici Leon i a n ;fung ic i d es ;antif u ngal acti v ity ;con tro l e ffect 辣椒疫病是一种重要的毁灭性土传卵菌病害,现已在全世界普遍发生[1].其病原菌(Phy toph t h oracapsici Leonian.)除危害辣椒外,也可侵染番茄、茄子、黄瓜、西瓜、南瓜等作物.近年来,随着辣椒在各676河 南 农 业 大 学 学 报第44卷主产区的连茬种植,该病害有逐渐加重的趋势,危害较为显著[2].疫病可危害辣椒的根、茎、叶和果实等部位,在气候条件适宜的情况下,短期内就可爆发,蔓延速度极快,给辣椒生产造成严重经济损失[3].目前,化学防治仍是辣椒疫病的主要防治措施之一[1].20世纪80年代引进内吸性杀菌剂甲霜灵、杀毒矾M8(主要成分为恶唑烷酮Oxad i x yl)等在防治辣椒疫病上取得了较好的效果.但随着这些药剂(尤其是甲霜灵)的长期使用,已引起抗药性的产生,使防治效果下降[4],并且已有报道甲霜胺(M etalaxyl),恶唑烷酮,Benalaxy,l O furace,Cypro f u ra m,Fura laxyl等苯基酰胺类杀菌剂之间普遍存在着交互抗性[5].因此,筛选辣椒疫病的理想防治药剂成为控制该病害的重要途径.双炔酰菌胺是由先正达公司开发的新型卵菌纲病害杀菌剂,也是第1个商品化的扁桃酰胺类化合物,对绝大多数由卵菌引起的叶部和果实病害均有很好的防效,对作物、人、野生动物和环境安全[6].银法利是由治疗性杀菌剂氟吡菌胺(Fluopico li d e)和强内吸传导性杀菌剂霜霉威盐酸盐(Propa m ocar b H C l)复配而成,低毒,对环境和作物安全,能在作物的任何生长时期使用[7].阿米西达(嘧菌酯Azoxystr obin)是以源于蘑菇的天然抗菌素为模板,通过人工仿生合成的一种全新的 甲氧基炳烯酸酯类杀菌剂,具保护、治疗和防除3重功效,具良好的作物安全性和非常突出的环境相容性[8].本研究通过测定5种新型化学杀菌剂对辣椒疫霉病菌菌丝生长和孢子囊中游动孢子释放的抑制作用以及盆栽防治效果,从而筛选出辣椒疫霉病的有效防治药剂,为该病的田间防治提供科学依据.1 材料与方法1.1 供试材料1.1.1 供试病原菌 辣椒疫霉病菌(Phy toph t h ora cap sici Leon ian.)由河南农业大学植保学院农药学实验室分离培养.1.1.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和米糠琼脂培养基(RB A).1.1.3 供试药剂 质量分数为72.2%普力克悬浮剂(有效成分为霜霉威盐酸盐,拜耳作物科学公司)、质量分数为25%阿米西达悬浮剂(有效成分为azoxystrob i n,瑞士先正达作物保护有限公司)、质量分数为68.75%银法利悬浮剂(有效成分为氟吡菌胺+霜霉威盐酸盐,拜耳作物科学有限公司)、质量分数为25%双炔酰菌胺悬浮剂(有效成分为m andipropa m id,瑞士先正达作物保护有限公司)、质量分数为50%安搏可湿性粉剂(有效成分为福美双,英国先利达作物保护有限公司).1.1.4 供试种子 美国西圆甜椒王(郑州金阳光种子有限公司).1.2 试验方法1.2.1 供试药剂对辣椒疫霉病菌菌丝生长抑制作用的测定 采用吴文君[9]的抑制菌丝生长速率法.将5种供试药剂分别用无菌水稀释成5种浓度梯度药液,分别取不同浓度梯度的药液1mL加到9mL PDA培养基中,每培养皿放置1个菌饼,重复3次,以无菌水为对照.按公式(1)计算菌丝生长抑制率.根据机率值分析法求出毒力回归方程和抑制中浓度EC50.菌丝生长抑制率(%)=(对照菌落直径-菌饼直径)-(处理菌落直径-菌饼直径)对照菌落直径-菌饼直径100%(1) 1.2.2 供试药剂对辣椒疫霉病菌孢子囊中游动孢子释放的抑制作用 参照毕艳红等[10]的方法.将辣椒疫霉病菌在PDA培养基上培养4d后接种到米糠培养基上,在光照度3000l x,光暗比D!L= 12!12,于25∀培养箱中培养8d,在1010倍显微镜下观察制成4.0106个 L-1的孢子囊悬浮液.根据预试验配成一系列合适浓度药液,将药液与孢子囊悬浮液等体积混匀,并以无菌水与孢子囊悬浮液等体积的混合液作对照.将混合液滴满凹玻片凹面,置于培养皿内保湿,经4∀冰箱中处理15 m i n,移至25∀恒温箱中培养5h,取出载玻片在1010倍显微镜下随机检查3个视野,每视野观察约50个孢子囊,以孢子囊中游动孢子全部游出而成空壳记录为完全释放,每处理3个重复,以平均值作为测定结果.按公式(2)求得供试药剂对病原菌孢子囊中游动孢子释放抑制率,并根据机率值分析法求毒力回归方程和抑制中浓度EC50值.游动孢子释放抵制率(%)=对照组的释放率-处理组的释放率对照组的释放率100%(2) 1.2.3 5种供试药剂对辣椒疫霉病的盆栽防效试验 将普力克、阿米西达、银法利、双炔酰菌胺和安博5种杀菌剂用蒸馏水稀释1000倍,分别配制成722.0,250.0,687.5,250.0,500.0m g L-1的药液.当盆栽辣椒长至5~8片叶时,分别取每种供试药液5mL在距离辣椒植株1c m处灌根,24h后将5mL配好的孢子囊悬浮液(1010倍显微镜下每第6期宋天有等:5种新型化学杀菌剂对辣椒疫霉病菌的毒力与药效677视野50个孢子囊)在距离辣椒植株2c m处灌根,每处理4株,重复3次,10d后调查结果,分别按照公式(3)和公式(4)计算病情指数和防治效果.病害分级标准[11]如下:0级:健康无症;1级:心叶变软至萎蔫;2级:2~3片叶子萎蔫,叶片沿叶柄基部下垂;3级:4~5片叶子萎蔫,下垂,茎尖萎蔫,变褐;4级:6~7片叶子萎蔫,下垂,茎尖至茎中上部萎蔫,变褐;5级:整株枯死或植株变褐倒伏.病情指数=(病级株数代表数值)株数总和发病最严重的代表数值100%(3)防治效果(%)=对照区病情指数-防治区病情指数对照区病情指数100%(4) 1.3 数据处理利用SPSS软件中ANOVA方法对试验数据进行方差分析,并用Duncan#s新复极差法比较数据之间的差异显著性.采用机率值分析法求取直线回归方程,并求抑制中浓度EC50值.2 结果与分析2.1 5种供试药剂对辣椒疫霉病菌菌丝生长的抑制作用由表1可知,供试的5种药剂对辣椒疫霉病菌菌丝生长均有较强的抑制作用,其中双炔酰菌胺的抑制作用最强,其EC50值仅为0.06m g L-1;其次是银法利,其EC50值为1.41m g L-1;其余3种杀菌剂的抑制作用强弱顺序为:普力克>安博>阿米西达,其EC50值分别为89.76,124.64和246.84 m g L-1.在显微镜下观察发现,双炔酰菌胺可导致辣椒疫霉病菌的菌丝生长发生畸变,菌丝变短,且产生较多分支.表1 5种供试药剂对辣椒疫霉菌丝生长抑制作用T ab l e1 Inh i b ition of tested fung i c i d es on myceli um growth of Phy toph thora capsici供试药剂Fung i ci d es毒力回归方程Tox i cit y regress i on equati on相关系数rEC50(95%置信限)/(m g L-1)EC50(95%FL)普力克Propa m ocarb HC l Y=3.6600+0.6861X0.968089.76(25.48~316.22)阿米西达Azoxystrob i n Y=2.1946+1.1726X0.9794246.84(109.89~554.44)银法利Propa m ocarb HC l+Fluop i coli de Y=4.8334+1.1183X0.99351.41(0.421~4.75)双炔酰菌胺M and i p ropa m i d Y=7.8912+2.3899X0.99210.06(0.01~0.67)安博Th ira m Y=1.5182+1.6614X0.9883124.64(62.89~247.01)2.2 5种供试药剂对辣椒疫霉病菌孢子囊中游动孢子释放的抑制作用从表2结果可以看出,在5种供试杀菌剂中,银法利对辣椒疫霉病菌孢子囊中游动孢子释放的抑制作用最强,其EC50值为11.73mg L-1;双炔酰菌胺的抑制作用次之,其EC50值为30.78m g L-1;其余3种杀菌剂抑制作用强弱顺序依次为:安博>普力克>阿米西达,其EC50值分别为108.12, 230.91和455.81m g L-1.除普力克外,其余4种供试药剂对辣椒疫霉病菌孢子囊中游动孢子释放的抑制中浓度均高于对菌丝生长的抑制中浓度.表2 5种供试药剂对辣椒疫霉菌游动孢子释放的抑制作用Tab le2 I nh ibiti on of te sted fungicides on spore re leasi n g of Phytophthora capsici供试药剂Fung i ci d es毒力回归方程Tox i cit y regress i on equati on相关系数rEC50(95%置信限)/(m g L-1)EC50(95%FL)普力克Propa m ocarb HC l Y=1.7405+1.3791X0.9811230.91(88.10~605.24)阿米西达A z oxystrob i n Y=0.0774+1.8515X0.9646455.81(229.84~903.94)银法利Propa m ocarb HC l+Fluop i coli de Y=4.1567+0.7886X0.966611.73(3.26~42.27)双炔酰菌胺M and i p ropa m i d Y=3.0535+1.3079X0.993230.78(14.21~66.67)安博Th ira m Y=-1.6006+3.2452X0.9532108.12(78.83~148.31)2.3 5种供试药剂对辣椒疫霉病的盆栽防效由表3可以看出,在盆栽试验中,稀释1000倍液的5种杀菌剂对辣椒疫霉病具有不同程度的防治效果,其中687.5m g L-1银法利悬浮剂对辣椒疫霉病的盆栽防效最好,平均防效为76.92%,显著高于其余4种供试药剂;其次为25%双炔酰菌胺悬浮剂和50%安博可湿性粉剂,平均防效均为69.23%;25%阿米西达悬浮剂的防效较差,平均防效为53.85%;72.2%普力克悬浮剂的防效最差,与其他4个处理差异达显著水平.678河 南 农 业 大 学 学 报第44卷表3 5种供试药剂对辣椒疫霉病的盆栽防效Table3 Con trol effects of tested fungicides on Phy t oph t hora cap sic i on p otted p lan ts test供试药剂Fung i ci d es 质量浓度/(m g L-1)Con cen tration treat m en t s病情指数D i sease i ndex防治效果/%C on trol effect普力克Propa m ocarb HC l722.056.2530.77d阿米西达A z oxystrob i n250.037.5053.85c银法利Propa m ocarb HC l+Fluop i coli de687.518.7576.92a双炔酰菌胺M and i p ropa m i d250.025.0069.23b安博Th ira m500.025.0069.23bCK∃81.25∃注:表中数据为3次重复之平均值;同列数据后标不同字母表示经Duncan#s新复极差测验差异显著(P<0.05).Note:Data are given as m eans f ro m3dupli cati on s.Dat a w i th i n a col umn f ollo w ed by d ifferent1etters sho w si gn ificant d ifference at P<0.05by Dun can#s m u l ti p l e range test.3 结论与讨论本试验通过对辣椒疫霉病菌菌丝生长和孢子囊释放孢子的室内毒力测定和盆栽试验发现,在5种供试的化学杀菌剂中,质量分数25%双炔酰菌胺悬浮剂和687.5g L-1银法利悬浮剂不仅对辣椒疫霉病菌的菌丝生长抑制活性强烈,对孢子囊中游动孢子释放也均有较强的抑制活性,且具有很好的盆栽防效.两者均是在中国登记上市的安全、低毒农药品种,因此,值得在生产上大面积推广应用.双炔酰菌胺和银法利为新型的化学杀菌剂,具有独特的作用机制和杀菌特性.双炔酰菌胺可抑制磷脂的生物合成,对萌发阶段的孢子具有较高的抑制活性,并可抑制菌丝生长和孢子形成;其可通过叶片被迅速吸收,并停留在叶表蜡质层中,对叶片起保护作用[6].研究表明,双炔酰菌胺对番茄晚疫病和黄瓜霜霉病具有很好的防治效果,对其它蔬菜作物的卵菌纲病害,如大白菜霜霉病、莴苣霜霉病、辣椒疫霉病等也有很好的防治效果[6].银法利是氟吡菌胺与霜霉威盐酸盐的复配制剂,为酰胺类化合物卵菌类杀菌剂.其单剂之一的氟吡菌胺杀菌机理与目前所有已知的卵菌类杀菌剂不同,主要作用于细胞膜和细胞间的特异性蛋白而表现杀菌活性,具有独特的%薄层穿透力&,可加强药剂的横向传导性及纵向输送力,对病原菌的各主要形态均有很好的抑制活性;另一单剂霜霉威是一种氨基甲酸酯类杀菌剂,其作用机理是抑制病菌细胞膜成分的磷脂和脂肪酸的生化合成,抑制菌丝生长、孢子囊形成和孢子萌发,与目前常用药剂如甲霜灵、杀毒矾等有不同作用机制,无交互抗性[12].如刘春艳等[12]研究表明,68.75%银法利800倍液对番茄晚疫病和黄瓜霜霉病的田间防效可达86.91%和92.76%.参考文献:[1] 崔晓岚,孟庆晓,毕 扬,等.辣椒疫霉对烯酰吗啉的敏感性基线及室内抗药突变体研究[J].植物病理学报,2009,39(6):630-637.[2] 高立强.辣椒疫霉病的发生与防治[J].西北园艺,2002(4):46-47.[3] 韩文革,李海燕,刘惕若,等.甲霜灵(M eta laxy1)种衣剂防治辣椒苗期疫病效果的初步研究[J].黑龙江农业科学,2004(5):17-l8,36.[4] 邵见阳,马辉刚,苏 玲.辣椒疫霉病菌对内吸性杀菌剂抗药性的研究[J].江西农业学报,1998,10(4):46-50.[5] 王文桥,刘国荣.卵菌对内吸杀菌剂的抗药性及对策[J].植物病理学报,1996,26(4):294-296. 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