UltiMate3000高效液相色谱仪
(完整word版)ThermoULtimate3000高效液相色谱确认方案
UL timate3000高效液相色谱仪确认方案编号：VP-AI-2017001*生物科技股份有限公司确认方案审批表确认小组人员名单：目录1.概述 (4)2.确认目的 (4)3.确认范围 (4)4.确认小组人员及职责 (4)5.验证相关文件依据 (5)6.验证项目和时间安排 (5)7. 安装确认 (5)8 运行确认 (8)9.性能确认 (14)10. 确认过程中的偏差及处理措施 (14)11．再确认周期 (14)12.确认结果评定与结论 (14)13.附件 (14)1.概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
2.确认目的：按照GMP的要求，对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定仪器是否有具有良好的检测性能，能否满足日常分析测试工作的需要。
3.确认范围：本确认方案适用于本公司的UL timate3000高效液相色谱仪的确认。
4.确认小组人员及职责4.1 确认小组4.2 验证小组职责组长：负责验证管理的日常工作和验证的协调，验证方案和报告的批准。
组员：QC，化验室。
起草验证方案和验证报告，并参与实施验证。
组员：QC主管，化验室。
审核验证方案和报告，协调与本次验证相关的化验室工作。
组员：QA主管，质量保证部。
负责审核验证方案和验证报告，如果验证中出现偏差，应对偏差进行调查。
5.验证相关文件依据6.验证项目和时间安排计划于年月日 - 月日对UL timate3000高效液相色谱仪进行确认，内容严格按照本确认方案，检查UL timate3000高效液相色谱仪其安装确认、运行确认、性能确认达到规定的标准要求。
Ultimate3000型高效液相色谱仪自主操作培训教材
Ultimate 3000型高效液相色谱仪自主操作培训教材福州大学测试中心2018年9月第一部分Ultimate 3000型高效液相色谱原理和仪器配置一、液相色谱原理简介1、色谱法起源色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
2、液相色谱法的分离原理溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相(stationary phase)时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子交换、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
英文为High Performance Liquid Chromatography，简称为HPLC。
3、HPLC分离模式包括反相模式 (RP-LC)；正相模式 (NP-LC)；离子对色谱 (IPC)；离子交换色谱 (IEC)；体积排阻色谱 (GPC/GFC)；亲和色谱（AC）等。
其中，反相和正相模式又属于液液分配色谱。
•流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。
正相与反相的出峰顺序相反；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。
C-18柱（常用反相柱）。
4、HPLC与经典液相色谱方法以及气相色谱（GC）方法的比较4.1 HPLC与经典液相色谱方法比较高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。
高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。
可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。
Ultimate 3000型高效液相色谱仪的培训
Ultimate 3000型高效液相色谱仪的培训一、仪器原理：流动相被高压泵打入系统，样品经进样器进入流动相，然后被流动相载入色谱柱。
由于样品各组分在两相中具有不同的分配系数，因此在两相中作相对运动，经过吸附、解吸的分配过程，依次从色谱柱内流出通过检测器，转换成电信号。
以峰面积形式表现出来。
正相色谱：采用极性固定相和相对非极性流动相。
一般可用于分离极性化合物。
正相色谱住一般采用极性强的硅胶等填料，洗脱顺序由弱到强。
一般流动相用正己烷、氯仿、二氯甲烷等。
反相色谱：采用相对非极性固定相和极性流动相。
一般可用于分离非极性化合物或弱极性化合物。
反相色谱柱的填料一般以硅胶为基质，表面健合极性相对弱的官能团的健合相。
如C18、C8、C4等。
流动相一般用极性强的水、缓冲液、甲醇、乙腈等。
洗脱顺序由强到弱。
二、硬件介绍：1、试剂架2、泵3、自动进样器4、柱温箱5、紫外检测器三、其他：1、流动相、清洗液存量和配置时间。
流动相过滤原则：含有有机相的要用有机系滤膜，不能用水系滤膜。
因为有机溶剂可以溶解水系滤膜，被溶解的滤膜容易损坏密封圈和柱塞杆。
（如果不小心用了水系的滤膜，过滤了有机相，把滤头堵了，可把滤头泡在有机相里超声清洗）流动相超声脱气：超声10到20分钟。
超声机水位尽量高于流动相水位，效果更好。
时间不宜过长。
2、溶剂滤头：溶剂充足，压力低于下限报警，或者脱气机前管道频繁出现大量气泡。
超声处理后无效更换新的滤片。
3、不明原因时间飘移，可能滤头堵了，纯水超声处理（安捷伦的玻璃滤头不能超声）。
4、滤片冒白沫或长绿毛就要用3%或5%稀硝酸超声10min，再换纯水超声。
四、LPG-3400泵内部构造（低压四元泵，最高耐压620bar）：（第二、三页）流动相从储液瓶出来，经过真空脱气机，到时间比例阀，经过泵头，到毛细管混合器，再到静态混合器，最后进入自动进样器，然后把样品环里的样品送入色谱柱，再到检测器。
泵工作原理：（第四页）注意：●绝对不允许泵在无液体的情况下运行，会损坏柱塞杆或柱塞密封垫。
UltiMate3000系列液相色谱技术指标
自动进样器技术指标
规格如有变更，恕不另行通知。
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泵技术指标
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快速泵技术指标
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荧光检测器技术指标
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库伦电化学检测器技术指标
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ECD-3000RS电化学检测器技术指标
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示差折光检测器技术指标
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Corona Veo(RS) 电雾式检测器技术指标
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蒸发光散射检测器技术指标
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UltiMate3000系列液相色谱技术指标
UltiMate3000系列液相⾊谱技术指标
⾃动进样器技术指标
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泵技术指标
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快速泵技术指标
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荧光检测器技术指标
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库伦电化学检测器技术指标
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ECD-3000RS电化学检测器技术指标
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⽰差折光检测器技术指标
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赛默飞世尔科技（中国）有限公司Corona Veo(RS) 电雾式检测器技术指标
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蒸发光散射检测器技术指标
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赛默飞戴安液相优点说明
赛默飞戴安品牌高效液相色谱仪优点说明1.兼容超快速分析：色谱泵是整个系统的承载者。
戴安ultimate3000液相色谱的泵耐受压力在全流速范围内（0.001-10.0mL/min）620bar，比目前市面上主流的色谱仪器耐受压力提高50%，。
620bar 的耐受压力使得小粒径色谱柱的使用成为可能，兼容90%以上的超快速分离，从而大大提供实验室的分析效率。
2.最准的流量准度戴安的色谱泵专利的smartflow技术，保证不使用压力阻尼器即可满足日常分析的系统脉冲要求，从而避免了使用压力阻尼器带来的系统延迟体积随反压变化而引起的保留时间不稳，同时该技术可以完成对流动相的连续、自动智能型压缩补偿，无需用户输入溶剂种类，即可根据流动相种类、脱气情况和环境温度完成压缩补偿，反映到指标上就是我们的色谱流量准度为0.1%，比竞争对手公司的指标好了10倍。
3.“免维护”式操作独立密封圈清洗流路，维护周期可编程。
密封圈清洗、漏液检测的合二为一设计。
4.智能型自动进样器自动防沉淀振摇、在线稀释、在线衍生。
自动位移功能，保证进样准确。
专利的Splitloop 进样技术，保证市面上同类仪器最低的交叉污染。
5.扩展性佳的柱温箱摒弃传统加热块方法，采用循环气流方式温控快速升温、降温。
高达5~80℃的控温范围，稳定性为±0.1℃。
具有预加热功能和色谱柱信息记录功能。
6.Viper管路专利技术戴安专利的viper技术可以使管路接口处达到0死体积，从而让系统流路的死体积大大降低，达到样品分析延迟时间降低，更准确的定性和保证更好的重现性。
7.双灯源设计和电子身份识别紫外检测器使用双灯提供光源，使光源涵盖的波长更宽的同时并保证在全波长范围内的最佳灵敏度，同时双灯设计使得寿命更长，维护平率更低；光源和流通池均具有电子芯片，系统可自动识别序列号、使用时间等信息，符合GLP规范。
8.强大的变色龙软件8.1真正的数据库色谱软件兼容Microsoft Access、Oracle、Microsoft SQL Server多种数据库平台。
UItiMate3000高效液相色谱仪标准操作规程
UItiMate 3000高效液相色谱仪标准操作规程起草人日期年月日审核人日期年月日日期年月日日期年月日质量部审核日期年月日批准人日期年月日颁发部门质量部执行日期年月日分发部门检测中心〔3〕替换的文件名及编号修订的原因、目的：1.目的建立UItiMate 3000型高效液相色谱仪操作规程，使高效液相色谱仪的操作标准化、规范化。
2.适用范围适用于本公司UItiMate 3000型高效液相色谱仪的操作。
3.责任仪器使用人员负责本文件的执行，检测中心主任负责监督和指导。
4.依据UItiMate 3000型高效液相色谱仪使用说明书。
5.内容5.1.型号及仪器组成5.1.1.型号：UItiMate 3000型5.1.2.仪器组成：UItiMate 3000四元泵+UV检测器+自动进样器+柱温箱5.2.操作程序5.2.1.使用前的准备工作5.2.1.1.接入稳压电源将稳压电源的输入端插头插在墙上的插孔上。
5.2.1.2.打开电源开关按下稳压电源前面板的“ON”键，大约一分钟后，稳压电源将正常供电。
5.2.1.3.更换泵头清洗瓶中溶液：必须采用非循环模式进行冲洗，将一只1000mL容量的清洗瓶置于U3000系统上方的托盘中，清洗液为10%左右的甲醇或异丙醇的水溶液，所使用的试剂必须为色谱纯，用超纯水或二次蒸馏水来配置。
5.2.2.打开仪器电源开关打开仪器各部份后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。
各部分自检成功后，方可正常进行以下各步操作。
（备注：各电源开关没有先后顺序；）；5.2.2.1.打开电脑:打开电脑，等待约1～2分钟，变色龙服务监视器将会自动启动。
然后双击桌面的变色图标，打开软件。
5.2.3.四元泵：5.2.3.1.确定好各通道的流动相后，先向上掀开泵头前面板，然后拧松快速清洗阀（反时针两圈左右）。
然后在软件中按此“冲洗”键，泵将以3.0 mL/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止（备注：需要依次对各通道单独进行排气，不能同时进行）5.2.3.2.排气结束后，将清洗阀拧紧，调节好各通道的流动相比例及流速，启动“马达”按钮即可；5.2.4.自动进样器的清洗：自动进样器的清洗分三个部分，一般在每天或每次使用自动进样器前需先进行如下三个步骤排除自动进样器的气泡。
高效液相色谱戴安U-3000操作技巧介绍材料
U-3000操作手册1．操作条件：电压：220V, 温度：10-40℃，湿度：10%-85%。
2．注意事项：密封圈清洗溶液为1：9甲醇/水，每次使用前更换，样品必须经过0.45μm 的滤膜过滤，流动相也必须经过0.45μm过滤（色谱纯除外）并脱气。
3．若流动相含有无机盐或酸，每天仪器使用完后，要用5%：95%的甲醇/水清洗系统至少30min后再用100%甲醇冲30min关机。
开机则用5%：95%的甲醇/水冲10min，换流动相。
先开仪器电源，再开电脑，待电脑右下角的服务器监测器由黄色变为灰色，双击面上的图标，进入工作站，如图为工作站根目录，点击快捷栏内的“default panel tabset”出现以下界面，点开“”My Computer”前加号：选择“Chromeleon Server”,“OK”，出现下面的控制界面，分别在“Pump”下设置比例和流速如果流路内有气泡，拧松泵混合器上的“Purge”阀，点上图内的“Purge off”前的按钮，快速排气泡，待气泡排完后，上图内的“Purge off”前的按钮停止，拧紧“Purge”阀，在“Col．Comp”下设置柱温，在“VWD”下开氘灯，设置波长。
系统开始平衡，点快捷栏内的兰色圆点“”采集基线，待基线稳定后，点“”停止采集基线，准备测样。
新建文件夹（第一次使用必须）点快捷栏内“”，回到根目录，右键点击根目录，，点“New Directory”，输入文件夹名称，“OK”。
建立程序文件点“File”下“New”，“OK”，“下一步”，设置温度，“下一步”，设置流速和各通道比例，“下一步”，设置取样和推样速度，“下一步”，设置采集时间，选择采集信号，“下一步”，“下一步”，“下一步”，设置波长，“下一步”，“完成”，如需要，可更改一些参数后，点右键，选“Check”，“确定”，点快捷栏内的“”，选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。
新建方法文件点“File”下“New”，点“File”下“Save As”选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。
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UltiMate3000高效液相色谱仪
配
置
说
明
南京途威仪器设备有限公司
免费热线：4008-585-600
优谱佳UHPLC+高效液相色谱系统
• UHPLC+设计理念贯穿纳升液相、常规液相和快速液相整个范围
• 基础型和标准分析型系统的最大压力创立了高效液相的新标准—620bar • 双三元液相系统—为常规分析设计，增加产率并拓展色谱分析技术应用范围• 变色龙色谱软件—智能化、专业化、人性化
• Viper和nanoViper接头系统—可手动安装拆卸，适应超快速液相范围并保证零死体积。
RSLCnano系统
• 提供20 nL/min到50 μL/min的纳升/毛细管/微升流速范围
• 柱最高耐压可达800bar
• 连续直流输送
• 上样泵可提供从10 μL/min到2.5 mL/min的流速
RSLC系统
• 二元或四元系统都可用于超快速液相和常规液相的应用
• 更广的压力—流速范围兼容超快速、超高分离度的分析应用
• 系统最高耐压1000bar
• 可提供高效双三元RSLC系统
标准分析型系统
• 为常规液相应用提供最佳性能和可靠性
• 620bar耐压和100Hz的数据采集频率均兼容超快速液相应用
• 可根据不同应用灵活配置
• 最高流速可达10mL/min，满足全方位应用需求
基础型系统
• 满足常规应用需求且更加耐用
• 分析结果一致可靠
• 提供620bar耐压和高达100Hz数据采集频率，全面兼容UHPLC应用
• 自动进样器与柱温箱整合，可提供样品和色谱柱温控功能
检测器选项
• 提供多种光学检测器选择－紫外/可见，荧光和示差折光检测器
• 创新型Corona通用电喷雾式检测器
• 高灵敏度库仑电化学检测器
• 支持AB、布鲁克和赛默飞质谱检测器
软件与备件
• 变色龙软件—直观的仪器控制，先进的数据处理
• D-Library数据库提供应用搜索支持
• Viper与nanoViper手旋接头系统，真正零死体积，简化安装拆卸过程
• 色谱柱加工制造—包括整体柱技术和先进的多基质键合技术
UltiMate® 3000 RSLCnano 系统
目前，RSLCnano系统研发的重点是提高样品通量。
UltiMate® 3000 RSLCnano系统采用稳定、连续的直流输送方式，可实现样品的不间断分析。
UltiMate® 3000 RSLCnano系统流速-压力范围广，即使在纳升级别针对最复杂的酶解肽段样品时，仍可保证最高的分离度和最快的分析要求。
是唯一可以同时满足分离速度、分离能力和灵敏度高要求的系统。
涵盖纳升、毛细管和微流水平的分离能力以及强大的双梯度泵为使用者提供了良好的灵活性。
UltiMate® 3000RSLCnano支持更高水平工作流程，如自动化离线二维分离（该技术采用了双泵、双切换阀以及自动进样器的微量组分收集功能）。
UltiMate® 3000 RSLC系统
RSLC系统将HPLC推向了高性能、高灵活性的新境界。
精密的设备、先进的数据处理和优质化学试剂可从容应对所有色谱性能挑战。
UltiMate® 3000 RSLC可选择二元、四元以及双三元泵，提供了行业内最大程度的灵活性，可用于常规液相和超快速液相等大量应用。
UltiMate® 3000双三元RSLC系统可为我们带来超高的样品处理量和先进便捷的样品自动化处理功能。
多维LC具有极佳的选择性和分离度，超快速液相和常规液相应用之间的自动切换更增加了仪器的使用频率。
配合变色龙软件可为您的实验检测带来无限可能！
标准分析型系统
HPLC是色谱实验室中最基础的工具。
但根据应用的不同，对系统功能的要求会有很大差别。
UltiMate® 3000标准分析型系统专门设计用来满足当前应用需要和未来挑战。
可支持所有常规应用并兼容超快速的功能，让超快速液相不再遥不可及。
双三元在线SPE技术分析生物体液样品
UltiMate® 3000双三元系统灵活性强，可明显增加样品处理量，并带来先进的自动化处理技术：
• 并联和串联LC带来2倍的样品处理量
• 可实现两个应用间的自动切换，简捷方便
• 在线SPE-LC可实现样品的在线富集和预分离
• 完全兼容超快速液相性能，可减少运行时间并获得更好的分离效果
基础自动型系统
基础自动型液相系统是进行常规应用的最佳选择：其可靠性高，灵活性强，同时也完全兼容超快速液相。
ACC-3000自动进样器柱温箱整合部件是该系统的核心部分，将进样器与功能强大的柱温箱融为一体。
• 完全满足常规检测需求，更经济
• 620bar的耐压能力和高达100Hz的数据采集率保证了超快速液相兼容性
• 关键连接点减少从而减少了易损部件
• 可选择多种检测器
自动进样器与柱温箱单元
UltiMate® 3000自动进样器为进样的可靠性、准确度和精密度提供全方位保障，从纳升到毫升级别均可达到极低的交叉污染率。
馏分收集器包含简单样品收集和高端收集－再进样过程（例如自动化离线二维液相应用）。
光学检测器
UltiMate® 3000光学检测器包含紫外－可见吸收、荧光、示差和蒸发光散射检测器，满足不同分析的检测需要。
高数据采集频率、多波长检测和3D紫外光谱可很好的兼容超快速液相，更好的满足分析和分离要求。
电喷雾式检测器
Corona电喷雾式检测器（CAD）是一款通用型检测器，可检测
任何非挥发性和部分半挥发性物质，并能兼容梯度。
C o r o n a Ul t r a 提供高达100Hz的数据采集率，能完全兼容UHPLC的应用。
Corona CAD是常规HPLC 系统的理想选择。
库仑电化学检测器
Coulochem® III电化学检测器用于可氧化还原物质的分析。
它的安培、库伦、脉冲安培检测和循环伏安法都有着出众的检测效果。
随着高灵敏度6011双电极电化学检测器同时推出的高效库伦分析池，可与超快速液相全面兼容。
质谱检测器
MSQ Plus是目前市面上最小型、最灵敏的四极杆质谱检测器，可使用变色龙软件支持。
另外，戴安公司液相色谱也可连接其它质谱，通过DCMSLINK™插件，可由质谱软件X c a l i b u r（ T h e r mo F i s h e r Scientific）,Analyst®（AB Sciex）和HyStar™（Bruker Daltonics）来进行仪器控制。
首创的通用型接头系统
使用Viper和nanoViper接头系统可避免使用常规接头带来的种种问题，完美的连接保证最佳的色谱性能。
• 零死体积，耐高压，手动安装拆卸。
可用于纳升/毛细管，微流和分析型液相系统
• 兼容各种类型和品牌的阀及色谱柱
• 同样兼容不锈钢流路和石英毛细管
所有RSLC和双三元系统都配有创新的Viper连接系统，让您拥有最佳，最便捷的液相系统。
NanoViper 接头是RSLCnano系统和Acclaim PepMapRSLC纳升色谱柱的标准附件。
功能强大的色谱管理软件
我公司变色龙色谱管理软件拥有众多智能化功能，可简化操作，轻松满足操作者需求。
精心设计的人性化用户界面可引导使用者高效地进行序列方法的建立以及数据处理。
使用革命性的eWorkflow功能，只需几步选择操作就能得到完整的样品序列与分析方案。
变色龙软件强大的数据分析功能保证了整个数据显示、解析和报告过程的高效准确。
从样品到最终检测结果—变色龙7软件将此过程大大简化，提高了工作效率。
D-Library数据库
D-Library是一个令人振奋的应用数据库，它采用web2.0技术，使用更方便。
在用户界面上，可根据不同标准搜索，例如分析物、基质、市场、柱子类型、仪器类型或运行时间等，用户可快速找到液相和离子应用方法。
内置的RSS feed可以及时告知用户最新应用方法。
一旦找到合适的应用D-Library就会给用户提供相应的变色龙软件方法文件。