PEG沉淀法-病毒提纯方法
分离提纯.
二、病毒的分离
田间采集的自然感染病毒的标本，常混杂几种病毒或病毒的不同株系。 福建漳州水仙:
水仙花叶病毒(Narcissus mosaic virus, NMV)、 水仙黄条病毒(Narcissus yellow stripe virus, NYSV) 水仙潜隐病毒(Narcissus latent virus, NLV)
密度梯度离心只用一个离心转速，而差速离心用两个甚 至更多的转速。
密度梯度离心的物质是密度有一定差异的，而差速离心 是适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分
差速离心法：
根据不同大小和密度的粒体在沉降速度上不同，将分离的 样品交替进行低速和高速（或超速）离心。
可以处理大量样品，可作为病毒精提纯的第一阶段。
浓度高的病毒，在暗室中用光束从离心管顶部往下照射，可 在离心管中看到乳白色的病毒带，直接用注射针筒吸出病毒 带，再经超速离心获得精提纯的病毒。
浓度低的病毒，无法形成肉眼可见的病毒带，就需要分部收 集各密度蔗糖溶液，再经紫外检测，确定含病毒部分，再经 超速离心获得精提纯的病毒。
病毒分离提纯的几个实例
温度对病毒浓度的影响：
高产株系：不同株系在植株积累的病毒浓度往往不同。同一病毒不同 株系在繁殖寄主上的浓度有时相差甚远，同时也要注意所用株系的侵染 力和稳定性。
病叶的采收：病毒接种植物后，随着复制其浓度逐渐增高，约在几天 或几周后达到最高峰，多数病毒其浓度迅速下降，必须及时采收病叶以 便获得较高的浓度。
第四章 植物病毒分离与提纯
基本原理 病毒的分离 病毒的毒源繁殖 病毒的提纯 病毒的分离提纯的实例
一、病毒分离提纯的基本原理
1.分离原理
生物分离. 依据病毒的分离寄主、传毒介体或病毒物理特性等的差异， 将一种病毒或株系同其他病毒或株系分离开来 .
peg沉淀噬菌体步骤
peg沉淀噬菌体步骤
PEG沉淀噬菌体是一种常用的方法，用于从细菌培养物中富集噬菌体。
以下是PEG沉淀噬菌体的一般步骤：
收集细菌培养物：从含有噬菌体的细菌培养物中收集样品。
可以通过离心将细菌细胞沉淀下来，收集上清液。
添加PEG溶液：将聚乙二醇（PEG）溶液加入收集到的上清液中。
PEG的添加可以促使噬菌体沉淀。
混合和静置：轻轻混合PEG溶液和上清液，然后让混合物静置一段时间（通常是20-30分钟），以便噬菌体沉淀。
离心：将混合物进行离心，以沉淀噬菌体。
离心的条件可以根据具体实验要求进行调整，通常在高速离心下进行。
去除上清液：将上清液小心地倒掉，留下噬菌体沉淀。
悬浮噬菌体：使用适当的缓冲液（如PBS）将噬菌体沉淀悬浮起来。
可以通过轻轻振荡或轻轻旋转管子来帮助噬菌体的悬浮。
储存或进一步处理：根据需要，可以将悬浮的噬菌体进行储存或进行进一步的处理，如测定噬菌体滴度或进行基因组提取等。
需要注意的是，具体的PEG沉淀噬菌体步骤可能会因实验目的、噬菌体类型和实验室惯例而有所不同。
因此，在进行实验之前，建议参考相关的实验方法或咨询实验室专业人士以获取准确的步骤和条件。
PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒
PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒张文清;马文煜;骆文静;姜绍谆;胡艳冰;侯悦;张进;于碧云【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2000(21)1【摘要】目的建立一种简便、有效的从细胞培养物中纯化PV1病毒的方法用于水病毒消毒实验. 方法 PV 1 Henan株在Hep-2细胞中增殖后用聚乙二醇(PEG)6000沉淀结合差速离心的方法纯化病毒. RT-PCR和透射电镜(TEM)鉴定提纯病毒的形态学和分子生物学特性. 结果 pH值7.5时终浓度70 g.L-1的PEG 6000沉淀病毒的感染性回收率(PFU计数)为79.2%,提纯系数(PF)为106,再经差速离心(16 000 g 30 min,100 000 g 4.5 h)浓缩病毒的感染性回性率和提纯系数分别为29.0%和168. RT-PCR和TEM最终鉴定提纯物为PV 1 Henan株. 结论 PEG 6000结合差速离心的方法较之蔗糖密度梯度区带离心方法易于操作,且比单独PEG 沉淀有更高的纯化系数,是一种简便、有效的方法.【总页数】3页(P38-40)【作者】张文清;马文煜;骆文静;姜绍谆;胡艳冰;侯悦;张进;于碧云【作者单位】第四军医大学,预防医学系军队卫生学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,预防医学系军队卫生学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,预防医学系军队卫生学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,预防医学系军队卫生学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,预防医学系军队卫生学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R123.6【相关文献】1.水中脊髓灰质炎病毒感染性,抗原性及核酸指标检测方法的？… [J], 张文清;姜绍谆2.共沉淀法沉淀废水中微量钴以及测试方法的研究和应用 [J], 朱珠;沈恒冠;林丽美;陈姝3.血清HDL—ch和LDL—ch的聚乙二醇6000（PEG6000）沉淀分离... [J], 徐元仁;崔书章4.水中脊髓灰质炎病毒浓集方法研究的新进展 [J], 丁昌慧;邵荣标;刁连东5.一种脊髓灰质炎病毒浓缩的新方法 [J], 杜丹萍;王虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
PEG收集沉淀病毒的方法
PEG收集沉淀病毒的方法
1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；
2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％
PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。
3、4过夜或放置一段时间；
4、8000r/min离心30分钟，收集病毒沉淀；
5、将病毒沉淀加入适量的PBS中，4℃过夜；
6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。
还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。
取100mL毒液，10000r/min，10min，取上清。
上清中加入10Gpeg-20000和2gNaCl4℃
溶解过夜，20000r/min，离心30min，弃上清，留沉淀。
沉淀用3ml无菌PBS重悬，
转入透析袋中，2L预冷PBS透析液4℃透析，每4h换一次液，到第三次过夜透析。
将透析袋放入平皿中，覆盖蔗糖浓缩至1.5ml，500μl1支分装至EP管中。
-80℃备
用。
将细胞反复冻融3次后，则获得病毒液。
取500mL病毒液，于4℃2000rpm离心10min，取上清；在超净工作台中，向上清中加入PEG6000和10gNaCl，边加边轻轻搅拌混匀，于4℃溶解过夜（注意要溶解完全，防止有未溶解的PEG）；于4℃8500g离心30min，弃上清，留取沉淀；沉淀用1.5mL无菌的PBS重悬，转入透析袋中，置于2L的预冷的PBS中进行透析，每4h更换一次透析液，至第3次时透析过夜；用蔗糖进行浓缩，500μL/每支分装到EP管中，-80℃保存；采用紫外分光光度计和BCA进行蛋白定量，定量结果为20.5mg/mL。
病毒纯化浓缩方法
病毒纯化浓缩方法之巴公井开创作方法一超速离心沉淀法1 仪器超速离心机(BECKMAN OPTIMAL-80XP) 50000~80000rpm相对离心力最大可达510000×g；高速冷冻离心机(BECKMAN AVANTIJ-26XP)20000~25000rpm 最大离心力为89000×g；超速离心管(Beckman 344058)，Ultra-clear SW28离心管2 方法步调（1）转染后44-48小时，收集上清液到50ml离心管内，并加入20ml Production培养基以便第二轮病毒的收集。
将收集的上清液4℃，4000g离心10分钟，去除细胞碎片，然后0.45 μm滤膜过滤到40ml超速离心管中。
（2）取6个Beckman超速离心管，70%乙醇清洗后在生物平安柜中风干并紫外消毒30min。
（3）每个Ultra-clear SW28管加入30ml 预先处理过滤过的病毒上清。
（4）取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液(PBS配制)。
将移液管一直拔出到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml，形成一个蔗糖垫。
同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。
另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。
（5）务必确定离心管没有裂缝且用PBS调整各管重量使两两平衡。
（6）4℃离心，25000rpm （82700g）2 h。
（7）离心完毕后小心取出超速离心管，小心弃去上清液，留下管底沉淀。
管底可见少量的半透明或白色沉淀。
将超速离心管倒置在吸水纸上晾干约10min，并用Tip头吸去管壁上多余的液体。
（8）每管中加入100ul不含钙和镁的冷PBS洗下沉淀。
（9）将SW28超速离心管拔出到50ml锥底离心管中，盖上盖子。
（10）在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
（11）4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
（12）用200μl移液器轻柔吹打使沉淀重悬。
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本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==peg8000浓缩病毒原理篇一：慢病毒浓缩方法一超速离心沉淀法1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。
将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。
同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。
另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
7. 小心将管子从转头中取出。
倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。
吸掉剩余的液滴。
在管底应当有可见的沉淀。
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。
10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。
避免产生泡沫。
将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。
用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。
方法二 PEG-8000浓缩法1. 5X PEG8000+NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200mlMilli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃。
PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒
PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒文章来源： 2006-7-18 18:54:14PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒第四军医大学学报2000年第21卷第1期张文清马文煜骆文静姜绍谆胡艳冰侯悦张进于碧云摘要：目的建立一种简便、有效的从细胞培养物中纯化PV1病毒的方法用于水病毒消毒实验.方法PV 1 Henan株在Hep-2细胞中增殖后用聚乙二醇(PEG)6000沉淀结合差速离心的方法纯化病毒. rT-PCR和透射电镜(TEM)鉴定提纯病毒的形态学和分子生物学特性.结果pH值7.5时终浓度70 g·L-1的PEG6000沉淀病毒的感染性回收率(PFU 计数)为79.2%，提纯系数(PF)为106，再经差速离心(16000 g 30 min，100 000 g 4.5 h)浓缩病毒的感染性回性率和提纯系数分别为29.0%和168. rT-PCR和TEM最终鉴定提纯物为PV 1 Henan株.结论PEG6000结合差速离心的方法较之蔗糖密度梯度区带离心方法易于操作，且比单独PEG沉淀有更高的纯化系数，是一种简便、有效的方法.关键词：脊髓灰质炎病毒；病毒分离与纯化；聚乙二醇；离心法0 引言影响水中病毒消毒效果的因素很多，除了病毒的生物学特性、消毒剂的性质与剂量以及环境温度外,还有水中病毒聚集性、水质酸碱度、离子强度以及病毒周围有机物等［1］.包绕在病毒周围的有机物，尤其是蛋白类，不仅为病毒提供物理屏障，使消毒剂不易穿透至作用靶点，而且有机物中许多化学基团如巯基还可与氧化性消毒剂产生反应，导致消毒剂有效浓度大为降低. emetson等［2］报告，臭氧灭活Hep-2. 细胞中的PV和Coxs病毒需要的消毒剂浓时积(CT值)较灭活游离于细胞外的这两种病毒高约150倍,因此在人工制备病毒污染水样时要经过反复冻融感染细胞、超声粉碎、低速离心沉淀细胞碎片以及其它特殊沉淀病毒蛋白、离心提纯病毒的过程.我们采用反复冻融、超声粉碎、低速离心以去除细胞碎片,并进一步用PEG6000沉淀病毒蛋白、差速离心提纯PV1病毒.1 材料和方法1.1 材料电子显微镜，JEM-2000EX型，日本电子公司；高速冷冻离心机GL-20A型，湘西仪器仪表厂；超速离心机，Centrikont-2080型，瑞士Kontron公司.病毒株与细胞株［3］，PEG 6000，日本进口，天津天秦公司分装.1.2 方法细胞培养与病毒感染按我们先前的方法［3］.接种病毒3～5 d出现严重CPE（＞）后反复冻融细胞5～6次，再经超声粉碎至细胞完全裂解.病毒原液（S）在4℃环境经4000 r·min-1离心30 min后弃沉淀(P1)，留上清(S1)冻存备用.PEG沉淀：在S1中缓慢滴加400 g·L-1PEG 6000溶液至PEG终浓度为70 g·L-1，并随时搅拌、调整pH 至7.5.4℃过夜后，8000 r·min-1离心30 min后弃上清(S2)，留沉淀(P2).差速离心：用0.01 mol·L-1pH 7.4的PBS混悬P2后4℃12 000 r·min-1(16 000g)离心30 min后弃沉淀(P3)，上清(S3)再经PBS混悬，4℃38 000 r·min-1 (100 000 g)超速离心4.5h弃上清(S4)，沉淀(P4)混悬后冰浴条件下14 mm振幅超声粉碎2 min，加双抗处理后用灭菌双蒸去离子水稀释，-75℃冻存.蛋白质浓度测定：按Lowry方法.病毒感染性测定：采用改良的蚀斑试验［3］. RT-PCR：详见我们先前的实验［4］.TEM鉴定：30 mL·L-1戊二醛和10 g·L-1饿酸双固定P4中病毒，按常规电镜制作程序用Epon812, dDSA, DMP-30混合液制备包埋块，超薄切片后用醋酸铀和枸橡酸铝染色，透射电镜下观察照相.2 结果2.1 细胞培养物处理效果细胞冻融、粉碎后低速离心可去除绝大部分细胞碎片(P1)，由Tab1可见，离心降低25%的蛋白，但病毒的感染性仅下降15.8%.表1 从细胞培养物中提纯PV1病毒结果tab 1 The results of purification of PV 1 from cell culturesSample(No) V/mLProtein Virus infectivity g·L-1 %Recovery PFU/L %Recovery PFU/g PF aS1600 6.24 100.00 2.80×108100.0 0.49×108 1.00S11584 4.73 75.00 2.38×10884.2 0.50×108 1.01P1Discarded - - - - - -S2Discarded 2.80 - 5.54×106- - -P240b 1.71 0.69 8.87×10979.2 5.19×109 106.00S338 0.87 0.33 5.02×10942.6 5.77×109 118.00P3Discarded - - - - - -S4Discarded - - 2.37×107- - -P424b0.66 0.16 5.42×10929.0 8.21×109 168.00a: PF (Purify coefficient)=(S1～S4or P1～P4PFU/mg protein)÷(SPFU/mg protein); b:Volume of pellets suspended with PBS buffer.s0: Primary virus solution. S1,S2,S3,S4:supernate,after first,second,third,and fourth centrifugation,respectively.P1,P2,P3,P4: precipitation,afterfirst,second,third,and fourthcentrifugation,respectively.2.2 PEG 6000沉淀病毒蛋白作用PEG处理后的沉淀物P2能保留79.2%的病毒感染性，同时去除99.1%非病毒蛋白，从而使提纯系数达到106 (Tab 1).2.3 差速离心提纯沉淀病毒的作用经一次高速和一次超速离心后可除去P2中约50%的小分子杂蛋白，而感染性回收率分别为42.6%和29.0%，提纯系数分别为116和168(Tab 1).2.4 RT-PCR及TEM鉴定结果提取物(P4)电镜检查可见密集分布的直径约30 nm、呈对称颗粒球形的病毒(Fig 1)，与文献一致，而提纯前细胞内质网中见有散在的病毒颗粒(Fig2). RT-PCR扩增后电泳可见一个214 bp特异片断，与阳性对照相同.图1 纯化后沉淀物PV1透射电镜鉴定结果fig 1 TEM photograph of poliovirus type 1 henan strain after purification ×20000图2 纯化前感染细胞透射电镜检查结果fig 2 TEM photograph of poliovirus type 1 henan strain in infected Hep-2 cells×120003 讨论常用的PV提纯方法是丁醇抽提、酶处理及两次超速离心后，再经速率区带密度梯度离心［5］，有较高的感染性回收率，但费时费力，不易操作，难以用于经常性提纯使用.而PEG沉淀法适于从含有大量宿主蛋白和磷脂的大体积(通常为数千毫克升)原始材料中选择性沉淀病毒，具有手段温和、非病毒蛋白残留量少等优点，但单独使用则感染性回收率低.本实验通过冻融、粉碎、低速离心等预处理去除细胞碎片而降低沉淀过程中非病毒蛋白的影响，结果显示约25%的细胞蛋白被沉淀去除.在此基础上，用PEG 6000沉淀法结合差速离心，可去除99%以上的非病毒蛋白，感染性回收率为29.0%，提纯系数(PF)168，与单独PEG沉淀(PF为66.4)［6］相比提高了近一倍；与蔗糖密度梯度离心相比，虽然感染性回收不及前者(47.0%)［7］，但相对而言，方法简便易行，适合于水中PV消毒实验人工病毒污染水样的经常性制备.作者简介：张文清(1965-)，男(汉族)，安徽省怀宁县人.讲师，博士. 现工作在第一军医大学军队卫生学教研室，广州510525. Tel.(020)7705370-48522 Email.defaultuser@张文清（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)马文煜（第四军医大学：基础部微生物学教研室，陕西西安710033)骆文静（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)姜绍谆（第四军医大学：基础部微生物学教研室，陕西西安710033)胡艳冰（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)侯悦（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)张进（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)于碧云（第四军医大学：基础部微生物学教研室，陕西西安710033）参考文献［1］韩友.消毒剂灭活病毒影响因素的研究进展［J］.中国消毒学杂志，1993；10(3):168-171.［2］Emerson MA， Sproul OJ, Buck CE. Ozone inactivation of cell-associated virus ［J］. Appl Environ Microbiol， 1982；43(2):603-610.［3］张文清，姜绍谆，马文煜et al.水中脊髓灰质炎病毒细胞感染模型中病毒株与细胞株的筛选［J］.第四军医大学学报，1998；19(6):643-645.［4］张文清，姜绍谆，马文煜et al.水中脊髓灰质炎病毒感染性、抗原性及核酸指标检测方法的评价研究［J］.第四军医大学学报，1998；19(5):498-500.［5］戴华生. 新实验病毒学［M］. 北京:中国学术出版社，1983:595-596.［6］黄志尚，黄祥瑞，杨佩英et al. Sindbis 病毒的浓缩提纯［J］.中华微生物学和免疫学杂志，1981；1(2):101-103.［7］马文煜，于碧云，姜绍谆et al.从感染鼠脑浓缩提纯流行性乙型脑炎病毒的研究［J］.第四军医大学学报，1984；5(4):251-254.。
peg沉淀免疫球蛋白原理
peg沉淀免疫球蛋白原理
PEG沉淀是一种可以用于纯化免疫球蛋白的方法。
PEG是聚乙二
醇的缩写，它可以通过沉淀的方式将免疫球蛋白从混合物中分离出来。
PEG分子的作用是引起免疫球蛋白分子之间的交互作用，从而形成沉淀团。
这些沉淀团随后可以被离心分离出来并通过洗涤和再溶解后获得
纯化的免疫球蛋白剂量。
PEG沉淀的原理是基于三种作用机制：1）体积排斥效应；2）疏
水作用；和3）电荷中性化。
PEG可以和免疫球蛋白分子之间形成疏水区，引起球蛋白分子之间的体积排斥效应，从而导致球蛋白分子形成
复合体。
同时，PEG分子也会中和免疫球蛋白的电荷，从而进一步促成沉淀反应。
在实践中，PEG沉淀技术的优点之一是简单易行且具有成本效益。
与其他纯化技术相比，减少蛋白质损失的同时同时可以高效纯化免疫
球蛋白。
PEG沉淀技术已经被广泛应用于生物制药和医学领域，包括从人血清、小鼠清蛋白和细胞培养液中纯化特定的免疫球蛋白种类。
总的来说，PEG沉淀技术是一种可靠有效的纯化免疫球蛋白的方法，可以帮助实现高效且低成本的纯化目的。
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1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v).3. Stir at 4℃for 2 hours.4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( ., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).沉淀法-病毒提纯方法主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。
1.中性盐沉淀法：病毒一般在45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。
在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。
2.聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉淀的主要是分子量为2 000～6000的PEG。
将PEG配成50%左右的溶液，或直接将固体PEG加于病毒悬液中，使其达到所需浓度，通常在4℃搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。
Tanncock(1985年) 成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。
3.有机溶剂沉淀法：甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。
4.等电点沉淀法：病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。
多数病毒的等电点在～之间，因此在pH3～6范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。
应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。
5.皂土法：Girin(1989年)应用皂土在酸性条件下(pH4～吸附轮状病毒SA-11，再在碱性条件下（），又使其洗脱下来，从而达到纯化目的。
6.鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于50nm的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。
当向这种沉淀物加入1mol/LNaCl时，病毒又重新释放到悬液中，而鱼精蛋白仍然沉淀。
直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。
因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50nm的异种蛋白质。
聚乙二醇HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n＞4)( Polyethylene Glycol 简写为PEG)，它的亲水性强，溶于水和许多有机溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备中，用的较多的是分子量为6000～20000的PEG。
PEG 的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关，同时还受离子强度、溶液pH 和温度等因素的影响。
在一定的pH 值下，盐浓度越高，所需PEG 的浓度越低，溶液的pH 越接近目的物的等电点，沉淀所需PEG 的浓度越低。
在一定范围内，高分子量和高浓度的PEG 沉淀的效率高。
以上这些现象的理论解释还都仅仅是假设，未得到充分的证实，其解释主要有：①认为沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。
②由于聚合物有较强的亲水性，使生物大分子脱水而发生沉淀。
③聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形成沉淀析出。
④通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。
有机聚合物沉淀的优点是：①操作条件温和，不易引起生物大分子变性；②沉淀效能高，使用很少量的PEG 即可以沉淀相当多的生物大分子；③沉淀后有机聚合物容易去除。
水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（PEG）及硫酸葡聚糖。
水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制尚不清楚，大致有如下解释：①聚合物与蛋白质形成共沉物；①聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；①聚合物与蛋白质形成复合物。
此法受许多因素影响，主要是pH、离子强度、蛋白质浓度和PEG的分子量等。
分子量为2000～6000的PEG皆适宜于做蛋白沉淀用。
如若使用得当，效果甚为满意。
一般认为，PEG浓度在3％～4％时沉淀免疫复合物，6％～7％可沉淀IgM，8％～12％可沉淀IgG，12％～15％可沉淀其他球蛋白，25％可沉淀白蛋白。
最突出的应用是用3％～4％的PEG沉淀免疫复合物，未结合的抗原和抗体留在溶液中。
按此原理设计了快速测定法和循环免疫复合物测定法从网上搜索到得关于PEG沉淀提纯病毒的方法，先汇总至此贴，希望大家支持本版1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。
如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml 样品。
)；3、4℃过夜或放置一段时间；4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀；5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜；6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。
还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。
PEG沉淀法提纯病毒1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。
如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml 样品。
)；3、4℃过夜或放置一段时间；4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀；5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜；6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。
还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。
Concentrating virus (PEG6000)--------------------------------------------------------------------------------1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v).3. Stir at 40Cfor 2 hours.4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( ., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).PEG-it慢病毒浓缩试剂价格：￥说明：欢迎询价详谈货号：LV810A-1PEG-it慢病毒浓缩试剂原理PEG是高分子聚合物，具有高亲水性，在溶液中会吸收大量水分，减少病毒之间的距离，使病毒与病毒能够很容易的聚合在一起，病毒的相对浓度提高，达到沉淀浓缩的目的。
PEG-it中还含有特定的（SBI专属的）缓冲液，它能够保持病毒的活性。
少量残留的PEG-it还会提高感染效率，使病毒更稳定。
图1使用简便快捷只需将5倍的PEG-it溶液与包含病毒颗粒的细胞培养基混合离心30分钟，即可得到10-100倍的病毒浓缩液特点快捷：全程只需30min高效：能使病毒颗粒浓缩10-100倍安全：对所有靶细胞，包括胚胎干细胞是无毒的使用方便：无需使用特别的仪器，避免了昂贵的超高速离心机的使用，只需普通离心机，低速离心即可无残留：没有细胞残片的残留，避免对细胞的毒性和免疫原性纯化病毒用终浓度10%PEG处理后8000g离心，溶解于PBS。
这样的方法对吗PEG沉淀的原理是什么啊是这样的，纯化病毒和噬菌体都可以，原理就是PEG8000是一种高度的网状聚合物，很粘稠，可以把病毒沉淀下来。
超速离心法-病毒提纯方法录入时间:2009-6-26 9:30:33 来源：青岛海博病毒粒子经过初步浓缩之后，要进一步纯化，通常采用超速离心法，它是分离提纯不同大小的病毒的有效方法之一。
在应用超速离心法沉淀病毒时，必须了解所用离心机的离心力。
离心机由于转头的回转产生了强大的离心力，这种离心力是随转头的大小和离心管至转轴中心的距离而变化的。
高速和超速离心机的离心条件，有的以每分钟速度(r/min)表示，有的则以离心力——重力加速度g(980cm/S2)为单位来表示。
离心沉淀时，沉降]速度与离心力有关。
当运转角速度为ω，运转半径为R时，则：[JZ]离心力g=ω2Rav，ω=(2πr/min)/60，[JZ]g=[SX(]4πr/min2[]3]600×980[SX)]×Rav[HT5”SS][JZ]图13-2〓角转头的横剖面图[JZ]表明从旋转中心到离心管顶部、中部及底部的距离。
[HT5SS]上式中，Rav为离心管中心至转轴中心的平均距离(如图13-2)。
从上式可以作]出r/min、R与g三者关系的贯线图(如图13-3)。
三者中如知其二，就可推算另一数值。
如转速超过7万，或R为英寸时，可参阅图13-4。
[HT5”SS][JZ]图13-3〓推算转头离心力的贯线图[JZ]图13-4〓推算转头离心力的贯线图由此图可以获得与半径相关的相对离心力的值。
将尺放在图左侧表示离心头中的离心管距转轴中心的距离(即旋转半径的标尺)上，]然后使之与预选转速(即图右侧的离心速度标尺)成一直线，在图中央的标尺上即可读出相对]离心力之值。
图中点线表示测量一个相对离心力的例子。
[HT5SS]离心机转速在4000r/min左右的称为低速(普通)离心机；转速至25]000r/min左右的]称为高速]离心机；转速25]000r/min以上的称为超速离心机。
高速和超速离心机装有冷冻装置和抽]真空]装置，以保持离心腔中恒定的低温，并减少转头运转时空气的摩擦力。