土壤酶活性对2,4-D丁酯的动态响应

ＤＵＨｕ—ｉｇ，Ｉａ，ＯｉｇｙｉｌＪｎＨｕＧＵＰｎ－ｉ
（．ｌｇｒｄｃｎｅ，ｈｎｉｇｃｌｒｎｅｉ，ａｕ３８１Ｃｉ；１ｏｅｅｆｔａｉｃＳａｘＡｒｕｕａＵｉｒｔＴｉ００，ｈａＣｌｏＡｓｎＳｅｓｉｔｌｖｓｙｇ０ｎ
表明，与对照相比，低浓度２４Ｄ对脲酶活性有较强的激活作用，，一且随着处理时间的延长以及２４一Ｄ浓度，
的增大酶活性增强，最高激活率达１１高浓度２４Ｄ对脲酶活性表现为先抑制后激活。不同浓度２４Ｄ５％；，一，一对碱性磷酸酶活性呈先激活后抑制又激活的趋势。２４Ｄ浓度为０２Ｌ时，当，一．ｍ儿５对蛋白酶活性具有激活作
关键词：，一小麦；壤酶活性２４Ｄ；土
中图分类号：１４２Ｓ５．文献标识码：Ａ文章编号：０２２８（０００ — ０９０１０ — ４１２１）６０２ — ４
Ｄｙｎｍｉｓｏｎｅｏ４ａｃＲｅｐｓｆ２．一ＤｔｔｒｔｏｌＥｎｙｅＡｃｉｉｉｓＢｕｙｌＥｓｅｏＳｉｚｍｔｖｔｅ山西农业科学２１，８６：３００３（）２ — ２
ｄｉ０９９．ｓ．０２２８．１．．ｏ：．６￣ｉｎ１０－４１０００１１３ｓ２６０
ＪｕｎｌｆＳａｘＡｒｕｔｒｌｃｅｃｓｏｒａｏｈｎｉｇｉｌａＳｉｅｃｕｎ
２ｇｒｏｙｏｅｅＳａｘＡｒｕｕｌｎｅｉ，ａｕ０００，ｈａ．ｏｎｍｌｇ，ｈｎｉｇｃｌｒｉｒｔＴｉ３８１Ｃｉ）ＡｏＣｌｉｔａＵｖｓｙｇｎ
ＡｂｔａｔＤｙａｃｅｅｔｏ，－ｔｏｌｕｅｓ，ａｋｌｅｈｓｈｔｓｎｒｔａｅａｔｉｅｅｅｓｄｅｙｐｔｓｒｃ：ｎｍｉｆｃｓｆ２４ＤｏｓｉｒａｅｌａｉｐｏｐａａｅａｄｐｏｅｓｃｉｔｓｗｒｔｉｄｂｏｎｖｉｕｅｐｒｍｅｔｕｄｒｈｏｄｔｎｆｕｔａｉｎＴｅｒｓｈｈｗｄｔａ，ｏａｅｔｅｃｎｒｌｌｗｏｃｎｒｔｎ２４Ｄｈｄｘｅｉｎｓｎｅｅｃｎｉｏｓｏｌｖｔ．ｈｅｕｓｓｏｅｈｔｃｍｐｒｄｗｉｔｏｔ，ｏｃｎｅｔａｉ，－ａｔｉｃｉｏｈｈｏｏｓｏｇａｔａｉｎｔｈｒａｅａｔｉ，ａｄｐｏｅｓｎｔｈｉｎｎｒａｅ２４Ｄｃｎｅｔａｉｎｈｒａｅａｔｉｔｎｃｉｔｏｔｅｕｅｓｃｉｔｎｒｃｓｉｇｗｉｔｅｔｒｖｏｖｙｈｍｅａｄｉｃｅｓｄ，－ｏｃｎｒｔ，ｔｅｕｅｓｃｉｔｏｖｙｉｃｅｓｄａｄｔｅｍａｉｍｃｉａｉｎｒｔｒａｈｎ１．Ｈｉｈｃｎｅｔａｉｎ２４Ｄｉｈｂｔｄｆｓｎｃｉａｅａｅｈｎｒａｅｎｈｘｍｕａｔｔａｅｅｃｉｇ１ｖｏ５％ｇｏｃｎｒｔ，－ｎｉｉｒｔｄａｔｔｄｌｔｒｔｔｅｏｅｉａｖｏｕｅｓｃｉｉｎａｉｕ，一ｏｃｎｒｔｎｒｔｃｉａｅ，ｈｎｉｈｂｔｄａｄａｔａｅｈｌａｉｅｐｏｐａａｅａｔｉ．ｒａｅａｔｔａｄｖｒｏｓ２４Ｄｃｎｅｔｉｓｆｔｔｄｔｅｉｉ，ｎｃｉｔｄｔｔｅａｋｌｈｓｈｔｓｃｉｔｖｙａｏｉｓａｖｎｅｖｏｎｖｙＷｈｎ２４Ｄｏｃｎｒｔｎｗｓ０２／，ｈｒｔａｅａｔｉｓａｔａｅ，ｉｓｃａｇｒｎｈｗｅｒｔｉｈｂｔｎａｄｅ，－ｃｎｅｔｉａ．５ｍｌｔｅｐｏｅｓｃｉｔｗａｃｉｔｄｗｈｌｉｈｎｅｔｄｓｏｄｆｓｎｉｉｏａｏＬｖｙｖｅｔｅｉｉｎａｔａｉｎｌｔｒｗｔｎｒａｉｇｏ，－ｃｎｅｔｔｎＳ，ｈｆｃｆ２４Ｄｏｌｎｙｃｉｉｅｓｒｌｔｄｎｔｎｙｗｉｃｉｔａｅｉｉｃｅｓｎｆ４Ｄｏｃｎｒｉ．ｏｔｅｅｅｔｏ，－ｔｓｉｅｚｍｅａｔｔｓｗａｅａｅｏｌｔｖｏｈ２ａｏｏｖｉｏｈ２４ＤｏｃｎｒｔｎａｄｔｒｃｓｉｇｂｔｓｔｅｔｐｆｏｌｎｙｓＩｓｏｄｔａｈｏｌｎｙｃｉｉｏｌｅ，－ｃｎｅｔｉｎｉｐｏｅｓ，ｕｏｗｉｔｙｅｏｉｅｚｍｅ．ｔｈｗｅｈｔｅｓｉｅｚｍｅａｔｔｃｕｄｂａｏｍｅｎｌａｈｈｓｔｖｙｕｅｓａｆｃｉｅｉｄｃｔｒｆｅｂｃｄｓｐｌｔｎｖｒａｉｔｔｏｌｕｌｙｔｅｔｉｘｅｔｓｄａｎｅｅｔｉａｏｒｉｉｅｏｌｉａｉｌｙｏｓｉｑａｉｃｒｎｅｔｎ．ｖｎｏｈｕｏｂｉｔｏａＫｅｒｓ２，－Ｗｈａ；ｏｌｎｙｃｉｉｙｗｏｄ：４Ｄ；ｅｔＳｉｅｚｍｅａｔｔｖｙ
用；当２４Ｄ浓度增大时，蛋白酶活性表现为先抑制后激活。可见，，一，一２４Ｄ对土壤酶活性的影响，不仅与２４Ｄ的浓度和处理时间有关，，一还与土壤酶的种类有关，映出土壤酶活性在一定程度上可作为除草剂污反染土壤环境质量变异的有效指标。
土壤酶活性对２４Ｄ丁酯的动态响应，一
杜慧玲，冀华，平毅郭
（．１山西农业大学文理学院，山西太谷０００；．３８１２山西农业大学农学院，山西太谷０００）３８１
摘要：过盆栽试验，究了种植条件下２４Ｄ对土壤脲酶、性磷酸酶和蛋白酶活性的动态影响。结果通研，一碱

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烯草酮·氯氰菊酯和2-4D丁酯对中华摇蚊幼虫的急性毒性研究

烯草酮氯氰菊酯和2-4D丁酯对中华摇蚊幼虫的急性毒性研究王镇江;刘曼红;方润东;王克;王亮【摘要】[目的]评价农药对水生生物的毒理效应.[方法]采用静水法研究烯草酮、氯氰菊酯和2-4D丁酯对中华摇蚊(Chironomus sinicus)幼虫的急性毒性效应.分别设定不同浓度梯度进行急性暴露试验,于48 h时测定摇蚊幼虫组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)的活性.[结果]在氯氰菊酯和2-4D丁酯处理摇蚊幼虫12 h后,不同浓度间的存活率无显著差异,在48 h时随着农药浓度的增加,存活率下降.烯草酮、氯氰菊酯和2-4D丁酯对中华摇蚊幼虫48 h的LC50分别为1.842、0.150和1.999 mg/L,氯氰菊酯对中华摇蚊幼虫的毒性最高,其次为烯草酮,2-4D丁酯毒性最低.烯草酮对中华摇蚊幼虫组织SOD含量有明显影响,表现出剂量-效应关系;2-4D丁酯对组织SOD含量有明显影响,但未表现出剂量-效应关系;而氯氰菊酯对组织SOD 含量则无明显影响.[结论]该研究为水体污染监测和水环境中农药的残留提供理论依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)017【总页数】3页(P5472-5474)【关键词】中华摇蚊;急性毒性;烯草酮;氯氰菊酯;2-4D丁酯;超氧化物歧化酶【作者】王镇江;刘曼红;方润东;王克;王亮【作者单位】东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】S188;X835在我国农药的平均用量为2.34 kg/hm2［1］，而杀虫剂占农药使用量的70%以上［2］。

但随着农药大量、不合理的使用，农药残留已成为水环境的重要污染源之一［3］。

土壤酶活性

土壤酶活性土壤酶活性是土壤生物学中的一个重要指标，它能反映出土壤的活性水平，是衡量土壤健康状况的重要指标。

土壤酶活性能够反映土壤中所发生的生物化学反应和肥力变化，同时也能反映出土壤肥力状态，是研究土壤有机质变化的重要手段。

因此，土壤酶活性的研究分析对于科学研究土壤肥力、土壤可持续利用和环境保护具有重要的意义。

一、土壤酶活性的研究土壤酶活性的测定包括反映土壤有机质变化的酶组，如淀粉酶、半胱氨酸酶、脲酶、脱氢酶、过氧化物酶、还原酶等，这些酶在土壤中具有不同的结构和活动水平，可以反映出环境因子对其影响的程度。

土壤酶活性的度量能够探究土壤有机质和肥力的变化情况，从而提供科学的指导意见，研究土壤肥力的变化及其对作物生长发育的影响。

常用的测定方法有实验室沉淀法、放射性标记法、水解法、色谱法和试管反应法等。

二、土壤酶活性的调控土壤酶活性的变化受多种环境因子的影响，包括：土壤中的微生物类型和数量、土壤中温度、湿度、pH值等，还受到土壤有机质及其组分、种植植物种类等的影响。

土壤肥力调控方面，可以通过施用有机肥、化肥和微量元素肥料，以及改良土壤成分，减少农药和植物保护剂，控制土壤有机质组分，来优化土壤酶活性，从而提高农作物的产量和质量。

三、土壤酶活性的应用土壤酶活性的研究不仅有助于科学地解决土壤的有机质变化问题，而且在应用方面还有着重要意义。

目前，土壤酶活性的研究已经被广泛用于农业、园艺、植物保护、土壤调查和生态修复等领域。

首先，土壤酶活性的研究可以用于确定土壤质量及其可能的生物效应，从而为合理施肥、防治土壤污染、改良土壤环境及园林植物生长发育提供科学参考依据。

其次，对土壤酶活性的研究可以帮助我们更好地理解土壤的有机质积累和释放，促进土壤的优化、可持续利用和生态修复，为可持续农业发展提供有力支持。

四、结论土壤酶活性是衡量土壤健康状况的重要指标，它能反映出土壤的活性水平，是研究土壤有机质变化的重要手段。

研究土壤酶活性对于科学研究土壤肥力、土壤可持续利用和环境保护具有重要的意义。

气相色谱法测定沃柑中2,4-滴的方法改进

气相色谱法测定沃柑中2,4-滴的方法改进李琬婧，覃弘毅*（南宁市食品药品检验所，广西南宁 530007）摘要：采用改进的气相色谱法测定沃柑中的2,4-滴。

试样经过乙腈提取，经过正丁醇加浓硫酸衍生化，弗罗里夕固相萃取柱净化浓缩后测定。

结果表明，2,4-滴在0.010～0.500 mg·L-1线性关系良好，相关系数（r）为0.999，定量限（10倍S/N）为0.001 mg·kg-1，回收率为82.7%～90.7%，RSD为1.6%~4.7%。

关键词：沃柑；气相色谱法；2,4-滴；农药残留Improvement of Gas Chromatography for Determination of2,4-D in Orah MandarinLI Wanjing, QIN Hongyi*(Nanning Institute for Food and Drug Control, Nanning 530007, China) Abstract: The pesticide residue of 2,4-D in Orah Mandarin was determined by improved gas chromatography. The sample was extracted with acetonitrile, derivatized with n-butanol and concentrated sulfuric acid, and cleaned up and concentrated on a Florisil cartrages solid phase extraction column for determination. The results showed that six compounds had the good linear relationship in the range of 0.010～0.500 mg·L-1. The correlation coeﬃcients (r) was 0.999, the limit of quantitation (10 S/N) was 0.001 mg·kg-1, the recovery and relative standard deviations was 82.7%～90.7% and 1.6%～4.7%.Keywords: orah mandarin; gas chromatography; 2,4-dichlorophenoxyacetic acid; pesticide residue2021年柑橘产季全球柑橘产量达到1.585亿t，我国柑橘产量居世界首位，达4 460万t，占全球总产量的28%；出口量91.8万t仅排名第5，表明我国柑橘主要用于国内消费[1]。

土壤酶活性测定

土壤与环境微生物研究法／李振高，骆永明，滕应编著．一北京：科学出版社，2008过氧化氢酶（398-399）脲酶（404-405）磷酸酶（412-413）关松荫/土壤酶及其研究法农业出版社 1986年七月第一版蔗糖酶274-276土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。

（二）试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，加蒸馏水90ml。

3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：取184g柠檬酸溶于300ml蒸馏水中，另取147.5g KOH 溶于蒸馏水，再将二种溶液合并，用1N NaOH将pH调节至6.7，用水稀释至1L。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A 液），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B液）,存于冰箱中。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将两种溶液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg 氮的标准液（100ppm）。

（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即为10ppm，吸取0、1、2、3、4、5、10、15、20 mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。

即为0、0.2ppm、0.4ppm、0.6ppm、0.8ppm、1ppm、2ppm、3ppm、4ppm的标准曲线。

将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。

烟草连作障碍及防治研究进展

安徽农学通报2023年12期经济作物作者简介王鹏（1995—），男，福建厦门人，硕士，从事烟草栽培研究工作。

收稿日期2023-02-07烟草连作障碍及防治研究进展王鹏（福建中烟工业有限责任公司，福建厦门361000）摘要烟草是忌连作作物，连作会严重影响烟叶的高质量发展和可持续生产。

本文从烟草连作障碍的危害、产生的机理和防治措施等角度，综述了国内外烟草连作障碍方面的最新研究成果，以期为烤烟的栽培和特色优质烟叶生产提供参考。

关键词烟草；连作障碍；化感自毒；微生物互作；养分失调；防治措施中图分类号S572文献标识码A文章编号1007-7731（2023）12-0024-04烟草是我国重要的经济作物，我国烟草农业逐步向规模化、集约化方向发展，连作成为大多数烟叶产区不可避免的选择[1]，但烟草是忌连作经济作物，随着种植年限的增加，烟叶的产质量和土壤质量会下降，土传病害会大大加重，严重影响烟叶的高质量和可持续生产[2]。

本文从烟草连作障碍的危害、产生的机理和防治措施等角度，综述国内外烟草连作障碍方面的最新研究成果，并对烟草连作障碍的防治研究提出展望，以期为烤烟的栽培和特色优质烟叶生产提供理论和实践参考。

1烟草连作障碍的危害1.1烟叶的产质量下降烟草长期连作会降低田间长势和农艺性状，进而显著影响烟叶的产质量，晋艳等[3]研究表明烟株连作4a 田间长势、产量、中上等烟比例、外观质量明显下降；长期连作会改变烟叶化学成分，蛋白质和烟碱含量会增加，总糖、还原糖和钾含量会减少，进而对感官评价产生负效应。

苏海燕等[4]研究表明连作对烤烟化学成份和中性致香物质有影响，烤后烟中的致香物质（新植二烯、类胡萝卜素类和苯丙氨酸类）会阶梯式下降，类西柏烷类和棕色化产物总体上呈现降低趋势。

1.2烟草土传病害加重烟草连作为病原体提供了适宜的生存场所，病原体可以在土壤中存活2~3a ，加重了土传病害的传播。

中国大部分植烟区主要的土传病害（青枯病、黑胫病和花叶病等）的发病率和连作年限呈正相关，烟草连作黑胫病的发病率为28%~99%，4年内种植两季发病率降为8%；烟草连作第2年青枯病的发病率由5%升到22%，严重影响优质烟叶的健康生产。

除草剂的主要类别及其特性-1

3）作物药害较轻时表观症状也很明显，但一般不影响产量。
4）喷药质量要求相对较高。必须保证杂草植株所有部位都接触到药剂才能将整株杂草杀死，杂草未接触到药剂的部位不受害。
5）茎叶处理剂施药浓度应尽可能低，以提高药剂在叶片内的扩散面积，提高除草效果，降低药害。
2、根据对不同类型杂草的活性分类
禾本科杂草除草剂阔叶杂草除草剂
5）茎叶处理剂施药浓度过高会降低除草效果。特别是激素类除草剂表现最为明显。
触杀性除草剂的特点
1）药效发挥速度快。药剂不经过传导直接发挥作用，吸收部位与作用部位在一起，所以需要时间短。
2）杀草不彻底，对多年生杂草及大龄杂草效果不好。多年生杂草及大龄杂草具有再生能力，处于休眠状态的芽由于顶芽被杀死而开始萌发，形成新的植株。
除草剂的传导
短距离传导：通过胞间连丝或扩散作用在非共质体内移动。长距离传导：通过木质部和韧皮部进行长距离传导。
叶吸收
新生叶
随
光合产
筛管
物
蒸腾导作管用
顶芽、幼叶、根尖
对多年生深根杂草有作用。药量过大会杀死筛管细胞，
破坏输导功能。
光合作用旺盛期施用，有利
于除草剂的输导。
根吸收
芳氧（基）苯氧基丙酸类杀草原理
大多数被植物叶片吸收，在共质体内传
导到根、芽的分生组织。个别品种如禾草灵除了被叶吸收外也能被根吸收，在植物体内进行有限的传导。
土壤处理剂的吸收
对除草剂的吸收能力因植物种类和除草剂品种而异，一般禾本科杂草的幼芽对除草剂较敏感。
与水一起被吸收，是被动的，属于扩散现象。吸收速度与除草剂的脂溶性成正相关，具极性的
除草剂进入根细胞的速度较慢，脂溶性的较快。

[doc]2，4-D除草剂降解菌的分离及其生物学特性的研究

2，4-D除草剂降解菌的分离及其生物学特性的研究农业环境科学2007,26(6):2183—2188JournalofAgro-EnvironmentScience2,4一D除草剂降解菌的分离及其生物学特性的研究卫亚红,张晓燕,曲东(西北农林科技大学资源环境学院,陕西杨凌712100)摘要:从陕西省关中地区的农田及菜园土壤中分离筛选出23株能够以2,4-D为惟一碳源的细菌.采用以2,4-D为惟一碳源的无机盐培养液,在30℃及180r?min.的恒温摇床中对不同菌株进行培养,通过测定培养12h后培养液中剩余的2,4-D浓度.计算不同菌株对2,4-D的表观降解率.结果表明,菌株SX09,SX13,SX15和SX21对2,4-D初始浓度为0.5g.L-一时的降解率分别达到40.93%,38.00%,35.47%和39.02%.降解特性试验表明,选择2,4-D浓度分别为0.14,0.50,1.40和3.00g?L一一条件下,4株细菌降解2,4-D的最适浓度为0.50g?L～.4株细菌利用2,4-D生长的最适温度为35℃.菌株SX09,SX13和SX21的最适生长pH值在7.0—8.5之间,而菌株SX15最适生长pH值为7.0.关键词:2,4一D:土壤污染:微生物降解中图分类号:X172文献标识码:A文章编号:1672—2043.(2007)06—2183—06 IsolationofBacteriaforDegradationofHerbicide2,4-DandTheirBiological CharacteristicsWEIY a—hong,ZHANGXiao-yan,QUDong (CollegeofResourcesandEnvironment,NorthwestA&FUniversity,Y angling712100,China)Abstract:Soilcontaminationisabigproblemaroundtheworld.Nowadaysthe farmandvegetablesoilsareseriouslycontaminatedby2,4一dichlorophenoxyaceticacid(2,4-D),whichisextensivelyusedinagriculture asherbicides.Thispaperfocusedontheenrichment.isolation anddegradationcharacteristicsof2,4-Ddegradationbacteria.2,4一Dusedasasolesourceofcarbonintheculturalmedium,23degradation bacteriawereisolatedandscreenedfromthefarmandvegetablesoilsamplesi nGuanzhongdistrict,Shaanxiprovince.Aftershakingat30oCandat180r.min～for12hontheinorganicsaltliquidmediuminwhich2,4-DWasusedasasolesour ceofcarbon,theapparentdegradingratesofthe4selectedstrainsSX09,SX13,SX15andSX21were40.93%,38.00 %,35.47%and39.02%respectively.Theoptimumconcen—trafionof2,4-Dforthe4bacteriaWas0.50g-L～.Basedonthetestinshakingfl asks.the4strainscangrowbestat35oC.TheoptimumpHforstrainsSX09,SX13andSX21Was7.0—8.5,andtheoptimumpHforstrainSX15Was7.0.Thisstudywillprovidetheascendantstrainsfor thebiodegradationof2,4-D.Keywords:2,4-dichlorophenoxyaceticacid;soilcontamination;microbiald egradation2,4一二氯苯氧乙酸(2,4一D)曾经是应用最广泛的农药之一,被用作除草剂和植物生长调节剂.据报道I11,0.5～1.0mg?L的2,4一D可用于植物组织培养中的基质成分;使用浓度为l～25mg?L时可防止果树落花落果,并能诱导无籽果实生长和起到果品保鲜等作用;在较高浓度(1000mg?L-1)下,2,4一D可作为除收稿日期:2007—03—29基金项目:西北农林科技大学优秀回国人员科研启动资助项目(08080104);西北农林科技大学大学生科技创新基金(2005)作者简介:卫亚红(1973—),女,讲师,主要从事环境微生物学方面的研究.E—mail:********************.an草剂杀死多种阔叶杂草.一些统计资料表明,我国每年的化学农药使用量大约为80～100多万t,在农药使用过程中大量的残留将进入农作物及土壤[31.导致土壤环境质量下降.对农产品质量安全造成潜在的威胁.由于农药导致的土壤面源污染给土壤污染防治工作带来了新的挑战,同时也促进了环境微生物修复技术的发展.自20世纪80年代以来,许多科学家尝试利用土壤微生物对污染物进行降解I4,51.并且通过生物技术方法对具有降解污染物潜能的微生物进行基因改造,以便提高对环境中污染物的降解能力.有机氯农药对大多数生物体而言是具有高毒性以至于难以被代谢的化学物质[61.方玲171分离到能降2184卫亚红等:2,4-D除草剂降解菌的分离及其生物学特性的研究2007年11月解”六六六”的芽孢杆菌属,无色杆菌属和假单胞菌属菌株.以及降解DDT的产碱杆菌属和无色杆菌属菌株.张国顺等【81从”六六六”的富集液中克隆到了13—2BHC脱氯基因.对有机氯杀菌剂和除草剂的降解研究表明.吉氏拟杆菌可降解五氯硝基苯;恶臭假单胞菌$25对2,4一D具有降解能力㈣.另外,和文祥等[11,121开展了农药与土壤酶关系的研究.通过室内模拟试验,研究了2,4一D对土壤酶活性的影响,为有机氯生物毒性和生物可利用性提供了新的证据.目前,针对我国西北地区特定生境下的2,4一D降解微生物的研究鲜见报道.为此.本研究拟从陕西省不同土壤样品中富集纯化能够在含较高浓度2,4一D的培养基中生长的细菌.通过比较不同菌株的降解率复筛出高效降解菌,测定其在不同2,4一D浓度,温度,pH条件下的生长情况.以期为2,4一D生物降解技术在西北地区污染土壤中的利用提供必要的理论依据.l材料与方法1.1供试土壤试验所用土壤采于2005年7～9月.21个土样分别采自陕西关中的杨凌,咸阳和西安等地农田和菜地采样时去除0—2cm表层,在2—15cm之间取样,鲜样用塑料袋密封,带回实验室置4℃冰箱冷藏保存.1.2培养基1.2.1无机盐基础培养液无机盐基础培养液组成包括MgSO4.7HO0.2g,CaC12?2H200.03g,FeSO4?7H2O0.01g,KH2PO40.4g, Na2HPO40.6g,MnSO4O.02g,NH4NO31.0g,蒸馏水1L. 调节pH为7.0.1.2.2富集培养液富集培养液包括3种.富集培养液I:在无机盐基础培养液中添加O.5g?L葡萄糖.富集培养液Ⅱ:在无机盐基础培养液中添加O.2g?L-葡萄糖和O.3g? L2,4一D.富集培养液Ⅲ:在无机盐基础培养液中添力ⅡO.5g?L一2,4一D.1.2.3牛肉膏蛋白胨培养基用作细菌的保存,活化.1.2.42,4一D无机盐培养基在无机盐基础培养液中加入琼脂粉18g,分别配制成2,4一D浓度为0,1.4和3.0g?L的培养基,用作筛选能够利用2,4一D的菌株.1.3菌株的富集纯化向分别盛有50mL富集培养液I.Ⅱ和Ⅲ的三角瓶中加入1g土样,各重复3次.在3O℃及180r?min的恒温摇床中培养72h.分别吸取5mL上清液转接至无机盐基础培养液中,继续驯化培养72h.反复3次转接培养.吸取0.1mL各富集培养液涂布于不同浓度的2,4一D无机盐培养基平板上,3O℃培养,挑取长势良好的菌落,平板划线纯化为单菌落,经反复划线纯化.不同单菌落保存至牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上.制备平板培养基时,2,4一D浓度为1.4和3.0g?L的培养基灭菌前用NaOH调pH至7.0.1.4菌株生长特性测定吸取经活化18h的菌液0.1mL接入装有牛肉膏蛋白胨培养液的三角瓶中,设3个重复,3OoC,180r? min振荡培养.不接种的牛肉膏蛋白胨培养液三角瓶作为CK.分别于培养0,1.5,3,4,6,8,10,12,14和24h后取出.在分光光度计上测定460nm处【131各菌株的光密度(OD)值.1.52,4一D标准曲线的建立培养基中2,4一D浓度的定量测定采用紫外分光光度法.根据王国惠㈣的报道,2,4一D在283nm具有特征吸收峰.因此,配制浓度为20mg?L的2,4一D溶液.用Uv1102型分光光度计扫描250～300nm波长范围的吸收值,绘制2,4一D吸收曲线,验证其特征吸收波长,为2,4一D浓度测定方法提供依据.分别用乙醇和无机盐基础培养液作溶剂,配制浓度为0,10.0,20.0,30.0,40.0和50.0mg?L的2,4一D标准溶液,在特征吸收波长下测定不同浓度标准溶液的吸光度(A),以2,4一D标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线.1.62,4一D降解率计算将富集纯化所得优势降解菌株活化培养18h后制成菌悬液,分别接种至100mL添加0.5g?L-2,4一D 的无机盐基础培养液中,各处理设3个重复,3O℃, 180r?min培养,分别在摇床恒温培养的0h和12h取样,3800r?min离心20min,取上清液,稀释1O倍,选择283am处测定其吸光度(A)值,无机盐基础培养液作为比色调零.根据标准曲线的拟合方程计算培养基中2,4一D浓度,通过降解率的比较,复筛出降解力较强的菌株.2,4一D降解率计算公式如下:降解率%:f(Oh时2,4一D浓度一12h时2,4一D浓度)/0h时2,4一D浓度1×1001.7菌株降解特性试验第26卷第6期农业环境科学1.7.1不同浓度2,4一D对降解率的影响于100mL无机盐基础培养液中分别加入0.14,0.50,1.40和3.00g?L的2,4一D,其余操作同1.6中2,4一D降解率计算.1.7.2不同温度对菌株生长的影响于100mL添加0.5g?L一2,4一D的无机盐基础培养液中接种1%活化18h的菌悬液,分别在25,30, 35,40和45℃下,180r?min振荡培养,每个温度设3个重复,培养12h测定460nm处的光密度(OD) 值.1.7.3不同pH对菌株生长的影响于100mL添加0.5g?L～2,4一D的无机盐基础培养液中接种1%活化18h的菌悬液,置于不同pH (3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0)下,每个pH值设3个重复,30oC,180r?min振荡培养12h,460nm处测光密度(OD)值.2结果与分析2.12,4一D除草剂检测标准曲线制定用uV1102型分光光度计扫描250～300nm波长范围的吸收值,绘制2,4一D吸收曲线.由2,4一D吸收曲线(图1)可确定2,4一D在283nm波长处有特征吸收峰,与王国惠IOl报道的吸收波长相同.在特征吸收波长283nm下测定不同浓度2,4一D标准溶液的吸光度(A),以2,4一D标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线.由于2,4一D在水中溶解度较低,通常选择乙醇作溶剂配制标准溶液.然而用乙醇制作的标准曲线与培养体系有一定的差异,所以需要用无机盐基础培养液进行校正.由图2可见,2,4一D在2种不同溶剂中的标准曲线的拟合方程均有较好的线性关系,溶液浓度在0～50.0mg?L之间的拟合方程分别为:y=O.00987x-0.00481和y=O.OO86+ ≤波长/nm图12,4-D吸收曲线Figure1Typicalabsorbaneecurveof2,4-D0.003,相关系数分别为r=0.9996(乙醇溶液)和0.9997(无机盐基础培养液).因此,计算培养基中2,4一D浓度时可采用无机盐基础培养液制作的标准曲线.0102O3O405O浓度ling?L-图22,4-D标准曲线Figure2Thestandardcurveof2,4-D2.22,4一D除草剂降解菌株的筛选选择不同碳源富集培养液是为了初筛到更多的对2,4一D有降解潜能的菌株,在富集培养液Ⅱ上生长的菌株只能称作2,4一D耐受菌株,不一定是以2, 4一D为惟一碳源的降解菌株.但是经过转接至无机盐基础培养液驯化培养以及经过以2,4一D为惟一碳源的无机盐培养基的纯化后,其上挑取的菌株可以判定为2,4一D降解菌.观察在30℃培养7d后的2,4一D 无机盐平板上的菌落发现,不添加2,4一D的平板上菌体生长速度明显较快,而2,4一D浓度为3.0g?L的培养基上菌体生长速度很慢.供试土样经富集筛选,共分离到23株能以2,4一D为惟一碳源的降解菌株,编号分别为SX01一SX23,初筛到的菌株均为细菌,菌落观察结合革兰氏染色初步归为以下4类:①无色半透明圆点,中心为致密白点,周围分泌无色透明黏液,G+ 球菌;②均匀白色小点,G一杆菌;③透明,粘稠,菌落边缘不规则,G杆菌;④无色透明半球状囱点,G+球菌.2.32:4一D除草剂降解茵生长特性为了确定进行后续复筛试验及降解特性试验时菌株的准确培养时间,故先进行生长特性试验.表1反映出各降解菌株生长特性各有差异,然而它们的延滞期,对数期,稳定期以及衰亡期的总体趋势是:在0～8h处于延滞期,8～12h为对数期,12～14h进入稳定期,14～24h为细菌衰亡期.选择23株菌的对数生长期中后期(12h)作为培养时间,进行菌株复筛试验及降解特性测试.2.42,4一D除草剂降解菌株复筛叭,髓刁l(2186卫亚红等:2,4一D除草剂降解菌的分离及其生物学特性的研究2007年11月根据标准曲线的拟合方程y=0.00862x+0.003计算样品中2,4一D浓度,代人2,4一D降解率公式,计算各处理的降解率,通过降解率的比较,可复筛出降解力较强的菌株.由表2可见,SX09菌株降解率最高.达40.93%,而SX03菌株降解率最低,仅为12.24%.结合各菌株在固体培养基上的生长情况.选取4株菌为高效降解菌进行其最适生长条件试验.4株菌编号分别为SX09,SX13,SX15和SX21,革兰氏染色后菌株形态见图3.4株菌均为G一杆菌,其中SX09菌株为链杆菌,SX13菌株为芽孢杆菌,SX15菌株为棒状杆菌,SX21为杆菌,两端平截.2.52,4一D除草剂降解菌的降解特性2.5.1不同浓度2,4一D对降解率的影响由表3可见,2,4一D浓度为1.40g?IJ_时复筛菌株的降解率明显降低.该4株菌降解2,4一D的最适浓度为0.50g?L～.2,4一D浓度为3.00g?L时.菌株SX09和SX13的降解率为0.显示2,4一D浓度过高会对菌体产生毒性作用.2.5.2不同温度对菌株生长的影响设定的5个温度下4株细菌的生长情况如图4所示.菌株在30c《=40c《=范围内生长良好,25c《=和45c《=培养时,菌株数量有所降低.温度过低菌体生长缓慢.过高易导致菌体死亡.由图4看出,4株细菌的最适培养温度为35cI=.2.5.3不同pH对菌株生长的影响由图5可知复筛菌株SX09,SX13和SX21的最适生长pH值在7.0—8.5之间.而菌株SX15最适生长pH值为7.0.pH值太高或太低均不利于菌株生长,这是由于一方面pH值过高或过低均会引起微生物表面电荷的改变.从而不利于细Morphologyofscreenedstrains(x1500) 有机化合物渗入细胞【41.3讨论农药本身的理化性质,微生物的可利用性及环境因子是影响其生物降解和污染修复的主要因素.农药表3菌株对不同浓度2,4-D的降解率(%)Table3Degradationratesofdifferentconcentrationsof2,4一Dby thescreenedstrains(%)图4不同温度下菌株生长情况Figure4Growthcharacterizationsofscreened strainsunderdifferenttemperatures图5不同pH对菌株生长的影响Figure5Growthcharacterizationsofscreened strainsunderdifferentpH组成中的化学键类型,分子极性,浓度,吸附性,生物毒性等I5】制约着农药的降解代谢过程,并且多数农药属于持久性化合物(POPs),具有抗生物降解的能力.因此.筛选具有降解基因的微生物.在人工控制条件下(温度,盐度,pH,氧化还原电位,营养可利用程度)促进农药的快速降解,减少在环境中的残留将在农业环境保护中具有重要的意义.大量的研究表明【阍,微生物修复技术已经成为净化土壤中有机污染物的最为有效和可靠的方法之一,在细菌,真菌和放线菌中2188卫亚红等:2,4一D除草剂降解菌的分离及其生物学特性的研究2007年11月均有促进农药降解的微生物存在的报道.目前对于利用细菌降解有机磷农药残留的研究包括降解菌株的获得,降解酶基因的克隆以及降解菌的田间应用等.能够降解有机磷农药的细菌种属主要有假单胞菌属,芽孢杆菌属,黄杆菌属,产碱菌属等㈣.降解有机磷农药的真菌研究报道较少,已知瓶形酵母菌Il8】,曲霉对甲胺磷[19,211和乐果㈤具降解作用.木霉和链格孢对甲基对硫磷具降解作用[231.其他能够降解有机磷农药的真菌还有镰刀菌属(Fusariumsp.),头孢菌属(Cephalosporiumsp.),毛霉属Mucorsp.),粘帚霉属(Gliocladiumsp.),链孢霉属(Neurosporasp.),根霉属(Rhizopussp.)等.从环境安全的角度考虑,微生物加速农药降解的现象无疑十分有利并可加以利用:但从农药防治的角度考虑.此现象的存在会降低其他各类农药的药效,甚至导致防治失败.因此,如何保证农药的防治效果,同时又能利用微生物减轻农药对环境的压力,是一个值得深入研究的课题.本试验所筛选的部分细菌在以2,4一D为惟一碳源的培养基中生长良好,说明它们具有利用2,4一D作为碳源的能力,然而,降解菌株是否具有降解土壤中2,4一D的能力就需将筛选菌株回接至污染土壤,借助高效液相色谱法分析2,4一D浓度和残留产物以准确判定菌株的实际修复能力,而本文得到的降解菌株的降解特性,可作为回接土壤时考虑的重要环境因素.菌株降残测定借助高效液相色谱法或气相色谱法同分析固然直接可靠,然而本文中2,4一D浓度的定量测定采用紫外分光光度法则较为简便.另外.方玲不仅分离到能降解”六六六”的芽孢杆菌属,无色杆菌属和假单胞菌属菌株,以及降解DDT的产碱杆菌属和无色杆菌属菌株,而且进一步探讨了5株菌在纯培养条件下对”六六六”,DDT的降解效果,分析由这些菌株配制成的复合菌剂,是较理想的降解农药残留的复合菌剂.而有关2,4一D高效降解菌株配制成复合菌剂的工作需要在以后的试验中作进一步的探讨.参考文献:…1杨胜勇,王明学,匡亮.植物生长调节剂2,4一D对两种绿藻生长的影响fJJ.淡水渔业,2005,35(6):28—30.[2]周春梅.”人世”与中国农产品农药残留的应对措施.农业与技术, 2001,21(6):7-10.【3]李顺鹏,蒋建东.农药污染土壤的微生物修复研究进展【J1.土壤, 2004,36(6):577-583.【4]OmennGS.Environmentalbiotechnology:reducingrisksfromenviron—mentalchemicalsthroughbiotechnology].PlenumPress,NewY ork, USA.1988.505.[5]Y oungL Y.CemigliaCE.Microbialtran~sformationanddegradationof toxicorganicchemicals[M].JohnWileyandSons,lnc,NewY ork,USA. 1995.654.『6]6刘继芳,逄焕成,严慧峻,等.用微生物对六六六污染土壤进行生物修复的初步试验研究fJ].农业环境科学,2003,22(6):677—680.【7]方玲.降解有机氯农药的微生物菌株分离筛选及应用效果[J1.应用生态.2000.11(2):249—252.f8]8张国顺,洪青,马爱芝,等.富集液中六六六(一BHC)脱氯基因的克隆,表达及降解试验fJJ微生物,2005,45(1):44—47.(9]王玉军,赵晓松,孙安娜,等.五氯硝基苯降解菌生长特性及降解活性lJ1.吉林农业大学,2002,24(6):62—64.【lO]王国惠.有机氯农药高效降解菌的筛选及其降解能力的研究lJ1.环境保护,2004,8:12—14.[11]KalamA,TahJ,MukherjeeAkPesticideeffectsonmicrobialpopulation andsoilenzymeactivitiesduringvermicompostingofagriculturalwaste 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土壤酶活性测定方法

土壤酶活性测定方法土壤酸性磷酸酶活性的测定1.试剂制备(1)0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液取10.67 GP硝基苯磷酸二钠（6H2O，分子量371.1）溶于pH4。

5 5在普通缓冲液中稀释至250ml，在4℃冰箱中保存。

(2)通用缓冲液（ph4.5）（缓冲液久置会有沉淀）储备溶液由以下成分组成：三羟甲基氨基甲烷12.1g顺丁烯二酸11.6g柠檬酸14g硼酸6.3g溶于500ml 1nnaoh（40g定容1L），加入蒸馏水至1L。

取200ml储备溶液，加入0.1nhcl或浓HCl，将pH值调节至4.5。

最后，稀释至1L。

（3）甲苯(4)0.5mol/lcacl2.2h2o溶液：36.75gcacl2。

2H 2O定容500ml（无水CaCl2:11.1g定容200ml）（5）0.5mol/lnaoh 溶液：20gnaoh定容1L 2。

测量步骤取1g土壤，置于50ml三角瓶中，加4ml通用缓冲液（ph4.5）、0.25ml甲苯和1ml0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液,摇匀后，置于37℃恒温箱中1h。

培养结束后，加入1ml0 5mol/L氯化钙溶液和4ml 0 5mol/LNaOH溶液，用浓滤纸过滤至50ml容量瓶中，用蒸馏水定容后在410nm处比较颜色。

3.计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用单位时间内每克土中的对硝基苯酚的毫克数表示，w（mgg-1h-1）=m1/（m×t）式中：M1——标准曲线上发现的样品中对硝基苯酚的质量（mg）；T-反应时间（H）=1hm-样品土壤重量（g）无土壤ck:用1ml蒸馏水代替1g土壤；每批土样做2个；无基质ck:用1ml蒸馏水代替1mlpnpp。

每个处理做1个。

标准曲线的制备：1）对硝基苯酚标液：1g对硝基苯酚定容1l，低温保存。

2）取标液0、1、2、3、4、5ml于0-6号硬质试管中，分别加ph6.5通用缓冲液4ml，cacl2.2h2o溶液1ml，naoh溶液4ml，② 混合后，将定量滤纸过滤至50ml容量瓶中。

解淀粉芽孢杆菌W48_对大蒜产量品质及土壤质量提升效果研究

89 中国土壤与肥料　2024 （2）大蒜（Allium sativum L.）为百合科葱属草本植物，营养价值丰富，并具有抗菌、抗氧化、免疫调节等保健价值，是我国重要的经济作物［1］。

我国是世界上最大的大蒜生产、消费和出口国，山东、江苏、河南等地的大蒜产业集群优势明显，如山东金乡、江苏邳州等大蒜之乡的常年种植面积约4万hm 2，在推动乡村振兴和拉动地方经济发展方面发挥着重要作用。

近年来，高品质、品牌化成为大蒜产业新的驱动力，杞县大蒜、金乡大蒜、邳州大蒜等34个产地的大蒜获批国家地理标志保护产品，其中“邳州大蒜”还是2020年欧盟理事会首批授权的中国地理标志产品［2］，这对开拓欧盟市场、提升品牌国际影响力有着重要的意义，同时也对大蒜品质保持提出了更高的要求。

目前，蒜农在生产中重产量、重投入，对大蒜产地环境关注度较低，连年种植和过量施用化肥农药且利用率低引起的连作障碍现象较普遍，造成土壤养分失调和质量退化、农药残留隐患较大、产量和品质下降等问题［3-4］，严重制约大蒜产业发展和大蒜产品进军国际市场。

同时，微塑料、塑化剂等新型污染物带来的农田复合污染也备受关注［5-7］。

邻苯二甲酸酯类塑化剂（PAEs）是一类环境激素类污染物，具有内分泌干扰和致癌毒性，在多种环境介质中被频繁检出［8］。

由于北方大蒜生长期采用地膜覆盖的栽培方式，大量的残留地膜为PAEs 释放到土壤中提供了来源。

PAEs 进入土壤后可通过植物吸收进入作物体内，并通过食物链影响人体健康，从而导致潜在农产品质量安全问题，如邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP，PAEs 的一种）会通过妊娠期母体接触来损害胎儿的生殖细胞发育［9］。

而且，PAEs 的芳香环几乎不能通过非生物途径被裂解，在野外环境下微生物是降解芳香环的主要途径［10］。

收稿日期：2023-02-14；录用日期：2023-06-15基金项目：江苏中晚熟大蒜产业集群建设项目（13922204）；江苏省农业科技自主创新资金［CX（22）3131］。