核酸检测试剂技术要求
猴痘病毒核酸检测试剂技术审评要点(2022版试行)
猴痘病毒核酸检测试剂技术审评要点（2022版试行）本审评要点旨在指导注册申请人对猴痘病毒核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门提供参考。
本审评要点是对猴痘病毒核酸检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用。
若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
一、适用范围本审评要点适用于猴痘病毒核酸检测试剂注册申请和变更注册申请的情形，其他未尽事宜应当符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家药品监督管理局公告2021年第122号）等相关法规要求。
二、注册审查要点（一）监管信息1.产品名称及分类编码产品名称应符合《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第48号）及相关法规的要求，如猴痘病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR 法）。
根据《体外诊断试剂分类规则》，该产品按照第三类体外诊断试剂管理，分类编码为6840。
2.其他信息还包括产品列表、关联文件、申报前与监管机构的联系情况和沟通记录以及符合性声明等文件。
（二）综述资料综述资料主要包括概述、产品描述、预期用途、申报产品上市历史及其他需说明的内容。
应详细说明产品所采用的技术原理及检测流程。
提供不同适用机型的检测通量，即一次检测最多可检测的样本数。
提供核酸提取（手工和自动提取方式应分别明确）和PCR扩增的时间，以及检测全过程所需的时间。
不同检测流程，分别提供最少和最多检测样本量下的检测时间。
与已上市同类产品进行比较，比较内容包括样本类型，检测原理，检测靶基因区域，组成成分，内标，质控品，判读规则，分析性能和临床性能等。
（三）产品技术要求及检验报告注册申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下，根据产品研制、前期评价等结果，依据国家标准、行业标准及有关文献资料，结合产品特性按照《医疗器械产品技术要求编写指导原则》（2022年第8号）的要求编写。
流感病毒的核酸检测技术操作规范
流感病毒的核酸检测技术操作规范（一）流感病毒Conventional one step RT-PCR 检测应用核酸检测技术为疑似流感病毒感染病例诊断提供依据，为流感病毒的型别和亚型的鉴定提供技术方法。
按照规定方法对标本和病毒进行处理和检测，保证检测结果的快速性和可靠性，同时确保样本不被污染和污染环境。
1.生物安全要求实验室操作应当遵守生物安全实验室的有关生物安全的规定。
季节性流感病毒生物安全二级，疑似高致病禽流感病例标本需在BSL-2级实验室操作，采取BSL-3级防护；核酸提取及加RNA模板可在BSL-2级实验室生物安全柜内操作；PCR反应体系配制在体系配制区；PCR产物检测在电泳区操作。
2.主要试剂（所列厂家仅用作举例，实验室可自行选择）注：*引物序列详见表1.3.设备（1）BSL-2生物安全柜；（2）可调转速最大至140rmp的离心机；（3）涡旋混合器；（4）10p L，1pL，2pL，10^L量程移液器；（5）PCR 仪；（6）电泳槽和电泳仪；（7）凝胶成像系统。
4.质量控制（1）实验检测所需核酸提取试剂和一步法RT-PCR检测试剂不同批号之间需进行灵敏度的检测。
同一试剂不同批次的灵敏度的检测至少半年一次。
（2）实验检测除待检标本外还需设置阳性对照及阴性对照，阳性对照核酸事先应稀释分装，经Real-time PCR检测Ct值在30以内；阴性对照为DEPC处理水Real-time PCR检测Ct值为0.5.实验步骤（1）实验注意事项由于PCR检测灵敏度高，因此必须采取一些预防污染的措施，以避免假阳性结果的出现，建议采取如下方法：a）核酸提取、反应液配制及检测反应进行应在独立的房间中进行。
b）不同的房间配制相应的专用耗材和设备，不可交叉使用。
c）配制反应液时，应穿着干净的实验服，带无粉手套进行操作。
d）实验操作期间，如怀疑有污染，请更换手套。
e）试剂及反应管的盖子应尽可能盖上。
（2）设备准备操作台的表面、枪头和离心机应保持洁净，可用5%漂白剂或其它清洁剂，如可以去除DNA酶的试剂擦拭台面，以减少核酸污染的风险。
核酸检验试剂配制方案
核酸检验试剂配制方案核酸检验是一项非常重要的实验室技术，用于检测和分析DNA和RNA的序列和结构。
核酸检验试剂的配制是核酸检验工作中的关键环节，下面是一个700字的核酸检验试剂配制方案。
一、试剂准备1. Tris-HCl缓冲液：将121.14g Tris-HCl溶解在800ml去离子水中，调pH至7.5，加去离子水至1L。
2. EDTA溶液：将186.1g EDTA二钠溶解在800ml去离子水中，加去离子水至1L。
3. NaCl溶液：将58.44g NaCl溶解在800ml去离子水中，加去离子水至1L。
4. Lyse Buffer溶液：将10ml Tris-HCl缓冲液、1ml EDTA溶液、8ml NaCl溶液混合，加去离子水至50ml。
5. 2×载脂体缓冲液：将40ml Tris-HCl缓冲液、8ml EDTA溶液、70ml NaCl溶液混合，加去离子水至200ml。
6. 蛋白酶K溶液：将1mg的蛋白酶K溶解在1ml去离子水中。
7. 合成引物：按需要合成引物序列，并与合成公司确认纯度和浓度。
二、试剂配制1. DNA提取试剂配制：将1ml Lyse Buffer溶液和10μl蛋白酶K溶液混合，制成DNA 提取试剂。
2. PCR反应液配制：将50μl 2×载脂体缓冲液、5μl DNA模板、1μl合成引物、3μl MgCl2、1μl dNTP混合，加去离子水至100μl，制成PCR反应液。
3. 电泳缓冲液配制：将242g Tris和36g boric acid溶解在800ml去离子水中，加去离子水至1L，pH调至8.0，加入20ml 0.5M EDTA混合，最终体积调至1L。
4. DNA标记液配制：将1μl DNA样品和9μl DNA加载缓冲液混合，制成DNA标记液。
5. 试剂保存温度：将所有试剂保存在适宜的温度下，避免阳光直射和高温。
三、注意事项1. 试剂配制时要严格按照实验室的操作规程进行，避免实验污染。
解脲脲原体(UU)核酸检测试剂注册技术审查指导原则
解脲脲原体(UU)核酸检测试剂注册技术审查指导原则UU解脲脲原体(UU)核酸检测试剂注册技术审查指导原则 :1、审查范围及内容：(1)审查产品应符合国家产品检验标准，包括生物安全检测、灭菌检测以及核酸相关特性检测等；(2)审查应包括试剂产品的基本配方、样品浓度、检测精度、灵敏度、稳定性以及灭菌等性能的实验数据；(3)要求以有证据的方式表明试剂的引物、探针和探针蛋白等组分。
2、材料准备(1)试剂配方与制备：提供完整详细的试剂配方、成份、制备步骤及售货说明书；(2)产品注册文件：提供完整的商标名称、生产厂家、有效期以及使用说明书等品质保证书；(3)样品：提供质检机构安排检测用的试剂样品或试剂品质样品。
3、审查过程(1)现场考察：审查团队将就试剂生产设施及流程等采取现场考察；(2)审查报告：审查团队将从技术角度出具报告，以评定试剂是否符合国家标准；(3)检测数据：审查报告中应有完备的检测数据，说明试剂的基本性能；(4)复查评定：审查团队根据实际试剂材料情况，进行复查评定。
4、审查结果(1)根据实际现场情况以及审查理论分析，审查团队将发放审查结论；(2)审查结论分类为绿色、黄色、红色三种，根据分类给予相应的后续措施；(3)绿色表示审查通过，项目可以进行注册；黄色表示项目有改进空间，可以继续审查；红色表示项目未通过，不予注册。
5、步骤及要求(1)试剂配方技术标准：要求采用规范的配方及灭菌技术，确保试剂质量；(2)核酸测定检测：要求采用国家规范的测定方法，确保试剂检测精度；(3)灵敏度及稳定性小组试验：要求采用质检机构相关标准的方法，确保试剂的灵敏度及稳定性；(4)安全产品评估：要求采用安全性测试标准，确保检测产品安全性；(5)试剂操作规范：要求遵照检测操作规程进行操作，确保检测数据的有效性。
以上就是关于UU解脲脲原体(UU)核酸检测试剂注册技术审查指导原则的介绍，通过完整的审查内容，详细的材料准备，过程安排，评定要求等，确保检测产品优质和安全。
核酸检测试剂性能验证及质检(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
二 性能验证的5W1H
WHY
WHO
WHEN
WHAT
WHERE
HOW
线性区间
y = -1.050x + 8.852 R² = 0.999
2
4
6
8
10
00
2
4
6
8
可报告区间只有经验证的线性范围上限不能满足临床需求时的定量检验项目。验证方案：选择在线性范围内高值标本，用试剂盒配套或指定的稀释液做系列等倍比稀 释。每份标本至少测定2次取平均值， 计算各稀释度的理论值与实测值对数值的差值。结果判断：如果某稀释度的理论值与实测值对数的差值≤±0.4，表明在此稀释度下结果 可靠。可报告范围上限为线性范围的上限值* 保证结果可靠的最大稀释倍数，下限为线性范围 下限。
34.26
35.65
37.91
N基因(CT值)
33.64
24.74
32.98
20200203
ORF1A/B(CT值)
38.41
35.3
39.77
N基因(CT值)
22.56
26.26
33.56
20200204
ORF1A/B(CT值)
44.42
36.61
40.85
N基因(CT值)
33.81
26.4
35.44
新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）
性能验证的5W1H
二
WHY
WHO
WHEN
WHAT
WHERE
HOW
正确度/符合率
性能验证的5W1H
二
WHY
WHO
WHEN
WHAT
WHERE
HOW
正确度/符合率
呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册技术审查指导原则
呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。
本指导原则是对呼吸道病毒多重核酸测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
如申请人认为有必要增加本指导原则未包含的研究内容，可自行补充。
如果申报产品检测项目包括的病毒有相应的指导原则，应首先满足指导原则要求的内容。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。
应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。
呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。
目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。
本指导原则适用于呼吸道病毒多重核酸检测试剂，适用样本类型为鼻咽拭子、鼻拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物样本等，可包括但不限于：甲型流感病毒（Influenza A，IFV A）、乙型流感病毒（Influenza B，IFV B）、呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）、副流感病毒(Parainfluenza Virus，PIV)、人偏肺病毒（Human Metapneumovirus，hMPV）、腺病毒（Adenovirus，Adv）、呼吸道感染肠道病毒（肠道病毒/鼻病毒）（Enterovirus，EV/ Rhinovirus，RhV）、冠状病毒（Coronavirus，CoV）等。
新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点
2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点一、适用范围2019新型冠状病毒核酸检测试剂用于对咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰液、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道分泌物等样本中的2019新型冠状病毒核酸进行体外定性检测。
本审评要点适用于进行首次注册申报的产品。
二、性能评估：企业应提交在符合质量管理体系的生产环境下生产的试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、实验方案、实验数据、统计分析等详细资料。
建议着重对以下分析性能进行研究。
1.核酸(RNA)提取/纯化性能在进行靶核酸检测前，应有核酸(RNA)提取/纯化步骤。
该步骤的目的除最大量分离出目的RNA外，还应有相应的纯化作用，尽可能去除PCR抑制物。
无论检测试剂是否含有RNA分离/纯化的组分，企业都应结合检测试剂的特性，对配合使用的核酸提取试剂/方法的提取效率、提取核酸纯度等做充分的验证，提供详细的验证资料。
2.最低检测限(1)最低检测限的确定将含有2019新型冠状病毒的真实临床样本/含有该病毒RNA片段的假病毒颗粒梯度稀释于（与适用样本一致的）适当基质中，用于进行最低检测限研究，应采用科学的方法标定病毒滴度。
每个浓度梯度最少重复三次检测，以100%可检出的最低浓度水平作为估计检测限，在此浓度附近制备若干梯度浓度样品，每个浓度至少重复20次检测，将具有90%〜95%阳性检出率的最低浓度水平作为确定的最低检测限。
在进行最低检测限的确定时，应至少包括不同来源的三个具有代表性的2019新型冠状病毒样本，进行系列梯度稀释。
（2）最低检测限的验证选择不同来源的至少3个病毒样本（与最低检测限确定不同的病毒样本）在最低检测限浓度水平进行验证，应达到90%〜95%阳性检出率。
应提供详细的病毒液滴度的确定方法及验证结果。
3.不同区域病毒样本包容性的验证至少验证包括具有时间和区域特征性的10个不同来源的病毒样本（阳性临床样本或分离培养物），应包括最低检出限、重复性等性能的验证，病毒样本的滴度应采用科学合理的方法进行标定。
核酸检测技术及质量控制
核酸检测技术及质量控制在当今的医疗卫生领域，核酸检测技术已经成为了一项至关重要的工具。
它在疾病的诊断、疫情的防控、遗传疾病的筛查等方面发挥着举足轻重的作用。
然而，要确保核酸检测结果的准确性和可靠性，质量控制是关键。
核酸检测技术的基本原理是通过检测样本中特定核酸序列的存在与否来判断是否存在相应的病原体或基因变异。
这一过程涉及到一系列复杂的步骤，包括样本采集、核酸提取、扩增和检测。
样本采集是核酸检测的第一步，也是至关重要的一步。
常见的样本类型包括鼻咽拭子、口咽拭子、血液、痰液等。
采集过程需要严格遵循操作规范，以确保采集到足够的、有代表性的样本，同时避免样本受到污染。
比如，在采集鼻咽拭子时，操作人员需要将拭子准确地插入鼻腔深处，并旋转数次，以采集到足够的细胞。
核酸提取是将样本中的核酸从其他成分中分离出来的过程。
这一步通常使用化学试剂和特定的仪器设备来实现。
提取的核酸质量直接影响后续检测的结果，因此需要严格控制提取过程中的温度、时间、试剂浓度等参数。
扩增是核酸检测中的关键步骤，其目的是将微量的核酸片段大量复制，以便于检测。
常用的扩增技术包括聚合酶链式反应（PCR）和逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）。
在扩增过程中，需要精确控制反应条件，如温度循环、引物浓度、酶的活性等，以确保扩增的特异性和效率。
检测则是通过各种方法来确定扩增产物的存在和数量。
常见的检测方法包括荧光定量 PCR、基因测序等。
荧光定量 PCR 能够实时监测扩增过程中荧光信号的变化，从而定量分析样本中的核酸含量；基因测序则可以更精确地确定核酸的序列信息。
然而，即使核酸检测技术本身具有高度的特异性和敏感性，在实际应用中，如果质量控制不到位，仍然可能导致检测结果的不准确。
质量控制首先要从人员培训开始。
参与核酸检测的工作人员需要具备扎实的专业知识和熟练的操作技能。
他们需要了解检测的原理、方法、流程，熟悉仪器设备的使用和维护，并且能够严格遵守操作规程。
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核酸检测试剂
一、基本要求：
1.试剂名称：核酸检测试剂(进口)
2.用途：对献血者血液标本进行乙肝病毒DNA、丙肝病毒RNA，人类免疫缺陷病毒RNA检测。
要求
HBV/HCV/HIV单管联检试剂。
3.数量：65000人份。
[乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒（1+2）型核酸检测试剂
盒（PCR-荧光法）：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒（1+2）型核酸质控试剂（PCR-荧光法）]。
4.★试剂适用设备：可以在现有S201设备上使用。
5.适用检测样本种类：血清及EDTA、ACD抗凝血浆。
6.★试剂原理基于荧光PCR技术的汇集模式或基于TMA技术的单检模式。
二、技术要求：
1.试剂必须通过美国FDA批准或欧洲CE（IVD）认可，以保证产品技术和质量达到国际认可水平，
投标试剂的注册标准应具有进字号的注册许可，投标人需在投标文件中提供相关证明文件。
2.试剂可检测到的基因亚型要求覆盖：HBV A-H所有亚型；HCV 1-6亚型；HIV－1 M组A－G所有
亚型、O组、N组；HIV-2组。
3.检测灵敏度(≥95%可信限)：HBV DNA≤20 IU/ml；HCV RNA≤50 IU/ml；HIV RNA≤51 IU/ml；
临床特异性≥99.7%。
4.★根据国家相关机构质控要求进行质控，试剂含有内标质控（Internal Control），为RNA内
标或RNA\DNA双内标，全程监控检测过程，包括核酸提取，扩增及检测步骤，以防止技术性的假阴性。
系统内部有UNG酶防扩增污染控制。
5.试剂使用时操作简便，不需要用专用设备进行孵育融化。
不需要人工配制或分装，不需要开盖，
试剂封闭操作，能有效防止交叉污染。
试剂包装容器需带条形码，满足检测设备自动扫描、自动读取判断试剂组分的需要。
6.装载样本及对应耗材试剂后，无需人工值守，直至试验结束接收结果，避免试验污染。
7.实验结束后，试剂架等材料无需84消毒液浸泡处理，方便操作人员对实验室的维护。
三、配套要求：
1.成交方无偿提供核酸检测正常运转的相关配套设备(包括2台混匀器)。
2.成交方无偿提供所有核酸检测正常运转的相关检测仪器（加样、核酸提取、纯化、扩增、检测）
以及配套实验台等，以进行自动核酸提取、扩增、检测和鉴别；成交方无偿提供设备、安装、调试、培训和维修的服务。
3.检测设备需求量：满足常规8小时至少完成600个标本检测的需求。
4.成交方无偿提供核酸检测正常运转的所有配套耗材，其中须包括一次性带滤芯移液头、一次性
使用核酸检测专用真空采血管、KIMTECH擦拭纸。
5.在相关设备安装、调试前，成交方应提供较详尽的系统标准操作程序及系统维护、校准的操作
程序文件（电子版），提供中文操作使用、维护说明书，中文培训教材。
6.试剂和设备提供的时间:
成交方供应商在正式实施检测前完成相关设备的运输、安装、调试和培训服务。
7.信息软件
i.检测设备自带检测软件。
ii.检测系统软件能够汇总管理整个核酸检测实验室内仪器的全部检测数据。
iii.能够与实验室使用唐山启奥SHINOW9.0软件匹配，数据能够传输；提供与实验室软件及采供血软件配对所需的所有费用。
8.售后服务：
i.提供免费现场操作培训，提供人员一至两名人员熟练掌握。
ii.终身免费提供软件升级服务。
iii.设备免费提供终身维护及校验服务；试剂及时安全到达，保证实验正常开展。
iv.使用方核酸实验室发生污染，中选方应协助使用方能够继续进行核酸检测。
v.提供相应售后技术服务：无偿提供24小时维修和技术支持，1小时响应时间，到达现场时间小于4小时，最长24小时内必须排除故障，否则提供同类型、同功能的仪器。
vi.负责所提供设备的免费维护、保养、校准，每月至少一次。
vii.供应商每次送货必须提供符合卫生部要求的试剂运输冷链监控温度记录。