小鼠睾丸与附睾的提取与位置
小鼠的基本实验操作
• 致死采血量：50～100ml
兔的一般实验操作
• 5、处死
•
•
空气栓色法
20～40ml空气，急性循环衰竭
• 6、解剖
腹腔：肝脏、胃、肠道、圆小囊、胰腺、脾脏、肾脏、 肾上腺、输尿管、膀胱；卵巢、输卵管、子宫；睾丸、附 睾、输精管。 胸腔：肺、心脏。胸腔纵隔。 颈部：甲状腺。颈部N：迷走、交感、减压N。
小鼠的基本实验操作
小鼠的基本实验操作
一、实验目的
通过实际操作，掌握小鼠的一般操作方法，包括小鼠 的抓取和固定、性别鉴定、编号、去毛、给药、采血、麻 醉、处死。
二、实验动物
KM小鼠4只（2雌2雄）
小鼠的基本实验操作
三、操作
1、抓取和固定
2、性别鉴定
雄性：阴囊；生殖器与肛门之间距离长，毛发密 雌性：生殖器与肛门之间距离短，毛发疏（无毛小沟）
小鼠皮肤移植试验、卵巢摘除术
近交系小鼠皮肤移植试验
• 一、动物
• KM小鼠2只（1雌1雄）
• 二、方法： • 尾-背植皮法
• 尾-尾植皮法
近交系小鼠皮肤移植试验
• 三、步骤
• 1、异体尾-背植皮法
• （1）麻醉 固定 • （2）受体小鼠，背部剪毛（1.5cm×1.5cm），酒精消毒， 去皮（0.3cm×0.3cm） • （3）供体小鼠，酒精消毒尾部，尾背部剪皮 （0.5cm×0.5cm） • （4）供体皮片覆盖受体背部方洞 • （5）1～3周后观察结果
• （3）尾静脉注射
小鼠的基本实验操作
• 6、采血
• （1）眼眶后静脉丛采血 （2）眼球摘除采血
小鼠睾丸支持细胞分离培养
小鼠睾丸支持细胞分离培养一、材料和器械：1、材料：小白鼠（18~ 20 日龄）1只2、配液：PBS 1L，高压灭菌细胞洗液：DMEM+双抗消化液：0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，0 1%( 质量分数) 胶原酶细胞培养液：DMEM+10%FBS+双抗3、器械：镊子、手术剪、手术刀各3-4把，高压灭菌500mL烧杯2个，高压灭菌25 mL离心管、5 mL离心管各20个，高压灭菌酒精棉一瓶细胞培养皿若干冰块若干二、操作步骤：1、处死小鼠颈椎脱臼法处死；2、消毒置于含75% ( 体积分数) 乙醇平皿中浸泡2 min, 然后置于超净台上；3、取睾丸用中剪剪开下腹部皮肤, 眼科剪从下腹部附睾部剪断精索, 取出双侧睾丸, 放入含预冷细胞洗液的培养皿中；4、取实质修剪睾丸附带的精索。
剥除睾丸被膜, 将睾丸实质剪成约1 mm 1 mm 1 mm 碎块, 静置3~ 4 min；5、消化转入25mL 离心管中。
吸出上层细胞洗液, 每只睾丸加入1 5mL 37 预温的0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，37 高速振荡消化15~ 20min, 直到残存的间质消化成粘液状, 可见成片断的曲细精管；6、终止消化加入入少许血清终止消化,；7、离心1000 r/ min离心5 min, 倾去上层胰酶。
加入DMEM/ F12 培养基重悬, 1000r/min 离心5min。
倾去上层培养液；8、再消化每只睾丸加入1 mL 37 预温的0 1%( 质量分数) 胶原酶, 37 低速缓慢振荡消化20~ 25min；9、铜网过滤取滤液800 r/ min 离心5min, 2 次去除胶原酶, 用培养液洗涤；10、接种往离心管加入细胞培养液5ml左右，吹打均匀，接种到两个30细胞培养皿中，补加培养液到培养皿1/3~1/2,培养皿标记显微观察后放入36CO2培养箱培养。
三、换液纯化，计数结果鉴定。
实验2-小鼠精子畸形试验-20121025
制
颈椎脱臼 处死小鼠 取双侧 附睾
片
3ml磷酸盐 剪碎附睾 缓冲液
擦镜纸 过滤
取悬液滴于 玻片上推片
甲醇固定5 分钟
伊红染色30分钟
（五）阅片
首先在低倍镜下选择背景清晰、精子分布 均匀、重叠较少的区域，然后在高倍镜下 观察结构完整的500个精子，计数其中畸 形的精子数。
五、结果分析与评价
精子畸形形态观察 无钩、香蕉形、无定形、双头、 胖头、 折尾、双尾 计算精子畸形的发生率（头部重叠或全部 重叠的精子、无尾精子不进行计数）。
注意鉴别制片过程中人为造成的精子损伤。
正常精子
胖头精子
双头精子
双尾精子
双尾精子
双尾精子
香蕉形精子
人类精子
Thanks!
四、操作步骤
（一）动物选择 （二）剂量与分组 （三）染毒与采样 （四）制片 （五）阅片
（四）制片
颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分离并摘取 双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml磷酸盐缓冲液或 生理盐水的小平皿中，以眼科剪将附睾剪成小 块，用吸管将悬浮液轻轻吹打5～6次，静置3～ 5min，用四层擦镜纸滤除组织碎片，吸取此精子 悬液滴于清洁载玻片上，均匀推片，待玻片晾干 后用甲醇固定5min，干燥后（此时也可镜检观察 精子形态）再用1%的伊红醇溶液染色1～2h（或 30min），流水冲洗，晾干后镜检。
一、目的
精子畸形试验是检测受试化学毒物 能否破坏哺乳动物精子正常形态的 实验方法 通过该实验，学习和掌握小鼠精子 畸形试验的原理和步骤
二、原理
精子畸形是指精子的形状异常和异常精 子数量的增多; 生殖系统对化学毒物的作用十分敏感, 在其它系统还未出现毒性反应之前，生 殖系统可能已出现损害作用;
实验动物学实验报告大鼠,小鼠,小鼠的基本实验操作,大鼠的基本实验操作
实验一小鼠的基本实验操作一、实验目的:通过实际操作,掌握小鼠的一般操作方法,包括小鼠的抓拿、标记、给药(灌胃、腹腔注射、皮下、肌肉、尾静脉注射)、取血(眶后静脉丛,摘眼球)、脊椎脱臼法处死、大体解剖。
二、实验动物:昆明小鼠2只(1雌1雄)三、实验步骤1、抓取与固定,标记2、去毛3、给药:消化道、腹腔注射、尾静脉注射4、取血:眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法5、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉6、处死:脊椎脱臼法7、解剖:雄性:睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,胶质状,透明)雌性:双角子宫、卵巢肾上腺、胆囊、甲状腺、胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏、甲状腺四、实验结果1、抓取与固定标记:抓取:抓小鼠的尾根部固定:抓住小鼠的尾根部,让小鼠在粗糙平面上爬行,后拉尾跟部,右手的拇指与食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤,小指与无名指将尾巴固定在手掌面。
并标记: 2、灌胃法:左手抓取小鼠固定后,右手持特制灌胃针,沿一侧口角进针,紧贴咽后壁,头后仰以便伸直消化道,进针2/3后灌生理盐水0、5ml3、注射给药:腹腔注射:从下腹部的两侧进针 ,进针时针与腹部成45°。
进针后稍微晃动针,如无粘滞感则可注射药物尾静脉注射:一人固定小鼠,另一人用左手中指与拇指将尾拉直,食指托住尾部,在尾动脉位置进针注射0、5ml生理盐水。
注射完毕拔出针头,用无菌棉球压迫止血。
4、采血从眼角内侧0、5cm处进针眼球摘除法:左手抓取用固定小鼠,右手持弯头镊在眼球根部将眼球摘除,头朝下,眼眶内血迅速流出。
5、麻醉:0、5%氯胺酮腹腔麻醉:本小鼠重22g,按100mg/kg的药量给药,2分钟麻醉成功6、处死:脊椎脱臼法:按住头部,将尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死7、解剖:雄性:寻找到睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺雌性:双角子宫、卵巢 3、7、2 肾上腺:米粒大小胰腺:位于胃下方,类似于脂肪组织,浑浊状 3、7、4 ,胆囊:芝麻大小,浅绿色,半透明,甲状腺:紧贴环状软骨 ,另可解剖出胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏。
实验一小鼠睾丸附睾及输精管精子采集运动能力检测与结构观察
实验用品
3. 实验动物： 选择60日龄以上，体重达到32-35g的昆明种 公鼠。
实验方法
1. 精子采集：
左手捏小鼠尾部，右手持镊子，或以图3-1所 示方法，以颈部脱臼法处死小鼠。使处死的小鼠 仰卧，用75%的酒精棉球消毒腹部开口部位被毛 及皮肤。剪开腹壁，暴露生殖系统。无菌分离睾 丸、附睾及输精管。在含培养液的表面皿中，用 眼科剪除去睾丸、附睾及输精管周围的系膜及脂 肪，并冲洗干净，以免血液或脂肪球混入液体妨 碍精子观察。
实验方法
采集附睾尾精子时，将其剪成几段。采集输精管 精子时，由于小鼠输精管非常细，不能直接冲洗 管腔，将输精管放入含有1ml培养液的表面皿内， 在实体显微镜下，用一只眼科异物针固定输精管， 用另一支异物针向相反方向纵向撕开输精管，精 子会浮游到培养液中。将大块输精管组织拨开， 用吸管连同精子吸出液体部分，装于乳动物的精子在睾丸内形成，并必须经过 在附睾内发生一系列形态、生理和生化方面的 变化而最终达到成熟，才能获得向前运动的能 力，这种向前运动能力的获得是精子受精能力 的重要指标。哺乳动物精子包括头部和尾部两 个主要部分，颈部介于头部和尾部之间，形成 头部和尾部的连接。精子头部主要由核组成，
实验目的
1. 认识雄性小鼠睾丸、附睾、输精管等 生殖器官结构及位置特点；
2.掌握小鼠睾丸、附睾及输精管精子采 集方法；
3.掌握血细胞计数板法精子计数和运动 能力检查的方法；
4.通过睾丸、附睾及输精管精子运动能 力检测，认识精子在睾丸产生后，在 附睾内成熟的过程；
实验目的
5. 掌握精子抹片方法； 6. 掌握染色法进行精子结构观察和顶体 结构观察的方法，认识精子的正常结构； 7. 使学生得到小鼠精子操作的基础训练。
实验方法
小鼠解剖实验报告总结(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过对小鼠进行解剖，了解小鼠的主要器官位置和结构，掌握解剖技巧，提高实验操作能力，为后续的生物学和医学研究打下基础。
二、实验材料与工具1. 实验动物：成年小鼠（体重约20-30g）2. 实验器材：解剖台、剪刀、镊子、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖显微镜、生理盐水、酒精、碘酒、棉球等三、实验步骤1. 实验动物准备：将小鼠置于解剖台上，用棉球蘸取适量的生理盐水湿润小鼠的皮肤，以便于解剖操作。
2. 解剖过程：（1）切开皮肤：用剪刀沿小鼠腹部正中线剪开皮肤，注意避免损伤内脏器官。
（2）暴露内脏：用镊子提起皮肤，显露内脏器官，包括心脏、肺、肝脏、胃、小肠、大肠、肾脏、膀胱、生殖器官等。
（3）解剖器官：用解剖刀和剪子依次解剖各个器官，观察其位置、形态和结构特点。
（4）记录数据：详细记录每个器官的位置、形态、大小等数据。
3. 实验结果分析：（1）心脏：心脏位于胸腔中央，呈红褐色，分为左右两个心房和两个心室，心脏壁由心肌组成。
（2）肺：肺位于胸腔两侧，呈粉红色，肺泡是肺的基本结构单位，肺泡壁与毛细血管壁紧密相连，有利于气体交换。
（3）肝脏：肝脏位于腹腔右上侧，呈红褐色，具有解毒、代谢和储存营养物质等功能。
（4）胃：胃位于腹腔左侧，呈粉红色，分为贲门、胃底、胃体和幽门，胃壁具有分泌胃酸和消化酶的功能。
（5）小肠：小肠位于腹腔中部，分为十二指肠、空肠和回肠，是消化吸收的主要场所。
（6）大肠：大肠位于腹腔右下方，分为盲肠、阑尾、结肠和直肠，主要吸收水分和电解质。
（7）肾脏：肾脏位于腹腔腰部，呈红褐色，具有过滤血液、生成尿液和调节体内水分和电解质平衡等功能。
（8）膀胱：膀胱位于腹腔底部，呈粉红色，是储存尿液的器官。
（9）生殖器官：雄性小鼠的生殖器官包括睾丸、附睾、阴茎等；雌性小鼠的生殖器官包括卵巢、输卵管、子宫和阴道等。
四、实验心得体会1. 解剖操作过程中，要熟练掌握解剖刀、剪子等工具的使用方法，注意操作规范，避免损伤内脏器官。
小鼠输精管结扎和简单精子操作
小鼠输精管结扎和简单精子操作121140052 王哲迪 174一、实验目的1、掌握小鼠手术的基本技巧2、学习雄性小鼠生殖系统特点3、练习显微操作技术二、实验结果及分析1、以腹部横切法剪开小鼠腹壁后，用镊子夹住脂肪垫将睾丸、附睾和输精管拉出切口。
实验时我们将下面图片中镊子夹着的地方剪掉了1cm。
但是在仔细观察过右边这个图后发现，我们错把附睾体当做了输精管。
我们剪掉的是附睾体，而不是输精管。
2、下面这张图片是小鼠腹壁缝合后的照片。
我们采取了方洁的打结方式。
在将睾丸放回腹腔的过程中，发现不管怎么推，都不能把睾丸推回阴囊，这给缝合带来了一定的难度。
缝合腹壁时一定要小心，因为缝合针很容易扎到皮肤和腹腔内的脏器。
3、下图为皮肤缝合后的照片，同样采用的是方结的打结方式。
皮肤相对于腹壁而言较容易缝合。
4、下图为在解剖镜下观察得到的照片。
可能由于角度问题，这张图片上只能分辨出脂肪体和睾丸，并不能看到附睾体和输精管。
取出睾丸时的操作也存在问题，并没有注意到输精管在哪里。
上面剪切输精管时也没有找对输精管，所以实验失败在没有观察到输精管。
脂肪体睾丸4、下图为在显微镜下观察精子得到的照片。
正如细线所指的，图中有着尖尖的头部和一条细长的尾巴的就是精子。
由于载玻片上有一些脂肪体残留的脂肪，所以在显微镜下会看到很多油花，影响精子的观察。
但是仔细看还是可以看到许多在快速无规则运动的精子。
精子三、备注1、本人在实验中操作的部分：对小鼠进行断颈处理切开腹壁夹出睾丸、附睾和脂肪体剪掉1cm输精管（其实剪掉的是附睾）部分缝合操作2、实验要求用乙醚麻醉小鼠，但是实验过程中发现用乙醚麻醉的方法并不好，小鼠经常会醒过来，而且用乙醚操作时间长了，实验人员出现头疼恶心等不适症状。
由于并不需要对小鼠进行回收，所以为了方便操作我们直接采取了断颈处理的方法。
睾丸
睾丸
主要内容：常见公畜睾丸的形态不 位置、组织结构及功能 基本要求：掌握睾丸的组织结构及 功能
一、形态与位置
形状：长卵圆形 睾丸下降：哺乳类的睾丸完成一定的发育 之后，由腹腔下降到阴囊。 隐睾：男婴出生后单侧或双侧睾丸未降至 阴囊而停留在其正常下降过程中的任何一 处。也就是说阴囊内没有睾丸或仅有一侧 有睾丸。
支持细胞 成熟后丌再分裂，数量恒定。 功能有： ①形成血睾屏障。为维持曲精细管内精子 生成的微环境的稳定性提供了重要保证。 ②具有分泌功能-雌激素睾丸液 ③对精子的支持、释放、营养和吞噬功能， 精子发生必须有支持细胞参不。 生精细胞包括精原细胞、初级精母细胞、次 级精母细胞、精子细织结构图
1、附睾管 2、附睾体 3、输精管 4、附睾尾 5、小叶 6、曲精细管 7、睾
丸网（纵隔） 8、睾丸 9、输出管 10、 输出小管 11、附睾头
二、组织构造
浆膜-白膜-睾丸纵隔-中隔-小叶（2~3条曲 精细管）-直精细管-睾丸网-睾丸输出管 （10~20）-附睾头 曲精细管 结缔组织纤维+基膜+生殖上皮 生殖上皮主要由支持细胞和生精细胞组成