苯酚降解菌
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析一、前言苯酚是一种常见的有机化合物，广泛应用于各种工业领域中，但长期的排放和使用会对环境产生严重的污染。
因此，开发一种高效的苯酚降解菌对于环境保护至关重要。
本研究旨在筛选一株好氧反硝化苯酚降解菌，并对其降解特性进行分析。
二、材料与方法2.1 筛选苯酚菌本实验采用活性污泥为菌源，经过序列分离筛选获得苯酚降解菌。
分离后的菌株进行纯化后，经过16S rDNA序列比对确定其菌种。
2.2 生长条件的优化在不同的培养基和培养条件下，探究苯酚降解菌的最适生长条件，并确定其最适浓度和最适pH值等。
2.3 苯酚降解试验将苯酚降解菌接入含有苯酚的培养基中，分别在不同时间段内收集样品，使用高效液相色谱（HPLC）检测降解产物。
2.4 剖析苯酚降解代谢途径通过GC-MS分析降解菌代谢苯酚的代谢产物，分析苯酚降解代谢途径。
三、结果分析经过序列分析和比对，鉴定出本次筛选获得的菌株为一株好氧反硝化菌，归属于福克斯氏菌属。
本次实验结果显示，最适生长温度为30℃，最适pH值为7.5，最适浓度为250mg/L。
本次实验结果显示，在48小时内，苯酚的降解率可达到85%，降解产物主要为苯酚羟基化物。
GC-MS分析结果显示，菌株代谢苯酚主要通过羟基化、甲基化、环化等途径进行，其中苯酚加氧羟基化产物的比例最高。
四、结论本研究成功筛选出一株好氧反硝化苯酚降解菌，其最适生长条件为30℃，pH值为7.5，浓度为250mg/L。
在48小时内，苯酚降解率达到了85%，代谢途径主要为羟基化、甲基化、环化等。
本研究的结果对于苯酚的治理与处理具有重要的实践意义。
苯酚降解细菌实验报告
苯酚降解细菌实验报告引言苯酚是一种有机溶剂和消毒剂，在工业生产和日常生活中广泛使用。
然而，由于其具有较强的毒性和对环境的潜在危害，苯酚的降解成为了一个重要的研究领域。
本实验旨在从自然环境中分离得到能够降解苯酚的细菌，并对其降解效果进行评估。
实验方法物质及设备- 实验材料：含有苯酚的培养基、蒸馏水、苯酚溶液- 实验仪器：培养皿、移液管、恒温振荡器、烧杯、离心机实验步骤1. 从自然环境中采集土壤、水样品。
2. 将土壤、水样品分别加入含有苯酚的培养基中。
3. 分别在不同温度下（比如25、37）进行恒温振荡培养，培养时间根据实验需求确定。
4. 取样品进行稀释，并分别接种在含有苯酚的琼脂培养基上。
5. 利用平板计数法，计算出细菌的菌落数目。
6. 采用高效液相色谱法检测苯酚的含量。
7. 进一步筛选表现出较强降解能力的细菌，进行进一步鉴定。
实验结果细菌菌落数目在实验过程中，我们成功分离到了一株对苯酚具有较强降解能力的细菌。
经过平板计数法的计算，其细菌菌落数目为1.2x10^6 CFU/ml。
苯酚的降解效果我们利用高效液相色谱法对苯酚的降解情况进行了检测。
实验结果表明，在细菌作用下，苯酚的降解速率较快。
在48小时内，苯酚的浓度从初始浓度的100 mg/L 降至5 mg/L，降解率达到了95%以上。
数据分析与讨论细菌的降解机制细菌通过代谢苯酚的酶系将苯酚降解为无机化合物，并利用其作为碳源和能源。
该细菌可能通过以下途径降解苯酚：1. 将苯酚通过羟化作用转化为苯酚羟化物；2. 苯酚羟化物经进一步代谢，生成苯甲酸、邻苯酚等化合物；3. 经过一系列代谢反应，最终生成无机化合物，如水和二氧化碳。
细菌的应用前景本实验分离得到的对苯酚具有降解能力的细菌，拥有较高的降解效率和广泛的适应性。
这些细菌可应用于苯酚的处理和环境修复，对于解决苯酚污染问题具有良好的应用前景。
结论通过本次实验，我们成功地分离出具有苯酚降解能力的细菌，并对其降解效果进行了评估。
苯酚降解菌TX1的分离鉴定及其降解特性
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苯 酚降解 菌 Ｔ 的分 离鉴 定及其 降解特性 Ｘ１
邱凌峰
苯酚降解菌 Ｔ 的分离鉴定及其降解特性 Ｘ １
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某种苯酚降解细菌的分离,纯化,鉴定
某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定一、引言近年来，环境污染问题日益突出，其中有机污染物的排放成为了一个备受关注的话题。
苯酚作为一种有机化合物，其在工业生产和生活中被广泛使用，但是其排放也给环境造成了不小的压力。
寻找一种能够高效降解苯酚的细菌成为了当下研究的热点之一。
本文将围绕某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定展开讨论。
二、苯酚降解细菌的分离1. 采样地点选择在开始分离苯酚降解细菌之前，首先需要明确采样地点的选择。
一般来说，苯酚的排放源比较集中，因此我们可以选择一些工业废水排放口、化工厂周围土壤和水体等地点进行采样。
2. 细菌分离方法经过采样后，我们可以利用稀释涂布法将采样的土壤或水样涂布在琼脂平板上，然后在适宜的温度和培养基条件下进行培养。
通过分离光圈和纯化培养，我们可以获得一系列有苯酚降解能力的细菌菌落。
三、苯酚降解细菌的纯化1. 选优菌落的鉴定在得到一系列有苯酚降解能力的细菌菌落之后，我们需要通过形态学、生理生化特性等手段对细菌进行初步鉴定，筛选出表现最佳的细菌进行后续的纯化培养。
2. 纯化培养方法对选优细菌进行纯化培养可以采用多次转接法，即将单一细菌菌落进行二次以上的转接，以获得单一细菌培养物。
四、苯酚降解细菌的鉴定1. 生化鉴定利用生化试剂对细菌进行生化反应鉴定，例如利用氧化酶试剂对细菌进行氧化酶试验，利用酚红素试剂对细菌进行酚氧化酶试验等，从而初步判断细菌的代谢特性。
2. 分子生物学鉴定通过16S rRNA基因测序鉴定细菌的亲缘关系，确定其属种级别的分类位置。
五、个人观点和总结苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定是一项具有挑战性的工作，需要从多个角度进行综合分析和判断。
通过本文的探讨，我们不仅仅了解了苯酚降解细菌的基本分离和纯化方法，还深入了解了细菌鉴定和分类的相关技术。
希望通过这些工作，能够为环境污染治理和资源开发提供一些有益的参考和借鉴。
苯酚是一种常见的工业化合物，在工业生产和生活中被广泛使用。
苯酚降解菌MW-1的分离及其降解特性研究
苯酚降解菌ＭＷ－1的分离及其降解特性研究摘要：用以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐驯化液对沈阳某煤气厂土壤进行驯化培养。
从中分离筛选到1株苯酚降解菌。
编号为MW-1。
试菌株最高可耐受1600苯酚，其降解性能研究表明：该菌具有较强的苯酚降解能力。
在30。
C，pH5.5—7.5。
装液量为60mL，接种量20％，摇床振荡速度120 r／min的每件下，振荡培养6 h后可使400=e,／L的苯酚降解率逮80％以上。
虽然葡萄糖对该菌体的生长及降解苯酚均有一定的抑制作用。
但有葡萄糖(600 me／L)存在的情况下，该菌对苯酚的降解率仍接近60％。
这对处理含有其它碳源的含酚度水具有一定的意义。
关键词：苯酚；苯酚降解菌；特性试验文献标识码：A苯酚是焦化、造纸、石油、塑料、纺织、制药等工业废水中的主要污染物，也是生物降解多种人工合成化合物如杀虫剂时产生的一种中间代谢物。
大量酚类物质及其衍生物在土壤和水体中的排放和积累导致了生态环境的日趋恶化，许多国家已将其列入环境优先控制污染物的黑名单中。
近年来，国内外在苯酚生物降解方面进行了广泛的研究，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物有细菌、酵母菌等。
利用培养优势菌群的微生物法降解酚类化合物因其投资少、处理效率高、运行成本低、无二次污染等优点而得到越来越广泛的应用。
本试验从沈阳某废弃煤气厂土壤中分离筛选到一株高效苯酚降解菌，并对其降解特性进行了研究，旨在找到对酚类化合物具有高效降解能力的优势菌株，为今后的进一步研究及含酚废水的生物处理奠定基础。
1材料与方法1.1菌种的来源沈阳某废弃煤气厂土壤1.2培养基驯化培养液：为无机盐溶液中添加一定浓度的苯酚配制而成。
各种无机盐的含量为(g／L)：NaO0.2；NH4.N03 1.0。
分离及保存培养基：为含200 m#L儿苯酚的牛肉膏蛋白胨固体培养基。
1.3苯酚降解菌的驯化、筛选与分离取一定量的菌源土壤加入到苯酚浓度为300mv／L的驯化培养液中,室温通气富集培养，定时取样测定苯酚浓度，至苯酚完全降解后，再加入新的以苯酚为唯一碳源的驯化培养液进行驯化培养。
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究摘要从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，初步确定为假单胞菌属（Pseudomonas）；该菌株能在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基中生长；可以在20～40℃、pH值5.0～9.0范围内较好生长；降解苯酚最适温度为35℃，最适pH 值为7.0，最大降解率达到89％。
完全降解无机盐培养基中500mg/L、1 000mg/L、1 200mg/L的苯酚分别需要60h、72h、108h。
关键词苯酚；生物降解；假单胞菌属苯酚是树脂制造、炼油、焦碳、染料、纺织、农药和医药生产等工业废水中的主要污染物[1-2]，在水体中，5～25mg/L的苯酚即可对鱼类的生存构成威胁[3]。
被美国环保署列入优先控制污染物和65种有毒污染物名单，也是我国优先控制污染物之一[4]。
因此，含酚工业废水的治理在环保中具有重大的意义。
除了传统的理化方法外，用微生物降解苯酚的方法对环境无害且成本低廉，因而在苯酚污染治理中起了越来越重要的作用[5]。
但是，目前生物处理技术只限于处理低浓度的含酚废水，而高浓度含酚废水具有污染物浓度高、可生化性差等特点，制约了这一技术在实际中的应用。
本实验从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，并对其降解特性进行了研究。
1 材料与方法1.1 培养基无机盐培养液[7]（g/L）：(NH4NO3 1.0，CaCl2 0.1，K2HPO4 0.5g，KH2PO4 0.5，MgSO4·7H2O 0.5，NaCl 1.0，定容到1 000 mL，pH值7.0～7.2，固体培养基中加入1.5％～1.8％的琼脂，按实际需要加入相应浓度的苯酚。
1.2 高效降解细菌的筛选和驯化从某农药厂废水处理活性污泥中采集污泥样品，称取5.0g污泥置于预先灭菌的100mL苯酚浓度为500mg/L的无机盐培养液中，30℃、150r/min振荡培养，到培养液浑浊后，按1％接种量转接到苯酚浓度为1 000 mg/L的无机盐培养液中，继续振荡培养。
苯酚降解菌的固定化及其降解特性的研究
１ ２ 方 法 ．
ｆ
１ ２ １ 细菌 的培 养 ．． 将 菌株 接种 到牛 肉膏蛋 白胨培 养 基 中 ， ３ ％ 的 在 ０ 恒 温培 养箱 中活化 ７ ， ２ｈ 然后 从 驯 化 的菌 落 中挑 取适 合 的菌 落 接 种 到 牛 肉 膏 蛋 白胨 液 体 培 养 基 中，于 ３ ℃ 、 ５ ｍｉ 摇 床 培 养 ２ 。将 菌 悬 液接 种 至 ０ １ ０ｒ・ ｎ ４ｈ 新鲜 的牛 肉膏 蛋 白胨液体 培养 基 ， 相 同 的条件 下 培 在 养 １ ， 到对 数生 长期 的菌体 。 ２ｈ 得
摘
要 ｉ 海 藻 酸钠 为 载 体 ， 苯 酚 降 解 菌 进 行 细 胞 固定 化 ， 对 其 降 解 特 性 进 行 了研 究 。 通 过 单 因 素 实验 确 定 较 以 对 并
佳 的 固定 化 条 件 为 ： 藻 酸钠 质 量 浓度 ３ ０ 、 ａ １ 量 浓 度 ４ ０ 、 菌 体 量 ０ ４ｇ ｌ 海 ． Ｃ Ｃ 质 ． 湿 ． ／ Ｏ ｍＬ海 藻 酸钠 溶 液 ； 固定 化 细 胞
Ｎａ １ ， 酚 ０ ３ｇ 蒸 馏 水 １Ｉ， Ｈ 值 自然 。 Ｃ ｇ 苯 ５ ． ， ｐ
苯酚降解菌的筛选及其降解特性初探
Ｖ１７ 。 ｏ２ Ｎ． ． ４
Ａ ｇ２ １ ｕ．０ １
苯 酚 降解 菌 的 筛 选 及 其 降解 特 性 初 探
周倩倩 ， 丁 丛 ， 志平 ， 王 蔡伟 民
（ 上海交通大学 环境科 学与工程学 院 ， 上海 ２ ０４ ） ０ ２ ０
摘
要： 为深入 了解好氧颗粒污泥降解苯酚的 内在机 制 ， 用苯酚选择性培养基从 颗粒污泥 中筛选出 采
关键词 ： 生物 降解 ； 热带假 丝酵母 ； 苯酚 ； 降解特性
中图分 类号 ： １２ Ｘ ７ 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ：６２— ９ ６ ２ １ ）４— ５４— ６ １７ ０ ４ （０ １ ０ ０ ４ ０
பைடு நூலகம்
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｏ ｅ ｏ － ｅ ｒ ｄｉ ｇ ｓｒ ｉ ｎ ｒ ｌ ｉ ｒ ｓ ｌ ｔｏ ｆｐｈ ｎ ｌｄ ｇ ａ ｎ ｔ ａ ｎ ａ ｄ ｐ ｅｉ ｎａ ｙ ｍ
第２卷 第４ ７ 期
２ １ 年８月 ０ １
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 （自然科 学版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＨ ｒ ｉ ｎｖｒｉ ｆ ｏ ｏ ｒ ａ ｏ ａ ｂｎ Ｕ ｉｅｓ ｙｏ ｍｍｅｃ Ｎａｕ ａ Ｓ ｉｎ ｅ ｄｔ ｎ ｔ Ｃ ｒｅ（ ｔｒｌ ｃ ｃｓＥ ｉｏ ） ｅ ｉ
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苯酚降解菌2,3-邻苯二酚双加氧酶基因克隆和序列分析一．摘要：环境中的酚污染主要指酚类化合物对水体的污染，通常含酚废水中又以苯酚和甲酚的含量最高。
目前环境监测常以苯酚和甲酚等挥发性酚作为污染指标。
苯酚广泛存在于石油、化工、煤气、焦化、钢铁及酚类生产厂排放的废水中。
含酚废水的排放导致水源污染,毒死鱼虾,危害农作物,并严重威胁人类的健康,在我国水污染控制中已被列为重点解决的有害废水之一。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数微生物所分解。
在油田地层水中分离出苯酚降解菌BF80，并且从BF80中克隆出编码2，3-邻苯二酚双加氧酶(参与苯酚降解所必须的一种酶)的基因序列；采用基因克隆的策略是通过PCR进行片段克隆，并用UNIQ-10柱形DNA 回收试剂盒回收产物，采用NCBI BLAST序列分析表明该基因片段长1207bp,序列比较分析表明该基因片段与2-苯酚羟化酶A相似度达88%，氨基酸序列分析表明其与2,3-邻苯二酚双加氧酶相似度达96%。
本实验研究编码降解苯酚的2,3-邻苯二酚双加氧酶的基因克隆及序列分析，为构建高效降解苯酚的基因工程菌奠定了基础。
Phenol degrading bacteria 2 - phenol hydroxylase gene sequence analysisAbstract:Phenol pollution in the environment mainly refers to phenolic compounds on water pollution, waste water containing phenol is usually turned around the highest levels of phenol and cresol. Often present environmental monitoring such as phenol and cresol Phenol as pollution indicators. Phenol widespread in the petroleum, chemical, gas, coke, steel and phenolic wastewater plant emissions. Phenolic wastewater emissions of water pollution, poisoned fish, damage crops, and a serious threat to human health, water pollution control in China has been a key to solve one of the harmful waste. The toxicity of phenol organics still only a small number of micro-organisms, their decomposition.In oilfield water of phenol degrading bacteria isolated from BF80, and BF80 was cloned from the 2,3 - catechol dioxygenase (involved in phenol degradation of an enzyme necessary) of the gene sequence; using gene cloning strategy were cloned by PCR, with UNIQ-10 column DNA extraction kit recycling products, using NCBI BLAST sequence analysis showed that the gene fragment was 1207bp, Sequence analysis showed that the gene fragment and 2 - A similarity to phenol hydroxylase 88% amino acid sequence analysis showed that with 2,3 - catechol dioxygenase similarity of 96%. This study coded degradation of phenol 2,3 Catechol Dioxygenase Gene Cloning and sequence analysis, in order to build efficient genetic engineering of bacteria degrading phenol basis关键词：苯酚苯酚降解菌基因克隆基因序列分析二、前言苯酚俗名石炭酸，无色结晶或结晶熔块，具有特殊气味（与浆糊的味道相似）。
置露空气中或日光下被氧化逐渐变成粉红色至红色，在潮湿空气中，吸湿后，由结晶变成液体。
酸性极弱（弱于Ｈ２ＣＯ３），有特臭，有毒，有强腐蚀性。
环境中的酚污染主要指酚类化合物对水体的污染，含酚废水是当今世界上危害大、污染范围广的工业废水之一，是环境中水污染的重要来源。
在许多工业领域诸如煤气、焦化、炼油、冶金、机械制造、玻璃、石油化工、木材纤维、化学有机合成工业、朔料、医药、农药、油漆等工业排出的废水中均含有酚。
这些废水若不经过处理，直接排放、灌溉农田则可污染大气、水、土壤和食品。
目前对含酚废水的处理方法主要以下五种，一、吸附法，利用一些多孔吸附剂较高的比表面积表现出的较强的吸附性能将废水中的酚类物质吸附,吸附剂吸附饱和后可再生使用,酚类物质也可以回收利用。
常用的吸附剂主要有活性炭、磺化煤、大孔吸附树脂及有机合成吸附剂等。
此种方法的最大优点是设备简单、操作方便、净化效率高、吸附量大及吸附选择性高等。
活性炭吸附虽然吸附量大,但再生困难,因而其使用逐渐不为人们看好。
磺化煤的吸附容量较小，处理后废水中含酚量远达不到排放标准，需进行二级处理。
所以活性炭和磺化煤在处理高浓度含酚废水时受到了一定的限制。
二、萃取法，萃取法主要是利用难溶于水的萃取剂与废水接触,使废水中的酚类化合物在从水相转移到溶剂相中,从而达到酚类物质与水分离的目的。
根据目前回收与处理含酚废水的技术水平和经济核算的结果,对于浓度高于1000ｍｇ/Ｌ的高浓度含酚废水,采取溶液萃取工艺,不失为一种经济高效的处理方法。
三、液膜分离技术，液膜分离技术和溶剂萃取过程相似，也是由萃取与反萃取两个过程构成的。
但是在液膜分离过程中，萃取与反萃取是同时进行，一步完成的。
其传质速率明显提高，甚至可以实现溶质从低浓度向高浓度的传递。
四、气提及蒸馏气提法，气提法是根据挥发性酚类化合物与水蒸气形成共沸化合物,四、气提及蒸馏气提法利用酚在两相中的浓度差将酚水分离,从而使水得以净化。
高浓度的含酚废水可用气提法处理,去除率在80%～85%。
此种方法可回收酚,效率高,操作简单,但对不挥发性酚不能使用。
五、生物法，对于高浓度的含酚废水来说，生物法的处理效果不是很好，但是随着生物新技术的发展，近来用生物法处理高浓度含酚废水也有一些报道。
应用包埋法固定化微生物技术处理废水是废水处理的新技木。
经固定化酶和固定化微生物普遍比未固定化的微生物性能好，稳定、降解有机物能力强、耐毒、抗杂菌，耐冲击负荷。
在生物法当中，苯酚降解菌扮演着重要角色，目前国内外有关苯酚降解菌的分离及分离物多样性分析，以及苯酚降解菌的分离鉴定及其苯酚降解特性分析的研究已见诸报道；另外也有对于外界条件对嗜热菌BF80生长及苯酚降解的影响研究，但对参与编码苯酚降解过程的各种酶的基因的研究目前尚少见报道。
苯酚降解菌是一种能有效降解苯酚的微生物目前对该类微生物的种类研究尚不清晰，有报道用富集培养和直接涂平板培养的方法,从含酚废水处理系统的悬浮污泥中分别分离了57株和55株苯酚降解菌（参见文献1）。
蝙蝠80苯酚降解菌，是苯酚降解菌的一种，有研究表明Ca2+和Mg2+对嗜热菌BF80生长有促进作用，二者对嗜热菌BF80的最大苯酚降解率几乎没有影响，但Ca2+降低其降解速率，而Mg2+可提高嗜热菌BF80的苯酚降解速率；0·5%浓度的酵母粉最适合BF80的生长，可使其最大生长量达到1·563（参见文献2-3），本次试验展开对嗜热菌BF80苯酚降解菌研究，获得对编码该菌降解苯酚所需的酶基因的序列和氨基酸序列进行分析，为其对苯酚降解机理提供依据。
三、材料与方法1、嗜热菌BF80由油田地层水中分离得到；2、菌种活化：取BF80菌苔一环于20ml于LB液体培养基中，振荡培养24h，离心分离菌体，用生理盐水洗涤2次，悬于10ml的生理盐水中3、用SDS裂解法大量制备菌株BF80总DNA；4、设计引物：根据GanBank数据课公布的序列设计二对兼并引物一、二（表1）；5、对基因片段进行PCR以获得目的片段；（1）PCR反应体系：PCR反应体系由生工提供的50微升体系：Taq酶（0.25微升），dntp（10mmol/l）,Mg2+（25mmol/l）,boffer（15微升），引物1（1微升），引物2（1微升），去离子水（36.75微升）（2）PCR程序：变性温度95℃；退火温度50℃、30s；复性温度72℃、10min，共30个循环；40℃无限循环；（3）；①PCR产物的检测：用0.9%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物大小及其特异性（结果显示于图1）；②PCR产物回收（UNIQ-10柱形DNA回收试剂盒回收产物）6、将目的片段连接到载体并转化入大肠杆菌（1）以E.coilDH5a作为DNA操作时用的受体菌；（2）感受态细胞的制备①液氮或低温冰箱中取出大肠杆菌DH5a，在LB平板上划线。
37摄氏度过夜至全长出菌落；②挑直径1-3mm的单菌落多个，接种到250ml锥形瓶的SOB培养基培养基不可再多，会影响效率；③在18℃、150-250r/min培养19-50小时（没有冷却的药床可在室温进行），温度不可超过37℃；④OD600约0.4-0.8时培养放在冰水中冷却10min；⑤在4摄氏度、300r/min离心15h,回收菌体；⑥去掉上清后用1/3体积的冷TB溶液悬浮，冷10min；⑦再次离心回收菌体；⑧用1/12.5体积的TB悬液添加最终浓度为7%的DMSO再冷却10min；⑨0.121ml分装，直接在液氮上冻；⑩在液氮或-80℃保存。
（3）用大肠杆菌克隆载体PGEM-T-Easy（载体大小为450bp,含有抗性）（4）连接载体体系由宝生物提供：10微升体系，PMD-19-T 0.5微升，solution2.5微升DNA4.5微升16℃连接过夜。