芥子油苷测定方法
芥子油苷检测
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芥子油苷检测
芥子油苷（Glucosinolate）又称硫代葡萄糖苷、硫苷，是十字花科蔬菜中的一种重要的次生代谢产物，根据侧链基团的不同，可以把硫苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。
硫苷在芥子酶的作用下容易水解产生异硫氰酸醋、硫氰酸醋等不同化合物，这些降解产物具有较强抗菌作用及可通过诱导泛醌还原酶的活性成为致癌物质的阻断剂。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱（HPLC）和液质联用（LC-MS）技术，可高效、精准的检测芥子油苷的含量变化。
此外，迪信泰检测平台还提供其他多种中药成分检测服务，方法成熟，可高效处理大批量样本。
HPLC和LC-MS测定芥子油苷样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. 芥子油苷含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
中药中硫苷化学成分研究进展
中药中硫苷化学成分研究进展摘要：硫代葡萄糖苷（Glucosinolates简称硫苷），也称芥子油苷。
是一种重要的含氮硫阴离子亲水性植物次生代谢产物。
本文主要针对于硫苷的主要化学成分及其药理作用的研究进展进行概述。
关键词：硫苷十字花科化学结构硫苷为次生代谢产物,它们在植物抗昆虫和病原体方面的作用有显著的癌症预防性[1]。
在植物中，硫苷是较稳定的，而且完整的硫苷并没有生物活性。
流行病学和生理学研究均表明十字花科蔬菜中含有硫苷，如饮食十字花科蔬菜可明显降低患癌的机率。
但其在胃肠道细菌酶或内源芥子酶的作用下会水解并且产生多种不同的水解产物组成的糖苷配基、硫酸盐和葡萄糖。
且配基部分是不稳定的，能够重新排列得到异硫氰酸酯（ITC）、腈、硫氰酸盐、吲哚等[2]，异硫氰酸酯盐是迄今为止蔬菜中发现的抗癌效应最好的生物活性物质[3-4]。
目前，对于硫苷的研究已经引起了广大医药、食品、畜牧学等科学家的兴趣。
1.硫代葡萄糖苷的分布硫苷广泛分布于高等植物、红藻类等植物中[5]。
最早发现是1840年从芥菜中分离的硫苷-丙烯基硫苷（Sinigrin），已经被分离鉴定的硫苷大约有120余种。
其中以十字花科植物硫代葡萄糖苷含量最多，主要存在于种子中[6]。
据统计已有11个种属不同的双子叶被子植物含有硫苷[7]，有芸薹科(Cruciferae)、白花菜科（Capparaeae）、多须草科（Tovariaceae）、木犀草科（Resedaeeae）、辣木科（Moringaeceae）、番木瓜科(Caricaceae)、池花科(Limnanthaceae)、旱金莲科(TroPaeolaceae)、环蕊木科（Gyrostemonaceae）、刺茉莉科（Salva doraceae）和大戟科（Euphorbiaceae）。
已发现植物中硫代葡萄糖苷含量最高别脂肪族硫代葡萄糖苷1-67-1415-1819-2021-2223-2829-3132-33H(CH2)n-(n=1-6)CH3(CH2)nC(CH3)(CH2)m-(n=1,2,3;m=0,1,2,3)CH2=CH-(CH2)n-（n=1-3）CH2=C(CH3)(CH2)n-(n=1-2)CH2=C(CH3)(CH2)n-(n=1-2)H(CH2)n(CHOH) (CH2)m-(n=0,1,3;m=1,2,3)CH2OHCH(M) (M=-CH3,-C2H5)MC(OH)(CH3)CH2-(M=-CH3,-C2H5)烷基(直链)硫代葡萄糖苷烷基(支链)硫代葡萄糖苷烯基硫代葡萄糖苷烯基硫代葡萄糖苷烯基硫代葡萄糖苷羟基烷基硫代葡萄糖苷Glucocapparin(n=1)Glucoputranivin(n=0,m=0)Glucocochlearin(n=1,m=0)Sinigrin(n=1)Gluconapin(n=2)Glucobras-sicanapin(n=3)芳香族硫代葡萄糖3435-3839-4748-5657585960-6364-6566-67686970-7879-83CH3(CH)(CHOH)4(CH2)2-CH2=CH-OH-(CH2)n-(n=1-2)CH3-S-(CH2)n- (n=2-11)CH3-SO-(CH2)n-(n=3-11)CH3-SO2-(CH2)n-(n=3)CH3-SO-CH=CH-CH2-CH2-CH3-SO-CH2-CH-CH=-CH2-CH3S(CH2)CO(CH2)2- (n=3-5)CH3SO(CH2)nCHOH(CH2)2-(n=2-3)CH3SO2(CH2)n CHOH(CH2)2-(n=2-3)CH3(CH2)4O(CH2)2CH3CH3-(CH2)2CH(OH)(CH2)2SO2CH3CH3SO2(CH2)nCH2-(n=3-6/8-10)C6H5(CH2)n-(n=0-4)HOC6O4CH2-(OH-邻、间、对）CH3O6H4CH2-(CH3O为邻、对、间位)C6H5CH2OHCH2-3,4-(HO)2-C6H3CH2-3,4-(CH3O)2-C6H3CH2-P-CH3O-C6H4CHOHCH22(R)C6H5CHOHCH2-4,5,6,7-四羟基癸基硫糖苷羟基烯基硫代葡萄糖苷甲硫基烷基硫苷甲基亚砜基硫苷3-甲基亚砜基丙基硫苷4-甲基亚砜基-3-烯丁基硫苷4-甲硫基-4-丁烯基硫苷4-甲硫基-3-丁烯基硫苷甲硫基羰基烷基硫代葡萄糖苷羟基甲亚砜基烷基硫代葡萄糖苷羰基甲亚砜基烷基硫代葡萄糖苷羰基甲磺酰基烷基硫代葡萄糖苷5-氧代辛基硫苷3-羟基-5-戊基硫苷苄基烷基硫代葡萄糖苷羟基苄基硫代葡萄糖苷甲氧基苄基硫代葡萄糖苷2-羟基-2-苯基乙基硫代葡萄糖苷南葶苈苷3,4-二羟基苄基硫代葡萄糖苷3,4-二甲氧基苄基硫代葡萄糖苷2-羟基-2-对甲氧苯基乙基硫代葡萄糖苷2-(R)-2-羟基-2-苯基乙基硫代葡萄糖苷3,4,5-三甲氧基苄基已基硫苷Progoitrin(n=1)Gluconapoloiferin(n=2)Glucoiberverin(n=3)Glucoerucin(n=4)Glucoilberin(n=3)Glucoraphanin(n=4)Glucoalyssin(n=5)Glucocheirolin(n=3)GlucoerysolinDehydroerucinglucocappasalinGlucotropaeolin(n=1)Gluconasturtlin(n=2)Glucosinalbin（对）GlucobarbarindescurainosideGlucomatronalin吲哚族硫代葡萄糖苷84-8687-8990919293949596979899-105106107108-1091101111123,4,5-(CH3O)2-C6H3CH2-P-CH3O-C6H4CHOHCH2-P-CH3O-C6H4CH(CH3)2CH2-C6H5COO(CH2)n-(n=1-6)C6H5COOCH2CH(CH3)-C6H5COOCH2CH(C2H5)-(R1=R2=H)(R1=OCH;R2=H)(R1=H;R2=OH)(R1=H;R2=OCH3)(R1=SO3;R2=H)2-羟基-2-对甲氧苯基乙基硫苷2,2-二甲基-2-对甲氧苯基乙基硫苷苯甲酸基烷基硫代葡萄糖苷1-甲基-苯甲酸基乙基硫代葡萄糖苷1-乙基-苯甲酸基乙基硫代葡萄糖苷苄基硫代葡萄糖苷(邻与对)4-(4-O乙酞-a-L-鼠李糖基)苄基硫代葡萄搪昔2-α-L-阿拉伯糖基-2-苯基乙基硫苔4-甲亚磺酞-3-丁烯基硫代-6-(3,5,-二甲氧基-4,-羟基肉桂酞)葡萄糖昔吲哚-3-甲基硫代葡萄糖苷1-甲氧基吲哚-3-甲基硫苷4-羟基吲哚-3-甲基硫苷4-甲氧基吲哚-3-甲基硫苷N-磺酸基吲哚-3-甲基硫苷GlucobarbarinGlucomalcomiin(n=3)GlucobenzosisymbrinGlucobenzsisaustricinGlucobrassicinNeoglucobrassicin4-hydroxygluco-brassicinN4-Methoxygluco-brassicinSulfogluco-brassicin113 114 115 116 117 118 11991号化合物结构式 107-111号化合物结构式吲哚类化合物结构式3.硫代葡萄糖苷的合成硫苷的合成方式主要有两种，即生物合成与化学合成。
芥子油苷测定方法.
高效液相色谱对芥子油苷的提取和分离I 准备阶段：1. 水浴锅设置80℃2.配制两瓶70%的甲醇，其中一瓶置于水浴锅中温浴。
3.5mM苄基芥子油苷.2.33mg/ml4.0.5M醋酸盐（PH=5）[30mlHAC，960ml H2O，加10-20g NaOH 粉末，调至PH=5]5.20mM的醋酸盐，PH=5：将4中的稀释25倍6.DEAE sephadex A-25：称取3g 树脂，加90ml 0.5M 醋酸盐（PH=5）室温过夜溶解。
7.硫酸酯酶：15mg溶解于6ml 20mM 醋酸钠中，PH=5（16100uM/hour/g）II 芥子油提取1. 取新鲜莲座叶，鲜重5-10mg2. 放入1.5mlEP管中，迅速放入液氮。
3. 研磨成粉末后并加入1ml 预热的70%的甲醇。
4. 加入50ul 5mM 的苄基芥子油苷5. 盖好盖子漩涡震荡置于冰上，剩下的样品重复步骤3-4。
6. 所有的样品置于80℃10min。
7. 4000rpm，10min。
8. 将上清液转移至1.5 的离心管。
9. 用预热的甲醇重新提取两次，收集所有的上清液至4ml，-20℃保存。
III 芥子油苷的脱硫纯化1. 搅拌DEAE sephadex A-25 树脂成溶液，用1ml的移液器取1ml 加入BioRad 管中，让其沉淀。
2. 用5ml 的灭菌水清洗（禁止干燥）。
3. 加入所有的芥子油苷提取液。
4. 用2ml的70%的甲醇清洗两次，2ml 的灭菌水清洗5次，2ml 20mM 醋酸盐PH=5清洗一次。
5. 加入0.5ml 硫酸酯酶，直至上侧的橡胶管中剩余1-2mm的液相。
IV 脱硫芥子油苷的洗脱1. 用1ml 灭菌水洗脱3次。
2. 浓缩至EP 管中剩余0.5ml 液体V HPLC分离脱硫芥子油苷1. 取60ul 洗脱液于HPLC管中，吸入30ul2. 检测：PDA 190nm-370nm （或者DV229nm和260nm）3. 流速：1ml/min4. 运行梯度：灭菌水（A）和甲醇（B），60minA100%,B0% 2minA to 60%B线性48min，60%B to 100% B 线性3minA 0%，B100% 3minB to 100% A 线性4minVI 芥子油苷的HPLC-MS5. 取60ul 洗脱液加入HPLC管中，吸入6ul6. 检测：质谱，[M+Na+]7. 流速：0.25ml/min8. 运行梯度：混有50uM的醋酸钠灭菌水（A）与甲醇（B），60minA100%,B0% 2minA to 60%B线性40min，60%B to 100% B 线性5minA 0%，B100% 5minB to 100% A 线性8min液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷腊贵晓,方萍,李亚娟,王月1.芥子油苷的提取和纯化称取0. 20 g冻干样品,加入3 mL 70%甲醇(甲醇∶水= 70∶ 30),在70℃的水浴锅中提取10 min,然后4000 r min- 1离心10 min.沉淀再按照上述方法提取2次,合并上述提取液.同时做2个平行.取2 mL提取液流经DEAESephadex A-25萃取柱,待提取液全部流出小柱后,加入200 L硫酸酯酶(0. 1%)溶液.室温反应16 h后用4× 0. 5 mL 超纯水洗脱.洗脱液过0. 45μm微膜,4℃下保存,待HPLC分析.利用2-丙烯基芥子油苷(sinigrin)作为外标进行定量.2.芥子油苷的测定与鉴定测定芥子油苷的主要方法包括气相色谱法测定其降解产物异硫代氰酸盐化合物;高效液相色谱法测定脱硫芥子油苷和完形芥子油苷.对芥子油苷的鉴定一般采用质谱法,包括化学电离、快速原子轰击电离及热喷雾电离等方法.1.超高效液相色谱法测定拟南芥芥子油苷[J]东北农业大学学报，石璐，李梦莎，国静等摘要：将已有的拟南芥芥子油苷高效液相色谱（HPLC）检测方法转换为超高效液相色谱（UPLC）方法，通过条件优化改进，建立拟南芥芥子油苷UPLC检测方法。
芥子油苷名词解释
芥子油苷名词解释
芥子油苷是一种植物产生的含硫化合物，广泛存在于十字花科植物中，如西兰花、花椰菜、卷心菜、芥菜等。
芥子油苷是由葡萄糖与不同的氨基酸结合而成的糖苷，其分子结构中含有一个硫代葡萄糖基和一个或多个氨基酸残基。
在植物中，芥子油苷通常与黑芥子硫苷酸酶共存，当植物组织受到损伤时，黑芥子硫苷酸酶会将芥子油苷水解，生成异硫氰酸酯、硫氰酸酯和腈等活性成分。
这些活性成分具有多种生物活性，如抗菌、抗炎、抗氧化、抗癌等。
此外，芥子油苷还具有调节植物生长、防御害虫和病原体等作用。
由于芥子油苷的生物活性，它在食品和医药领域得到了广泛关注。
在食品工业中，芥子油苷被用于提取芥末油和其他调味品，也被用于生产保健食品和功能性食品。
在医药领域，芥子油苷及其衍生物被用于治疗癌症、心血管疾病、炎症等多种疾病。
需要注意的是，芥子油苷及其衍生物具有一定的毒性，过量摄入可能会对人体造成损害。
因此，在使用芥子油苷及其衍生物时，需要严格控制剂量和使用条件。
植物化学物芥子油苷
对肿瘤的预防和抑制作用
● 流行病学研究表明，十字花科蔬菜能够降低多种癌症的患病 危险。
● 作用机制:
✓ 诱导Ⅱ相致癌物解毒酶：主要机制 GST，QR，NQO1，UGT等 主要由ARE介导， Nrf2 起关键作用
✓ 抑制I相代谢酶——细胞色素P450酶系 ✓ 阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡 ✓ 提高机体免疫功能等
【食物来源】
●广泛存在于十字花科蔬菜中（花椰菜、甘蓝、包心 菜、白菜、芥菜、小萝卜、辣根、水田芥等）
【摄入量】
●人体每日从膳食中摄入约10～50mg ，素食者可高 达100mg 以上。
●生蔬菜中的生物利用率较煮熟的蔬菜高。
【生物学作用】
● 对肿瘤的预防和抑制作用：主要作用 ● 对氧化应激的双向调节作用 ● 抗菌作用 ● 其他作用
感谢聆听
天天学营养
来，促使GS酶解。
非酶解：主要生成异硫氰酸盐和腈类。 肠道内微生物：类似MYR活性,使GS水解成
ITCs。பைடு நூலகம்
ITCs
●GS只有在水解成ITCs后才能体现出活性。
●ITCs具有共同的—N = C = S 结构
● 莱菔硫烷（SFN） ● 苯乙基异硫氰酸盐（PEITC） ●苯甲基异硫氰酸盐 （BITC ） ● 烯丙基异硫氰酸盐（AITC） ● 吲哚-3-甲醇（IC）
对氧化应激的双向调节作用
●抗氧化作用：
✓增加细胞内抗氧化蛋白水平 ✓诱导Ⅱ相酶
●致氧化作用：
✓引起细胞内谷胱甘肽的耗竭 ✓诱导活性氧的产生
抗菌作用
● 抑制细菌：SFN和日本辣根中的AITC，芸苔属中的AITC，西兰花中的ITCs ● 抑制真菌
其他作用
● 调节免疫 ● 抗炎 ● 抑制组蛋白去乙酰化和微管蛋白多聚化 ● 用作食品添加剂 （主要风味物质）
超高效液相色谱法测定拟南芥芥子油苷
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不同干燥方式对白萝卜干制品品质的影响
不同干燥方式对白萝卜干制品品质的影响王鑫;车刚;万霖;刁显琪;李海龙;王敬轩【摘要】为了解不同干燥方式对白萝卜干制品品质和微观结构的影响及变化情况,以新鲜白萝卜为原料,采用振动远红外干燥方式和传统远红外干燥方式对白萝卜进行干燥,研究其对营养成分、复水比、干燥时间、脱水速率、感官品质以及微观结构的影响.结果表明:振动远红外干燥方式干制的白萝卜样品中蛋白质、维生素C、芥子油苷、总糖、脂肪和复水比明显高于传统远红外干燥方式制得的样品;相比于传统远红外干燥方式,干燥时间缩短了0.67 h,脱水速率提高了40.58％;干制品感官品质和微观结构均优于传统远红外干燥方式.研究为远红外干燥方式在白萝卜方面的应用提供理论依据与技术参考.【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》【年(卷),期】2017(029)002【总页数】6页(P58-63)【关键词】白萝卜;远红外;干燥;品质【作者】王鑫;车刚;万霖;刁显琪;李海龙;王敬轩【作者单位】黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学工程学院,大庆163319【正文语种】中文【中图分类】S375白萝卜又叫莱菔、芦菔、土人参等，是根菜类蔬菜的主要品种之一。
从古代至今已有千年历史，在食品和中医药方面都有广泛应用。
白萝卜中含有蛋白质、脂肪、多糖、膳食纤维、芥子油苷、胡萝卜素、维生素C、维生素E、钙、铁、锌等，具有丰富的营养价值和防病保健功能[1-2]。
中医理论认为，该品味辛甘，性凉，入肺胃经，可以治疗或辅助治疗多种疾病，本草纲目称之为“蔬中最有利者”[3]。
近几年来，脱水白萝卜已成为蔬菜产业的重要组成部分，市场前景广阔，需求量大。
已有很多研究者对脱水白萝卜的干燥工艺和生产方法进行了报道。
COI1参与茉莉酸调控拟南芥吲哚族芥子油苷生物合成过程
COI1参与茉莉酸调控拟南芥吲哚族芥子油苷生物合成过程石璐;李梦莎;王丽华;于萍;李楠;国静;阎秀峰【摘要】芥子油苷是一类具有防御作用的植物次生代谢产物,外源激素茉莉酸对吲哚族芥子油苷的合成具有强烈的诱导作用,但茉莉酸调控吲哚族芥子油苷生物合成的分子机制并不清楚.以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)的野生型和coi1-22、coi123两种突变体为研究材料,通过茉莉酸甲酯(MeJA)处理,比较了拟南芥野生型和coi1突变体植株吲哚族芥子油苷含量、吲哚族芥子油苷合成前体色氨酸的生物合成基因(ASA1、TSA1和TSB1)、吲哚族芥子油苷生物合成基因(CYP79 B2、CYP79B3和CYP83B1)及调控基因(MYB34和MYB51)的表达对MeJA的响应差异,由此确定茉莉酸信号通过COI1蛋白调控吲哚族芥子油苷生物合成,即茉莉酸信号通过信号开关COI1蛋白作用于转录因子MYB34和MYB51,进而调控吲哚族芥子油苷合成基因C YP79 B2、C YP79 B3、CYP83B1和前体色氨酸的合成基因ASA1、TSA1、TSB1.并且推断,COI1功能缺失后,茉莉酸信号可能通过其他未知调控因子或调控途径激活MYB34转录因子从而调控下游基因表达.【期刊名称】《生态学报》【年(卷),期】2012(032)017【总页数】7页(P5438-5444)【关键词】茉莉酸;COI1;吲哚族芥子油苷;拟南芥【作者】石璐;李梦莎;王丽华;于萍;李楠;国静;阎秀峰【作者单位】温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035;温州大学生命与环境科学学院,温州325035【正文语种】中文芥子油苷(glucosinolate)是一类含氮、含硫的植物次生代谢产物，主要分布于十字花科植物。
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高效液相色谱对芥子油苷的提取和分离
I 准备阶段：
1. 水浴锅设置80℃
2.配制两瓶70%的甲醇，其中一瓶置于水浴锅中温浴。
3.5mM苄基芥子油苷.2.33mg/ml
4.0.5M醋酸盐（PH=5）[30mlHAC，960ml H2O，加10-20g NaOH 粉末，调至PH=5]
5.20mM的醋酸盐，PH=5：将4中的稀释25倍
6.DEAE sephadex A-25：称取3g 树脂，加90ml 0.5M 醋酸盐（PH=5）室温过夜溶解。
7.硫酸酯酶：15mg溶解于6ml 20mM 醋酸钠中，PH=5（16100uM/hour/g）
II 芥子油提取
1. 取新鲜莲座叶，鲜重5-10mg
2. 放入1.5mlEP管中，迅速放入液氮。
3. 研磨成粉末后并加入1ml 预热的70%的甲醇。
4. 加入50ul 5mM 的苄基芥子油苷
5. 盖好盖子漩涡震荡置于冰上，剩下的样品重复步骤3-4。
6. 所有的样品置于80℃10min。
7. 4000rpm，10min。
8. 将上清液转移至1.5 的离心管。
9. 用预热的甲醇重新提取两次，收集所有的上清液至4ml，-20℃
保存。
III 芥子油苷的脱硫纯化
1. 搅拌DEAE sephadex A-25 树脂成溶液，用1ml的移液器取1ml 加入BioRad 管中，让其沉淀。
2. 用5ml 的灭菌水清洗（禁止干燥）。
3. 加入所有的芥子油苷提取液。
4. 用2ml的70%的甲醇清洗两次，2ml 的灭菌水清洗5次，2ml 20mM 醋酸盐PH=5清洗一次。
5. 加入0.5ml 硫酸酯酶，直至上侧的橡胶管中剩余1-2mm的液相。
IV 脱硫芥子油苷的洗脱
1. 用1ml 灭菌水洗脱3次。
2. 浓缩至EP 管中剩余0.5ml 液体
V HPLC分离脱硫芥子油苷
1. 取60ul 洗脱液于HPLC管中，吸入30ul
2. 检测：PDA 190nm-370nm （或者DV229nm和260nm）
3. 流速：1ml/min
4. 运行梯度：灭菌水（A）和甲醇（B），60min
A100%,B0% 2min
A to 60%B线性48min，60%
B to 100% B 线性3min
A 0%，B100% 3min
B to 100% A 线性4min
VI 芥子油苷的HPLC-MS
5. 取60ul 洗脱液加入HPLC管中，吸入6ul
6. 检测：质谱，[M+Na+]
7. 流速：0.25ml/min
8. 运行梯度：混有50uM的醋酸钠灭菌水（A）与甲醇（B），60min
A100%,B0% 2min
A to 60%B线性40min，60%
B to 100% B 线性5min
A 0%，B100% 5min
B to 100% A 线性8min
液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷
腊贵晓,方萍,李亚娟,王月
1.芥子油苷的提取和纯化
称取0. 20 g冻干样品,加入3 mL 70%甲醇(甲醇∶水= 70∶ 30),在70℃的水浴锅中提取10 min,然后4000 r min- 1离心10 min.沉淀再按照上述方法提取2次,合并上述提取液.同时做2个平行.取2 mL提取液流经DEAESephadex A-25萃取柱,待提取液全部流出小柱后,加入200 L硫酸酯酶(0. 1%)溶液.室温反应16 h后用4× 0. 5 mL 超纯水洗脱.洗脱液过0. 45μm微膜,4℃下保存,待HPLC分析.利用2-丙烯基芥子油苷(sinigrin)作为外标进行定量.
2.芥子油苷的测定与鉴定
测定芥子油苷的主要方法包括气相色谱法测定其降解产物异硫代氰酸盐化合物;高效液相色谱法测定脱硫芥子油苷和完形芥子油苷.对芥子油苷的鉴定一般采用质谱法,包括化学电离、快速原子轰击电离
及热喷雾电离等方法.
1.超高效液相色谱法测定拟南芥芥子油苷[J]东北农业大学学报，石璐，李梦莎，国静等摘要：将已有的拟南芥芥子油苷高效液相色谱（HPLC）检测方法转换为超高效液相色谱（UPLC）方法，通过条件优化改进，建立拟南芥芥子油苷UPLC检测方法。
该方法采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（50 mm×
2.1 mm，1.8 μm），以超纯水和甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速为0.40 mL·min-1，检测波长229 nm，进样量5 μL，内标为苯甲基芥子油苷。
2.芥蓝芥子油苷提取条件优化研究
腊贵晓1，孔海民2，方萍3，杨铁钢1*
摘要:采用正交试验设计，研究了提取温度、提取剂甲醇浓度( V/V) 、提取时间和待测物质与提取液比例( 简称“物液比”) 对芥蓝菜薹中芥子油苷( 总芥子油苷含量、总脂肪族芥子油苷和总吲哚族芥子油苷) 提取效果的影响。
结果表明，物液比和提取温度对总芥子油苷、总脂肪族芥子油苷和总吲哚族芥子油苷提取效果影响显著( P＜0．05) ，而甲醇浓度和提取时间对芥子油苷提取率无显著影响( P＞0．05) 。
综合考虑提取效果和成本，芥蓝中芥子油苷最佳提取条件为75℃，物液比1∶45( g ∶mL) ，甲醇浓度70%，提取时间 5 min。
在该条件下，总芥子油苷提取量为8．31 μmol/g DW，总脂肪族芥子油苷提取总量为7．58 μmol/g DW，总吲哚族脂肪族芥子油苷提取总量为0．73 μmol/g DW。
3.中国甘蓝型油菜硫苷含量及组份分析
李培武1，2，赵永国2，张文2，丁小霞2，杨湄3，汪雪芳3，谢从华1，傅廷栋1 （1）硫苷提取：准确称取0.2000 g 已制备好的样品至离心管中，于75℃水浴中保温杀活1 min，加入2 ml 70%甲醇提取液和200 µl 内标，离心、转移上清液至试管中，再加入2ml 70%甲醇提取并离心，共重复3 次，混合上清液，取2 ml 溶液上醋酸型DEAE-Sephadex A-25 阴离子交换柱，加硫酸酯酶500 µl，于36℃培养箱中酶解20 h 后取出，用1 ml 纯水冲洗，待流干后再用1 ml纯水冲洗，共冲洗3 次，混匀收集的洗脱液，用0.45 µm的微孔滤膜过滤、封口，待上液相色谱仪分析。
（2）高效液相色谱分析：使用美国Waters 公司的液相色谱仪，包括两台高压泵，自动进样器，二极管阵列检测器，色谱柱为Spherisorb C18柱（150 mm×4 mm），流动相为20%乙腈，检测波长229 nm，柱温为30℃，进样量10 µl，所有样品重复2 次，按照国际标准方法进行硫苷分量色谱峰定性。
青花菜：在青花菜芽菜中共发现了7种芥子油苷，3种脂肪类芥子
油苷，S4,S5和T4以及4种“吲哚类芥子油苷”:4OHIM，IM,1IM和4IM.
拟南芥中芥子油苷：
拟南芥：
大白菜：。