敲基因小鼠鼠尾基因鉴定实验报告
p53基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定_乔录新
p53基因敲除⼩⿏的饲养繁殖及鉴定_乔录新第29卷第1期2012年2⽉实验动物科学LABORATORY ANIMAL SCIENCE Vol．29No．1February 2012櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴毷毷毷毷研究·论著p53基因敲除⼩⿏的饲养繁殖及鉴定*乔录新1徐萌1柴梦⾳1乔欣2陈德喜1（1.⾸都医科⼤学附属北京佑安医院，北京100069）（2.⾸都医科⼤学实验动物科学部，北京100069）摘要：⽬的为了繁育和鉴定p53基因敲除⼩⿏，将引进的杂合⼦⼩⿏进⾏饲养繁殖，杂合⼦⽤于继续保种。
⽅法对其幼⿏剪尾提取基因组DNA ，采⽤PCR ⽅法进⾏基因型鉴定。
结果对引进⼩⿏已成功饲养和繁殖，并得到纯合基因缺失型⼩⿏。
结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定⽅法对于基因敲除⼩⿏的获得和保种具有重要的意义。
关键词：p53；基因敲除⼩⿏；PCR 中图分类号：Q95-331⽂献标识码：A⽂章编号：1006－6179（2012）01-0022-03收稿⽇期：2011－07－28*基⾦项⽬：国家⾃然科学基⾦⾯上项⽬（No．30870853）作者简介：乔录新（1985－），⼥，在读硕⼠。
主要研究⽅向：感染性疾病。
E-mail ：qiaolx2006@163．com 徐萌（1983－），⼥，实验员。
主要研究⽅向：感染性疾病。
通信作者：陈德喜。
E-mail ：Dexi09@yahoo．comp53基因是迄今发现与⼈类肿瘤相关性最⾼的基因之⼀，有研究显⽰，⼈类⼤约⼀半的肿瘤发⽣与p53基因异常有关，因此p53基因的相关功能成为当前肿瘤分⼦⽣物学研究的热点［1，2］。
p53蛋⽩介导的细胞凋亡通路是⼈类肿瘤发⽣过程中最常改变的通路。
该通路中p53蛋⽩发挥细胞周期调控和DNA 修复功能，在肿瘤调控机制中发挥着重要的作⽤［3，4］。
⽬前对于此⽅⾯的体外研究⼤多在各种p53基因缺失细胞中进⾏，虽然具有很好的效果，但是在模拟体内环境⽅⾯仍有不⾜，因此，我们于2007年从美国匹斯堡⼤学引进p53基因敲除⼩⿏杂合⼦，在⾸都医科⼤学实验动物部SPF 级动物实验室饲养繁殖，经基因鉴定成功培育p53基因敲除⼩⿏，为深⼊研究肿瘤疾病提供了动物模型。
博士实验小白鼠实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着科学技术的不断发展，动物实验在医学、生物学等领域的研究中发挥着重要作用。
小白鼠作为一种常用的实验动物，其行为特征的研究对于揭示动物心理和行为规律具有重要意义。
本研究旨在通过对小白鼠进行一系列行为实验，探讨其认知、情感及社会行为等方面的发展规律。
二、实验目的1. 了解小白鼠的基本行为特征；2. 探讨小白鼠的认知、情感及社会行为的发展规律；3. 为后续相关研究提供实验数据支持。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（SPF级，雄性，体重20-25g，年龄4-6周）；2. 实验环境：温度（22±2）℃，湿度（50±10）%，光照周期（12h光照/12h黑暗）；3. 实验设备：观察箱、录音设备、视频设备、食物、水等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只；2. 实验设计：（1）认知实验：观察小白鼠对食物的寻找能力、空间记忆能力及视觉辨别能力；（2）情感实验：观察小白鼠对疼痛刺激的反应、情绪变化及社会互动；（3）社会行为实验：观察小白鼠的群体行为、社会等级及亲子关系；3. 数据收集：通过观察箱、录音设备、视频设备等手段记录实验数据；4. 数据分析：采用统计学方法对实验数据进行处理和分析。
五、实验结果1. 认知实验结果：（1）食物寻找能力：实验组小白鼠在寻找食物方面表现出较高的能力，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（2）空间记忆能力：实验组小白鼠在空间记忆方面表现出较好的能力，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（3）视觉辨别能力：实验组小白鼠在视觉辨别方面表现出较高的能力，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. 情感实验结果：（1）疼痛刺激反应：实验组小白鼠对疼痛刺激的反应较为敏感，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（2）情绪变化：实验组小白鼠在情绪变化方面表现出较大的波动，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（3）社会互动：实验组小白鼠在社交互动方面表现出较高的积极性，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
敲基因小鼠鼠尾基因鉴定实验报告
碱法提取小鼠总DNA及基因鉴定：一、实验器材：加样枪（1ml、200ul、20ul、10ul）、枪头（大中小一套）、EP管（20ul、1.5ml、10ml）、试管架、浮标、温度计、胶布、手套、记号笔、锥形瓶、称量匙、冰盒二、实验试剂：A液、B液、引物、mix、双蒸水、三蒸水、琼脂糖、TBE（5x、1x、回收液）、核苷酸染料、Marker三、母液配置：1.10M NaOH: NaOH 40g加双蒸水至90ml，待NaOH完全溶解冷却后定容至100ml2.0.5M EDTA：EDTA.Na2盐18.61g, NaOH 1.5g, 加双蒸水至80ml,逐滴加入10M NaOH至EDTA完全溶解后加双蒸水定容至100ml3.1M TrisHCl（pH8.0）：Tris碱12.1g，加水至70ml，边搅拌边加入浓盐酸4ml，然后边逐滴加入1M HCl边测PH值，直至PH升至8.0（+\-0.05），定容至100ml（pH=8.8的TrisHCl中边加入浓盐酸边测PH值至PH=8.0（+\-0.05）为止）四、实验步骤：1.剪取鼠尾（约芝麻大小）储存于-20度冰箱（-20度冰箱，主要是防止DNA降解，4度不行）2.提取DNA：1)配置工作液——20ml体系A液：50ul 10M NaOH 加双蒸水至20ml8ul 0.5M EDTAB液：800ul 1M TrisHCl（pH8.0）加双蒸水至20ml2)加150ulA液（液体应完全浸没标本），95度水浴锅煮1.5h（将EP管插入浮标中后用胶布缠好防止EP管在加热过程中爆开）3)加150ulB液，混匀（上下颠倒3-5下）4)12000r/min 4度离心5分钟（可储存于-20度冰箱）3.PCR（冰上操作）：P1 0.5ul（P为AC3I，G为AAA）1)配置PCR体系——15ul体系P2 0.5ulMix 7.5ul三蒸水4.5ulDNA 2ul2)加2ul上述离心后的上清液至PCR体系，瞬离3)PCR仪扩增，参数设定：预变性：94度——3min变性：94度——30s退火：55度——30s 30个循环延伸：72度——24s72度——5min4度——∞4.琼脂糖凝胶电泳：1)制胶——2%琼脂糖凝胶配方：总体积（ml）20 30 40 50 60 120琼脂糖（g）0.4 0.6 0.8 1 1.2 2.4TBE 1x（ml）20 30 40 50 60 120Tris-base 13.6gTBE 5x配方：硼酸 6.56gEDTA 0.73g双蒸水up to 250mlEg：50孔大胶的配置：琼脂糖2.4g 微波炉加热5min左右冷却至适温后加染料7.5ulTBE 1x 150ml（需考虑蒸发量）2)加样——Marker 0.5ul，样品8ul（加样前吹打2次，从右向左加样）3)电泳——150V，300mA，20min（加样孔在近负极侧）5.成像分析：Image lab 新建核酸凝胶（第一项）最后一项滤光片拨至中间放置凝胶运行保存图像编辑拍照保存6.结果及分析：1)AAA分子量为700+？2)AC3I分子量为400+？3)AAA型——只出现AAA一条带AC3I型——只出现AC3I一条带双阳型——两条带都出现野生型——AAA型老鼠没出现AAA条带或AC3I型老鼠没出现AC3I条带或双阳型两条带均未出现4)出现浅带的原因？判定为阴性还是阳性？我觉得阴性更多。
基因编辑_鼠实验报告
实验名称：基因编辑鼠模型构建及功能研究实验时间：2023年X月X日至2023年X月X日实验地点：XX大学XX实验室实验人员：XXX、XXX、XXX一、实验背景随着分子生物学和基因编辑技术的快速发展，基因编辑技术在疾病模型构建和基因功能研究中发挥着越来越重要的作用。
本实验旨在通过CRISPR/Cas9技术对小鼠进行基因编辑，构建基因敲除和基因过表达模型，研究特定基因在生理和病理过程中的功能。
二、实验目的1. 利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除和基因过表达小鼠模型。
2. 观察基因敲除和基因过表达小鼠的表型变化。
3. 研究特定基因在生理和病理过程中的功能。
三、实验材料1. 实验动物：SPF级C57BL/6小鼠2. 工具：CRISPR/Cas9系统、电穿孔仪、PCR仪、实时荧光定量PCR仪、Western blot试剂盒等3. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR引物、荧光染料、限制性内切酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶等4. 仪器：生物安全柜、离心机、凝胶成像系统、显微镜等四、实验方法1. 基因编辑载体构建（1）设计特异性引物，针对目标基因设计CRISPR/Cas9系统所需的sgRNA。
（2）合成sgRNA和Cas9模板DNA，构建CRISPR/Cas9系统。
（3）将sgRNA和Cas9模板DNA连接到载体上，构建基因编辑载体。
2. 基因编辑小鼠模型构建（1）将基因编辑载体电穿孔转染到小鼠受精卵中。
（2）将转染后的受精卵移植到假孕母鼠体内。
（3）观察出生小鼠的表型，筛选基因敲除和基因过表达小鼠。
3. 基因敲除和基因过表达小鼠表型观察（1）观察基因敲除和基因过表达小鼠的生长发育、行为、生理指标等。
（2）通过组织学、病理学等方法观察基因敲除和基因过表达小鼠的组织结构变化。
4. 基因功能研究（1）通过实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测基因敲除和基因过表达小鼠的基因表达水平。
（2）通过细胞培养、动物模型等方法研究基因敲除和基因过表达小鼠的生理和病理过程。
Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法
Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法周胜强;罗东;黄素芬;易健;刘柏炎【摘要】Objective To investigate the identification and optimal breeding method of caveolin-1 knockout mice, and provide an ideal animal model for further study of the role of caveolin-1 in cerebral ischemic injury and repair. Meth⁃ods The introduced caveolin-1 gene knockout mice were reared in the SPF laboratory and genomic DNA was extracted from mouse tail tissue by the method of boiling lysis. According to the primer sequences provided by the Jackson Laboratory of America for polymerase chain reaction ( PCR) to detect the genotypes, with the four different ways of mating:caveolin-1 +/ -heterozygote intercrossing, heterozygous and homozygous caveolin-1 -/ -hybrid ( orthogonal and pay) as well as homo-zygous intercrossing. The pregnancy rate, shape characteristics of the filial generation mice and homozygous rate of the pa-rental mice were observed. Results Agarose gel electrophoresis results indicated that the size of molecular weight of the PCR products was about 200 bp and 661 bp, which were consistent with the expected target gene fragment, and identified caveolin-1 gene knockout mice of different genotypes successfully. The results of different mating patterns are basically in a-greement with Mendel rule, and the female and male aveolin-1 -/ -homozygous mice had a certain ability to reproduce, three different genotypes of mice had no significant differences between the shape features. Conclusions PCR can fast and reliably identify the genotypes ofcaveolin-1 knockout mice using genomic DNA through the method of boiling lysis. Combi- ning the breeding methods of intercrossing of caveolin-1 heterozygous mice and intercrossing of caveolin-1 homozygous mice may be a good way to obtain enough homozygous mice and homologous wild type mice in a short period.%目的：探讨小凹蛋白-1（caveolin-1）基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式，为深入研究caveo-lin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。
课题-基因敲除小鼠的pcr鉴定
一、技术介绍与研究进展转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业，催生了数以百计的创新药物和数以千计的优秀文章。
尽管如此，传统技术仍然存在一些难以克服的缺陷，如步骤繁琐、周期漫长、成功率低、费用高昂等，而ZFN和TALEN 等新技术的出现，或有可能将这一局面彻底改变。
二、同源重组技术原理基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为"基因打靶"（gene targeting）或"基因敲除"（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。
同源重组（homologous recombination）定义：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。
在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组，如图1所示：图1.基因敲除鼠制作同源重组原理示意图三、制作流程图2.基因敲除鼠制作过程示意图1. Knockout载体设计与构建根据研究项目具体情况和要求把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 片段都重组到带有标记基因(如neo 基因，TK 基因等)的载体上，成为重组的Knockout载体。
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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鼠尾鉴定操作步骤
小鼠基因鉴定（KO鼠）1．实验原理：小鼠基因鉴定示意图（1）野生型小鼠，无法p出p1p3片段，且p1p2片段相对于KO型的要小。
（2）杂合KO小鼠，有p1p3产物，但p1p2产物有两条带。
（3）纯合KO小鼠，能p出p1p3产物，且p1p2结果片段较大。
注：p1p3600bp左右，p1p21000bp左右2．实验操作步骤（1）剪子鼠尾（脚趾）：2-3mm1酒精灯、剪子、镊子、1.5EP管、EP管板子、marker笔等（2）小鼠DNA提取：1组织消化：将配置好的消化buffer（裂解液）分别加入到，装有小鼠组织的1.5mlEP管内，每管500ul。
然后按1:500的比例加入蛋白酶K（即每支加入1ul）。
混匀后，55℃水浴消化过夜。
2蛋白酶灭活处理：将过夜消化的样品100℃煮沸，5min。
然后25℃，12000g，离心5-10min。
3苯酚氯仿处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入200ul苯酚和氯仿（抽提液）。
将离心好的样品拿出，每管吸出400-450ul上清转移到相应加入苯酚和氯仿的EP管中。
（尽可能多吸，但保证不能吸到下边沉淀，每管体积一样。
）之后用力摇晃2-3min，避免摇晃过程中将标记磨损掉。
然后25℃，12000g，离心10min。
4等体积氯仿处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入400ul氯仿（等体积氯仿）。
将离心好的样品拿出，每管吸出400ul（视情况而定）上层液体转移到相应加入氯仿的EP管中。
（尽可能多吸，但保证不能吸到下层液体及夹层蛋白，可管子斜置，方便吸取。
每管体积一样。
）用力摇晃2-3min，避免摇晃过程中将标记磨损掉。
然后25℃，12000g，离心10min。
5无水乙醇处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入1ml无水乙醇（2.5倍体积无水乙醇）。
将离心好的样品拿出，每管吸出400ul（视情况而定）上层液体转移到相应加入无水乙醇的EP管中。
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碱法提取小鼠总DNA及基因鉴定：
一、实验器材：加样枪（1ml、200ul、20ul、10ul）、枪头（大中小一套）、EP管（20ul、1.5ml、
10ml）、试管架、浮标、温度计、胶布、手套、记号笔、锥形瓶、称量匙、冰盒
二、实验试剂：A液、B液、引物、mix、双蒸水、三蒸水、琼脂糖、TBE（5x、1x、回收液）、
核苷酸染料、Marker
三、母液配置：
1.10M NaOH: NaOH 40g加双蒸水至90ml，待NaOH完全溶解冷却后定容至100ml
2.0.5M EDTA：EDTA.Na2盐18.61g, NaOH 1.5g, 加双蒸水至80ml,逐滴加入10M NaOH
至EDTA完全溶解后加双蒸水定容至100ml
3.1M TrisHCl（pH8.0）：Tris碱12.1g，加水至70ml，边搅拌边加入浓盐酸4ml，然后
边逐滴加入1M HCl边测PH值，直至PH升至8.0（+\-0.05），定容至100ml（pH=8.8
的TrisHCl中边加入浓盐酸边测PH值至PH=8.0（+\-0.05）为止）
四、实验步骤：
1.剪取鼠尾（约芝麻大小）储存于-20度冰箱（-20度冰箱，主要是防止DNA降解，4度不
行）
2.提取DNA：
1)配置工作液——20ml体系A液：50ul 10M NaOH 加双蒸水至20ml
8ul 0.5M EDTA
B液：800ul 1M TrisHCl（pH8.0）加双蒸水至20ml
2)加150ulA液（液体应完全浸没标本），95度水浴锅煮1.5h（将EP管插入浮标
中后用胶布缠好防止EP管在加热过程中爆开）
3)加150ulB液，混匀（上下颠倒3-5下）
4)12000r/min 4度离心5分钟（可储存于-20度冰箱）
3.PCR（冰上操作）：P1 0.5ul（P为AC3I，G为AAA）
1)配置PCR体系——15ul体系P2 0.5ul
Mix 7.5ul
三蒸水4.5ul
DNA 2ul
2)加2ul上述离心后的上清液至PCR体系，瞬离
3)PCR仪扩增，参数设定：预变性：94度——3min
变性：94度——30s
退火：55度——30s 30个循环
延伸：72度——24s
72度——5min
4度——∞
4.琼脂糖凝胶电泳：
1)制胶——2%琼脂糖凝胶配方：
总体积（ml）20 30 40 50 60 120
琼脂糖（g）0.4 0.6 0.8 1 1.2 2.4
TBE 1x（ml）20 30 40 50 60 120
Tris-base 13.6g
TBE 5x配方：硼酸 6.56g
EDTA 0.73g
双蒸水up to 250ml
Eg：50孔大胶的配置：琼脂糖2.4g 微波炉加热5min左右冷却至适温后
加染料7.5ul
TBE 1x 150ml（需考虑蒸发量）
2)加样——Marker 0.5ul，样品8ul（加样前吹打2次，从右向左加样）
3)电泳——150V，300mA，20min（加样孔在近负极侧）
5.成像分析：Image lab 新建核酸凝胶（第一项）最后一项滤光片拨至中间
放置凝胶运行保存图像编辑拍照保存
6.结果及分析：
1)AAA分子量为700+？
2)AC3I分子量为400+？
3)AAA型——只出现AAA一条带
AC3I型——只出现AC3I一条带
双阳型——两条带都出现
野生型——AAA型老鼠没出现AAA条带或AC3I型老鼠没出现AC3I条带
或双阳型两条带均未出现
4)出现浅带的原因？判定为阴性还是阳性？我觉得阴性更多。
可能是上
样量的问题，可能是剪尾太少，还有就是没跑好。
（上样量不够？）
5)出现双浅带的原因？原因类似吧（PCR扩增有问题？）
6)个别条带出现弥散或拖尾的原因？未混匀啦，加样时间太久，还没跑
就弥散啦等等（加样前未混匀？）
7.注意事项：
1)实验开始前，首先打开水浴锅进行加热，至95度时改为恒温，水浴锅中应
加双蒸水，至线上3cm左右，煮的过程中要随时观察温度及是否有EP管爆
开
2)切忌过早拔梳子
3)放置凝胶时需将胶倒过来放置（加样孔向机器内侧）。