基因工程实验报告资料
基因工程转化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解基因工程转化实验的基本原理和方法。
2. 掌握基因工程转化实验的操作步骤和技巧。
3. 通过实验，验证基因转化效果，为后续研究提供基础数据。
二、实验原理基因工程转化实验是将目的基因导入受体细胞的过程。
根据受体细胞的不同，转化方法也有所区别。
本实验采用农杆菌介导转化法，将目的基因导入植物细胞。
三、实验材料1. 受体植物：小麦植株2. 转化质粒：含目的基因的质粒3. 农杆菌：具有转化能力的农杆菌菌株4. 实验试剂：氯化钙、CaCl2溶液、IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）、抗菌素等5. 实验仪器：超净工作台、无菌操作箱、移液器、离心机、培养箱、显微镜等四、实验步骤1. 农杆菌活化与扩大培养（1）将冻存的农杆菌菌株复苏，在含有抗菌素的LB培养基中扩大培养。
（2）将培养好的农杆菌转移到无菌条件下，用移液器吸取适量菌液，加入含有转化质粒的LB培养基中。
（3）将菌液在摇床上振荡培养过夜。
2. 农杆菌转化（1）将小麦叶片进行表面消毒，用无菌移液器吸取适量菌液，滴在叶片表面。
（2）将叶片放入无菌培养皿中，在黑暗条件下共培养3-5天。
3. 农杆菌侵染与再生（1）将共培养后的叶片转移到含有抗菌素的培养基上，进行再生培养。
（2）待再生植株长出后，进行筛选，去除未转化植株。
4. 转化植株PCR检测（1）提取转化植株的总DNA。
（2）设计目的基因的引物，进行PCR扩增。
（3）观察PCR产物，判断转化效果。
五、实验结果与分析1. 农杆菌活化与扩大培养实验中，农杆菌菌株在LB培养基中生长良好，菌液呈均匀浑浊状。
2. 农杆菌转化共培养后，小麦叶片出现明显的不定芽，表明农杆菌已成功侵染植物细胞。
3. 农杆菌侵染与再生再生培养过程中，部分植株长出不定芽，表明农杆菌已成功转化植物细胞。
4. 转化植株PCR检测PCR检测结果显示，部分转化植株扩增出目的基因片段，表明基因转化成功。
六、实验结论本实验采用农杆菌介导转化法，成功将目的基因导入小麦植株。
基因工程实验报告
基因工程实验报告一、实验目的：本实验旨在掌握基因工程的基本操作技能，了解DNA的提取、PCR扩增和基因克隆等基本实验过程，并通过实际操作检测转基因植物的存在。
二、实验原理：1.DNA提取：采用传统的CTAB法提取植物基因组DNA，目的是获得待测植物样品中的基因组DNA。
2.PCR扩增：选用合适的引物，利用PCR技术将待测基因扩增出来。
PCR反应中需要设置阳性对照、阴性对照和试验样品，以确定PCR扩增结果的可靠性。
3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因与质粒载体进行连接，再将重组质粒导入大肠杆菌进行转化培养，最后通过酶切和测序等方法验证目标基因的克隆成功与否。
三、实验步骤：1.DNA提取：将待测植物样品加入CTAB提取缓冲液中，酶解并脱脂植物细胞，通过乙酰酚/氯仿法提取总DNA。
2. PCR扩增：设计合适的引物，进行PCR反应。
反应条件通常为94℃预变性5min，然后循环20-35次，每次循环包括94℃变性30s、56-68℃退火30s、72℃延伸1-2min，最后72℃延伸10min。
3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因进行酶切，并与质粒载体进行连接，然后转化大肠杆菌进行培养。
通过PCR重放大和酶切验证目标基因是否成功克隆。
4.验证目标基因：通过测序等方法对目标基因进行验证，判断基因克隆是否成功。
四、实验结果与分析：1.DNA提取：从待测植物样品中成功提取到总DNA，并进行酶切分析，可见DNA带状条带。
2.PCR扩增：通过PCR扩增，得到了目标基因的特异性条带，并且也验证了阳性对照和阴性对照的准确性。
3.基因克隆：通过酶切和重放大等方法验证了目标基因的成功克隆。
4.验证目标基因：通过测序结果，确认目标基因与已知序列一致，说明基因克隆成功。
五、实验结论：通过本实验，我们掌握了基因工程的基本操作技能，成功进行了DNA提取、PCR扩增和基因克隆等实验过程，并通过测序等方法验证了目标基因的克隆成功。
基因工程实验报告
基因工程实验报告姓名：杜琳颖学号：2017051141 学院：生命科学院专业：生化与分子一、实验目的学习并掌握从目的基因克隆到蛋白质表达的实验流程及原理。
二、实验流程实验一、质粒提取载体DNA提取及酶切鉴定一、实验目的学习质粒的酶切及电泳分析。
二、实验原理质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，具有双链闭环结构的DNA 分子。
它具有自主复制能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
目前，经人工改造的质粒已广泛用作基因工程中目的基因的运载工具——载体。
质粒DNA 的提取是依据质粒DNA 分子较染色体DNA 分子小，且具有超螺旋共价闭合环状的特点，从而将质粒DNA 与大肠杆菌染色体DNA 分离。
现在常用的方法有：碱裂解法、密度梯度离心法、煮沸裂解法等。
实验室普遍采用的碱裂解法具有操作简便、快速、得率高的优点。
其主要原理：利用染色体DNA 与质粒DNA 的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA 的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA 氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=4.8 的乙酸钠将其pH 调到中性时，变性的质粒DNA 又恢复到原来的构型，而染色体DNA 不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA 与大分子RNA、蛋白质-SDS 复合物等一起沉淀下来而被除去。
限制性内切酶可以识别双链DNA 特定位点，并产生特异的切割，形成粘性末端或平末端，这样有利于DNA 片段再连接。
限制性内切酶对环状质粒DNA 有多少切点，酶切后就能产生多少个片段。
因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切点的数目；从片段迁移率的大小可以判断酶切片段大小的差别。
用已知相对分子量DNA 为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA 的相对分子质量。
三、实验材料、仪器及试剂（一）实验材料含载体质粒pET28a的大肠杆菌（二）试剂1、LB 液体培养基2、质粒提取试剂盒(天根生物科技)3、TBE 缓冲液4、点样缓冲液Loading buffer（10×）5、琼脂糖6、NcoⅠ酶，XhoⅠ酶(Takara)7、DNA回收纯化试剂盒（天根生物科技）（三）仪器1、Eppendorf 管、离心管架2、10，50，200，1000 μL 微量加样器3、Eppendorf台式高速离心机4、电泳仪系统5、恒温水浴箱6、凝胶成像仪7、摇床等四、实验步骤（一）质粒提取1、柱平衡步骤：向吸附柱CP3 中（吸附柱放入收集管中）加入500μL 的平衡液BL，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
基因工程实验报告
基因工程实验报告摘要：提取小麦的总的RNA通过RT—PCR扩增出GAPDH截短体基因ｃDNA，ＰＣＲ扩增ｃDNA获得大量目的基因，对目的基因和表达载体p ＧＥＸ４Ｔ－１进行双酶切，通过电泳分离条带胶回收酶切的目的基因和载体，然后载体和目的基因连接构建表达载体，重组载体转入大肠杆菌top10中大量复制目的基因；提取质粒，转入大肠杆菌bl21，通过ＩＰＴＧ诱导目的基因的表达；通过ＳＤＳ染色和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交检验目的蛋白是否表达。
实验流程：小麦幼苗总ＲＮＡ提取ＲＴ＿ＰＣＲ扩增目的基因表达载体构建表达菌株转化（ｔｏｐ１０）从ｔｏｐ１０转入ＢＬ２１诱导表达Ｗｅｓｅｒｎ杂交一．目的基因的获得１．小麦总ｒｎａ的提取（Ｔｒｉｚｏｌ法）１在研钵中加入液氮，再将小麦剪成小片段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的钥匙取１００ｕｌ粉末于已加入１ｍｌ的ｔｒｉｚｏｌ的ＥＰ管中，充分混匀。
２室温放置５ｍｉｎ，然后加入２ｏｏｕｌ的氯仿，剧烈震荡。
３１２０００ｒｐｍ离心１０分钟，取上清于新的ＥＰ管，加入500ul异丙醇，温和颠倒，室温放置10分钟，12000rpm离心10分钟。
4小心弃上清，加入75%乙醇，混匀，4度12000rpm离心5分钟。
5重复46弃上清，室温干燥5-10分钟，用30uldepc溶解rna。
2.rna电泳检测是否提取出rna（10ulrna+1ul buffer）图中出现明显的亮的条带的即表示提取出rna，其中我们提取的rna比较少条带不明显，可能是操作过程中被污染，所以在提取rna是一定要注意防止rna降解，因为空气中随处都是rna酶，所以要带上手套，快速操作，尽量不要暴露在空气中，使用处理过的试管，器材。
3.RT-PCR扩增目的基因cDNA3.1 rna反转录Total RNA 6ulOligo dt primer 1ulH2o 5ul65℃5min,补加下列试剂5×reaction buffer 4ulRibolock rnase inhibitor 1ul10mM dntp mix 2ulRevertaid m-mulv reverse transcripase 1ul42℃ 60min70℃ 5min3.2 PCR扩增目的基因（表达引物扩增 25ul)2×pcr mix 12.5ul 95℃1mincDNA 1ul 95℃10s引物GAPDH1-1 1ul 58℃ 20s 35cycle引物GAPDH1-2 1ul 72℃45sH2O 9.5ul 72℃10min通过图片的条带可以看出pcr扩增的产物；通过RT-PCR获得的目的片段，为连续表达的基因片段，去除了真核基因中的内含子序列，通过重组质粒载体的构建可以直接在宿主大肠杆菌中克隆和表达。
生物基因工程实习报告
随着科学技术的不断发展，生物基因工程作为一门新兴的综合性学科，在我国得到了广泛的应用和发展。
为了更好地了解生物基因工程的理论和实践，提高自己的专业素养，我于2022年7月1日至2022年7月31日在XX生物科技有限公司进行了为期一个月的生物基因工程实习。
二、实习目的1. 深入了解生物基因工程的基本原理和操作技术；2. 掌握实验室基本操作技能，提高实验操作水平；3. 培养团队合作精神和创新能力；4. 为今后从事生物基因工程相关领域的研究和工作打下坚实基础。
三、实习内容1. 实习单位介绍XX生物科技有限公司是一家专注于生物基因工程领域的高新技术企业，主要从事基因测序、基因编辑、基因治疗等方面的研发和应用。
公司拥有先进的实验室设备和技术团队，为我国生物基因工程领域的发展做出了重要贡献。
2. 实习项目（1）基因测序：学习并掌握DNA提取、PCR扩增、Sanger测序等基因测序技术，对样本进行基因测序，分析基因序列信息。
（2）基因编辑：学习CRISPR/Cas9等基因编辑技术，对目标基因进行定点修改，验证基因编辑效果。
（3）基因治疗：了解基因治疗的基本原理和操作流程，参与基因治疗项目的实施。
3. 实习过程（1）第一阶段：学习生物基因工程基本原理和操作技术，熟悉实验室设备。
（2）第二阶段：参与基因测序、基因编辑、基因治疗等项目的具体实施，提高实验操作水平。
（3）第三阶段：总结实习过程中的经验教训，撰写实习报告。
1. 理论知识方面：通过实习，我对生物基因工程的基本原理和操作技术有了更深入的了解，为今后从事相关领域的研究和工作打下了坚实基础。
2. 实践技能方面：在实习过程中，我熟练掌握了DNA提取、PCR扩增、Sanger测序、CRISPR/Cas9等实验操作技能，提高了自己的实验操作水平。
3. 团队合作方面：在实习过程中，我与团队成员共同完成了多个项目，培养了良好的团队合作精神。
4. 创新能力方面：在实习过程中，我积极思考，勇于尝试，提出了一些创新性的想法，为项目的实施提供了有益的建议。
基因工程实验报告
基因工程实验报告引言基因工程是现代生物技术的一个重要分支，通过对生物体基因的修改和重组，可以创造出具有特定功能的生物体。
本次实验旨在探究基因工程在农业、医学等领域的应用，以及可能带来的潜在风险和争议。
实验方法1. 筛选目标基因：首先，我们在实验中选择了对叶绿体功能有重要影响的一个基因作为目标基因。
2. 基因克隆：通过PCR技术，将目标基因从细菌DNA中放大，然后将其插入载体DNA中。
3. 转化目标生物体：将重组的载体DNA转入植物叶片细胞中，借助几丁质体、热激冲击等方法促使基因转化成功。
4. 筛选阳性转化率：通过筛选培养基中的抗性选择制剂，筛选出转化成功的阳性细胞。
5. 验证目标基因的表达：通过PCR扩增和基因芯片技术验证目标基因在转化植物中的表达情况。
实验结果1. 实验结果显示：我们成功将目标基因插入到植物叶片细胞的染色体中，并且获得了一定比率的阳性转化植株。
2. 鉴定转化植株：对转化植株进行证实鉴定，确保目标基因已经整合到植株基因组中，且稳定表达。
3. 表达验证：通过PCR扩增和基因芯片分析，确定目标基因在转化植物中得到了表达，并且表达量较高。
4. 性状鉴定：对转化植物进行生长发育、形态结构、生理生化等方面的综合性状鉴定，结果显示转化植物与野生型无显著差异。
讨论基因工程技术的应用：本次实验展示了基因工程技术在农业生产中的应用前景，通过将具有耐逆性、抗病虫害等功能基因导入植物，可以提高植物的产量和抗逆性。
潜在风险和争议：但是，基因工程也伴随着一系列争议和风险，如转基因植物可能对环境造成影响，转基因食品可能对人体健康产生潜在影响，因此需要严格的监管和评估。
结论通过本次实验，我们成功地验证了基因工程技术的可行性，展示了其在农业和生命科学领域的广阔应用前景。
然而，我们也要看到基因工程技术所带来的潜在风险和争议，需要谨慎评估和监管。
基因工程是一把双刃剑，只有正确使用才能实现其最大的利益。
愿基因工程技术为人类带来更多福祉。
基因工程实验报告
基因工程实验报告基因工程实验报告引言：基因工程是一门前沿的科学领域，通过对生物体的基因进行编辑和改造，已经在医学、农业、环境保护等领域取得了重大突破。
本实验旨在探索基因工程的原理和应用，并通过实验验证其可行性。
实验目的：本实验旨在通过基因工程技术将一种植物的抗虫基因转移到另一种植物中，以增强其抗虫能力。
通过此实验，我们希望验证基因工程在农业领域的潜力，为农作物的抗虫育种提供新的思路和方法。
实验方法：1. 选择目标基因：通过文献调研，我们选择了一种来源于大豆的抗虫基因。
2. 提取基因：使用PCR技术从大豆中提取目标基因的DNA序列。
3. 载体构建：将目标基因插入一个植物表达载体中，以便在目标植物中进行转基因。
4. 转基因：将植物表达载体导入目标植物细胞中，通过生物转化技术将目标基因导入目标植物的基因组中。
5. 筛选转基因植物：通过对转基因植物进行筛选和鉴定，确认是否成功将目标基因转移到目标植物中。
6. 抗虫性测试：将转基因植物和野生型植物分别暴露在虫害环境中，观察并比较它们的抗虫能力。
实验结果：经过实验，我们成功将大豆的抗虫基因转移到了目标植物中。
通过PCR技术和基因测序，我们确认了目标基因已经整合到目标植物的基因组中。
在抗虫性测试中，转基因植物表现出明显的抗虫能力，相比野生型植物，其受虫害程度明显降低。
讨论与分析：本实验结果表明，基因工程技术可以成功地将抗虫基因转移到目标植物中，从而提升其抗虫能力。
这为农作物的抗虫育种提供了新的思路和方法。
通过基因工程，我们可以将不同物种的有益基因导入到目标植物中，从而增强其抗虫性、抗病性等特性。
这对于农业生产的可持续发展和环境保护具有重要意义。
然而，基因工程也面临一些挑战和争议。
一方面，基因工程技术的应用需要谨慎，确保对环境和生态系统的影响可控。
另一方面，基因工程的伦理和道德问题也需要认真思考和讨论。
因此，在推动基因工程技术的发展和应用时，我们需要综合考虑科学、环境和社会的各种因素。
基因工程实验
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五、实验注意事项
1 用微波煮胶时，胶液的量不应超过三角瓶容量的 1/3，否则易溢出
2 煮好的胶应冷却至50℃左右时再倒，以免制胶板变 形，并减少漏胶的机会
加入等体积的氯仿， 12000rpm，离心5分钟，取上清
加入1/10体积的3MNaAc，加2倍体积的预冷的无水乙 醇，混匀。
置于-70℃冰箱约10min以上或者-20℃冰箱30min至 数个小时
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12000rpm离心15分钟（4℃），倒掉酒精，离心几秒，
用移液枪尽可能除去酒精
用0.5ml70 %酒精洗DNA沉淀一次，离心2分钟，倒掉 酒精
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当加入中性缓冲液调和时，变性的质粒 DNA又恢复到原来的构型，而染色体DNA 不能复性，它们之间交联形成不溶性网状 结构，并与细胞碎片、蛋白质、SDS等结 合沉淀下来。
通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA 及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA 及小分子量的RNA则留在上清液中。混杂 的RNA可用RNaseA消除。再用酚／氯仿 处理，可除残留蛋白质
真核生物的基因组DNA为双螺旋结构，在在碱性溶 液中，双链DNA氢键断裂，双螺旋结构遭破坏而发生 变形，而基因组DNA分子量相对较大，在碱性PH条 件下其线性的大分子量基因组DNA不能复性，而形成 缠连的网状结构与蛋白质等共沉淀。
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2 异丙醇和无水乙醇对核酸沉淀的优缺点 答：异丙醇和乙醇都能与与任意比例的水相混合。异 丙醇比较疏水，能很更好地沉淀核酸，乙醇可以去 盐，它比异丙醇更亲水，所以能去掉一些盐离子。 异丙醇沉淀量多，但杂质也多，增加了后续实 验风险。其优点为：所需容积小且速度快，适用于 浓度低，而体积大的DNA样品的沉淀。一般不需要 在低温条件下长时间放置。缺点为：易使盐类（如 NaCl、蔗糖）与DNA共沉淀；在DNA沉淀中异丙 醇难以挥发除去 乙醇是沉淀DNA乙醇是首选的有机溶剂，对盐 类沉淀少，DNA沉淀中所含的衡量乙醇易蒸发去处， 不影响以后的实验。在适当的盐浓度下，2倍样品 容积的95％乙醇可有效沉淀DNA。其缺点是总体积 较大。需在-20放置很长时间，30分钟-1小时，同 时DNA微溶于乙醇，使用乙醇沉淀会使部分DNA溶 解损失
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实验报告实验项目名称：基因工程综合实验所属课程名称：基因工程原理班级：12生物工程3班学号：201230620312姓名：李杰锋指导老师：徐学锋目录0.摘要 (1)1.前言 (1)2.实验材料和仪器 (2)2.1 实验材料 (2)2.2 实验仪器 (2)3.实验试剂 (2)3.1DNA提取所需试剂 (2)3.2 PCR实验所需试剂 (2)3.3 双酶切实验所需试剂 (2)4.实验步骤 (3)4.1 质粒DNA提取 (3)4.2 聚合酶链式反应（PCR） (3)4.3 质粒DNA的双酶切分析 (4)4.4 琼脂糖凝胶制备 (4)5.实验结果与分析 (5)5.1质粒DNA提取所得凝胶电泳结果 (5)5.2 PCR扩增实验结果 (5)5.3质粒DNA的双酶切分析结果 (6)摘要：本实验包括质粒DNA的提取、DNA的凝胶电泳、质粒DNA中靶基因的酶切分析及质粒DNA中重组进的靶DNA序列的PCR扩增。
通过本综合实验，进一步理解质粒DNA的提取原理、凝胶电泳中DNA分离的机理、限制性内切酶的工作原理及PCR是如何实现DNA扩增的，也掌握了DNA的提取技术、凝胶电泳技术、DNA酶切分析技术及靶基因的体外快速扩增技术，进而了解实验中出现的现象并学会分析与解决实验中出现的有关问题。
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA或RNA的地方。
关键词：凝胶电泳限制线内切酶DNA质粒1 前言本次实验对象为含有重组了1kb DNA片段的PET32.a表达质粒。
该表达质粒中长度约6kb。
首先采用离心破碎法破碎细胞，再使用碱裂解法提取质粒DNA。
最后通过各种化学抽提纯化质粒DNA，最后得到纯化后的DNA质粒作为之后实验的材料。
在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液时，变性质粒DNA 又恢复到原来的够型；而线性的大分子量细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶物，通过离心沉淀可被除去，而质粒DNA及小分子量的RNA则留在上清液中。
混杂的RNA可用RNaseA酶消除，再用酚/氯仿处理，可除去残留的蛋白质，达到纯化质粒DNA的目的。
PCR是根据DNA双螺旋结构在变性温度下解链为单链DNA，在退火温度下加入反应体系的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA特异结合，然后在延伸温度下，通过DNA聚合酶的聚合作用，不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则，由引物引导合成出与模板DNA互补的新链，实现DNA的扩增的技术。
本次实验我们将以纯化后的质粒DNA作实验材料，在预先设计好引物后用PCR技术扩增目的片段。
利用提取的质粒DNA作目的序列的双酶切实验。
限制性内切酶能在适当温度、pH等条件下识别DNA序列中的特定序列并对识别序列进行有效切割。
利用琼脂糖凝胶电泳，通过电泳结果检验DNA提取纯度、PCR和双酶切实验的效果，并对比各组实验效果了解实验各步骤的各项影响因素核试验操作。
2 实验材料和仪器2.1实验材料大肠杆菌DH5α（含重组了约1000bp DNA片断的PET32.a表达质粒，Amp抗性）2.2 实验仪器高压灭菌锅、超净工作台、恒温摇床、台式离心机、涡旋振动器、培养管、移液器、离心管、吸管头、量筒、紫外观测仪、小三角瓶、PCR仪、微量移液器、冰盒、制胶模、电泳仪3 实验试剂3.1 DNA提取所需试剂LB培养基、3mol/L醋酸钠（pH5.2）、TE缓冲液（pH8.0）、无水乙醇、75%乙醇、RNaseA（10mg/ml）、goldview DNA染色剂、氯仿、琼脂糖溶液Ⅰ：50 mmol/L葡萄糖，25 mmol/L Tris-Cl（pH8.0），10 mmol/L EDTA (pH8.0) 溶液Ⅱ： 0.2 mol/L NaOH， 1%SDS(w/v)，现配现用溶液Ⅲ：3 mol/L KAc，用冰醋酸调pH值至5.23.2 PCR实验所需试剂实验一提取的质粒DNA，0.5U/μL的 Taq酶及5 × PCR buffer、1 mmol/L 的dNTP、克隆基因特异引物PF、PR（各1µmol/L），0.2mL的PCR管，TIP头，goldview DNA染色剂，琼脂糖，10×上样缓冲液，0.5×TBE、marker DNA等。
PCR扩增引物： PF：5`—CTCGGATCCATGGAGCTAGCTACTGCGGG—3`PR：5`—CCGGTCGACTCCATCAATCTTGGAAAGCA—3`3.3双酶切实验所需试剂实验一提取的质粒DNA，BamH I（3 U /μL），HindⅢ（3 U /μL），1.5mL的EP 管，TIP头，goldview DNA染色剂，琼脂糖，6×上样缓冲液，0.5×TBE等。
4 实验步骤4.1 提取质粒DNA4.1.1 挑LB固体平板菌落于2ml含Amp的LB液体培养基中，37℃振摇培养过夜。
4.1.2 取1mL菌液放入Ep管中，12000 r/min（简写rpm）离心1min；弃尽上清。
4.1.3 加入200μL预冷的含RNaseA的溶液I，旋涡以充分混匀。
4.1.4 加入200μL的溶液Ⅱ，温和混匀，室温静置5min以充分裂解细菌。
4.1.5 加入200μL的溶液Ⅲ，温和混匀，－20℃放置8min，12000rpm离心5min；吸上清至另一新的1.5mL EP管，加500μL氯仿/异戊醇（V：V=24：1）充分混匀，12000rpm离心5min。
4.1.6 移取上清液500μL至一新1.5mL EP管，加入2倍体积无水乙醇，充分混匀，-20℃静置10min，12000 rpm离心10min，弃上清；加入200μL 70%乙醇洗DNA沉淀，12000rpm离心5min，倒掉乙醇，再12000rpm离心几秒钟，用移液器尽可能除去乙醇，烘箱适度风干。
4.1.7 加入20μL RTE（含10μg/mL RNaseA 的TE，pH8.0）溶解质粒DNA， 37℃放置10min，乃至30min，以充分消化RNA。
4.1.8 取4～5μL质粒DNA溶液于另一干净离心管中，加入8μL TE及2μL上样缓冲液，混匀后全部点样于一个琼脂糖凝胶点样孔中。
4.1.9 打开电源开关，调电压为80～100伏进行电泳。
4.1.10 电泳约40分钟后关掉电源，把凝胶置于紫外仪上观察结果并记录。
4.2 聚合酶链式反应4.2.1 PCR反应液配制反应液组分起始浓度反应系终浓度20µL反应体系所需量DNA模板提取的质粒5ng到10ng 取2μL已稀释20×的质粒DNA溶液引物PF 1µmol/L0.2µmol/L 4µL引物PR 1µmol/L0.2µmol/L 4µLdNTP mix 2.5mmol/L 0.25mmol/L 2µL反应buffer 10×1×2µLTaq酶0.5U/µL20µL体系加1U 2µL无菌水HO ——补水至总体积20µL，混匀盖上盖24.2.2 把上述配制的反应液体系放置于PCR仪中，并使PCR仪运行如下PCR反应程序，实现靶DNA的扩增。
94℃ 3min→94℃ 50sec→54℃ 50sec→72℃ 1.5min→72℃ 5min↑ 20循环↑4.2.3 PCR扩增过程中，全班分组按实验一的方法制备1％的琼脂糖凝胶。
4.2.4 PCR结束后取10µL反应产物，加入2µL上样缓冲液，混匀并全部上样于1％琼脂糖凝胶1点样孔中；每块琼脂糖凝胶分别留一个点样孔并上样5µL marker DNA做标准分子量大小对照。
4.2.5 接通电源，调电压80～90伏开始电泳，电泳持续约30～40分钟。
4.2.6 切断电源，取出凝胶并置于紫外仪中观察、记录实验结果。
4.3 质粒DNA的双酶切分析4.3.1 在一1.5mL离心管中配制反应体系为20µL的质粒双酶切反应液：加入成分加入量质粒DNA （<1μg）2-5μL10×Buffer1μLBamH I 1μLHindⅢ1μLO 补水至20μLddH2用移液器tip头轻轻混匀。
4.3.2 37℃恒温条件下酶切反应约1-1.5h。
4.3.3 酶切结束后，往酶切反应管中加入4μL 6×上样缓冲液，轻轻混匀。
4.3.4 取10μL酶切液点样于琼脂糖凝胶1点样孔中；每块琼脂糖凝胶分别留一个点样孔并上样5µL标准分子量 marker DNA。
4.3.5 接通电源，调电压80～90伏开始电泳，电泳持续约30～40分钟。
4.3.6 切断电源，取出凝胶并置于紫外仪中观察、记录实验结果。
4.4 琼脂糖凝胶制备4.4.1 称量0.3g的琼脂糖粉置于一干净的小三角瓶中。
4.4.2 加入30mL 0.5×TBE于三角瓶中，称出总重量并记录。
4.4.3在微波炉中充分溶解，称溶解后的总重量并用蒸馏水补充至原总重量。
4.4.4 室温条件下放置或自来水冲三角瓶下部到溶液温度冷却到约50度，并经常摇动防止降温不均匀导致局部凝固现象，此时再加入1.5μL goldview 染料(原则上按照100mL 琼脂糖液加goldview 染料3-5μL )，混匀。
4.4.5 把混合液倒入一已插入梳子的制胶模具中，让其自然充分凝固。
4.4.6 拔掉梳子，把凝胶转移到电泳槽中，即可用于点样和电泳检测。
5 实验结果与分析5.1 质粒DNA 提取所得凝胶电泳结果图1 质粒DNA 的电泳图M:DNA marker III ；泳道1-6：不同样品提取质粒上图中有3条相近的条带（第一条最亮），原因是提取的质粒DNA 相对质量相同，但各种因素导致会出现螺旋、线形和开环这三种泳动速度不同的构像。
5.2 PCR 扩增实验结果图2 质粒的PCR 扩增M:DNA marker III ；泳道1-6：PCR 扩增产物4500300020001200800bp M 1 2 3 4 5 6bp M 1 2 3 4 5 64500300020001200800以pF/pR 为引物，使用PCR 克隆技术扩增不同样品的质粒，经凝胶电泳，结果显示扩增片段大小约为1kb ，与预期结果相符（图2）。