酪氨酸酶活性抑制实验方法
酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
王白强;曾晓军
【期刊名称】《福建轻纺》
【年(卷),期】2002(000)007
【摘要】研究探讨了皮肤黑色素的成因和皮肤美白机理。
通过测定常用的6种生物美白剂对酪氨酸酶活性的抑制率，初步建立美白剂效果的评价体系，实验还表明自制中草药萃取物美白效果明显，抑制率可达95％。
同时，开发了3种美白、祛斑、防晒等功能的化妆品，市场潜力很大。
【总页数】6页(P1-6)
【作者】王白强;曾晓军
【作者单位】福建省轻工业研究所，福建福州 350005;福州抗生素集团有限公司中心化验室，福建福州 350002
【正文语种】中文
【中图分类】TQ685.5
【相关文献】
1.酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用 [J], 杜孝元;刘玮;史飞;张萍
2.皮肤化学美白剂抑制酪氨酸酶活性的研究 [J], 刘宇红;董银卯;李才广
3.十味归白散对酪氨酸酶活性及诱导豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用 [J], 谢凡; 姚佳晨; 陈丽文; 李文艳
4.响应面法优化新疆阿魏中阿魏酸的提取工艺及其抑制酪氨酸酶活性研究 [J], 阿
迪拉·吐尔逊塔依;田永芝;何诗冰;努尔亚·艾尼外尔;范琳惠;约日耶提·萨力;塔吉古丽·阿不里克木
5.Box-Behnken优化微波萃取桂花果皮多酚提取工艺及体外抑制酪氨酸酶活性研究 [J], 杨丹;梁正杰;徐广;张万超;黄红燕;梁正杰
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油溶性美白剂对酪氨酸酶抑制性能的测试方法
油溶性美白剂对酪氨酸酶抑制性能的测试方法
周忠;王建国;周蕾;王建新
【期刊名称】《日用化学工业》
【年(卷),期】2003(033)005
【摘要】化学分析方法测定油溶性美白剂对酪氨酸酶活性的抑制率可在有机溶剂-水体系中进行.通过测定若干单一有机溶剂和复配有机溶剂对酪氨酸酶活性的抑制率及相关的溶解参数,发现复配有机溶剂V(丙二醇):V(乙酸乙酯)为9:1的用量为0.5 mL时,对酪氨酸酶活性的抑制率为29.4%.该复配有机溶剂与水构成的测试体系可用于油溶性美白剂,如异甘草素和甘草素对酪氨酸酶活性的抑制率的测定.
【总页数】3页(P326-328)
【作者】周忠;王建国;周蕾;王建新
【作者单位】江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036
【正文语种】中文
【中图分类】TQ658.5
【相关文献】
1.4种美白剂对B-16细胞内酪氨酸酶活性抑制的研究 [J], 李玲;宋伟民;周华
2.马铃薯酪氨酸酶体外筛选美白剂测定体系的建立 [J], 徐鹏;付绍平;王伟;赵长新;章克昌
3.皮肤化学美白剂抑制酪氨酸酶活性的研究 [J], 刘宇红;董银卯;李才广
4.几种美白剂抑制酪氨酸酶活性的研究 [J], 刘琦;刘洋;吴金昊;陶丽莉;王楠;赵华
5.三种美白剂对酪氨酸酶活性的抑制 [J], 陆晔;周名权;翁康生;刘国星
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酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
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作 者简介 ： 自强 （ ９ ５一） 男 ， 建惠 安人 ， 王 １６ ， 福 工程 师 ， 长期 从事 香料 、 香精 、 化妆 品 的研制工 作 。
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摘 要 ：研 究探 讨 了皮 肤 黑 色素 的 成 因 和 皮 肤 美 白机 理 。 通 过 测 定 常 用 的 ６种 生 物 美 白剂 对 酪 氨 酸 酶 活 性 的抑 制 率 ，初 步 建 立 美 白剂 效 果 的评 价 体 系 ， 实验 还 表 明 自制 中草 药 萃 取 物 美 白 效 果 明 显 ，抑 制 率 可 达 ９ ％ 。 同时 ， 开 发 了 ３种 美 白、 祛 斑 、 防 晒 等 功 能 的 化 妆 品 ， 市场 潜 力 ５
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此 ，近 些 年 皮 肤 美 白类 化 妆 品 市 场 的 开 发 日趋 重 视 ，无 论 是 日常 家 庭 用 还 是 专 业 美 容 店 用 ，美
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皮 肤 黑 色 素 细 胞 组 织 将 黑 色 素 转 移 到 表 皮 基 底 层 细 胞 中 ，随 着 细 胞 的 新 陈 代 谢 而 被 带 到 角
种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究
6种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究摘要! 目的! 研究&种中药对酪氨酸酶活性的抑制作用1 方法! 分别用50%乙醇水溶液回流提取中药白芷、白附子、当归、云苓、白蒺藜、银杏叶- 然后浓缩提取液至膏状1用水将$ #45膏状稀释为$45 6 47 - 测定各自对酪氨酸酶活性的抑制率1结果! &种中药白芷3 白附子3 当归3 云苓、白蒺藜、银杏叶都对酪氨酸酶活性的抑制率分别为35%、55%、60%、22%、55%、40%。
结论：白附子对酪氨酸酶活性抑制作用最强关键词! 黄褐斑；中药；祛斑；美白；酪氨酸酶据统计- 约有,70%的被调查者认为美容的最大障碍之一是面部雀斑、黄褐斑、老年斑的形成，它们属于常见色素沉着的皮肤病，影响容貌，给患者造成严重的心理压力，有报道美白祛斑类化妆品的市场份额始终处于增长趋势。
1994年日本的美白类化妆品销售额约为1980年的二十倍。
中国与日本属同一肤色人种- 巨大的市场潜力不容忽视1近年来- 对从传统药物和天然资源中寻找新药物- 已越来越受到许多发达国家和发展中国家的医药科研工作者的重视，我国是中药的发源地- 中药3 天然药物资源丰富- 而且几千年的临床实践-给开发和利用祛斑的天然植物提供宽广的空间1 本文在研究黄褐斑的形成机理和中药治疗黄褐斑的基础上，对6种常用中药进行了抑制酪氨酸酶活性的试验- 发现白附子、白蒺藜的提取液有较强的抑制酪氨酸酶活性的作用。
黄褐斑形成的机理及病因由于黄褐斑患者皮损部位黑色素细胞活性增强- 黑素和黑素小体均增加- 进而表现出色斑- 影响美容病理状态下- 真皮内巨噬细胞可吞噬滴落入真皮的黑色素体- 或沉着于真皮上层- 或在细胞内降解- 一部分经淋巴转移< / = 1色素的产生与排泄失去平衡- 并过剩地聚集在表皮细胞内的部分- 就形成色素沉着< & = 1黑色素的排泄有两条途径! 一是从肾内排泄- 另一是经皮肤排出- 即黑色素被转移到角质蛋白中- 随表皮生长移行到角质层，最后随角质层周期换新而脱落，病的原因有以下几个方面：1.1妊娠或口服避孕药由于妊娠或口服避孕药导致激素的改变! 血中雌激素" 孕激素或促黑色素细胞激素# $%&6水平增高使黑色素细胞活性增加1.2某些疾病某些慢性疾病! 特别是女性生殖器疾病和月经失调" 痛经"附件炎" 不孕症等以及肝脏病" 慢性酒精中毒" 甲状腺疾病" 结核" 内脏肿瘤患者中也常发生本病! 可能与卵巢" 垂体" 甲状腺等内分泌有关(有研究表明! 妇女中黄褐斑患者的甲状腺疾病患病率比正常人高! 故认为黄褐斑不是单一疾病! 可能是自身免疫病的一部分.1.3 遗传因素不同的资料表明有30%-70%的患者有家族史! 且男性的比例比女性高。
柯里拉京对B16细胞增殖及酪氨酸酶活性的抑制作用
柯里拉京对B16细胞增殖及酪氨酸酶活性的抑制作用黄海潮;郑公铭;王如意;张显策;李忠军;刘纲勇;傅中【摘要】采用体外培养B16细胞,在柯里拉京作用不同时间后,用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测柯里拉京对B16细胞生长的影响;用多巴氧化法检测柯里拉京对B16细胞中酪氨酸酶活性的抑制作用;用形态学和Hoechst33258染色法观察柯里拉京对B16细胞生长形态的影响.结果表明,柯里拉京对B16细胞增殖的抑制作用明显,其作用12,24和48 h的IC50分别是35.63,25.78和20.94 mg/L;对作用于B16细胞中酪氨酸酶12,24和48 h时的IC50分别是16.38,14.00和13.85 mg/L;形态学观察表明,当p(柯里拉京)＞16 mg/L作用24h时,B16细胞损伤明显;Hoechst33258染色显示,当ρ(柯里拉京)≤16 mg/L作用24h时,B16细胞呈现凋亡形态.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2016(046)001【总页数】4页(P44-47)【关键词】化妆品添加剂;柯里拉京;B16细胞;酪氨酸酶【作者】黄海潮;郑公铭;王如意;张显策;李忠军;刘纲勇;傅中【作者单位】广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520【正文语种】中文【中图分类】TQ658现在越来越多的人注重外表，因此化妆品拥有众多的消费者，其中美白化妆品较受青睐。
由于绝大部分天然中草药毒副作用小，使消费者易于接受，中草药的美白作用及其应用成为研究热点，相关文献报道众多，且市场上宣称添加某种或几种中草药提取物的美白化妆品也林林总总。
酪氨酸酶抑制率测定方法
1. 4念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制1. 4. 1念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活力的影响提取物对酪氨酸酶的抑制参照Masuda和Kubo的方法[ 6, 7] , 并略作修改。
待测样品用DMSO 进行浓度梯度稀释, 浓度分别为1、05、025、0125 mg / mL; 换算成反应体系中的终浓度分别为333、1665、8325、4 3 g /mL。
反应在96孔细胞板上进行, 每组8孔, 分别是: A. 不含样品, 但含酪氨酸酶的阴性对照, 3孔重复; B. 不含样品及酪氨酸酶的空白对照, 1孔; C. 包含样品及酪氨酸酶, 3孔重复,D. 含样品但不含酪氨酸酶的空白对照, 1 孔。
A 孔中加入190 L pH 68、0 1 mo l/L 磷酸缓冲液,10 L 1380 U /mL酪氨酸酶; B 孔中加入200 L 相同的磷酸缓冲液; C 孔中加入180 L磷酸缓冲液,10 L 1380 U /mL酪氨酸酶, 10 L样品; D 孔中加入190 L磷酸缓冲液, 10 L样品。
然后将细胞板在30条件下放置5 m in, 再在每孔中加入100 L2 5 mmo l/L L-酪氨酸( 见表1 )。
在30反应10m in后, 立即置于Tecan Sunrise 酶标仪中测量在475 nm下的吸光值。
提取物对酪氨酸酶活性的抑制按公式计算:抑制率=( A - B ) - ( C- D)*100%A – B参照文献方法〔3〕在数支干燥的试管中各加入1.oml0.03%左旋多巴溶液，再加上维生素E一日环糊精溶液，(加入量按表所列体积) 最后的磷酸钠缓冲液加至5.Oml，25℃恒温10 min后，加入0.4ml酶提取液，立即计时并迅速置于恒温槽内，待反应1min，用BaCRmanDV一70型分光原度计在475nm处测定吸收度，以缓冲液为参比，然后根据多巴色素的消光系数“=3700求出Vi，把无维生素E一日环糊精溶液存在时速度定为100%，求出不同浓度维生素E一日环糊精存在时酶的相对活性以及对酶的抑制率抑制率二V。
酪氨酸抑制性测定实验方案
熟地黄提取液对酪氨酸酶的抑制作用研究一、仪器和药品：仪器：分光光度计、微量移液器（1ml）、电子天平、容量瓶（10ml、50ml、250ml）、回流装置一套、沸石、抽滤装置、旋转蒸发仪、水浴恒温箱、烧杯和量筒若干。
药品：熟地黄粉末（约50g）、体积分数50%的乙醇（200ml）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、L-酪氨酸、酪氨酸酶、去离子水若干。
二、实验方案：A、熟地黄有效成分的提取：1、干燥熟地黄粉末10.0 g + 体积分数50%的乙醇100mL，室温浸泡24 h。
2、烧瓶+沸石+上述浸泡液，回流提取3 h，冷却后抽滤取滤液。
残渣再次加50%乙醇100mL 回流提取3 h，冷却抽滤取滤液，合并两次滤液。
（回流温度约80℃。
）3、将滤液置于旋转蒸发仪上60-65℃浓缩回收溶剂，得膏状提取物。
4、称取适量膏状提取物+去离子水配置成1 mg/mL 溶液备用。
B、磷酸缓冲溶液（PBS）的配制：1、称取磷酸氢二钠13.3984 g，加去离子水溶解，转移至250mL 容量瓶中定容得a液；另称取磷酸二氢钠6.9011 g，加去离子水溶解，转移至250mL容量瓶中定容得b液。
2、分别移取a、b两溶液各50mL至250mL容量瓶中，加去离子水定容，即得pH=6.8的磷酸缓冲溶液。
C、L-酪氨酸溶液和酪氨酸酶溶液的配制：1、称取L-酪氨酸25.6 g，用PBS缓冲液定容于50mL容量瓶中，即得L-酪氨酸溶液。
2、称取酪氨酸酶0.3502 g，用PBS缓冲液定容于10mL容量瓶中，即得酪氨酸酶溶液。
（冰水浴中操作、保存。
）D、酪氨酸酶活力的测定：（分光光度法测A475）用微量移液器分别按表一剂量准确移取a、b、c、d四组样液，置于37℃水浴中恒温10 min后，各加入0.40mL酪氨酸酶溶液，混匀，37℃温育反应10 min，迅速移入比色皿中，测得在475nm处的吸光度A a、A b、A c、A d ，然后按下面的公式计算熟地提取液对酪氨酸酶的抑制率：抑制率=[1-（A d-A c）/（A b-A a）]×100%其中：a：既无底物也无提取物的待测液；b：有底物但无提取物的待测液；c：无底物但有提取物的待测液；d：既有底物也有提取物的待测液。
酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用_杜孝元
Ｔｙｒｏ ｓｉｎ ａ ｓｅ ｉｎ ｈ ｉｂ ｉｔｉｏ ｎ ｔｅ ｓｔ ａ ｎ ｄ ｉｔｓ ａ ｐ ｐ ｌｉｃ ａ ｔｉｏ ｎ ｉｎ ｅ ｆｆｉｃ ａ ｃ ｙ ｅ ｖａ ｌｕ ａ ｔｉｏ ｎ ｏ ｆ ｗｈ ｉｔｅ ｎ ｉｎ ｇ ｃ ｏ ｓｍ ｅ ｔｉｃ ｓ
ＤＵ Ｘｉａｏ － ｙｕ ａｎ ， ＬＩＵ Ｗｅｉ， Ｓ ＨＩ Ｆｅｉ， ＺＨＡＮＧ Ｐｉｎ ｇ （Ｄｅｐ ａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇ ｙ， Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓ ｐ ｉｔａｌ ｏｆ Ａｉｒ Ｆｏｒｃｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００３６， Ｃｈｉｎａ）
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中国美容医学 ２００５ 年 １２ 月第 １４ 卷第 ６ 期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｄｅｃ．２００５．Ｖｏｌ．１４．Ｎｏ．６
表 ３ 已知活性物成分的样品检测结果
活性物成分
浓度（ ％）
合成熊果苷（ ＡＲＢＵＴＩＮ）
３．０
天然熊果苷
２．０
曲酸双棕榈酸脂（ ＫＡＤ－Ｄ１５）
内（ 或接近）。
１．４ 功效评价表示方法
２．１．３ 曲酸标准对照：选用曲酸作为标准品对照，将浓度由
１．４．１ 抑制率计算方法：样品对酪氨酸酶活性的抑制强度以 ２０ｇ／Ｌ 倍量稀释至 １．２５ｇ／Ｌ，结果见表 ２。
抑制率表示。参照李莉［３］介绍的较简便方法，以阳性对照结果
结果显示量效关系呈负相关，ｒ＝－０．９７－０．９９，接近高度相关。
１ 材料和方法 １．１ 材料：酪氨酸酶（ Ｓｉｇｍａ 公司生产，货号 ９００２－１０－２）；Ｌ
多巴（ Ｓｉｇｍａ 公司生产，货号 ５９－９２－７）；曲酸（ Ｓｉｇｍａ 公司生 产，货号 ５０１－３０－４）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠（ 北京化工厂 生产，ＡＲ）。试验样品是由广州丹芭碧化妆品有限公司研究 和发展实验室提供，部分样品是市售的各种牌号的祛斑类产 品。恒温仪（ 美国 Ｆｉｓｈｅｒ 公司生产，型号 Ｂａｔｈ１３５）；紫外分光 光度计（ 日本岛律，ＵＶ－２２０１，上海第三分析仪器厂，型号 ７５２）；离心机（ 上海安亭科学仪器厂生产，ＬＸＪ－ＩＩＢ）。 １．２ 检测方法 １．２．１ 样品处理：取定量（ Ｗ）样品溶于定量（ Ｖ）去离子水 或三蒸水中（ 酪氨酸酶是铜蛋白，溶液中不应含有铜离子）， 经搅拌、混匀、沉淀等处理后吸取澄清部分待检。水剂和水溶 性凝胶剂可直接溶解；乳化剂要在溶解前先鉴别乳状液相 型，如为 Ｗ／Ｏ 型，则采取转型稀释法使成为 Ｏ／Ｗ 型。 １．２．２ 实验操作：在玻璃试管中进行生化反应，各管加入所 需缓冲液（ ｐＨ６．８，０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ＰＢ）、样品液、曲酸溶液和酶 溶液。于 ３０℃水浴中反应 １０ｍｉｎ，依次加入多巴溶液，再于 ３０℃水浴中反应 １０ｍｉｎ，测 ４７５ｎｍ ＯＤ 值。实验体系设计见 表 １。
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酪氨酸酶活性抑制实验方法
一、试剂：酪氨酸酶、酪氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、阳性对照（熊果苷粉末）、样品、去离子水
二、试剂配制：
1、磷酸盐缓冲溶液（PH=6.8）：先分别配制0.2M的磷酸二氢钠和0.2M的磷酸氢二钠。
0.2M磷酸二氢钠：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 去离子水；
0.2M磷酸氢二钠：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 去离子水；
取51ML磷酸二氢钠+49ML磷酸氢二钠即得0.2M、PH=6.8的磷酸缓冲液。
2、L-酪氨酸溶液：称取L-酪氨酸25.6 g，用磷酸缓冲液定容于50mL容量瓶
中，即得L-酪氨酸溶液。
3、酪氨酸酶溶液：将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。
去皮，切成约1.0 cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。
称重，按1：1（W:V ）的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000 r/min离心10min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h内用完。
4、受试液的配制：将原先所配5mg/ml的溶液用甲醇稀释到1mg/ml.。
5、阳性对照：取熊果苷粉末0.01g，溶于10ml的甲醇溶液，即得1mg/ml的
对照品溶液。
三、实验方法：
依下表所示向试管中依次加入磷酸盐缓冲溶液、样品溶液、酪氨酸溶液，于35℃水浴10分钟。
然后加入酪氨酸酶液，混匀，再在35 ℃下孵育30min，迅速转移至比色皿中，在475nm处测定吸光值。
受试组用空白对照组1调零，阴性对照组用空白对照组2调零，阳性对照组用空白对照组3调零。
受试组吸光值为A1，阴性对照组吸光值为A2，阳性对照组吸光值为A3。
抑制率=1－[（A1－A2）/(A3－A2)]×100%=（A3－A1）/(A3－A2)×100% 注：受试液组共四种样品。