酪氨酸酶活性抑制实验方法
酪氨酸酶活性抑制实验方法
一、试剂： 酪氨酸酶、酪氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、阳性对照（熊果苷粉末）、样品、去离子水
二、试剂配制：
1、磷酸盐缓冲溶液（PH=6.8）：先分别配制0.2M的磷酸二氢钠和0.2M的磷酸氢二钠。
0.2M磷酸二氢钠：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 去离子水；
0.2M磷酸氢二钠：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 去离子水；
取51ML磷酸二氢钠+49ML磷酸氢二钠即得0.2M、PH=6.8的磷酸缓冲液。
2、L-酪氨酸溶液：称取L-酪氨酸25.6 g，用磷酸缓冲液定容于50mL容量瓶中，即得L-酪氨酸溶液。
3、酪氨酸酶溶液：将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。去皮，切成约1.0 cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。称重，按1：1（ W:V ）的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000 r/min离心10min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h内用完。
4、受试液的配制：将原先所配5mg/ml的溶液用甲醇稀释到1mg/ml.。
5、阳性对照：取熊果苷粉末0.01g，溶于10ml的甲醇溶液，即得1mg/ml的对照品溶液。
三、实验方法：
依下表所示向试管中依次加入磷酸盐缓冲溶液、样品溶液、酪氨酸溶液，于35℃水浴10分钟。然后加入酪氨酸酶液，混匀，再在35 ℃下孵育30min，迅速转移至比色皿中，在475nm处测定吸光值。
组别
试剂 受试液组
阴性对照
组
阳性对照
组
空白对照组
1 2 3
缓冲液（ML） 1.0 1.5 1.0 3.5 4.0 3.5 受试液（ML） 0.5 0 0 0.5 0 0
酪氨酸（ML） 2.5 2.5 2.5 0 0 0
熊果苷（ML） 0 0 0.5 0 0 0.5
35℃水浴10min
酪氨酸酶（ML） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
受试组用空白对照组1调零，阴性对照组用空白对照组2调零，阳性对照组用空白对照组3调零。
受试组吸光值为A1，阴性对照组吸光值为A2，阳性对照组吸光值为A3。
抑制率=1－[（A1－A2）/(A3－A2)]×100%=（A3－A1）/(A3－A2)×100%
注：受试液组共四种样品
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的研究进展
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的研究进展
一、本文概述
表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）是一类针对EGFR信号通路的关键药物，广泛应用于非小细胞肺癌、结直肠癌、头颈癌等多种癌症的治疗。本文旨在综述近年来EGFR TKIs的研究进展，包括其作用机制、药物研发、临床应用以及面临的挑战等方面。通过深入了解EGFR TKIs的研究现状和发展趋势，有望为癌症治疗提供新的思路和方法，进一步改善患者的生活质量和预后。
本文将从EGFR TKIs的作用机制出发，阐述其如何通过抑制EGFR的酪氨酸激酶活性来阻断癌细胞的增殖和转移。接着，我们将回顾EGFR TKIs的药物研发历程，介绍目前市场上主流的EGFR TKIs药物及其特点。在此基础上，我们将重点关注EGFR TKIs在临床试验中的应用情况，包括其疗效、安全性以及耐药性等问题。我们将探讨EGFR
TKIs面临的挑战和未来发展方向，包括如何克服耐药性、提高治疗效果以及拓展新的适应症等。
通过本文的综述，我们希望能够为相关领域的研究者和临床医生提供有价值的参考信息，推动EGFR TKIs在癌症治疗中的进一步应用和发展。 二、EGFR-TK抑制剂的分类与机制
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TK抑制剂）是近年来癌症治疗领域的重要突破，其通过抑制表皮生长因子受体（EGFR）的酪氨酸激酶活性，从而阻断细胞的生长、增殖和转移过程。根据药物的作用机制和化学结构，EGFR-TK抑制剂主要分为两大类：可逆性抑制剂和不可逆性抑制剂。
可逆性抑制剂，如吉非替尼和厄洛替尼，能够与EGFR的ATP结合位点形成可逆性结合，从而竞争性地抑制酪氨酸激酶的活性。这类药物对于EGFR敏感突变的非小细胞肺癌具有较好的疗效，但在长期治疗过程中，患者往往会出现耐药现象。
不可逆性抑制剂，如阿法替尼和奥希替尼，能够与EGFR的ATP结合位点形成共价键，导致EGFR的永久性失活。这类药物在抑制EGFR活性的同时，还能够抑制EGFR的二聚化和下游信号通路的激活，因此在克服耐药性和提高疗效方面具有优势。
酪氨酸酶抑制剂的应用研究进展
酪氨酸酶抑制剂的应用研究进展
胡泳华;贾玉龙;陈清西
【摘 要】酪氨酸酶是一类络合铜离子的金属酶类,广泛存在于动植物、微生物及人体中,是生物体合成黑色素、果蔬褐变的关键酶.酪氨酸酶的异常表现可能会出现黑色素瘤等,黑色素异常生成造成的色素沉着是动物衰老及果蔬褐变的重要表现.综述了酪氨酸酶抑制剂在美容保健、色素型皮肤病的治疗、病虫害防治以及食品保鲜等方面的应用,如:通过直接抑制酪氨酸酶活性以及调控细胞中酪氨酸酶的表达量来有效调控黑色素的生成,从而达到美白及治疗色素紊乱症的作用;抑制果蔬褐变,延长货架期;抑制昆虫蜕皮时的鞣化,达到杀灭农业害虫的目的;提高微生物对于紫外线及其他辐射的敏感度,进一步达到抑菌的目的.
【期刊名称】《厦门大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2016(055)005
【总页数】9页(P760-768)
【关键词】酪氨酸酶抑制剂;医疗美容;害虫防治;保鲜;生物抗菌
【作 者】胡泳华;贾玉龙;陈清西
【作者单位】厦门大学生命科学学院,福建厦门361102;厦门大学生命科学学院,福建厦门361102;厦门大学生命科学学院,福建厦门361102
【正文语种】中 文
【中图分类】Q356.1 酪氨酸酶(tyrosinase，EC 1.14.18.1)广泛分布于微生物、动植物及人体中,在植物中,酪氨酸酶一般称为多酚氧化酶;在昆虫中,一般称为酚氧化酶;在微生物和人体中,称为酪氨酸酶.酪氨酸酶是生物体合成黑色素、果蔬褐变的关键酶,在昆虫蜕皮时的鞣化过程和伤口愈合中起重要作用,细菌的黑色素能保护细菌细胞和孢子免受紫外线的伤害.酪氨酸酶具有单酚酶和二酚酶双重催化功能,在单酚酶的作用下,酪氨酸被羟基化成L-多巴(L-DOPA),在二酚酶的作用下,L-DOPA被氧化生成多巴醌,多巴醌再经过一系列的反应之后生成黑色素[1].
酪氨酸酶表现异常,有可能会出现黑色素瘤及早发性老年痴呆疾病等,黑色素异常生成造成的色素沉着是动物衰老及果蔬褐变的重要表现[2].酪氨酸酶抑制剂应用广泛,涉及美容保健、色素型皮肤病治疗、病虫害防治以及食品保鲜等多个领域.
光甘草定的制备及其对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用
第２８卷第４期 ２０１０年８月 石河子大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈｉｈｅｚｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ） Ｖｏ１．２８ ＮＯ．４ Ａｕｇ．２０１０
文章编号：１００７—７３８３（２０１０）０４—０４７８—０５
光甘草定的制备及其对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用
骆从艳，慕春海，王园姬，李超鹏，陈文
（石河子大学药学院／新疆特种植物药资源重点实验室，石河子８３２００２）
摘要：分别选用单酚酶与二酚酶为底物，评价硅胶柱层析（ＣＨＣ１。／Ｍｅ０Ｈ梯度洗脱）分离得到的光甘草定对蘑菇酪 氨酸酶活性的影响。结果表明：实验室所分离得到的光甘草定纯度为８５ 以上，其对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚 酶的活性均有抑制作用，导致酶活力下降５０ 的抑制剂浓度（ＩＣ 。）分别为１．２８ｕｍｏｌ／Ｌ和１．５６ｔＬｍｏｌ／Ｌ，且Ｌｉｎ—
ｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ图显示，光甘草定对酪氨酸酶二酚酶活性的抑制作用表现为竞争型抑制。光甘草定发挥着显著的抑 制酪氨酸酶活性，说明光甘草定可以通过抑制黑色素生成的限速酶一酪氨酸酶达到美白肌肤之功效。 关键词：光甘草定；酪氨酸酶；单酚酶；二酚酶；抑制机理 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ
Ｔｈｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｌａｂｒｉｄｉｎ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ
Ｉ ＵＯ Ｃｏｎｇｙａｎ，ＭＵ Ｃｈｕｎｈａｉ，ＷＡＮＧ Ｙｕａｎｊ ｉ，ＬＩ Ｃｈａｏｐｅｎｇ，Ｃ Ｈ ＥＮ Ｗｅｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｓｈｉｈｅｚｉ ８３２００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｐａｐｅｒ，ｍｏｎｏｐｈｅｎｏｌａｓｅ ａｎｄ ｄｉｐｈｅｎｏｌａｓｅ ａｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ａｓ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｉｎ—
不同中药乙醇提取物对酪氨酸酶抑制活性的对比分析
不同中药乙醇提取物对酪氨酸酶抑制活性的对比分析
宝应县中医医院
江苏省扬州市
225800
【摘要】目的：研究分析不同中药乙醇提取物对酪氨酸酶抑制活性的对比。方法：选取中药诃子、艾叶、紫草、白芷等药材应用70%乙醇提取方法，将维生素C、熊果苷作为阳性参照，运用体外酪氨酸酶抑制方法，对比不同药物的活性。结果：中药诃子酪氨酸酶抑制率达到50.34%，艾叶酪氨酸酶抑制率为21.67%，而紫草酪氨酸酶抑制率达到-10.36%。结论：中药诃子、艾叶醇提取物对于酪氨酸酶有抑制活性，能够为美白中药的研究提供新方向。
【关键词】乙醇提取物；美白；酪氨酸酶抑制活性
美容中药与化妆品在我国有着悠久的发展历史，最早在《五十二病方》中记录有关美容的方剂共8首[1]。由于中药的毒副作用相对比较低，应用后有着明显的效果，所以深受爱美女士的追捧。中医药美白、祛斑等产品在国外发展迅猛，市面上有许多美白产品都是利用抑制酪氨酸酶活性，降低黑色素形成，具有美白的作用，药物美白作用效果可利用监测手段，将酪氨酸酶抑制率作为重要的评估标准。本次研究基于体外实验，借助酪氨酸酶活性抑制实验，对诃子、艾叶、紫草、白芷等药材美白与抗菌消炎中药的美白活性进行观察，为研发中药美白制剂提供可靠的研究依据。
1.材料与方法
1.1材料选取
熊果苷由台湾第一化工原料股份有限公司提供；酪氨酸酶与酪氨酸源自于美国Sigma企业；KH2PO4与K2HPO4由台湾联工化学制药厂提供。 1.2中药供试液制取
中药饮片诃子、艾叶、紫草、白芷中药源于北京同仁堂药方，称量10克原药材，放在三角瓶中，加入用药乙醇150毫升浸泡12小时，在三角瓶口处，覆盖玻璃皿，文火加热45分钟，把中药提取液进行抽滤处理，旋转蒸发仪器浓缩，旋转真空干燥仪器，使其在温度为50℃的环境下干燥处理，制备供试中药提取物粉末，利用天平精准称量17毫克中药提取液干燥粉末，将其转移到容量瓶之中，通过纯净水超声溶解定容处理后，制取成浓度为每升1.7毫克的供试药液。
酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
第７期（总第１５８期） 福建轻纺 Ｎｏ７（Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ１５８）Ｔｈｅ Ｌｉｇｈｔ＆Ｔｅｘｔｉｌｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ ２００２年７月 ＪＵＩ Ｙ．２００２
王白强 ，曾晓军
（Ｉ．福建省轻工业研究所，福建福州 ３５０００５；２．福州抗生素集团有限公司中心化验室，福建福州３５０００２）
摘要：研究探讨了皮肤黑色素的成因和皮肤美白机理。通过测定常用的６种生物美白剂对
酪氨酸酶活性的抑制率，初步建立美白剂效果的评价体系，实验还表明自制中草药萃取物美白
效果明显，抑制率可达９５％。同时，开发了３种美白、祛斑、防晒等功能的化妆品，市场潜力
很大。 关键词：皮肤美白剂；酪氨酸酶活性抑制率；皮肤美白化妆品
中图分类号：ＴＱ６８５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７—５５０Ｘ（２００２）０７—０００１—０６
随着人民生活水平和审美标准的提高，白皙与洁润的肌肤越来越被大多数妇女所推崇。因
此，近些年皮肤美白类化妆品市场的开发日趋重视，无论是日常家庭用还是专业美容店用，美 白化妆品已成为护肤类化妆品的主流品种之一，尽管其价格不菲，但所占的市场份额越来越
大。美白化妆品中有关皮肤黑色素成因，美白机理，美白效果的评价，美白剂的选择以及皮肤
美白化妆品的研制，在当今化妆品研究和生产中非常活跃。
１ 皮肤黑色素的成因与美白机理
造成皮肤黑色素生成的原因有多种，如遗传因素和环境因素，并且其生成原因相当复杂。
目前研究结果基本上认为其成因在于：皮肤细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下，受环境中各
种因素的影响，逐渐氧化为Ｄｏｐａ、Ｄｏｐａｑｕｉｎｏｎｅ，Ｄｏｐａｑｕｉｎｏｎｅ再经过一系列的代谢反应，聚合为
Ｉｎｄ。１。一５．６一ｑ‘ｕｍ‘ｏｎｅ，最后逐步转化为皮肤黑色素。其反应方程式为：
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收稿ｆｊ期：２００２—０４—１０ 作者简介：王自强（１９６５一），男，福建惠安人，工程师，长期从事香料、香精、化妆品的研制工作。 究制 升升 ＝＝’－Ｉ 制的 Ｉ＝＝ ．一Ⅱ 七Ⅱ ＩＩｃ Ｊ－｜ｔ＝＝，＾ 的妆 工 ．苎ＨｌＩ， ｜Ｉ 千口 ｒ｜ｒ 活自 每芭 酶茔大 夫 酸肤 氯皮 ｛巴｝ Ｕ＇－－ 酪
种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究
6种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究
摘要! 目的! 研究 &种中药对酪氨酸酶活性的抑制作用1 方法! 分别用50%乙醇水溶液回流提取中药白芷、 白附子、 当归、 云苓、白蒺藜、 银杏叶- 然后浓缩提取液至膏状1用水将 $ #45膏状稀释为 $45 6 47 - 测定各自对酪氨酸酶活性的抑制率1结果! &种中药
白芷3 白附子3 当归3 云苓、白蒺藜、银杏叶都对酪氨酸酶活性的抑制率分别为 35%、55%、60%、22%、55%、40%。 结论：白附子对酪氨酸酶活性抑制作用最强
关键词! 黄褐斑； 中药； 祛斑； 美白； 酪氨酸酶 据统计- 约有,70%的被调查者认为美容的最大障碍之一是面部雀斑、黄褐斑、老年斑的
形成，它们属于常见色素沉着的皮肤病， 影响容貌， 给患者造成严重的心理压力，有报道
美白祛斑类化妆品的市场份额始终处于增长趋势。1994年日本的美白类化妆品销售额约为 1980年的二十倍。中国与日本属同一肤色人种- 巨大的市场潜力不容忽视1近年来- 对从传统药物和天然资源中寻找新药物- 已越来越受到许多发达国家和发展中国家的医药科研工
作者的重视，我国是中药的发源地- 中药3 天然药物资源丰富- 而且几千年的临床实践-给
开发和利用祛斑的天然植物提供宽广的空间1 本文在研究黄褐斑的形成机理和中药治疗黄
褐斑的基础上， 对6种常用中药进行了抑制酪氨酸酶活性的试验- 发现白附子、 白蒺藜的
提取液有较强的抑制酪氨酸酶活性的作用。 黄褐斑形成的机理及病因
由于黄褐斑患者皮损部位黑色素细胞活性增强- 黑素和黑素小体均增加- 进而表现出
色斑- 影响美容 病理状态下- 真皮内巨噬细胞可吞噬滴落入真皮的黑色素体- 或沉着于真
皮上层- 或在细胞内降解- 一部分经淋巴转移< / = 1色素的产生与排泄失去平衡- 并过剩地聚集在表皮细胞内的部分- 就形成色素沉着< & = 1黑色素的排泄有两条途径! 一是从肾内
排泄- 另一是经皮肤排出- 即黑色素被转移到角质蛋白中- 随表皮生长移行到角质层，最后
白癜风伴寻常型银屑病1例
旦 风皮肤病杂志 ２０１１年３月第２７卷第３期 ２１５
版．上海：上海科学技术文献出版社，２ Ｋｏｒａｎｓｋｙ ＪＳ，Ｒｏｅｎｉｇｋ ＨＨ Ｊｒ．Ｖｉｔｉｌｉｇｏ ａｎｄ １８３—１８９．
２００５．６５２．Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ．Ｊ Ａｍ Ａｃａｄ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １９８２；７（２）： （收稿：２００９—１０～１２）
壬二酸衍生物抑制酪氨酸酶活性实验研究
马秋华汪峰周春英
壬二酸衍生物（Ｋ—ＡＤＧ）与壬二酸相
比，易溶于水，使用量少，有效浓度低，美
白作用更强。目前市场上销售的许多美
白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美
白作用， 故对酪氨酸酶抑制作用的强弱
是评价增白化妆品的主要指标。 近年来，
有文献报道了多种对酪氨酸酶活性有抑 制作用的化学物质的研究结果。 ’该实
验比较几种不同浓度的壬二酸衍生物对
酪氨酸酶活性的抑制率。
１实验材料
１．１ 样品 ３０％、１５％、７．５％、３．２５％壬
二酸衍生物溶液（均购自北京贝丽莱斯生
物制剂有限公司）。
１．２试剂仪器酪氨酸酶、左旋多巴、磷
酸二氢钠（均购自ｊＥ京海克隆生物化学制
品有限公司）、可见光分光光度计、温控水
箱、３ ｍＬ石英比色皿、微量加样器及吸头
（均购自上海跃进医疗器械厂）等。
２实验方法 ２．１对照设置（１）阳性对照组；（２）窗口
标准组２％曲酸；（３）样品组；（４）隐性对照
组。
２．２实验操作在玻璃试管中进行生化
反应，各管加入所需缓冲液（ｐＨ ６．８，０．０５
ｍｏｌ／Ｌ，磷酸二氢钠）、样品液、曲酸溶液和
酶溶液。于３０％水浴中反应１０ ｍｉｎ，依次
加入多巴溶液，再于３０％水浴中反应１０
ｍｉｎ，测４７５ ｎｌＩｌ ＯＤ值。实验体系设计见表
１。 ３实验结果
以阳性对照结果为对照，按以下公式 算出抑制率：抑制率＝［（对照一样品）／对
照］×１００％，抑制率高表明其对酶活性抑
制强度高。结果见表２。
４实验结论
各样品对酪氨酸酶抑制效果依次为
B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性测定方法
酪氨酸酶活性测定
一．实验材料
（一）仪器：倒置显微镜、96孔板、微量移液器（枪及枪头）、恒温培养箱、喷壶、脱脂棉、封口膜、培养瓶100ml、点滴瓶(250ml、500ml)、烧杯（500ml、50ml）、酒精灯、移液管、吸球、吸管架及瓶架、镊子、标签贴、超净台、酶标仪、超低温冰箱或液氮冷冻罐
（二） 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、PBS液、75%酒精、左旋多巴、TritonX-100液
二．实验方法
采用多巴速率氧化法。取对数期B16黑素瘤细胞，弃去培养液，用PBS液清洗2次。调节细胞浓度为0.5×104—1×104/孔相当于干细胞悬液5×104—10×104个（ml-1）,加入96孔板中，每孔加入100ul。过夜后（12h），细胞贴壁，使用同MTT法同浓度同体积的含药培养基加入，并设置对照组（细胞+培养基）和空白对照组（培养基），每个浓度组设置5个复孔，培养基中均含5%胎牛血清，于37摄氏度5%CO2恒温培养箱中培养56h后，吸去培养液后，用PH=7.4的PBS液洗涤2次，然后每孔加入1%TritonX-100液50ul，迅速与-80摄氏度冷冻30min,室温下融化，由于速冻过程是细胞破裂，加入0.5%左旋多巴20ul，37摄氏度下反应4h,酶标仪490nm处测吸光度A，以A表示酪氨酸酶活性。（酪氨酸酶活性率=（A含药组-A空白组）/（A对照组-A空白组）×100%）。
富锌酵母的制备实验报告
一、实验目的
1. 掌握富锌酵母的制备方法；
2. 了解富锌酵母的生理特性及其应用；
3. 掌握微生物发酵的基本原理和操作技术。
二、实验原理
富锌酵母是一种富含锌元素的微生物发酵产品，其制备原理是利用酵母菌对锌元素的吸收和转化能力，将锌元素转化为酵母细胞的一部分，从而提高锌的利用率。富锌酵母具有生物利用度高、无副作用、口感好等优点，在食品、饲料、医药等领域具有广泛的应用前景。
三、实验材料与仪器
1. 材料与试剂：
- 锌离子（ZnSO4）
- 葡萄糖
- 酵母粉
- 磷酸氢二钠
- 氯化钠
- 水合氯醛
- 酵母菌种（如ATCC204508）
- 营养琼脂
2. 仪器与设备：
- 烧杯
- 电子天平
- 高压蒸汽灭菌器
- 磁力搅拌器 - 酵母发酵罐
- 恒温水浴锅
- pH计
- 离心机
- 紫外可见分光光度计
四、实验方法
1. 富锌酵母培养基的制备
- 称取葡萄糖20g、磷酸氢二钠5g、氯化钠3g，加入适量蒸馏水溶解；
- 将溶液加热至沸，加入锌离子（ZnSO4）0.5g，搅拌均匀；
- 调整pH值至6.0，加入营养琼脂15g，搅拌均匀；
- 分装至锥形瓶中，高压蒸汽灭菌15min；
- 冷却后备用。
2. 富锌酵母的制备
- 将酵母菌种接种于富锌酵母培养基中，置于30℃恒温培养箱中培养48h；
- 将培养好的酵母菌液以1:10的比例接种于富锌酵母培养基中，继续培养48h；
- 收集发酵液，离心分离酵母细胞；
- 将离心后的酵母细胞用蒸馏水洗涤2次，去除培养基中的杂质；
- 将洗涤后的酵母细胞用无菌蒸馏水制成悬浮液，置于4℃冰箱中保存备用。
3. 富锌酵母的质量检测
- 测定富锌酵母中的锌含量，采用原子吸收光谱法；
- 测定富锌酵母的抗氧化活性，采用DPPH自由基清除法；
酪氨酸酶抑制率测定方法
1. 4 念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制
1. 4. 1 念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活力的影响
提取物对酪氨酸酶的抑制参照Masuda和Kubo的方
法[ 6, 7] , 并略作修改。待测样品用DMSO 进行浓度
梯度稀释, 浓度分别为1、05、025、0125 mg /
mL; 换算成反应体系中的终浓度分别为333、
1665、8325、43 g /mL。反应在96孔细胞板上
进行, 每组8孔, 分别是: A. 不含样品, 但含酪氨酸
酶的阴性对照, 3孔重复; B. 不含样品及酪氨酸酶的
空白对照, 1孔; C. 包含样品及酪氨酸酶, 3孔重复,
D. 含样品但不含酪氨酸酶的空白对照, 1 孔。A 孔
中加入190 L pH 68、01 mo l/L 磷酸缓冲液,
10 L 1380 U /mL酪氨酸酶; B 孔中加入200 L 相
同的磷酸缓冲液; C 孔中加入180 L磷酸缓冲液,
10 L 1380 U /mL酪氨酸酶, 10 L样品; D 孔中加
入190 L磷酸缓冲液, 10 L样品。然后将细胞板
在30 条件下放置5 m in, 再在每孔中加入100 L
25 mmo l/L L-酪氨酸( 见表1 )。在30 反应
10m in后, 立即置于Tecan Sunrise 酶标仪中测量在
475 nm下的吸光值。提取物对酪氨酸酶活性的抑
制按公式计算:
抑制率=( A - B ) - ( C- D) *100%
A – B
参照文献方法〔3〕在数支干燥的试管中
各加入1.oml0.03%左旋多巴溶液，再加上维
生素E一日环糊精溶液，(加入量按表所列体积)
最后的磷酸钠缓冲液加至5.Oml，25℃恒温10
min后，加入0.4ml酶提取液，立即计时并迅速
置于恒温槽内，待反应1min，用BaCRman
DV一70型分光原度计在475nm处测定吸收度，