PMS2和c-met及MSH6联合检测在结肠癌中的意义
《靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用》
《靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用》一、引言近年来，随着癌症治疗的不断发展，细胞治疗成为了一个热门的研究领域。
其中，CAR-T细胞疗法作为新一代的免疫治疗方式，已在某些肿瘤中显示出其独特的治疗效果。
在众多靶点中，c-Met作为一个重要的受体酪氨酸激酶，与结肠癌的发生、发展密切相关。
因此，以c-Met为靶点的CAR-T细胞在结肠癌的治疗上展现出极大的应用潜力。
本文将深入探讨靶向c-Met的CAR-T 细胞对人结肠癌细胞的作用。
二、c-Met在结肠癌中的作用c-Met是一种跨膜受体酪氨酸激酶，其在正常细胞中主要参与细胞生长、迁移和分化等生理过程。
然而，在结肠癌等肿瘤细胞中，c-Met的表达常常异常升高，并参与肿瘤的增殖、侵袭和转移等过程。
因此，针对c-Met的靶向治疗成为了一种有效的抗肿瘤策略。
三、CAR-T细胞的概述CAR-T细胞疗法是一种通过基因工程改造T细胞，使其能够识别并杀死肿瘤细胞的治疗方法。
CAR-T细胞通过表达针对肿瘤细胞的特异性受体，实现对肿瘤细胞的精确打击。
在针对c-Met 的CAR-T细胞中，通过将c-Met的单链抗体与T细胞的激活信号相结合，使得CAR-T细胞能够识别并杀死表达c-Met的肿瘤细胞。
四、靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用1. 识别与杀伤：靶向c-Met的CAR-T细胞能够通过其表面的特异性受体识别结肠癌细胞表面的c-Met蛋白，进而激活T细胞的杀伤机制，对结肠癌细胞进行精确打击。
2. 抑制肿瘤增殖：通过CAR-T细胞的持续作用，能够抑制结肠癌细胞的增殖，降低肿瘤细胞的数量。
3. 阻断肿瘤侵袭与转移：CAR-T细胞不仅能够杀死已经存在的肿瘤细胞，还能够阻断肿瘤细胞的侵袭与转移过程，减缓肿瘤的扩散。
4. 提高治疗效果：将靶向c-Met的CAR-T细胞应用于结肠癌患者的治疗中，能够显著提高治疗效果，延长患者的生存期。
五、结论综上所述，靶向c-Met的CAR-T细胞在结肠癌的治疗中展现出独特的应用潜力。
结肠癌免疫组化意义 免疫组化的临床意义
结肠癌免疫组化意义免疫组化的临床意义临床常用免疫组化指标的意义临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果的意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”的意义打印在报告中，以增加病理报告的使用价值。
1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。
2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。
3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义多药耐药基因蛋白--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。
谷光甘肽S转移酶--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。
拓扑异构酶Ⅱ--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。
阳性率高者对VP16尤其有效。
雌激素受体--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。
孕激素受体性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。
C-erbB-2--癌基因产物--胞浆--阳性率越高，肿瘤恶性程度越高。
ER、PE阳性而C-erbB-2也阳性者，用三苯氧胺治疗效果不好。
Ki-67--细胞增殖标志--胞核--阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。
Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA。
CEA 多数腺癌表达CEARb 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。
2023结直肠癌基因检测的临床意义
2023结直肠癌基因检测的临床意义结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，目前研究发现结直肠癌中存在一些相关基因可以用于结直肠癌患者的治疗、预后评估以及筛查林奇综合征，提示对这些基因进行检测具有重要的临床意义。
本文主要汇总了结肠癌常见基因异常的临床意义以及罕见基因异常的潜在临床意义。
结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率和病死率一直都位居前列，并且多数结直肠癌患者在初诊时已属于中晚期，正确的治疗决定患者的预后。
随着对结直肠癌发病机制的深入研究和基因检测能力的提高,与结直肠癌发病和治疗相关的基因越来越多。
目前,国内外已有的相关指南及实践推荐检测的结直肠癌相关基因包括APC.MS1RAS和BRAF等。
此外,对于其他一些具有潜在临床意义的基因也得到越来越多的关注,包括Her-2扩增/过表达、PIK3CA突变和NTRK融合等。
合理的检测及应用结直肠癌相关分子标志物已经成为目前临床实践的重要部分。
为此，《结直肠癌分子生物标志物检测专家共识》及《结直肠癌分子标志物临床检测中国专家共识》等共识相继出台，为结直肠癌的基因检测的提供了指导方案。
结直肠癌常见基因异常RAS、BRAF和MSI检测的临床意义1、RAS基因点突变：RAS是表皮生长因子受体（EGFR）信号通路里的下游基因，可以调控细胞生长、分化、增殖和存活，其中KRAS和NRAS是由RAS家族成员基因编码的两种GTP酶蛋白，约有40%~50%的结直肠癌患者存在KRAS点突变，3.8%的结直肠癌存在NRAS点突变。
目前已有多项临床研究表明,RAS野生型的晚期结直肠癌患者能从抗EGFR单抗治疗中获益，患者的总生存时间显著延长。
因此，对于这部分患者推荐首选化疗联合抗EGFR单抗的治疗方案。
而对于RAS 基因突变患者，应用抗EGFR单抗则无明确获益，一般采用化疗联合VEGF单抗治疗。
因此，推荐在晚期或转移性结直肠癌患者开始治疗前，应进行RAS突变的检测，有助于帮助患者选择最佳的个体化治疗方案。
219526304_左半结肠癌与右半结肠癌微卫星不稳定性差异分析
*基金项目：广东省惠州市科技计划项目（20200415）①惠州市第一人民医院 广东 惠州 516000左半结肠癌与右半结肠癌微卫星不稳定性差异分析*温祥① 彭晓峰① 张建筑① 袁士成① 赵文丽① 眭文妍①【摘要】 目的：探析左半结肠癌（left sided colon cancer，LSCC）与右半结肠癌（right sided colon cancer，RSCC）微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI）差异。
方法：选取2021年4月—2022年6月于惠州市第一人民医院就诊的53例结肠癌患者为研究对象。
根据肿瘤生长部位将其分为LSCC 组（28例）和RSCC 组（25例）。
采集两组临床特征及MSI 蛋白表达情况。
比较两组临床特征及MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白阳性率。
比较两组MSI 情况，分析免疫组化阳性切片。
结果：两组性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、脉管浸润、神经浸润、组织分化、组织学分型比较，差异无统计学意义（P >0.05）。
两组MLH1、MSH2、MSH6阳性率比较，差异无统计学意义（P >0.05），LSCC 组PMS2阳性率明显高于RSCC 组，差异有统计学意义（P <0.05）。
LSCC 组微卫星稳定（MSS）占比高于RSCC 组，低频率MSI（MSI-L）、高频率MSI（MSI-H）占比低于RSCC 组，差异有统计学意义（P <0.05）。
结论：相较于LSCC 患者，RSCC 患者更易出现MSI 状态，而加强MSI 筛查更有利于提高结肠癌分型精确度。
【关键词】 结肠癌 不同部位 微卫星不稳定性 差异 doi：10.14033/ki.cfmr.2023.17.017 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2023）17-0067-04 Analysis of Microsatellite Instability Differential between Left Sided Colon Cancer and Right Sided Colon Cancer/WEN Xiang, PENG Xiaofeng, ZHANG Jianzhu, YUAN Shicheng, ZHAO Wenli, SUI Wenyan. //Chinese and Foreign Medical Research, 2023, 21(17): 67-70 [Abstract] Objective: To explore the microsatellite instability (MSI) differential between left sided colon cancer (LSCC) and right sided colon cancer (RSCC). Method: From April 2021 to June 2022, 53 colon cancer patients visited in the First People's Hospital of Huizhou were selected as the study objects. According to the site of tumor growth, they were divided into LSCC group (28 cases) and RSCC group (25 cases). The clinical characteristics and MSI protein expression condition of the two groups were collected. The clinical characteristics and positive rates of MLH1, MSH2, MSH6 and PMS2 proteins were compared between the two groups. The MSI status of the two groups was compared, and the immunohistochemical positive sections were analyzed. Result: There were no significant differences in gender, age, pathological type, lymph node metastasis, vascular invasion, nerve invasion, tissue differentiation, and histological classification between the two groups (P >0.05). There were no significant differences in the positive rates of MLH1, MSH2, and MSH6 between the two groups (P >0.05), but the positive rate of PMS2 in the LSCC group was significantly higher than that in the RSCC group, and the difference was statistically significant (P <0.05). The proportion of microsatellite stability (MSS) in the LSCC group was higher than that in the RSCC group, and the proportions of low frequency MSI (MSI-L) and high frequency MSI (MSI-H) in the LSCC group were lower than those in the RSCC group, and the differences were statistically significant (P <0.05). Conclusion: Compared with LSCC patients, RSCC patients are more likely to have MSI status, and strengthening MSI screening is more conducive to improving the accuracy of colon cancer somatotype. [Key words] Colon cancer Different site Microsatellite instability Differences First-author's address: The First People's Hospital of Huizhou, Huizhou 516000, China 结肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在我国呈逐年上升的趋势，且发病率和死亡率均排在恶性肿瘤的前3位[1-3]。
2020CSCO结直肠癌指南
成立中国遗传性大肠癌协作组
家系中至少2例组织病理学明确诊断的大肠癌患者，其中的2例为父母与子 女或同胞兄弟姐妹的关系，并且符合以下一条：
（1）至少一例为多发性大肠癌患者（包括腺瘤）； （2）至少一例大肠癌发病早于50岁； （3）家系中至少一人患HNPCC相关肠外恶性肿瘤（包括胃癌、子宫
• 阳性者进入高危人群
管理流程 • 阴性者进入后续筛查
后续筛查
FIT 每年1次
阴性
下一年继续FIT
无症状健康人群的筛查：一般人群 （I 级专家推荐）
• 多项研究一致证实，免疫法大便隐血检测（FIT）在不降低特异性情况下，筛 检的敏感性较化学法大便隐血检测有显著提升。
• 免疫法大便隐血检测（FIT）：建议进行2次间隔1周的检测。经一项1020人 的全人群结肠镜金标准对照筛查试验，与1次检测相比，2次间隔1周的大便
直系亲属结肠镜检查 三甲/省级专科医院就诊
FAP基因筛检
*CHRPE： 眼底视网膜色素上皮细胞肥大
腹腔肿块
• FAP家系受影响者可出现有多种肠外疾病，我国人群的文献报道，肠外疾病以腹腔内硬纤维瘤和骨瘤 最容易被识别且相对较为常见。因此，怀疑FAP时，应特别注意是否有腹腔内硬块和骨瘤。
• FAP患者会出现先天性视网膜色素上皮肥大(CHRPE)，在典型的FAP中发生率可达80%。 • 1/3-1/4的FAP患者无家族遗传史，为该个体胚系新发肿瘤。家族史并不是诊断FAP的必要条件。
内膜癌、小肠癌、输尿管或肾盂癌、卵巢癌、肝胆系统癌）
Lynch综合征的筛检
Lynch综合症筛检——I 级专家推荐
结直肠癌 患者
患者家族史 疑似Lynch
中国人HNPCC家系标准（2003）
结肠癌免疫组化意义免疫组化的临床意义
结肠癌免疫组化意义免疫组化的临床意义临床常用免疫组化指标的意义1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。
2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。
3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。
谷光甘肽S转移酶（GSTπ）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。
拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。
阳性率高者对VP16尤其有效。
雌激素受体（ER）--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。
孕激素受体(PR)--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。
C-erbB-2--癌基因产物--胞浆--阳性率越高，肿瘤恶性程度越高。
ER、PE阳性而C-erbB-2也阳性者，用三苯氧胺治疗效果不好。
Ki-67--细胞增殖标志--胞核--阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。
Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA(增埴细胞核抗原)。
CEA多数腺癌表达CEARb(retinoblastoma视网膜母细胞瘤)基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。
P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。
野生型半衰期很短Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。
目前已被广泛应用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤的检测。
结直肠癌MMR蛋白和MSI检测对比及临床病理特征分析
医学研究杂志 ２０２１年５月 第５０卷 第５期·论 著· 结直肠癌ＭＭＲ蛋白和ＭＳＩ检测对比及临床病理特征分析孙林雍 王紫静 唐 源 陈 昶 江 丹摘 要 目的 探讨结直肠癌（ＣＲＣ）患者ＭＭＲ蛋白表达与微卫星不稳定（ＭＳＩ）检测的一致性以及与临床病理特征的相关性，分析两种检测结果不一致的原因。
方法 选取３９２例ＣＲＣ石蜡包埋组织（ＦＦＰＥ）样本，采用免疫组化（ＩＨＣ）法检测４种ＭＭＲ蛋白（ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６及ＰＭＳ２）表达，至少１种蛋白表达缺失判定为错配修复蛋白表达缺失（ｄＭＭＲ），全部阳性判定为错配修复蛋白表达完整（ｐＭＭＲ）；采用ＰＣＲ毛细管电泳法检测ＭＳＩ，将至少２个单核苷酸重复位点发生改变，归纳为高度ＭＳＩ（ＭＳＩ－Ｈ）；仅有１个单核苷酸重复位点发生改变，归纳为低度ＭＳＩ（ＭＳＩ－Ｌ）；未发生改变，归纳为微卫星稳定（ＭＳＳ）。
结果３９２例ＣＲＣ中，ｄＭＭＲ为１８．９％（７４／３９２），ＭＳＩ－Ｈ占比１８．１％（７１／３９２）。
ＩＨＣ法检测的敏感度、特异性分别为９７．２％和９８ ４％；ＰＣＲ法检测结果的敏感度、特异性分别为９３．２％和９９．４％，两种检测方法的一致性为９８．２％。
７例检测结果不一致的样本中，２例ＰＣＲ法检测结果为ＭＳＩ－Ｈ，ＩＨＣ法检测结果为ｐＭＭＲ；５例ＰＣＲ法检测结果为ＭＳＳ，ＩＨＣ法检测结果为ｄＭＭＲ，其中２例ＭＳＨ６蛋白单独缺失，３例肿瘤为黏液腺癌。
ｄＭＭＲ组与ｐＭＭＲ组、ＭＳＩ－Ｈ组与ＭＳＳ／ＭＳＩ－Ｌ组在发病年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、组织类型、临床分期及淋巴结转移等方面比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
结论 ＩＨＣ法检测ＭＭＲ蛋白与ＰＣＲ法检测ＭＳＩ具有较高的一致性。
ＭＳＨ６单独缺失时，ＰＣＲ检测可能表现为ＭＳＳ。
肿瘤中含黏液时，肿瘤实际占比＜５０％可能对ＰＣＲ检测有一定的影响。
ＣＲＣ中ｄＭＭＲ／ＭＳＩ－Ｈ患者具有明显的临床病理特点，对临床病理诊断、治疗有一定的指导意义。
结直肠癌组织中MMR蛋白表达、MSI、RAS和BRAF基因突变与临床病理特征的关系
㊃论 著㊃D O I :10.3969/j.i s s n .1672-9455.2024.01.001结直肠癌组织中MM R 蛋白表达㊁M S I ㊁R A S 和B R A F基因突变与临床病理特征的关系*向林果,谭憬一,姚 远,孙雪琴,张阳丽ә重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检测中心,重庆400016摘 要:目的 探讨结直肠癌患者癌组织中错配修复(MMR )蛋白表达㊁微卫星不稳定性(M S I)㊁大鼠肉瘤(R A S )基因和致癌同源体B 1(B R A F )基因突变与临床病理特征的关系㊂方法 选取该院2022年1-12月接受根治手术治疗的352例结直肠癌患者的肿瘤组织和血液标本㊁42例非肠癌患者的实体瘤组织和血液标本,采用免疫组化法检测MM R 蛋白表达,一代测序片段分析法检测M S I ,实时荧光定量聚合酶链反应检测K R A S ㊁N R A S 和B R A F 基因突变状态,分析MM R 蛋白表达㊁M S I 和3种基因突变状态与结直肠癌临床病理特征的关系㊂结果 352例C R C 患者肿瘤组织中检出MM R 缺陷(d MM R )29例(8.2%),高度微卫星不稳定(M S I -H )26例(7.4%),K R A S 基因突变161例(45.7%),N R A S 基因突变13例(3.7%),B R A F 基因突变11例(3.1%)㊂与d MM R 有关因素为低龄㊁黏液腺癌㊁原发于右半结肠癌(P <0.05);与M S I -H 相关因素包括低龄㊁肿瘤家族史㊁原发于右半结肠癌(P <0.05);K R A S 和N R A S 基因高突变率分别与黏液腺癌和淋巴结转移有关(P <0.05);B R A F 基因高突变率与低分化和原发于右半结肠癌有关(P <0.05)㊂B R A F 基因突变与d MM R和M S I -H 有关(P <0.05)㊂结论 MM R 蛋白表达,M S I ,以及K R A S ㊁N R A S 和B R A F 基因突变与不同的临床病理特征有关㊂通过这5种分子标志物的联合检测可以对肿瘤进行分子分型,进一步为结直肠癌患者的个体化精准诊疗提供理论依据㊂关键词:结直肠癌; 大鼠肉瘤基因; 致癌同源体B 1基因; 错配修复蛋白; 微卫星不稳定性; 基因突变中图法分类号:R 735.3文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)01-0001-07R e l a t i o n s h i p b e t w e e n m i s m a t c h r e p a i r p r o t e i n e x pr e s s i o n ,M S I ,R A S a n d B R A F g e n e m u t a t i o n i n c o l o r e c t a l c a n c e r t i s s u e s w i t h c l i n i c o p a t h o l o gi c a l c h a r a c t e r i s t i c s *X I A N G L i n g u o ,T A N J i n y i ,Y A O Y u a n ,S U N X u e q i n ,Z HA N G Y a n g l i әC l i n i c a l M o l e c u l a r M e d i c a lD e t e c t i o n C e n t e r ,F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f C h o n g q i n gM e d i c a l U n i v e r s i t y ,C h o n g q i n g 400016,C h i n a A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e m i s m a t c h r e p a i r p r o t e i n (MM R p r o t e i n )e x p r e s s i o n ,m i c r o s a t e l l i t e i n s t a b i l i t y (M S I ),r a t s a r c o m a g e n e (R A S )a n d c a r c i n o g e n i c h o m o l o g B1g e n e (B R A F )g e n e m u t a 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n s h i p be t w e e n MM R p r o t e i n e x p r e s s i o n ,M S I a n d t h r e e g e n e m u t a t i o n s t a t e s w i t h t h e c l i n i c o p a t h o l o gi c f e a t u r e s o f C R C w a s a n a -l y z e d .R e s u l t s I n t h e t u m o r t i s s u e s o f 352p a t i e n t s w i t h C R C ,t h e 29c a s e s (8.2%)o f MM R (d MM R )a n d 26c a s e s (7.4%)o f M S I -H w e r e d e t e c t e d r e s p e c t i v e l y.T h e m u t a t i o n r a t e s o f K R A S ,N R A S ,B R A F g e n e s w e r e 45.7%(161c a s e s ),3.7%(13c a s e s )a n d 3.1%(11c a s e s ),r e s p e c t i v e l y.T h e f a c t o r s a s s o c i a t e d w i t h d MM R w e r e t h e a g e ,m u c i n o u s c a r c i n o m a a n d o r i g i n a t e d f r o m r i gh t -s i d e d c o l o n c a n c e r .T h e f a c t o r s a s s o c i a t e d w i t h M S I -H i n c l u d e d t h e l o w a g e ,f a m i l y t u m o r h i s t o r y a n d o r i g i n a t e d f r o m r i gh t -s i d e d c o l o n c a n c e r (P <0.05).H i g h m u t a t i o n r a t e s o f K R A S a n d N R A S g e n e s w e r e r e l a t e d w i t h m u c i n o u s a d e n o c a r c i n o m a a n d l y m p h n o d e m e t a s t a s i s ,r e s p e c t i v e l y .H i g h B R A F m u t a t i o n r a t e w a s a s s o c i a t e d w i t h p o o r d i f f e r e n t i a t i o n a n d o r i gi n a t e d ㊃1㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1*基金项目:重庆市科卫联合医学科研项目(2020F Y Y X 145)㊂ 作者简介:向林果,女,技师,主要从事临床检验诊断新技术研究㊂ ә通信作者,E -m a i l :346170823@q q.c o m ㊂ 网络首发 h t t p://k n s .c n k i .n e t /k c m s /d e t a i l /50.1167.R.20231130.1627.002.h t m l (2023-12-04)f r o m f r i gh t -s i d e d c o l o n c a n c e r (P <0.05).T h e B R A F g e n e m u t a t i o n w a s r e l a t e d w i t h d MM R a n d M S I -H.C o n c l u s i o n T h e MM R p r o t e i n e x pr e s s i o n ,M S I s t a t u s ,a n d t h e g e n e m u t a t i o n s o f K R A S ,N R A S a n d B R A F a r e c o r r e l a t e d w i t h d i f f e r e n t c l i n i c o p a t h o l o gi c f e a t u r e s .T h e c o m b i n e d d e t e c t i o n o f t h e s e f i v e m o l e c u l a r m a r k -e r s c o u l d b e u s e d t o c l a s s i f yt h e t u m o r m o l e c u l e s ,w h i c h f u r t h e r p r o v i d e s t h e t h e o r e t i c a l b a s i s f o r t h e i n d i v i d u -a l i z e d p r e c i s i o n d i a gn o s i s a n d t r e a t m e n t o f t h e p a t i e n t s w i t h C R C .K e y w o r d s :c o l o r e c t a l c a n c e r ; r a t s a r c o m a g e n e ; c a r c i n o g e n i c h o m o l o g B 1g e n e ; m i s m a t c h r e p a i r p r o t e i n ; m i c r o s a t e l l i t e i n s t a b i l i t y; g e n e m u t a t i o n 结直肠癌(C R C )是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率分别位于恶性肿瘤的第2位和第5位,且呈逐渐上升趋势[1]㊂C R C 的发生㊁发展涉及多个基因和多条细胞信号传导通路,是由一系列复杂的遗传和表观遗传事件逐步累积所致[2-3]㊂相关分子标志物的检测不仅可作为C R C 筛查的有效补充,还在用药方案选择㊁预后判断及疗效预测等方面起到关键作用㊂错配修复(MM R )蛋白㊁微卫星不稳定性(M S I)㊁大鼠肉瘤(R A S )基因和致癌同源体B 1(B R A F )基因突变已被公认是影响C R C 患者个体化治疗策略的主要标志物[4]㊂此前虽有研究报道了关于MM R 蛋白㊁M S I ㊁R A S 和B R A F 基因在C R C 患者中的表达情况,但由于病例纳入标准的差异,标志物组合不同和临床资料的覆盖度不同以及样本量的限制,研究结果不尽相同[5-6]㊂因此,本研究分析了352例C R C 患者的病理标本和详细的临床资料,旨在更完整地探讨MM R蛋白表达㊁M S I ㊁R A S (含K R A S 和N R A S )基因和B R A F 基因突变与各临床病理特征的关系,以及R A S 和B R A F 基因分别与MM R 蛋白表达和M S I 的关系,为C R C 患者的个体化治疗提供理论依据㊂1 资料与方法1.1 一般资料 收集本院2022年1-12月352例病理诊断明确㊁临床病历资料完整患者(C R C 组)的C R C 组织和血液标本,以及42例非C R C 的其他实体瘤患者(非C R C 组)癌组织和血液标本㊂非C R C 的其他实体瘤包括胆管癌㊁肝癌㊁卵巢癌㊁胰腺癌㊁肺癌等共计42例㊂所有患者未接受放化疗㊁靶向或免疫治疗,未合并其他肿瘤㊂患者和家属对本次研究均知情同意,并签署知情同意书㊂本研究通过本院医学伦理委员会的审核批准(伦理审批号:K 2023-566号)㊂C R C 组和非C R C 组研究对象之间性别㊁年龄㊁病理特征等比较,差异均无统计学意义(P >0.05),具有可比性㊂见表1㊂表1 两组患者的临床及病理特征比较[n (%)]组别n性别男女年龄(岁)ɤ50>50高血压史有无糖尿病史有无吸烟史有无饮酒史有无C R C 组352201(57.1)151(42.9)51(14.5)301(85.5)86(24.4)266(75.6)53(15.1)299(84.9)97(27.6)255(72.4)78(22.2)274(77.8)非C R C 组4222(52.4)20(47.6)5(11.9)37(88.1)5(11.9)37(88.1)5(11.9)37(88.1)11(26.2)31(73.8)4(9.5)38(90.5)χ20.3400.2053.3150.2970.0353.635P0.5600.6500.0690.5860.8510.057组别n肿瘤家族史有无分化程度中+高分化低分化T NM 分期(期)Ⅰ+ⅡⅢ+Ⅳ淋巴结转移有无远处转移有无C R C 组35239(11.1)313(88.9)290(82.4)62(17.6)185(52.6)167(47.4)149(42.3)203(57.7)50(14.2)302(85.8)非C R C 组424(9.5)38(90.5)30(71.4)12(28.6)19(45.2)23(54.8)21(50.0)21(50.0)10(23.8)32(76.2)χ20.0022.9540.8050.9002.682P0.965a0.0860.3700.3430.102注:a 为连续性校正χ2检验㊂1.2 仪器与试剂 仪器:全自动免疫组化染色仪(D a k o c yt o m a t i o n )㊁基因测序仪(A B I 3500D x )㊁荧光定量P C R 仪(S L A N 96S )㊁移液器(E p pe n d o rf )㊁紫外分光光度计(N a n o D r o p On e )㊁全自动核酸提取仪(奥盛A u t o -P u r e 32A )㊁涡旋混匀器(其林贝尔Q B -328)㊁微型高速离心机(M i n i -15K )㊁恒温金属浴(奥盛M i n i T -H 2C )㊂试剂:友芝友人类K R A S 基因7种突变检测试剂盒㊁人类N R A S 基因突变检测试剂盒㊁人类B R A F 基因V 600E 突变检测试剂盒㊁新百基F F P E核酸提取或纯化试剂盒㊁桐树M S I 检测试剂盒㊁福州迈新抗体㊂1.3 方法1.3.1 MM R 蛋白表达检测 使用全自动免疫组化染色仪检测394例癌组织标本MM R 蛋白(含㊃2㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1㊁P M S 2)表达㊂M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1和P M S 2四者均表达为(+)判断为错配修复功能完整(p MM R ),任意一种表达为(-)则判为错配功能修复缺陷(d MM R )㊂1.3.2 K R A S ㊁N R A S 和B R A F 基因突变检测 每个癌组织标本制备3张8μm 厚的石蜡切片用于核酸提取,1张4μm 白片用于H E 染色㊂H E 染色后由两位病理医师镜下阅片标识出肿瘤细胞比例>20%的区域㊂于H E 染色片肿瘤富集区域刮取3张白片对应区域组织用于D N A 提取㊂采用全自动核酸提取仪进行D N A 提取并采用紫外分光光度计测得D N A 标本的浓度和纯度㊂采用实时荧光定量聚合酶链反应(P C R )技术检测标本D N A 中K R A S 基因第2外显子,N R A S 基因第2㊁3㊁4号外显子,B R A F 基因第15号外显子的热点突变㊂D N A 标本的提取㊁稀释㊁加样㊁扩增程序和结果判读均严格按照试剂盒说明书进行㊂1.3.3 M S I 检测 采用一代测序片段分析法(荧光P C R -毛细管电泳法),使用M S I 检测试剂盒对所有患者肿瘤组织和血液标本进行M S I 检测㊂试剂盒覆盖5个M S 位点(B A T -25㊁B A T -26㊁D 5S 346㊁D 2S 123㊁D 17S 250)㊂结果判定:ȡ2个M S 位点不稳定为高度微卫星不稳定(M S I -H );1个M S 位点不稳定为低度微卫星不稳定(M S I -L );若5个M S 位点均稳定,则为微卫星稳定(M S S )㊂1.4 统计学处理 采用S P S S 25.0统计软件处理和分析数据㊂计数资料采用例数或百分率表示,突变状态及临床特征单因素分析采用χ2检验,当理论数1ɤT<5时用连续性校正χ2检验;当T<1或n ɤ40时,用F i s h e r 确切概率法;多因素L o gi s t i c 回归分析基于单因素分析结果㊂采用一致性检验(K a p p a 值)统计分析免疫组化法检测MMR 蛋白和荧光P C R -毛细管电泳法检测M S I 结果的一致性程度:K a p p a 值<0表示极差;0~0.2表示微弱;>0.2~0.4表示弱;>0.4~0.6表示中度;>0.6~0.8表示高度;>0.8~1.0表示极强㊂以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变情况 352例C R C 患者中d MM R 检出率为8.2%,4种MM R 蛋白(M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1㊁P M S 2)的缺陷检出率分别为0.9%㊁1.7%㊁4.5%和6.8%㊂M S I -H 检出26例,M S I -L 检出3例,M S S 共323例㊂K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变率依次为45.7%㊁3.7%㊁3.1%;N R A S 基因只检出G 12D 和Q 61R 位点突变,未发现K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因之间存在交叉突变㊂42例非C R C 的肿瘤患者d M -M R 检出率㊁M S I -H 检出率㊁K R A S 和N R A S 基因突变率依次为2.4%㊁4.8%㊁23.8%㊁2.4%,未检出B R A F 基因突变㊂与非C R C 组相比,C R C 组的K R A S 基因突变率显著升高(P <0.05),两组MM R 蛋白表达,M S I ㊁N R A S 和B R A F 基因突变情况比较,差异无统计学意义(P >0.05)㊂见表2㊂表2 d MM R ,M S I -H 以及K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 常见基因突变类型分析[n (%)]组别nd MM RM S H 2缺陷M S H 6缺陷M L H 1缺陷P M S 2缺陷合计M S I -H C R C 组3523(0.9)6(1.7)16(4.5)24(6.8)29(8.2)26(7.4)非C R C 组421(2.4)0(0.0)0(0.0)1(2.4)1(2.4)2(4.8)χ21.0920.095P0.296a0.758a组别nK R A S 基因突变G 12CG 12SG 12RG 12VG 12DG 12AG 13D合计N R A S 基因突变G 12D Q 61R合计B R A F基因突变V 600EC R C 组35213(3.7)11(3.1)1(0.3)31(8.8)64(18.2)10(2.8)31(8.8)161(45.7)7(2.0)6(1.7)13(3.7)11(3.1)非C R C 组421(2.4)0(0.0)0(0.0)5(11.9)3(7.1)0(0.0)1(2.4)10(23.8)0(0.0)1(2.4)1(2.4)0(0.0)χ27.346<0.001-P 0.007>0.999a0.616b注:a 为连续性校正χ2检验;b为F i s h e r 确切概率法;表示无数据㊂2.2 不同临床病理特征C R C 癌组织中MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变状态 352例C R C 患者的5种分子标志物与临床病理特征关系的分析结果显示:年龄ɤ50岁㊁黏液腺癌㊁原发于右半结肠的患者d MM R 检出率更高(P <0.05);M S I -H 多见于年龄ɤ50岁㊁有肿瘤家族史㊁黏液腺癌㊁原发于右半结肠㊁T NM 分期Ⅰ+Ⅱ期㊁无淋巴结转移的患者(P <0.05)㊂K R A S 基因高突变率的临床特征表现为女性㊁无吸烟史㊁黏液腺癌(P <0.05);N R A S 基因仅在有淋巴结转移的患者中突变率升高㊃3㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1(P <0.05);B R A F 基因突变率在低分化和原发于右半结肠的患者中更高(P <0.05)㊂见表3㊂将单因素分析中差异有统计学意义的变量纳入多因素L o g i s t i c 回归模型㊂由于在单因素分析中只有淋巴结转移与N R A S 基因突变有关,因此在多因素分析中排除了N R A S 基因突变㊂多因素L o gi s t i c 回归分析结果显示,黏液腺癌患者更易发生K R A S 基因突变(P <0.05);低龄㊁有肿瘤家族史的右半结肠癌患者更易表现出M S I -H (P <0.05);d MM R 和B R A F 基因突变多因素分析结果与单因素分析一致㊂见表4㊂表3 不同临床特征下MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变情况分析[n (%)]项目nM M R 蛋白d M M Rχ2PM S IM S I -Hχ2PK R A S 基因突变χ2PN R A S 基因突变χ2PB R A F 基因突变χ2P性别 男20120(10.0)1.8160.17815(7.5)0.0040.95081(40.3)5.5870.01810(5.0)2.1650.1418(4.0)0.5690.451a女1519(6.0)11(7.3)80(53.0)3(2.0)3(2.0)年龄(岁) ɤ50519(17.6)5.6040.018a 10(19.6)11.0170.001a 21(41.2)0.5000.4791(2.0)0.0950.758a1(2.0)0.0070.935a>5030120(6.6)16(5.3)140(46.5)12(4.0)10(3.3)高血压史 有865(5.8)0.8850.3474(4.7)1.2450.26540(46.5)0.0270.8692(2.3)0.1980.657a2(2.3)0.0180.894a无26624(9.0)22(8.3)121(45.5)11(4.1)9(3.4)糖尿病史 有535(9.4)0.0050.942a4(7.5)<0.001>0.999a 21(39.6)0.9400.3324(7.5)1.4860.223a1(1.9)0.0180.894a无29924(8.0)22(7.4)140(46.8)9(3.0)10(3.3)吸烟史 有9710(10.3)0.7590.3847(7.2)0.0060.94034(35.1)6.1620.0134(4.1)<0.001>0.999a 5(5.2)1.0140.314a 无25519(7.5)19(7.5)127(49.8)9(3.5)6(2.4)饮酒史 有788(10.3)0.5400.4636(7.7)0.0140.90732(41.0)0.8970.3442(2.6)0.0670.796a3(3.8)0.0020.963a无27421(7.7)20(7.3)129(47.1)11(4.0)8(2.9)肿瘤家族史 有396(15.4)1.9950.158a 8(20.5)8.9950.003a 19(48.7)0.1570.6920(0.0)-0.376b1(2.6)<0.001>0.999a 无31323(7.3)18(5.8)142(45.4)13(4.2)10(3.2)病理类型 普通腺癌30820(6.5)8.1650.004a 19(6.2)4.0110.045a 132(42.9)8.2430.00412(3.9)0.0110.915a 10(3.2)<0.001>0.999a 黏液腺癌449(20.5)7(15.9)29(65.9)1(2.3)1(2.3)分化程度中+高分化29021(7.2)2.1660.14121(7.2)<0.001>0.999a 136(46.9)0.8890.34610(3.4)0.0240.876a 3(1.0)20.009<0.001a 低分化628(12.9)5(8.1)25(40.3)3(4.8)8(12.9)原发部位 左半结肠+直肠27217(6.3)6.2610.01215(5.5)6.1290.013119(43.8)1.9070.16712(4.4)0.9620.327a5(1.8)4.8090.028a 右半结肠8012(15.0)11(13.8)42(52.5)1(1.3)6(7.5)分期(期) Ⅰ+Ⅱ18518(9.7)1.1470.28420(10.8)6.6850.01078(42.2)2.0100.1564(2.2)2.5700.1093(1.6)2.9110.088Ⅲ+Ⅳ16711(6.6)6(3.6)83(49.7)9(5.4)8(4.8)淋巴结转移 有14910(6.7)0.7970.3725(3.4)6.1360.01373(49.0)1.1030.29410(6.7)6.6170.0107(4.7)1.3070.253a 无20319(9.4)21(10.3)88(43.3)3(1.5)4(2.0)㊃4㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1续表3 不同临床特征下M M R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变情况分析[n (%)]项目nM M R 蛋白d M M Rχ2PM S IM S I -H χ2PK R A S 基因突变χ2PN R A S 基因突变χ2PB R A F 基因突变χ2P远处转移 有502(4.0)0.8090.369a2(4.0)0.4850.486a29(58.0)3.5300.0601(2.0)0.0790.779a3(6.0)0.6770.411a无30227(8.9)24(7.9)132(43.7)12(4.0)8(2.6) 注:a 为连续性校正χ2检验;b 为F i s h e r 确切概率法;-表示无数据㊂表4 影响MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁B R A F 基因突变的多因素分析项目d M M RO R 95%C IP M S I -HO R 95%C IP K R A S 突变O R95%C IP B R A F 突变O R95%C IP性别(女v s .男)1.360.83~2.240.225年龄(ɤ50岁v s .>50岁)2.831.17~6.850.0224.681.80~12.170.002病理学类型(黏液腺癌v s .普通腺癌)3.011.23~7.390.0162.160.75~6.200.1532.481.27~4.840.008原发部位(左半结肠+直肠v s .右半结肠)0.410.18~0.920.0300.310.12~0.760.0110.230.06~0.820.024分期(Ⅰ+Ⅱ期v s .Ⅲ+Ⅳ期)2.230.26~19.400.468淋巴结转移(有v s .无)0.510.05~5.130.569分化程度(高v s .低)0.070.02~0.28<0.001肿瘤家族史(有v s .无)4.621.70~12.540.003吸烟史(有v s .无)0.670.38~1.170.157注:括号内a v s .b 表示a 同b 比较,b 为参考,b 的O R 赋值为1㊂2.3 不同MM R 蛋白表达和M S I 状态下R A S 和B R A F 基因突变情况 352例C R C 患者中,K R A S ㊁B R A F 基因突变与d MM R 有关,与p MM R 患者相比,d MM R 患者K R A S 基因突变率降低而B R A F 突变率显著升高(P <0.05)㊂M S I -H 的患者同样具有更高的B R A F 基因突变率(P <0.05),而K R A S 和N R A S 基因突变率与M S I 状态无关(P >0.05)㊂见表5㊂表5 不同MM R 蛋白表达和M S I 状态下R A S 和B R A F 基因突变情况分析[n (%)]项目n K R A S 突变χ2P N R A S 突变χ2P B R A F 突变χ2Pd MM R 297(24.1)5.9420.0152(6.9)0.1940.659a4(13.8)8.3510.004apMM R 323154(47.7)11(3.4)7(2.2)M S I -H268(30.8)2.5350.1110(0.00)-0.610b3(11.5)3.9060.048a M S I -L 及M S S326153(46.9)13(4.0)8(2.5) 注:a 为连续性校正χ2检验;b为F i s h e r 确切概率法;-表示无数据㊂2.4 MM R 蛋白检测与M S I 检测一致性分析 将M S S 和M S I -L 划为一组,d MM R 对应M S I -H ,p M -M R 对应M S S 或M S I -L ,分析免疫组化法检测MM R 和荧光P C R -毛细管电泳法检测M S I 结果的一致性㊂两组共394份标本中,MMR 蛋白检测和M S I 检测结果相符的共有378例,总体相符率为95.9%,K a p pa 一致性检验结果表明,两种检测方法检测结果高度一致(K a p p a =0.702,P <0.001)㊂结果不一致标本中有9例免疫组化检测为d MM R ,P C R -毛细管电泳结果为M S S ;7例P C R -毛细管电泳结果为M S I -H ,免疫组化显示p MMR ㊂3 讨 论MM R 基因的主要功能是修复D N A 复制和重组过程中的碱基错配,以确保基因结构的稳定性,其编码的最重要的蛋白家族包括M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1和P M S 2㊂d MM R 可引起微卫星复制错误㊁不能被修㊃5㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1复,导致微卫星长度改变,从而表现为M S I㊂既往研究已经证实,MM R基因突变或高甲基化和M S I不仅是林奇综合征的主要原因,也是C R C的重要发病机制之一[2,7]㊂本研究显示,d MM R在C R C患者中的检出率为8.2%,与之前报道3%~13%的亚洲C R C患者表现出d MM R状态的结果相符[8];M S I-H检出率为7.4%,略低于d MM R检出率㊂在本研究中,与d MM R和M S I-H高检出率有关的共同临床病理因素为低龄和原发部位为右半结肠癌,表明d MM R和M S I-H与C R C疾病早发性和原发部位有关㊂也有研究报道,T NM分期为Ⅰ~Ⅱ期的无淋巴结转移的C R C患者中M S I-H的发生率较高[9-10],这与本研究中M S I的单因素分析结论相符㊂但在多因素L o g i s-t i c回归分析中,与M S I相关因素排除了病理学类型㊁分期和淋巴结转移,显示有肿瘤家族史的患者更容易发生M S I-H,黏液腺癌更容易发生d MM R㊂既往研究发现,d MM R或M S I-H的C R C患者中B R A F V600E突变和M L H1启动子甲基化与散发性C R C密切相关[11-12]㊂本研究显示,B R A F V600E突变与d MM R和M S I-H密切相关,其突变率在d MM R 和M S I-H患者中明显高于p MM R和非M S I-H(M S S 和M S I-L)患者㊂因此,当C R C患者单独检测到M S I-H或M L H1缺失时,有必要进行B R A F基因突变和(或)M L H1启动子甲基化的后续检测,如有B R A F V600E突变则不能确诊为林奇综合征㊂有报道指出,在d MM R或M S I-H的转移性C R C患者中,若存在B R A F基因突变则提示生存率更差,而R A S基因突变可能与生存率无关[13]㊂尽管MM R蛋白表达和M S I反映的是同一生物学事件,但本研究中MM R蛋白表达和M S I与临床病理特征的关系仍存在略微不同,这可能是由于两种标志物检测结果不完全一致所致㊂同一标本出现免疫组化结果为p MM R而荧光P C R-毛细管电泳法结果为M S I-H这种情况的原因:一方面可能是MM R蛋白的基因发生变异,这些变异虽不影响蛋白的抗原结构,但却能影响其MM R功能,导致微卫星位点MM R 失败;另一方面可能是其他MM R蛋白(除外M S H2㊁M S H6㊁M L H1和P M S2这4种主要的MM R蛋白)的缺失亦会影响微卫星的稳定性,表现出p MM R而微卫星不稳定[14]㊂当然,由于MM R蛋白之间存在功能重复(P M S2和P M S1㊁M S H6和M S H3),当孤立性的M S H6缺失时,M S H3可以功能性替代部分M S H6,活化MM R系统而继续保留M S S状态,从而表现为d MM R而M S S[14]㊂此外,免疫组化法依赖于染色过程,染色质量不佳会影响结果准确判读,同一份标本不同的切取角度也有可能造成两种检测结果不一致㊂因此,为提高检测准确性,不管是在林奇综合征的筛查时,还是C R C患者治疗指导时,建议进行MM R蛋白和M S I联合检测,相互补充㊂表皮生长因子受体(E G F R)是临床上治疗C R C 的主要靶点之一㊂K R A S㊁N R A S和B R A F基因是E G F R依赖的下游丝裂原活化蛋白激酶(MA P K)信号通路中的3个关键分子,这些基因的突变可导致MA P K通路的激活,促进大多数癌细胞增殖和抗凋亡,使E G F R受体抑制剂无效㊂临床研究表明,M S S㊁R A S和B R A F基因野生型的转移性C R C患者能从抗E G F R单抗治疗中获益[15]㊂本研究中K R A S基因第2外显子突变率为45.7%,与文献[16]报道结果相近㊂在单因素分析中,与K R A S基因突变有关的临床病理参数为女性㊁黏液腺癌和无吸烟史,但多因素L o-g i s t i c回归分析显示,仅黏液腺癌是K R A S基因突变的独立影响因素㊂已有研究报道,由于C R C中K R A S等位基因的多样性,不同K R A S基因突变可能具有不同的预后,但导致预后不同的原因尚不清楚㊂其中K R A S基因第2外显子12号密码子G12C已被证明与较差的总生存率相关[17-18]㊂N R A S基因突变较少发生,本研究中C R C组N R A S基因突变检出率为3.7%,有淋巴结转移的患者N R A S基因突变率高于无淋巴结转移者(P=0.010),有肿瘤家族史和M S I-H的C R C患者未检测出N R A S基因突变㊂笔者推测N R A S突变可能与淋巴结转移㊁肿瘤家族史及M S I有一定关系,但因本次N R A S基因突变例数较少,有待增加病例数进一步分析证实㊂B R A F基因编码一种R A F激酶蛋白,参与调控细胞生长㊁增殖㊁分化和凋亡等过程,其突变状态与多种肿瘤的发生㊁发展和临床预后相关㊂B R A F基因V600E突变往往被认为是肿瘤侵袭性的标志,与B R A F野生型相比,它是转移性C R C患者预后不良和总生存期更短的危险因素[19]㊂本研究中,C R C组B R A F基因V600E突变率为3.1%,低于西方人群8%~12%的突变率[20],但与之前报道的中国C R C患者B R A F基因突变率相当[21],进一步证实C R C患者B R A F基因突变在中国和西方人群存在种族差异㊂本研究显示B R A F基因在低分化㊁原发于右半结肠的患者中突变率高,但未发现与淋巴结转移和远处转移等其他不良预后的临床病理特征有关㊂B R A F和R A S基因同处于R A S-R A F-MA P K通路,突变结果相互排斥,本研究未发现R A S和B R A F基因同时发生突变㊂毋庸置疑,MM R蛋白,M S I,以及K R A S㊁N R A S㊁B R A F基因已经成为需要新辅助治疗和转移性C R C肿瘤患者的常规检测项目[4]㊂随着分子诊断技术的飞速发展,适用于肿瘤早筛早诊的分子标志物也得到越来越多的关注和重视㊂硫酸类肝素蛋白多糖2(S D C2)㊁隔膜蛋白9(S E P T9)㊁组织因子通路抑制因子2(T F P I2)基因被认为是潜在的C R C早筛分子标志物,特别是粪便标本S D C2基因甲基化检测,有望普及作为一种新的无创的高灵敏度㊁高特异度的㊃6㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n,J a n u a r y2024,V o l.21,N o.1C R C辅助诊断方法[22]㊂循环肿瘤细胞(C T C)检测也是一种理想的临床肿瘤液体活检技术,可提供C R C 患者疾病状态的实时信息,有助于C R C的预后评估㊁治疗反应监测㊁复发转移风险评估等㊂综上所述,本研究分析了C R C患者的MM R蛋白,M S I,以及K R A S㊁N R A S㊁B R A F基因共5个分子标志物,发现它们与多种临床病理特征相关㊂这些发现为C R C的临床诊断和个体化精准治疗提供了额外的支持㊂本研究也存在不足,缺乏这些患者的临床治疗和预后的数据,不能分析这些分子标志物与疗效或预后之间的关系,下一步将继续完善随访数据,进行更深入全面的探讨㊂参考文献[1]X I A C,D O N G X,L I H,e t a l.C a n c e r s t a t i s t i c s i n C h i n aa n d U n i t e d S t a t e s,2022:p r o f i l e s,t r e n d s,a n d d e t e r m i-n a n t s[J].C h i n M e d J,2022,135(5):584-590. 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2020CSCO结直肠癌指南
≥1位一级或二级 亲属患大肠癌
Lynch HT, et al. 2013
遗传性结直肠癌指南总体框架
遗传性结直肠癌主要包括：
• Lynch综合症 • FAP (家族性腺瘤性息肉病)
n 典型的FAP
结直肠内息肉数均在100枚以上，癌变 年龄早，癌变风险几乎为100%
n AFAP (轻症FAP)
基本一致共识，但有小的争 顾性研究、病例-对照研究，专
议（支持意见60%~80%） 家组取得一致共识（支持意见
≥80%）
III级 2B类证据：
3类证据：
• 正在探索的诊治手段，
专家推荐 基于稍低水平证据，如一般 基于低水平证据，如样本数量不
质量的meta分析、小型随 大的非对照的单臂临床研究、病
虽然缺乏循证医学证 据，但是专家组具有
息肉数相对较少，癌变年龄相对较大
n MAP (MUTYH相关息肉病)
临床表现与AFAP相似
• PJ综合症(黑斑息肉综合症)
指南总体框架
启动筛检的一般原则
Lynch筛检 I级专家推荐 II级专家推荐 III级专家推荐
FAP筛检 I级专家推荐 II级专家推荐 III级专家推荐
PJ筛检 I级专家推荐 II级专家推荐 III级专家推荐
• MDT原则应该贯穿每一位患者的治疗全程
• MDT团队应根据治疗过程中患者机体状况的变化、肿瘤的 反应而适时调整治疗方案，以期最大幅度地延长患者的生 存期、提高治愈率和改善生活质量
结直肠癌的筛查及遗传学
• 无症状健康人群的结直肠癌筛查
p 见指南第2.1节
• 遗传性结直肠癌筛检和基因诊断原则
p 见指南第5节
每年参加结直肠癌筛查 (FIT 每年1次)
遗传性结直肠癌基因检测及其在临床上的应用规范化问题
遗传性结直肠癌基因检测及其在临床上的应用规范化问题姜烈君;陆晓旭;黄华艺【摘要】遗传性结直肠癌是一类多因素遗传特征家族性疾病,包括Lynch综合征、家族结直肠腺瘤性息肉和MYH相关性息肉,约占所有结直肠癌的5％.Lynch综合征(又称遗传性非息肉性结直肠癌)是因无效的错误配对修复(mismatch repair,MMR)而导致微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)的一系列相关癌症,常由MMR基因(MLH1、MSH2、MSH6和PMS2)突变引起.家族性结直肠腺瘤性息肉(familial adenomatous polyposis,FAP)是APC基因突变引起的广泛性结肠息肉病.而MUTYH基因突变可引起MYH相关性息肉(MYH-associated polyposis,MAP).为了规范对遗传性结直肠癌的分子诊断技术流程,美国医学遗传学和基因组学会制定检测大纲以供各相关实验室参考.本文对该大纲进行归纳并结合我国的大纲进行讨论.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2016(008)002【总页数】7页(P135-141)【关键词】遗传性结直肠癌;家族性腺瘤样息肉;Lynch综合征;MYH相关性息肉;基因检测【作者】姜烈君;陆晓旭;黄华艺【作者单位】广西壮族自治区人民医院检验科,广西,南宁530021;广西壮族自治区人民医院检验科,广西,南宁530021;广西壮族自治区人民医院检验科,广西,南宁530021;美国罗斯威尔帕克癌症研究所肿瘤外科,纽约,布法罗14263【正文语种】中文结直肠癌（colorectal cancer，CRC）可分为散发性、家族性或遗传性几种特征。
约20%～30% CRC为多因素遗传特征家族性疾病，因遗传获得的高度外显率单基因突变约占所有CRC的5%。
Lynch综合征、家族结直肠腺瘤性息肉（familial adenoma⁃tous polyposis，FAP）和MYH相关性息肉（MYH⁃associated polyposis，MAP）为3种常见遗传性CRC，约占所有CRC的5%。