红细胞悬液的配制
新生儿溶血卡式游离放散试验及判定表
游离和放散试验操作程序
（微柱凝胶法）
一、被捡者红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞400微升，加入5毫升生理盐水，离心1
分钟，弃去上清液，再入5毫升生理盐水，离心，反复4次，第4次弃去上清液后，再离心然后弃去上清液。
取洗涤后的压积红细胞与350微升生理盐水混匀，即为红细胞悬液。
二、放散液制备：将红细胞悬液置于56℃水温箱，孵育10分钟，期间不断摇动，以离心力1000g，
离心2－3分钟，取上清即红细胞放散液。
三、操作步骤：
（一）反定型红细胞悬液的制备。
取反定型红细胞A、B、O各1滴（约50微升）于标记好的试管中，加生理盐水250微升。
（二）取抗人球蛋白试剂卡，写上姓名，1、2、3孔分别加入50微升新生儿血浆（游离试验），4、5、6孔分别加入50微升红细胞放散液（放散试验）。
（三）在第1、4孔分别加入新配制的A型红细胞悬液各50微升；在第2、5孔分别加入新配制的B型红细胞悬液各50微升；在第3、6孔分别加入新配制的0型红细胞悬液各50微升。
（四）将检测卡置于37℃孵育器孵育15分钟。
（五）使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出检测卡，根据表格判读结果：
阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或悬于胶中，表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或红细胞被致敏。
用”+”表示。
阴性结果：红细胞完全沉降到微柱管尖底部，表明血清中无相应抗原免疫的抗体或红细胞没有被致敏。
用”0”表示。
新生儿溶血病游离放散试验判定表。
红细胞悬液的配制[精彩]
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红细胞悬液的配制[精彩]红细胞悬液的配制1 目的配制合格的红细胞悬液。
2 使用范围适用于ABO血型鉴定、Rh血型鉴定、交叉配血试验及抗A和抗B血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验等。
3 职责血库专业人员及本科值班人员。
4 试剂及仪器4.1.1 生理盐水4.1.2 离心机5 操作规程5.1 取红细胞加入已标记的洁净小试管(内径10mm×60mm)中～3000r/min离心5min。
5.2 弃上清～加入适量生理盐水～用吸管轻轻吹散管底红细胞～3000r/min离心5min。
5.3 重复5.1.2操作2次以充分洗涤红细胞。
5.4 用吸管小心吸取上层生理盐水并弃去～取底部压实红细胞按下表1配成不同浓度的红细胞悬液。
表1 红细胞悬液配制悬液浓度,%, 压实红细胞,滴, 生理盐水,滴,2 1 2.0ml,40,4 1 1.0ml,20,3-5 1 0.8ml-1.3ml,16-26,5 1 0.8ml,16,10 1 0.4,8, 6.质量控制6.1 配制A型和B型5,试剂红细胞悬液时需随机选用经血液中心鉴定血型的3个以上健康成人同型标准红细胞～无溶血及脂血。
配制前需按[ABO血型手工鉴定]进行正反定型。
6.2 离心时严格按照转速要求～吹散管底红细胞时动作需轻柔～防止溶血。
6.3 试管和滴管必须清洁干燥～防止溶血。
6.4 A型和B型5,试剂红细胞悬液使用前需按[ABO血型手工鉴定]进行正定型。
7 红细胞悬液的保存7.1 配制好的5,的试剂红细胞悬液应在试管上注明红细胞血型及配制时间～并在[配制5,试剂红细胞悬液记录表]中按要求记录～加盖后2-8?避光保存～有效期3天。
7.2 用于血型鉴定的受检者3-5%红细胞悬液可不保存。
7.3 抗A和抗B血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验所需红细胞悬液需现用现配～使用后勿需保存。
8 参考文献叶应妩,王毓三～申子瑜主编.全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司. 南京.第三版.附表:文件修改记录修改内容修改人修改时间批准人批准时间配制5,试剂红细胞悬液记录表配制时间血型浓度体积,ml, 失效时间配制人。
红细胞裂解液的配方
红细胞裂解液的配方红细胞裂解液是一种可以用于制备单细胞悬液的液体，是用于培养细胞、测定细胞特性或进行免疫学和细胞生物学分析时必不可少的。
红细胞裂解液的配方可能会随着应用不同而有所不同，一般来说，红细胞裂解液应该包含两种主要成分：溶剂和除去红细胞壁的酶。
第一步，选择溶剂。
红细胞裂解液的溶剂有多种，如水、生理盐水、PBS(phosphate buffered saline)、Tris-HCl（tris hydrochloric acid）及EDTA （ethylenediaminetetraacetic acid）等。
其中，生理盐水和PBS是最常用的，因为它们能够保持细胞环境的稳定性，PBS也是大多数细胞生物学实验中最常用的溶剂之一，而EDTA是一种有助于去除红细胞壁的溶剂。
第二步，选择酶。
红细胞裂解液中的酶一般是由trypsin或RNase组成，这两种酶都有助于去除红细胞壁，以便使细胞可以被溶解。
有些研究者会添加DNAse （deoxyribonuclease），这种酶可以帮助降解DNA，从而减少胎牛血清白蛋白对细胞的污染。
第三步，添加抗凝剂。
抗凝剂可以防止细胞在悬液中凝结，常用的抗凝剂有EDTA、heparin、citrate等。
抗凝剂的用量一般以0.1%~0.5%的浓度添加到溶剂中。
第四步，添加抗生素。
抗生素可以有效预防致病微生物的污染，常用的抗生素有penicillin/streptomycin、gentamicin、amphotericin B等，一般以100U/ml的浓度添加到溶剂中，以防止污染。
最后，将上述所有成分添加到一定的比例中，并搅拌均匀，就可以制备出一种完整的红细胞裂解液了。
通常情况下，红细胞裂解液的配方可以根据具体的实验要求而有所不同，可根据实验的具体要求调整添加的各种成分的比例，以满足实验的要求。
总之，红细胞裂解液的配方应当包括溶剂、除去红细胞壁的酶、抗凝剂和抗生素，经过调整添加各种成分的比例，即可制备出一种完整的红细胞裂解液。
红细胞悬液
红细胞悬液
红细胞悬液是指将新鲜的血液经过特定处理后得到的一种液体样品，其中富含红细胞。
红细胞，也被称为红血球，是血液中最常见的细胞之一，承担着输送氧气到全身组织和细胞的重要功能。
在制备红细胞悬液的过程中，首先需要获取供给的新鲜血液样品。
这种血液通常来自健康的供体，在采集后通过一系列的步骤进行处理。
其中包括离心、洗涤、悬液化等过程。
离心是最常见的一步。
通过离心，可以将血液样品分离成不同的组分，而红细胞通常会沉积在离心管底部形成一个底层。
接着，通过去除上层的血浆和其他细胞成分，就可以得到富含红细胞的血细胞悬液。
洗涤是为了去除血细胞表面所附着的血浆蛋白、细胞碎片等杂质，以确保制备的红细胞悬液纯净。
在洗涤过程中，需要将红细胞悬液与生理盐水等溶液混合后进行离心，重复这个过程数次以彻底清洗。
悬液化是指将处理后的红细胞重新悬浮在适当的液体介质之中，以确保红细胞的分散性和稳定性。
悬液化过程需要一定的技术和设备支持，以确保红细胞悬液具备所需的性质。
红细胞悬液在医学、科研等领域具有重要意义。
它可以用于临床上的输血、实验室的细胞培养等多个方面。
通过制备红细胞悬液，医学工作者可以更好地理解红细胞的结构、功能以及相关疾病的研究。
总的来说，红细胞悬液是一种重要的生物学样品，其制备过程需要精准的操作和严格的控制。
通过对红细胞悬液的研究和应用，我们可以更好地认识和利用这种重要的细胞组分，为医学和科学的发展做出贡献。
红细胞悬液制备
2021/5/19
为什么ABO血型鉴定应采用“正反定型”两种方法？
因为 ABO 血型鉴定,主要依据受检者红细胞与 抗A 、抗B 试剂血清反应结果确定,此法称正定型法； 也可通过受检者的血清与A型、B型和O型试剂红细 胞反应结果确定,此法称反定型法，同时采用正反定 型法,并互相核对其结果是否一致是一个可靠的血型 鉴定法。
2021/5/19
离心
2021/5/19
相对应的抗原抗体反应
2021/5/19
观察结果
2021/5/19
ABO血型判断
血
正定型
反定型
型 抗-A
抗-B
AC
BC
OC
A
+
—
—
+
—
B
—
+
+
—
—
O
—
—
+
+
—
AB +
+
—
—
—
2021/5/19
思考题
ABO血型的分类原则是什么？ A BO 血型的分类原则是根据红细胞膜上所存在
• 抗凝或不抗凝的血标本→洗涤→压积பைடு நூலகம்细胞→配制
红细胞悬液
• 2-3% 的红细胞悬液
试管法血型鉴定、效价滴 定
• 5% 的红细胞悬液
绵羊红细胞悬液制备方法(2%,4%)
南京森贝伽生物科技有限公司
绵羊红细胞制备方法
一、目的
规定绵羊红细胞制备方法，以及外购绵羊红细胞的管理办法，指导操作人员实验操作，保证检验结果的正确性。
二、适用范围
适用于实验使用的4%以及各浓度绵羊红细胞的制备。
三、材料和设备
3.1生理盐水：即0.85%氯化钠溶液，取氯化钠8.5g，溶解于1000ml纯化水即得。
3.21ml或2ml,5ml一次性注射器，冰箱等
3.3阿氏液：自配
四、操作流程
4.1绵羊血采集：采用颈动脉采血法。
4.1.1先将绵羊固定，剪去颈部位置的被毛。
4.1.2压迫绵羊，让其血管扩展以确定下针部位，对该部位使用75%酒精消毒。
4.1.3预先吸入约1~2ml阿氏液于5或10ml注射器中，实验者手持有针头的注射器，在血管凸起位置扎针，血液自动进入注射器。
4.1.4一般情况下，一只成年绵羊可采血250-500ml血，且注意抽血时一定要缓慢。
采完后要压迫止血。
4.2绵羊血保存：外购绵羊血按照供应商推荐的保存条件及有效期。
自采绵羊血与阿氏液混匀，置入15ml离心管中，在2~8℃保存，有效期二周。
4.3绵羊红细胞制备：使用前处理绵羊血，步骤如下：1500rpm离心5min，弃去上清液。
加生理盐水至15ml，摇匀，1500rpm离心5min，弃去上清液，重复两次，最后一次离心10分钟。
用无菌生理盐水配制成2%或实验所需绵羊红细胞悬液即得，置2~8℃备用，有效期7天。
血型鉴定(微柱法)
目录
contents
01 原 理 、 标 本 要 求 02 操 作 步 骤 、 结 果 判 读 03 注 意 事 项
原理
微柱凝胶试验是利用凝胶的分子筛效应，区分血液凝集反应中游离和凝集的红细 胞的技术，把特定配比的凝胶介质放入微量反应柱中，形成分离相，分离相的上 方是反应池，即红细胞与相应的抗血清或受检血清发生反应的地方。
粒悬浮于近凝胶底部
表示混合凝集外观，部分RBC凝集颗粒集结于凝胶表层，
dcp
部分RBC沉于凝胶底部
表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有
pH
残留RBC
表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色胶底部
结 果判 读
判读标准
结果判读
正定型 <3+ 试管复查 亚型或抗原减弱? 反定型 ① <2+ ② 0型价差超过2+ 试管复 查 亚型或抗体减弱? 正反定型不符 试管复查 参照试管结果进一步分析
注意事项
操作
结果判读
结果分析
注意事项
一．操 作
贮存条件：室温，非低温
检查：液面是否干涸 、微柱介质中是否有气泡 使用 前离心
撕开锡纸注意：避免柱间特异性抗体试剂的交又污染
红细胞悬液配制：标准化 过高造成假阴性结果，过 低可发生弱抗原漏检
加样：不触碰凝胶，先红细胞再血浆/血清，加样后 轻轻震动微柱凝胶卡混匀，以便抗原抗体充分反应
感谢您的观看
一定离心力的作用:
1. 未凝集的红细胞 沉淀于柱的底部
阴性反应
2. 凝集的细胞
滞留于柱的顶部或中间 阳性反应
标本要求
EDTA或CPD-A抗凝血：离心分离出血细胞的血浆。 用血清检测， 需要1500g离心10分钟，以免纤维蛋白残余干扰试验结果。 配制红细胞悬液浓度 ：0.8%~5%。 不同的试剂和不同的实验项目，要求都不一样。
红细胞中和试验操作规程
红细胞中和试验操作规程
《红细胞中和试验操作规程》
一、实验目的
红细胞中和试验是一种用于检测体液中抗体和抗原反应的实验方法。
本实验的目的是通过红细胞中和试验来判断患者的血清中是否存在特定的抗体，并对其抗原进行鉴定。
二、实验仪器与试剂
1. 离心机
2. 玻璃试管和试管架
3. 1% 的红细胞悬液
4. 不同血型抗体
三、实验步骤
1. 取一根试管，在底部标记所需进行的血型和试验样本编号。
2. 取充分标记的血样和同等数量的1%红细胞悬液，混合均匀。
3. 在37℃孵育20分钟。
4. 用离心机离心5分钟。
5. 观察红细胞悬液下清液的混浊度，判断是否发生了红细胞中和反应。
四、实验结果判定
1. 若上清液清澈，表示未发生红细胞中和反应。
2. 若上清液混浊，表示发生了红细胞中和反应，即患者血清中含有特定抗体。
五、实验注意事项
1. 实验过程中要严格遵守无菌操作，以免污染。
2. 实验操作时要注意用手套和口罩，避免细菌感染和呼吸道排放。
3. 实验结束后，要将试管和实验仪器及时清洗消毒，以保持实验室卫生。
六、实验结果记录
实验结束后，要将实验结果准确记录在实验记录表中，并及时归档保存。
以上就是关于红细胞中和试验操作规程的详细介绍，希望能对您有所帮助。
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红细胞悬液的配制
1 目的
配制合格的红细胞悬液。
2 使用范围
适用于ABO血型鉴定、Rh血型鉴定、交叉配血试验及抗A和抗B血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验等.
3 职责
血库专业人员及本科值班人员。
4 试剂及仪器
4。
1.1 生理盐水
4.1。
2 离心机
5 操作规程
5.1 取红细胞加入已标记的洁净小试管(内径10mm×60mm）中,3000r/min离心5min. 5。
2 弃上清，加入适量生理盐水，用吸管轻轻吹散管底红细胞，3000r/min离心5min。
5。
3 重复5。
1。
2操作2次以充分洗涤红细胞.
5.4 用吸管小心吸取上层生理盐水并弃去，取底部压实红细胞按下表1配成不同浓度的红细胞悬液.
表1 红细胞悬液配制
悬液浓度(%) 压实红细胞（滴) 生理盐水(滴）
2 1 2。
0ml(40）
4 1 1.0ml（20）
3—5 1 0.8ml—1.3ml（16-26）
5 1 0.8ml（16)
10 1 0。
4（8）
6.质量控制
6。
1 配制A型和B型5％试剂红细胞悬液时需随机选用经血液中心鉴定血型的3个以上健康成人同型标准红细胞,无溶血及脂血。
配制前需按［ABO血型手工鉴定]进行正反定型。
6。
2 离心时严格按照转速要求，吹散管底红细胞时动作需轻柔，防止溶血.
6.3 试管和滴管必须清洁干燥,防止溶血.
6.4 A型和B型5％试剂红细胞悬液使用前需按［ABO血型手工鉴定］进行正定型。
7 红细胞悬液的保存
7.1 配制好的5％的试剂红细胞悬液应在试管上注明红细胞血型及配制时间，并在［配制5％试剂红细胞悬液记录表]中按要求记录，加盖后2—8℃避光保存，有效期3天。
7。
2 用于血型鉴定的受检者3-5%红细胞悬液可不保存。
7.3 抗A和抗B血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验所需红细胞悬液需现用现配，使用后勿需保存。
8 参考文献
叶应妩,王毓三,申子瑜主编。
全国临床检验操作规程。
中华人民共和国卫生部医政司。
南京.第三版。
附表：
文件修改记录
配制5％试剂红细胞悬液记录表。