噬菌体的分离
噬菌体分离纯化的原理和步骤
噬菌体分离纯化的原理和步骤1. 噬菌体简介好啦，大家，今天我们来聊聊一个有趣又神奇的东西，叫做噬菌体。
听起来像是外星人发明的玩意儿，其实它是一种专门攻击细菌的病毒，简直是细菌界的“灭霸”。
它们在微观世界中偷偷摸摸地工作，悄无声息地解决那些惹人烦的细菌问题。
咱们身边的细菌可不少，有的对我们有益，但有的却是个十足的“败类”。
这时候，噬菌体就像是细菌的天敌，真是太酷了！2. 分离纯化的意义2.1 为何要分离纯化噬菌体？那么，为什么我们要把噬菌体分离和纯化呢？首先，想象一下，如果你在一个大杂烩中找一颗珍珠，那可是相当困难的。
所以我们得把这些小家伙从杂乱的环境中“捞”出来，单独让它们站到聚光灯下。
这样一来，我们就可以更好地研究它们，了解它们是怎么攻击细菌的，有助于开发新的治疗手段，像是抗生素的替代品。
2.2 纯化的重要性再者，纯化的过程就像是给噬菌体洗澡，洗去那些多余的脏东西，只留下最纯粹的样子。
这样才能确保我们研究的数据准确，不然的话，可能会被一些“干扰分子”搞得一团糟。
想想，如果你的咖啡里多了一勺盐，那可就毁了整杯了，不是吗？3. 分离纯化的步骤3.1 收集样本接下来，我们来说说具体步骤。
第一步，得收集样本。
你可以从土壤、水源，甚至是一些腐烂的食物中找到细菌和噬菌体。
这可不是随便捞的，咱得选那些“鱼塘”丰富的地方。
想象一下，像在一片荒野中寻找“金矿”，可是比喻中的“金矿”得小心翼翼，别让细菌给我们添乱。
3.2 培养细菌收集好样本后，我们要把这些细菌培养起来。
通常用一些培养基，就像细菌的“自助餐”。
让它们在温暖的环境中肆意生长，像是细菌的“欢乐派对”。
可是咱可不能忘了，噬菌体也会趁机来“捣乱”，所以这时得时刻盯着它们的动态。
3.3 噬菌体分离一旦细菌培养得差不多了，就可以进行分离了。
这里可以用过滤的方法，把细菌和噬菌体分开。
想象一下，像是在过筛子，把沙子和金子分开，真是一场“筛沙子”的大比拼。
然后把留下来的液体提取出来，这里就大功告成了，噬菌体终于登场了。
嗜热芽孢杆菌噬菌体的分离及特征研究
研 究报 告
嗜 热 芽孢 杆 菌 噬菌 体 的分 离及 特 征 研 究
晏爱芬 ， 余丽 ， 林连 兵
１ ． 保 山 学 院 资 源环 境 学 院 ， 云南 保 山 ６ ７ ８ ０ ０ ０ ；２ ．昆 明理 工 大 学 生物 工程 技 术 研 究 中心 ， 云 南 昆明 ６ ５ ０ ２ ２ ４ ［ 摘要］ 目的 ： 从腾 冲 热 海温 泉 中分 离嗜 热 芽 孢 杆 菌 噬 菌体 ， 并 初 步 分 析 其 特 征 。方 法 ： 采 用 双 层 平板 法分 离纯 化 嗜
１ ．Ｂａ ｏ ｓ ｈ ａ ｎ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ，Ｂ ａ ｏ ｓ ｈ ａ ｎ ６ ７ ８ ０ ０ ０ ；２ ．Ｋｕ ｎ ｍｉ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｋｕ ｎ ｍｉ ｎ ｇ ６ ５ ０ ２ ２ ４ ；Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
８ ０
生 Ｌ
ｖｏ Ｖ ， １ ． ・ ４ ２ ４ Ｎｏ 一 ． ・ １ ｌ Ｊ — ａ ｎ． ・ ．２ ・ … ０１ ３ ｊ ＥＴＴＥＲＳ Ｉ Ｎ ＢＩ ＯＴＥＣＨＮＯＬ ０ＧＹ
物
技
术
通
讯
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ６ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ９ — ０ ０ ０ ２ ． ２ ０ １ ３ ． ０ １ ． ０ １ ８
Ｃｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ，Ｅ－ ｍａ ｉ ｌ ：ｌ ｉ ｎ ｌ ｂ ＠ｓ ｏ ｈ ｕ． ｃ ｏ ｎ ｒ
［ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ：Ｔ ｏ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ ｐ ｈ ｉ ｌ ｉ ｅ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｔ ｅ ｎ ｇ ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ｈ ｏ ｔ ｓ ｐ ｒ ｉ ｎ ｇ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｉ ｔ ｓ
一株奶牛乳房炎源链球菌噬菌体P27的分离及生物学特性分析
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：本试验旨在分离奶牛乳房炎源链球菌裂解性噬菌体，并对其进行生物学特性测定及比对分析。
以实验室保存的奶牛乳房炎源链球菌为宿主菌，从新疆石河子地区奶牛场粪便、污水及奶牛饮用水中分离纯化裂解性噬菌体。
利用双层琼脂平板法测定其裂解能力、最佳MOI 、一步生长曲线的变化、热稳定性、酸碱耐受性等，并对结果进行比对分析。
本试验中分离纯化出了1株裂解性噬菌体。
使用透射电子显微镜观察P27其头部长约76.2 nm ，尾长约153.1 nm ，为常见的肌尾噬菌体，将其命名为vB_SMC_P27（简称P27）。
P27最佳MOI 为10℃、60℃下50 min 活性丧失；在pH4.0～12.0时，噬菌体P27活性未有明显下降；裂解量约为156 PFU/cell ，潜伏期约为15 min ，爆发期约为140 min 。
其对奶牛乳房炎源链球菌的裂解率为33.33%（6/18）。
P27裂解效果较好，增殖迅速，在生产中具有防治奶牛乳房炎源耐药链球菌的潜力。
关键词：链球菌；裂解性噬菌体；奶牛乳房炎；生物学特性中图分类号：S858.23 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2023）06-0028-07Isolation and Characterization of a Streptococcus Bacteriophage p27 from CowMastitis CasesWANG Huixiang 1,2, WU Ziwen 1,2, LIN Jinru 1,2, LIANG Yan 1,2, QU Yonggang 1,2, YI Peng 1,2,YU Jiahui 1,2, LIANG Chengzhe 1,2(1. College of Animal Science and T echnology, Shihezi University, Shihezi 832003, China; 2. Key Laboratory of Control and Prevention of AnimalDisease, Xinjiang Production & Construction Corps, Shihezi 832003, China)收稿日期：2021-06-30基金项目：兵团第十二师重点领域科技攻关计划（SRS2022013）；兵团第十二师重点领域科技攻关计划（SRS2022013）作者简介：王辉翔，男，本科，动物医学专业通信作者：屈勇刚，E-mail：*******************.cn；梁晏，E-mail：****************一株奶牛乳房炎源链球菌噬菌体P27的分离及生物学特性分析王辉翔1,2，吴子文1,2，林津如1,2，梁 晏1,2，屈勇刚1,2，易 鹏1,2，俞佳辉1,2，梁成哲1,2（1.石河子大学动物科技学院，石河子832003；2.动物疾病防控兵团重点实验室，石河子832003）2023,31(6):28-34Abstract: The purposes of this study were to isolate the lytic phages from dairy cows of Streptococcus mastitis, and to conduct biological characterization. Using laboratory-preserved bacteria from Streptococcus mastitis cases, the lytic phages were isolated and purifi ed from feces, sewage and drinking water of dairy cows in Shihezi, Xinjiang. The double-layer agar plate method was used to determine the lysis capacity, MOI, change of one-step growth curve, thermal stability, acid-base tolerance, etc . In this experiment, a lytic phage P27 was isolated and purifi ed. The transmission electron microscopy found that P27 had a head of about 76.2 nm and a tail of about 153.1 nm. It was a common myophage and named as vB_SMC_P27 (referred to as P27). The best MOI of P27 was 10℃, and its activity lost at 60℃ for 50 min. However, the phage P27 did not decrease its activity signifi cantly at pH4.0~12.0. Other features of the phage P27 included the cracking amount of about 156 PFU/cell, the incubation period for about 15 min and the burst period for about 140 min. In addition,· 29 ·王辉翔等：一株奶牛乳房炎源链球菌噬菌体P27的分离及生物学特性分析第31卷第6期奶牛乳房炎（Bovine mastitis）又称奶牛乳腺炎，为奶牛乳房内实质、间质的炎症，对乳品质具有很大的影响。
噬菌体基因组提取方法
噬菌体基因组提取方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：噬菌体是一类侵染细菌的微生物，其基因组提取方法是研究噬菌体性质和功能的关键步骤之一。
噬菌体基因组提取的目的是获取噬菌体DNA，以便进行后续的分子生物学研究和应用。
本文将系统介绍噬菌体基因组提取的方法及其应用。
一、样品采集在进行噬菌体基因组提取之前，首先需要对需要研究的噬菌体进行样品采集。
样品可以来源于各种环境中的细菌样品，例如水体、土壤、动植物表面等。
在采样时需要注意样品的保存和运输条件，避免对噬菌体DNA的破坏。
二、细胞裂解细胞裂解是基因组提取的第一步，其目的是破坏噬菌体细胞壁和细胞膜，释放出噬菌体DNA。
传统的裂解方法包括化学裂解和物理裂解。
化学裂解使用蛋白酶、SDS等化学试剂破坏细胞结构，物理裂解则是利用高温、高压、超声波等手段使细胞破裂。
近年来，随着生物技术的发展，还出现了新的细胞裂解方法，如离心裂解、酶切裂解等，这些方法具有高效、低成本、易操作等优点。
三、蛋白质和RNA的去除在提取得到的细胞裂解液中，除了目标的噬菌体DNA外还会存在大量的蛋白质、RNA等杂质。
这些杂质会影响后续的DNA纯化和测序分析，因此需要进行去除。
通常采用蛋白酶和RNase酶对裂解液进行处理，将蛋白质和RNA降解分解，然后通过差速离心或柱层析等方法将杂质分离。
四、DNA的纯化经过蛋白质和RNA的去除后，得到的裂解液中含有目标噬菌体DNA。
为了获得纯净的DNA样品，需要进行DNA的纯化。
常见的DNA纯化方法包括酚/氯仿提取、硅胶柱纯化、磁珠分选等。
这些方法可以有效地去除残留的杂质，得到高质量的噬菌体DNA。
五、DNA的测序分析最后一步是对提取得到的噬菌体DNA进行测序分析。
目前，常用的DNA测序技术包括Sanger测序、next-generation sequencing（NGS）和第三代测序技术等。
这些技术可以对噬菌体的基因组结构、功能基因等进行深入的研究和分析，为噬菌体的应用研究提供重要的数据支持。
大肠杆菌噬菌体的分离、纯化及其特性研究
１０ｎ 尾宽约 １ ２ ｉ 有尾鞘 、 ３ ｍ， ８— ２ｒ ｍ， 基板 、 尾丁 、 尾丝等结构 ， 该类噬菌体在污水中 占绝大多数． 三是短尾 噬菌体 ， 其头部
为二十面体 ， 大小为 ２ ｍ， ０ｒ 尾部长约 ２— ｍ， ｉ ３ｎ 在污水 中占有一定 的比例． ２种噬菌体在 一１ ￣ 冰箱可存活 ５ ８（ ２ ６天． 噬菌 经
体处理的污水 ， 总菌数下降了 ３ ％左右 ， ０ 大肠杆菌总数下降 ９ ％ 以上． ０
关 键词 ： 大肠杆菌； 噬菌体 ； 分离； 纯化； 特性
中图分类号 ： ３．８ Ｑ ９９４
文献标识码 ： Ａ
文章编 号 ： ３－ ７（０８ ￥－ ７－ ０ ８ ４９２０ ）２ ２３ ５ ４ ０ ０ ０
不衰 ， 已证 明利用 噬菌 体 可 以控 制 大肠 杆菌 引起 的 现 犊牛 、 仔猪 、 羔羊 的腹 泻 ， 治疗 大 鼠的大肠杆菌感 染 ， 在
１ 材 料 与方 法
１ １ 菌株来源及培养 ．
菌种 ： 大肠杆 菌（ ｃｉＣ Ｅ． ｌ ＭＣＣ（ ４ １３ 由厦 门 ｏ） Ｂ）４ ０ （
大学生命 科学学 院教学部提 供 ） 培养基 参 考文献 ［ ］ ， ７ 配制 ， ３倍 Ｌ Ｂ培 养基 ，Ｈ ． ７ ４ 其 中 Ｌ ｐ ７ ２— ． ； Ｂ底层 平 板培养 基加 ２ 琼脂 ， ％ 上层 培 养基 加 １０ ．％琼 脂 ．ＭＢ Ｅ 固体 培养基 ．
对鸡肉接种大肠杆菌的同时在鸡体不同部位注射噬菌 体， 则可保 护 鸡免 受 大 肠 杆 菌 的 感染 ．９２年 ，ｏｔｌ １９ Ｓｏｉ ｌ 发现 噬菌 体可 以保 护小 鼠免受 鲍 曼不 动 杆菌 、 脓假 绿 单胞菌的感染． 现在， 噬菌体在人、 鱼的传染性疾病 畜、 的防治方面发挥 着重 要 的作 用 ． 国 内， 在 自上 世 纪 ５ ０年代应用绿脓 杆菌 噬菌体 治疗 大 面积烧 伤病 人 ， 成 功地解 除 因耐药性 而 长期 不 能治 愈 的 问题 以来 ， 菌 噬
细菌的噬菌体分型
细菌的噬菌体分型实验二细菌的噬菌体分型第一部分肠杆菌科噬菌体的分离、纯化与增殖噬菌体广泛存在于自然界。
凡是有细菌存在的地方，一般都能找到相应的噬菌体。
例如，土壤、肥料、腐烂有机物、粪便和阴沟污水等常是各种细菌的栖息地，从中能分离到相应的噬菌体。
从自然界分离某一噬菌体需要经过以下步骤:培养宿主菌(或叫做敏感菌);采集含噬菌体的样品;噬菌体富集培养;制备噬菌体裂解液;验证噬菌体的存在;噬菌体的纯化;噬菌体的增殖;噬菌体的效价测定和保存。
下面以大肠杆菌噬菌体为例详细介绍噬菌体的分离和纯化方法。
1( 噬菌体的分离(1)制备菌悬液:取大肠杆菌斜面一支，加4ml无菌水洗下菌苔，制成菌悬液。
(2)增殖培养:于10ml三倍浓缩的肉膏蛋白胨液体培养基的三角烧瓶(1支5ml吸管)中，加入污水样品20ml(1支5ml吸管)与大肠杆菌悬液0.2ml(1支1ml吸管)，37?培养12h,24h以增殖噬菌体。
(3)制备裂解液:将以上增殖的混合培养液2500r/min离心15 min(1支5ml吸管)。
将上清液倒入无菌平皿，针管抽取液体，在针栓式滤器上过滤除菌。
所得滤液倒入灭菌瓶内，取少量滤液作无菌试验，即将它接入牛肉膏蛋白胨培养液中(1支5ml吸管、1支1ml吸管、1支无菌带帽华氏管)，置于37?培养过夜，以作无菌检查。
(4)噬菌体确证试验:滤液经37?培养过夜，若无细菌生长则表明已经彻底除菌。
需进一步证明噬菌体的存在。
于已烘干的肉膏蛋白胨琼脂平板(平皿1个)表面加一滴大肠杆菌悬液(1支1ml吸管)，再用灭菌玻璃涂布器将菌液涂布成均匀的一薄层。
放置数分钟，待琼脂表面干燥，在菌层的表面布点5个,7个，每点滴加上述滤液1小滴(1ml枪1把和枪头10个)，同时选择其中一点不加滤液只滴加一小滴生理盐水为对照，再放置数分钟，使液滴被琼脂吸干。
倒置平板，37?培养过夜。
次日观察结果，若平板上滴加滤液的部位出现噬菌斑，而在对照滴中处无噬菌斑，则表明该滤液中肯定含有大肠杆菌相应噬菌体。
噬菌体的检测
噬菌体的检测双层琼脂平板法测定噬菌体操作：器材以及药品：1.器材：试管及试管塞（已灭菌）、移液枪（200ul以及5ml）以及相应的无菌枪头、90mm 平板（已灭菌）、250ml三角瓶、酒精灯、琼脂粉、分离提纯的噬菌体液以及敏感菌（已经活化好的）。
方法及步骤：1.配制培养基：LB液体培养基（1000ml水：10g蛋白胨：5g酵母粉：5g氯化钠）、1.5%的固体培养基、0.7%的半固体培养基；2.倒平板：将1.5%的固体培养基熔化，每个平板倒10-15ml的1.5%固体培养基，然后静置至平板上没有水珠为好，平板数根据实际需要而定；3.分装0.7%的半固体培养基：将0.7%的半固体培养基加热熔化，然后用5ml的移液枪向每个试管（已灭菌）加入5ml的半固体培养基；试管的数量和上一步平板数是相同的。
如果试管很多，防止培养基凝固，可将已分装好的试管放入水浴温度为55℃左右的水浴锅中保温；4.等到试管中培养基温度降至45 ℃-50 ℃之间（不烫手）时，迅速向试管中加入100ul 敏感菌和100ul的噬菌体液（噬菌体浓度要适当，这样才能看到明显的噬菌斑），摇匀；5.将摇匀好的该培养基迅速倒入之前已倒有1.5%固体培养基平板中，晃动平板，使其铺满平板，静置；6.待所有平板倒好后（最好静置2h左右），将其放入30 ℃恒温箱中培养12h左右，即可观察有无噬菌斑。
注：所有操作在酒精灯旁进行！噬菌斑效果图培养噬菌体的方法：一. 液体培养法1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时。
2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合，静置15分钟使其感染。
3. 将混合液接种至含10 ml新鲜液体培养基的试管中，于适当温度下振荡培养约8~24小时，培养时间依噬菌体之不同而异。
4. 将培养液移入离心管中，以10,000 rpm (5,000 g)离心10分钟，以沉淀寄主细菌。
5. 将上清液移至新管中，以0.22μm孔径之过滤器(filter)去除残余菌体，即得不含寄主细菌之噬菌体原液。
锡金小鼠中鼠疫噬菌体的分离及流行
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报锡金小鼠中鼠疫噬菌体的分离及流行病学意义摘 要：调查云南锡金小鼠体内是否携带鼠疫噬菌体，并探讨其流行病学意义。
2016-2017年，在云南鼠疫疫源地梁河县、宜良县及文山市3个调查点进行锡金小鼠的捕获，取其肠道标本，以鼠疫疫苗株EV76为宿主菌，采用双层平板法进行鼠疫噬菌体的分离，所分离噬菌体进行噬菌斑及电镜观察；同时进行鼠疫菌特异基因caf1的检测。
结果共捕获86只锡金小鼠，从中分离到3株鼠疫噬菌体，分离率为3.49%；其噬菌斑在双层平板上表现为特大（直径>3.0mm ）、中（~1.0mm ）及小（<0.5mm ）3种噬菌斑；对3株噬菌体进行电镜观察，皆为肌尾病毒科噬菌体；caf1基因检测皆为阴性。
在家鼠鼠疫疫源地锡金小鼠中存在鼠疫噬菌体，锡金小鼠在鼠疫菌保存及远距离传播中的作用及意义值得进一步探讨。
关键词：锡金小鼠；鼠疫噬菌体；流行病学中图分类号： R378.61文献标志码：A文章编号：1674-6422（2022）06-0135-06Isolation of Yersinia pestis Phages from Mus pahari in Yunnan Province and TheirEpidemiological Signifi canceYANG Fengyi 1, SU Chao 1, ZHANG Haipeng 1, WU Hesong 1, WANG Peng 1, LI Wei 2, ZHONG Youhong 1(1. Yunnan Institute of Endemic Diseases Control and Prevention, Yunnan Key Laboratory for Natural Focus Infection Disease Prevention and Control Technology, Dali 671000, China; 2. Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for DiseaseControl and Prevention, Beijing 102206, China)收稿日期：2020-06-29基金项目：国家自然科学基金（31660043，81560545）；云南省医疗卫生单位内设研究机构科研项目（2017NS089）；徐建国院士工作站（2018IC155）作者简介：杨丰义，女，本科，技师，主要从事鼠疫噬菌体方面的研究通信作者：钟佑宏，E-mail：*****************Abstract: To explore whether Yersinia pestis phages were carried in Mus pahari in Yunnan province and its relationship with the plague epidemic, the rodents were captured from 2016 to 2017 in 3 places of Lianghe county, Yiliang county and Wenshan city and their intestinal specimens were taken for isolation of phages. The Y . pestis vaccine strain EV76 was used as the feeding bacteria and the two-layer plate method was used for phage solation. The isolated phages were examined under the electric microscope. At the same time, the specifi c gene caf1 of Y . pestis was tested in the isolated phages. A total of 86 Mus pahari were captured and 3 (3.49%) Y . pestis phages were isolated. These phages had different sizes (large>3.0 mm, medium 1.0 mm and small<0.5 mm in diameter) on the double-layer plate. Two phages belonged to be myoviridae as observed under electron microscope. Three phages were all caf1 negative. This study demonstrated the presence of Y . pestis phages in Mus pahari in these places. The role and epidemiological signifi cance of Mus pahari in the preservation of plague is needed for further investigation. Key words: Mus pahari; Yersinia pestis phage; epidemiology2022,30(6):135-140杨丰义1，苏 超1，张海鹏1，吴鹤松1，王 鹏1，李 伟2，钟佑宏1（1.云南省地方病防治所 云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室，大理671000；2.中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，北京102206）· 136 ·中国动物传染病学报2022年12月鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的烈性传染病，具有病死率高，传染性强的特点，主要经鼠蚤传播，属广泛流行于野生啮齿动物间的一种自然疫源性疾病[1]。
噬菌体的分离与纯化
噬菌体的分离纯化及一步生长曲线的绘制前言噬菌体是以细菌为寄主的一类非细胞微生物。
目前对于噬菌体的研究大多数集中在人和动物传染性疾病的防治方面，在环境的治理方面的研究报道较少，因此我们试图分离纯化污水中的噬菌体，掌握其生物学性质，应用所得噬菌体处理、净化生活污水，减少生活污水中病原性细菌的危害。
本研究以从小鹅中提取的大肠杆菌为宿主菌，从污水中分离噬菌体并进行纯化，最后绘制一步生长曲线。
1材料与方法1.1材料1.1.1菌种及样品菌种：从小鹅中提取的大肠杆菌，由老师提供。
污水来源：主要来自于农大出水口。
1.1.2试剂1mmol/L CaCl2溶液1.1.3试剂的配制(1) 液体牛肉膏培养基：胰蛋白胨5g，牛肉膏1.5 g，NaCl 2.5g，加H2O至500mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌。
(2) 3×牛肉膏培养液：胰蛋白陈3g，牛肉膏0.9g，NaCl 1.5g，加H2O 至100mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌。
(3) 固体牛肉膏培养基：每100mL液体牛肉膏培养基加入1.5g琼脂粉，121 ℃20min高压灭菌。
(4) 半固体牛肉膏培养基：每100mL液体牛肉膏培养基加入0.7g琼脂粉，121℃20min高压灭菌。
1.1.4主要仪器电热恒温培养箱（SHEL·LAB）、电热恒温水温箱（HHW21·Cu600，XMTD）、恒温摇床（中国科学院武汉科学仪器厂）、通风柜（M·TFG-A）、医用净化工作台（苏净集团安泰公司）、台式离心机（eppendorf）、台式高速冷冻离心机（BECKMAN COULTER）、超低温冰箱（Forma Scientific）、YM50全自动不锈钢立式电热蒸汽消毒器、针头式细菌过滤器、0.22μm微孔滤膜（上海市新亚净化器件厂）、微量移液器（GILSON）、UVette(Eppendorf)。
1.2方法1.2.1噬菌体的分离1.2.1.1摇菌老师提供的大肠杆菌液加入5mL1×牛肉膏液体培养基，混合后，37℃振荡（120rpm）14h，此时大肠杆菌达到了对数生长期，取出4℃保存。
噬菌体的分离与纯化
大肠埃希氏杆菌噬菌体的分离与纯化【实验目的】1.培养自主查阅资料，自行设计、整理实验方案，自己安排实验的能力。
2.通过综合性大实验进一步掌握微生物实验的基本原理和技术、培养无菌意识。
3.培养互助协作的团队精神和分析解决问题的能力。
4.掌握从污水中分离和纯化大肠埃希氏菌噬菌体的原理。
5.掌握噬菌体的分离与纯化以及用双层琼脂平板法培养噬菌体的方法。
【实验原理】1.凡有寄主细胞存在的地方，一般都能找到其相应的噬菌体。
粪便和阴沟污水等往往是各种肠道细菌尤其是大肠杆菌的栖居地，故常能从其中分离到各肠杆菌噬菌菌株的相应噬菌体。
2.从自然界分离某一噬菌体的一般方法是：（1）培养寄主细胞（大肠杆菌）；（2）采集含有相应寄主细胞的噬菌体（阴沟污水）；（3）将样品内的细胞进行富集培养；（4）制备噬菌体裂解液；（5）检测噬菌体是否存在；（6）噬菌体的纯化及效价测定。
3.培养基的配制（配方）与灭菌（1）3×牛肉膏蛋白胨培养液：牛肉膏9克，蛋白胨30克，NaCl 15克，自来水1000ml,Ph 7.2-7.4.（2）牛肉膏蛋白胨培养液：牛肉膏3克，蛋白胨10克，NaCl 5克，自来水1000ml,Ph 7.2-7.4.（3）牛肉膏蛋白胨固体培养基：牛肉膏3克，蛋白胨10克，NaCl 5克，琼脂条20克，自来水1000 ml，Ph 7.2-7.4。
（4）牛肉膏蛋白胨琼脂半固体培养基：牛肉膏3克，蛋白胨10克，NaCl 5克，琼脂条7克，自来水1000ml,Ph 7.2-7.4。
封好做好标记于121℃灭菌20min备用【实验材料及器皿】1.菌种：大肠埃希氏菌。
2.噬菌体样品：矛坡的阴沟污水3.培养基：3×牛肉膏蛋白胨培养液，牛肉膏蛋白胨培养液，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，牛肉膏蛋白胨琼脂半固体培养基。
4.仪器：离心机，恒温水浴锅，冰箱，恒温培养箱，高压灭菌锅，酒精灯，量筒，微量移液器及枪头，火柴，接种针，标记笔，无菌涂布棒，培养皿，试管，三角瓶，电热炉，玻璃棒，牛皮纸，纱布，PH试纸，橡皮筋。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验器材
仪器设备： 500ml三角瓶、中试管、培养皿、 无菌不锈钢涂布器、无菌吸管、无菌滤器（孔 径0.22um）、恒温水浴锅、真空泵、恒温培养 箱、灭菌锅、抽滤瓶等
6. 高效价噬菌体的制备 将纯化的噬菌体滤液 与培养液1：10混合，再加入适量（与噬菌体滤 液等量或1/2的量）的大肠杆菌菌悬液，培养增
殖，重复数次，最后过滤，可得到高效价噬菌体 的制品。
实验结果
绘出平板中噬菌斑的形态特征
试剂： 大肠杆菌、三倍浓缩的牛肉膏蛋白胨 液体培养基、含琼脂0.7%、2%的半固体、固 体培养基、阴沟污水、无菌水等
实验步骤
1．制备大肠杆菌菌悬液 37℃培养18小时的大肠 杆菌斜面一只，加无菌水5ml洗下菌苔，制成菌悬液。
2．增殖培养 把200ml污水加到有100ml三倍浓缩的 牛肉膏蛋白胨培养液的三角瓶中，再加入2ml大肠杆 菌菌悬液，37℃振荡培养24～48小时。
实验九 噬菌体的分离
何伟 06Байду номын сангаас04
实验目的
1、利用噬菌体的一些生物特性，从自然 环境中分离、纯化大肠杆菌噬菌体，掌 握噬菌体分离纯化的基本原理和方法。
2、在实验过程观察噬菌斑的形态，和细 菌菌落进行对照加深印象。
3、绘出平版中噬菌斑的形态特征。
实验原理
噬菌体是专性寄生物，所以自然界凡是有细菌分 布的地方，都可发现其特异的噬菌体存在。如粪 便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌，固也能很容 易地分离到大肠杆菌噬菌体 。噬菌体颗粒可以 独立存活（当然不能生长）。
3．制备裂解液 将上述液体以5000r/min离心15min。 以无菌操作把无菌滤器安装于灭菌抽滤瓶上，正常 过滤除菌。滤液37℃培养过夜，以作无菌检查。
4．确证实验 检查噬菌体是否真的存在（看大肠杆 菌平板上能否长出噬菌斑）
5．噬菌体的纯化 （1） 把具有噬菌体的滤液接种一环于液体培养 基内，再加入0.1ml大肠杆菌菌悬液，充分混合。 （2） 在固体琼脂平板上倒入5ml融化并冷却到 48℃半固体培养基，加入（1）中混合液0.2ml， 立即混匀，铺平，37℃正置培养24小时。 （3） 取大肠杆菌的噬菌斑（中部）一环，接种 于大肠杆菌培养液内，37℃培养，即可得到纯化 的噬菌体。