HI-HA试验原理
血凝HA和血凝抑制试验HI
HA值可用于评估血液凝固功能和血栓形成风险
试验方法
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试验材料：抗凝剂、试管、离心机、凝血因子活性检测试剂等。
试验原理：通过观察血液凝固过程，检测血浆中凝血因子的活性。
试验步骤：采集血液样本，加入抗凝剂，离心分离血浆，加入凝血因子活性检测试剂，观察血液凝固时间并记录结果。
不同点：血凝HA试验只能判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，而血凝抑制试验HI不仅可以判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，还可以检测抗凝物质的具体类型和浓度。
试验方法的比较
血凝HA试验：通过观察血凝块的形成和溶解过程，检测抗凝物质的存在和含量
操作简便性：血凝HA试验操作相对简单，而血凝抑制试验HI需要更多的样本和操作步骤
参考值：血凝HA试验结果的参考值一般为阴性或阳性，具体参考值因不同病毒而异。
临床意义
用于诊断血栓栓塞性疾病
评估血液高凝状态的风险
辅助诊断易栓症等血栓前状态
监测抗凝治疗的效果
02
血凝抑制试验HI
试验原理
血凝抑制试验HI是一种检测病毒抗体的方法，通过与特异性抗体结合，抑制病毒的凝集活性，从而检测出病毒抗体。
临床意义
用于诊断疾病：血凝抑制试验HI可以用于诊断多种疾病，如流感、麻疹等病毒感染性疾病，以及疟疾、血友病等出血性疾病。
监测治疗效果：通过血凝抑制试验HI，可以监测治疗效果，评估病情进展和预后。
指导治疗：血凝抑制试验HI的结果可以指导治疗，例如在输血时，通过血凝抑制试验HI可以确定最佳的输血量。
流行病学调查：血凝抑制试验HI还可以用于流行病学调查，了解疾病的流行趋势和分布情况。
试验意义：用于检测凝血因子活性，评估血液凝固功能，协助诊断凝血障碍相关疾病。
血凝及血凝抑制实验
1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢，以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄色，之后直至清亮为清洗干净）。 2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸取干净。
血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验
一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、红细胞制备
一、实验目的
1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法 2、了解新城疫有关背景知识
二、实验内容
1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价 2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫苗注射后的抗体检测）
三、实验原理
1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。
病毒颗粒
红细胞
2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；
25
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红细胞凝集试验(HA)与红细胞凝集抑制试验(HI)
红细胞凝集试验(HA)与红细胞凝集抑制试验(HI)
红细胞凝集试验(HA)和红细胞凝集抑制试验(HI)是两种常见的检验手段，用于检测血液中是否存在抗体，从而诊断某些疾病或病原体感染。
红细胞凝集试验(HA)
红细胞凝集试验(HA)是一种检测抗体与抗原反应的常规方法。
在这个测试中，医生或实验室技术人员将被测血浆放入红细胞凝集剂中，然后与已知抗原混合，比如病毒、细菌或其他病原体。
如果血浆中含有与已知抗原相应的抗体，那么红细胞就会和抗原结合在一起形成凝集。
如果血浆中没有抗体，红细胞就会分散在凝集剂中。
HA 可以检测出许多病原体的抗体，包括流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒和风疹病毒等。
红细胞凝集抑制试验(HI)
红细胞凝集抑制试验(HI)也是一种检测抗体和抗原反应的常规方法。
在这个测试中，被测血液中的抗体与已知抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后，在复合物中加入未和抗原混合的红细胞，如果血浆中含有抗体，它们会与复合物结合，使得红细胞不会凝集。
如果血液中没有相应的抗体，红细胞就会在复合物中凝集。
与HA相比，HI适用于检测一些病原体，比如肝炎病毒和流感病毒等，但不是所有病原体都适合使用HI进行检测。
红细胞凝集试验（HA）和红细胞凝集抑制试验（HI）是检测抗体和抗原反应的两种常见方法。
这两种技术可用于诊断许多疾病和病原体感染，但需要在临床实验室或医疗机构进行，由专业人员执行。
尽管这些测试非常有用和重要，但仍需要与其他诊断工具和检查方法相结合，以确保诊断的准确性和病人的治疗。
阐述ha,hi原理和实验流程
阐述ha,hi原理和实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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鸡新城疫血凝和血凝抑制实验课件
毒对 照
对照
8单位病毒 4单位病毒 被检鸡血清
0.6%红细胞
结果观察
50 50 50 50 50 50 50 50
50 50 50 50 50 50 50 50
50 50 50 50 50 50 50 50 震荡混匀，室温30-40min
-
-
-
-
-
-
+ ++
50 50 50 50
50 50 +++ ++
• 新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 • 0.5％鸡血球悬液 • 生理盐水或PBS • 96孔微量血清盘 • 微量加样器 支
1份 1管 1瓶 1块 1
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【方法与步骤】 (一)制备鸡红细胞悬液：
1.用注射器抽取抗凝剂。
2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡 的静脉血。
鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价
目的
1、掌握鸡新城疫的临诊要点。 2、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。
内容 1、鸡新城疫的临诊要点。 2、鸡新城疫的实验室诊断。
NDV的分离及鉴定； NDV毒力的鉴定
3、鸡新城疫的免疫效果评价
鸡新城疫的免疫监测
血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)
• 从表4-2看出，该血清的HI效价为1:64，用以2为底的负 对数(-log2)表示，即6log2。
• 5. 自第l孔至12孔各加0.5% 鸡红细胞悬液50 L，振荡混合均匀，室温下静置3040min后观察结果
二、鸡新城疫的血凝抑制试验 (HI)
• 【病毒血凝抑制试验的操作方法(单位： L) 】
孔号 滴度lg2
实验八病毒的血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验
华南农业大学兽医学院微生物教研室
[目的要求]
1.理解病毒HA和HI试验的原理
2.掌握HA和HI试验的操作方法、结果判 定并了 解其实用价值。
［实验原理］
❖ HA:许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞 的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。HI:血凝现象可以被 特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血 清学试验，称为血凝抑制试验。
100%抑制红血球凝集的血清最大稀释度为血凝抑制价。表中的血凝抑制价为1:128 判定标准：HI血凝抑制价小于或等于8×（3㏒2）判为阴性；等于16×（4㏒2）为可 疑，需复检；大于或等于32×（5㏒2）为阳性。
结果判定：
待病毒对照(11孔)孔出现红细胞100%凝（++++）， 而血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可 进行结果观察。
❖ HA
HI
❖ 通过HA-HI实验可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知 病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量
试管法❖ 实验方法微量法[实验材料]
1. 96孔 “V”形微量反应板，移液器，枪头，振 荡 器。
2. 生理盐水，1% 鸡红细胞悬液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城 疫阳性血清，新城疫阴性血清，待检鸡血清。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一 个血凝集单位。
二、血凝抑制（HI）试验
1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。 例128÷4＝32即 1毫升（抗原）+31毫升（生理盐水）即成。其1个单位抗原孔的红血球 必须达到100%凝集。
兽医免疫学实验HA和HI test (课件)
➢ +约有25％血球发生凝集；
➢ －不凝集，表现为血球沉于孔底，呈一致密小圆点，与对照孔相同
结果判定
以红细胞凝集50％的稀释度作为判定终点； 以50％鸡红细胞凝集（++）的最高病毒稀释倍数作
为该病毒的血凝价。 将血凝价规定为1个血凝单位（U）。
将血凝价规定为1个血凝单位（U）。
血凝单位的计算方法： 以血凝价为29(512x)为例 8U=8×1/512=64x,即将原病毒稀释64倍； 4U=4×1/512=128x,即将原病毒稀释128倍.
以抑制50％鸡红细胞凝集（++）的最 高血清稀释倍数作为该血清的血凝抑 制价。
作业
完成实验报告,将实际测定结果， 填写上表, 并说明其血凝价和血凝 抑制价是多少？
（二）血凝抑制试验（HI）
弃50µL
1．做标记；
2.第1孔加8U抗原和被检血清；
3. 从第1孔取样50µL，然后倍比稀释； 4.室温静置10min；
5．加红细胞,立即振荡2min，静置20－30min; 6.观察结果。
➢结果记录中的-、+、++、+++、++++和HA中
结果判定
以抑制50％鸡红细胞凝集的血清稀释 度作为判定终点；
当这些病毒与相应的抗体发生特异性结合 后，失去了与红细胞凝集的能力，称为红 细胞凝集抑制。
HA
HI
三、实验材料
1. 鸡新城疫病毒抗原(NDV)：弱毒株（Lasota） 2. 鸡红细胞：用生理盐水配成1%悬液 3. 抗凝剂：3.8%柠檬酸三钠缓冲液 4. 被检血清 5. V型血凝板、微量移液器，微量振荡器等
实验三 血凝和血凝抑制试验
HA-HI试验
8、判定结果
（1）血清抗体效价的判断：
能够使4单位病毒凝集鸡红细 胞的作用完全被抑制的血清最 高稀释倍数，称为该血清的抗 体效价，以2的指数表示。
孔号： 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11ห้องสมุดไป่ตู้
12
上图，血清抗体效价依次为28、 27、28、29、28、27、27、26
2、判定标准：
（1）一般认为鸡的免疫临界水平 为25（成鸡）或26（雏鸡）。 （2）鸡血清的凝集抑制价，全部 高于26可适当推迟新城疫免疫时间， 全部低于24以下，应马上进行新城 疫疫苗接种。
血清稀释倍数
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
血清 稀释 倍数
21
22
23
24
25
26
27
28
29
210
211 对 照
3、加4单位抗原
1~12孔各加25微
升。 4、置于振荡器上，振荡1分钟，室 温静置 20分钟。 5、加1%的鸡红细胞悬液 用微量 移液器向1~12孔各加1%红细胞悬 液25微升。 6、置于振荡器上，振荡1分钟。室 温静置20~25分钟后观察结果。
1%红细胞悬液制备
1、抗凝血的制备 采集3只非免疫成年健康鸡血液， 由翅静脉或心脏采血，按3.8%柠檬酸钠与血液1：4 混合制成。 2、1%红细胞悬液制备 将抗凝血加入离心管内， 用生理盐水洗涤5次，每次2000r/min离心5min ， 将血浆、白细胞充分弃去，最后一次离心时间为 10min，离心结束后，弃去上清液，根据剩下的红 细胞体积，用生理盐水配制成1%红细胞悬液。
实验五 鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价
弃50
结果观 察
++++ ++++ ++++
++++
++++ ++++
++++
+++
+
+
-
-
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位
【 结果判定 】
置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待 对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集， 沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝 集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
2、HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特 异性免疫血清所抑制，称HI试验。
1、鸡新城疫的血凝试验(HA)
【材料】
新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 1份
0.6％鸡红细胞悬液
1管
生理盐水或PBS
1瓶
96孔微量血凝板
1块
微量加样器
1支
【病毒血凝试验的操作方法】
单位： L
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
取鸡免疫血清或者取高免卵黄抗体。
【病毒血凝抑制试验的操作方法】
单位： L
弃50
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。
【结果判定】
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清 最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI 效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者， 该病毒为新城疫病毒。
HA与HI试验
实验HA与HI一、实验原理某些病毒（如新城疫病毒，减蛋综合症）能凝集某些动物的红细胞，这种现象虽非抗原抗体，但利用这一现象可检查样品中是否有病毒存在，测病毒滴度，病毒红细胞血凝由于能被相应抗体所抑制，因此可以通过病毒的血凝抑制试验测定抗体的效价。
二、实验试剂与器材1、实验器材小烧杯、电子天平、离心机、离心管、采血针、玻璃棒、微量移液器（50μl）、枪头（50μl）、培养皿、96孔板恒温箱2、实验材料免疫过的鸡3、实验试剂3*1 0.9%生理盐水（200ml）称取1.8gNaCl,溶解于200ml蒸馏水中，即可制成3*2 1%红细胞配制（1）、取抗体凝血，离心（1000~1500rpm,5min）（2）、弃上清，取5ml生理盐水，离心（1000~1500rmp,3~5min）（3）、弃上清，取5ml生理盐水，离心（3000rmp , 3~5mim）（4）、以红细胞体积，加入生理盐水，制成1%浓度抗体制备 3*3（1）、从鸡翅取血，放入离心管中（2000rmp , 3~5min）（2）、吸取上清，即为抗体（黄色清亮）3*4 抗原制备（1）、取新城疫病毒干粉，加生理盐水（灭菌过））、（2）、溶解，即为抗原三、实验步骤1、HA实验步骤（1）、前10孔与第12孔，每孔加50μl生理盐水（2）、第11孔加50μl病毒液，第12孔不加，前10空依次倍比孔口 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12项目50 5050505050 505050 5050不稀释液加→→→→→→→→不病毒液弃50 →50，5050 加5050 50 505050 50 5011：1024：2 1阳毒病液：：阴14 1：1：1：1：8 11：：16256倍稀释性64性32128512对对数照照50 50 5050 红细胞50 50 50 50 50 50 5050放用作时37 ℃恒温箱20min温间与度凝凝结果凝凝凝凝凝不不不凝不凝集凝凝凝集集集集集集集．12 10 11 5 6 7 8 9 2 孔口 1 3 4项目50 50 50 50 不加50 50 稀释液50 50 50 50 505050→，→→→→→→→不→被检抗50病毒倍比稀50毒l5050l50l50l (1211110)生ll50μ病毒50μ生理盐水每孔50μl 液理盐水l红细胞3）、每孔加入50μ（，观察结果20min、放37 ℃恒温箱（4）实验步骤 2、HI 1ml 抗原液，加2^2 ,则取/、四单元抗原：取病毒滴度（1）2^n 生理盐水。
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反应温度不能太高，若在37℃ （如温箱） 下进行，会影响检测结果。 标准抗原稀释液浓度必须为4个HA单位 /25μl，必须每天制备并在试验前滴定。 孵育时间要严格控制。红细胞对照完全 沉淀时要迅速判读。在一些病毒株中可 见红细胞从病毒中解脱，如果有这种情 况的发生，要提前判定或4℃下孵育。
HI试验注意事项
NDHI 的判读
注意事项 不同实验室结果可以不同 要有阳阴性对照 了解现场生产背景 临床解剖资料 免疫情况、采血周龄
应用
检测血清中的抗体水平。 鉴定病毒。 辅助诊断病毒性疾病。 作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失 败、免疫空挡及重复免疫造成的损失。
禽流感免疫效果监测
发 病
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0
前 发 17d 病 前 1d 5d 8d 9d 11 d 15 d 15 d 15 d 19 d 21 d 24 d 26 d 26 d
发病前后ND抗体的变化
NDHI与临床症状的关系
NDHI NDHI NDHI NDHI <4 4-7 6-8 8-10 感染100％死亡 感染发病90％不死 感染发病100%不死 感染产蛋下降、 NDHI上升 感染只见NDHI上升 病毒无法侵入
微量血凝板的清洗，对试验结果有很大的 影响。 使用过的凝集板，要按程序清洗干净。 清洗程序：试验完毕即将凝集板用自来水 反复冲洗，再用洗涤剂的温水溶液浸泡30 分钟，并在洗涤剂溶液中以棉拭子刷洗凹 孔及板面，待反应板干燥后，放到2—3% 浓度的盐酸中浸泡24小时以上，捞出用自 来水冲洗多次，最后以蒸馏水冲洗2—3次， 在37度温箱中烘干备用。
血凝试验（血凝效价的滴定)
血凝试验结果判定
效价判定： 凝集特别显著：“＋＋＋＋” 凝集现象次之：“＋＋＋” 凝集清楚可见：“＋＋” 稍显凝集者：“＋” 血凝效价：呈“＋＋＋＋”凝集时的最高稀释度。 此时的稀释度即为1个血凝单位。
结果判定
将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌 完全血凝(不流淌)的抗原或病毒最高稀释 倍数代表一个血凝单位(HAU) 终点稀释倍数除以4即为含 4HAU的抗原的 稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为 1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是 1/64(256除以4)
血清学诊断
禽流感、新城疫（HA、HI）
HA、HI依据标准
《高致病性禽流感诊断技术》 GB/T18936-2003 《鸡新城疫检测技术规范》 GB/T16550-1996
血凝原理
血凝抑制原理
血凝与血凝抑制试验基本原理
病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，即为血凝 这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑 制，即红细胞凝集抑制试验
影响HA和HI的因素
配制红细胞悬液应采集2只以上成年公鸡 的血 一般要求用非免疫公鸡，如果用免疫公鸡 代替，但应增加洗涤次数和时间 在使用微量移液器时，每个吸头要安装牢 固，防止漏气 移液器滴头不要离开液面，防止产生气泡， 造成移液量不准 使用过和未使用过的加样头分开放
影响HA和HI的因素
NDHI 11-13 NDHI 13-15
HI试验注意事项
反应试剂要按规定保存和使用。为避免 反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将 试剂分装成小包装。 冻干的试剂应按照说明中规定的体积 重新溶解并保存。 要避免杂菌污染，因为污染所造成的 非流感起源的凝集素也可与所有抗血清 发生非特异反应。
HI试验注意事项
红细胞悬液要始终符合标准，使用时应 随时振荡。 稀释液应选用PBS，反应体系为0.075ml.
影响HA和HI的因素
被检血清腐败变性。血样采集后要及时分 离血清，分离后即时测定或放置在4℃冰 箱内保存，不可过久，要力求新鲜。 缓冲液配制时间过长，pH值发生变化，使 凝集不明显。缓冲液（PBS）尽可能现配 现用，浓度和酸碱度要准确 病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀， 加入时浓度高低不一，人为造成误差。因 此抗原和红细胞使用前一定要摇匀，保证 每一孔中加入的浓度准确一致。鸡 第二次免疫14天后，进行免疫效果监测。 鸡群免疫抗体转阳率≥50%判定为合格。 灭活疫苗的免疫效果判定家禽免疫后21 天进行免疫效果监测。HI抗体效价≥24 为免疫合格。 存栏禽群免疫抗体合格率必须≥70%判 定合格。
禽流感HI应注意的问题
合理选择抗原：H9、H5、H7 H5:针对Re-1和Re-4株疫苗免疫采用相应抗 原 同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果 毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异， 从而使检测同一血清的结果有差别 一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株 相同时，则所测得的HI效价较高
思考
HA为什么加补充液 为什么选用4 HAU
血凝抑制试验
结果判定
测定孔：RBC沉于孔底中心，呈纽扣状 (+)、 凝集（-） 血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝 病毒对照孔：凝集 RBC对照孔：无自凝 血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制使的 最高血清稀释度。
结果判定
只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2 , 阳性对照孔血清误差不超过 1个滴度，试 验结果才有效。 HI价小于或等于3 log2判定HI试验阴 性;HI价等于4 log2为可疑，需重复试 验;HI价大于或等于5 log2为阳性。