6-磷酸果糖激酶-2果糖双磷酸酶-2同工酶3在胃癌中的表达和意义论文
糖代谢论文
糖代谢摘要：糖是一类化学本质为多羟醛或多羟酮及其衍生物的有机化合物.在人体内糖的主要形式是葡萄糖(glucose，Glc)及糖原(glycogen，Gn).葡萄糖是糖在血液中的运输形式,在机体糖代谢中占据主要地位；糖原是葡萄糖的多聚体,包括肝糖原、肌糖原和肾糖原等，是糖在体内的储存形式.葡萄糖与糖原都能在体内氧化提供能量.食物中的糖是机体中糖的主要来源，被人体摄入经消化成单糖吸收后，经血液运输到各组织细胞进行合成代谢和分解代谢.机体内糖的代谢途径主要有葡萄糖的无氧酵解、有氧氧化、磷酸戊糖途径、糖原合成与糖原分解、糖异生以及其他己糖代谢等.关键词:糖的消化和吸收血糖糖的无氧酵解糖的有氧氧化磷酸戊糖途径糖异生作用糖蛋白与蛋白聚糖糖的消化和吸收食物中的糖主要是淀粉，另外包括一些双糖及单糖。
多糖及双糖都必须经过酶的催化水解成单糖才能被吸收。
食物中的淀粉经唾液中的α淀粉酶作用，催化淀粉中α-1，4-糖苷键的水解，产物是葡萄糖、麦芽糖、麦芽寡糖及糊精。
由于食物在口腔中停留时间短，淀粉的主要消化部位在小肠。
小肠中含有胰腺分泌的α淀粉酶，催化淀粉水解成麦芽糖、麦芽三糖、α糊精和少量葡萄糖。
在小肠黏膜刷状缘上，含有α糊精酶，此酶催化α极限糊精的α-1，4-糖苷键及α-1，6-糖苷键水解，使α-糊精水解成葡萄糖；刷状缘上还有麦芽糖酶可将麦芽三糖及麦芽糖水解为葡萄糖。
小肠黏膜还有蔗糖酶和乳糖酶，前者将蔗糖分解成葡萄糖和果糖，后者将乳糖分解成葡萄糖和半乳糖。
糖被消化成单糖后的主要吸收部位是小肠上段，己糖尤其是葡萄糖被小肠上皮细胞摄取是一个依赖Na+的耗能的主动摄取过程，有特定的载体参与：在小肠上皮细胞刷状缘上，存在着与细胞膜结合的Na+-葡萄糖联合转运体，当Na+经转运体顺浓度梯度进入小肠上皮细胞时，葡萄糖随Na+一起被移入细胞内，这时对葡萄糖而言是逆浓度梯度转运。
这个过程的能量是由Na+的浓度梯度（化学势能）提供的，它足以将葡萄糖从低浓度转运到高浓度。
6_磷酸果糖激酶_2_果糖双磷酸酶_2是一种重要的代谢信号酶
— —— —— —— —— —— 收稿日期： ２００５－ １１－ ０１ 广西医科大学校内基金 作者简介： 陶 萍 （１９８０—），女，硕士生，Ｅ－ ｍａｉｌ：ｔａｏｐｉｎｇ－
８０２６＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ； 吴耀生 （１９５８—），女，硕士，教授，研究生导 师，联系作者，Ｅ－ ｍａｉｌ：ｗｕｙａｏｓｈｅｎｇ０３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
●Ｒｅ ｃｅ ｎｔ Ｐ ｒｏｇｒｅ ｓ ｓ ｅ ｓ
· １１０ · 文章编号：１０００－ １３３６（２００６）０２－ ０１１０－ ０４
《生命的化学》２００６ 年 ２６ 卷 ２ 期 ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＯＦ ＬＩＦＥ ２００６， ２６（２）
●Ｒｅ ｃｅ ｎｔ Ｐ ｒｏｇｒｅ ｓ ｓ ｅ ｓ
６－ 磷酸果糖激酶－ ２／果糖双磷Байду номын сангаас酶－ ２ 是一种重要的代谢信号酶
比（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ）和模拟实验，通过定向诱变 研究大量的氨基酸残基发现，ＰＦＫ－ ２ 结构域与腺 苷激酶有相似性，而 ＦＢＰａｓｅ－ ２ 亚基的结构域所 包含的序列、力学和结构因素则与组氨酸磷酸酶 家族很相似。ＰＦＫ－ ２／ＦＢＰａｓｅ－ ２ 是一个二聚体，包 括两个结构域：主要的 α／β域和一小的结构域。 从小角度的 Ｘ 射线散射实验数据显示，与 ６－ 磷酸 葡萄糖结合可以使 ＰＦＫ－ ２／ＦＢＰａｓｅ－ ２ 产生一个更 为紧凑的结构；在变构位点接合 Ｍｇ ＡＴＰ 可以使 其转变为四聚体形式并引起三级结构的改变 。 ［１，２］ 在同型二聚体结构中，２ 个 ＰＦＫ－ ２ 结构域是以头 对头的形式连接在一块，而 ＦＢＰａｓｅ－ ２ 基本是独 立的，仅仅有一个盐桥相连。ＰＦＫ－ ２ 结构域由 ７ 个 α螺旋缠绕的 ６ 股 β折叠构成［３］。从一些细菌 中发现，焦磷酸依赖的 ＰＦＫ－ ２／ＦＢＰａｓｅ－ ２ 也是以 二聚体形式存在的［４，５］。
JAK-STAT信号通路和心肌葡萄糖代谢
JAK-STAT信号通路和心肌葡萄糖代谢王丽丽;张翠丽【摘要】葡萄糖是心肌的重要能源物质之一,葡萄糖转运及代谢是心脏进行各项生物学活动的基础.Janus激酶-信号转导和转录通路(JAK-STAT)是一条由多种细胞因子参与的信号转导通路,几乎存在于机体的所有组织中.该文总结关于心肌葡萄糖代谢与JAK-STAT信号通路关系的文献发现,JAK-STAT信号转导通路通过多种方式参与胰岛素诱导的心肌葡萄糖代谢.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2015(021)023【总页数】4页(P4263-4266)【关键词】心肌;葡萄糖代谢;Janus激酶;信号转导和转录;胰岛素【作者】王丽丽;张翠丽【作者单位】哈尔滨医科大学附属第一医院心内科,哈尔滨150001;哈尔滨医科大学附属第一医院心内科,哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】R541.8Insulin细胞信号转导是细胞对胞外调节信号做出的特异性应答，目前已知大部分细胞中存在肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system，RAS)-丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路和Janus激酶(Janus kinase，JAK)-信号转导和转录活化因子(signal transducer and activator of transcription，STAT)通路两条基本通路。
JAK-STAT信号转导通路是近年来发现的一条由细胞因子刺激的信号转导通路，其参与了细胞的增殖、分化、凋亡及免疫调节等生物学过程，其在几乎所有细胞因子信号的传递中都发挥着重要作用。
目前JAK-STAT信号通路的调控及其与其他细胞因子信号转导通路的联系尚不清楚。
现对心肌葡萄糖代谢与JAK-STAT信号通路中关于葡萄糖代谢方面现有的研究结果予以综述。
心脏是耗氧率最高、对缺氧反应最强烈的有氧代谢器官。
磷酸果糖激酶研究进展
磷酸果糖激酶研究进展杨益坤生命科学学院SA16008074摘要：磷酸果糖激酶掌握着糖酵解开始的钥匙，是糖酵解中最重要的控制点。
糖酵解速度主要取决于磷酸果糖激酶，它是个限速酶，其受多个途径调控：受ADP别构激活、ATP别构抑制；受柠檬酸、脂肪酸别构抑制；受果糖-2,6-二磷酸的调控；受H+抑制。
生物体对磷酸果糖激酶的调控十分精细。
对于磷酸果糖激酶的研究和应用主要在于对于糖尿病的治疗，磷酸果糖激酶的变构效应的研究，磷酸果糖激酶在糖酵解中的地位等等。
本文就磷酸果糖激酶的研究进展进行综述。
关键词：磷酸果糖激酶别构激活别构抑制柠檬酸结合位点乳酸糖尿病地位一．磷酸果糖激酶简介名称：磷酸果糖激酶（fructose-1,6-bisphosphate）磷酸果糖激酶1（Phosphofructokinase-1；PFK-1）是一种糖酵解作用里一种重要的酶，是一种由4个次单位组成的异位（allosteric）酵素，可受多种活化剂与抑制剂调控。
糖酵解（glycolysis）是指在细胞质中将葡萄糖分解成为丙酮酸的过程，期间每分解一分子葡萄糖产生两分子丙酮酸以及两分子ATP。
属于呼吸作用的第一个阶段，随后根据有氧与否将丙酮酸进行柠檬酸循环或发酵。
在糖解作用里，PFK-1是负责将果糖-6-磷酸与ATP 转变成为果糖-1,6-双磷酸与ADP。
糖酵解过程中，6-磷酸果糖生成1，6-二磷酸果糖( Fructosel，6bisphosphate，F-1，6-BP)，催化此反应的酶是6-磷酸果糖激酶1(6-phosphofructokinase1，PFK1)，这是糖酵解途径的第二次磷酸化反应，需要ATP与Mg2+参与，ΔG"0=-14.2KJ/mol，反应不可逆。
6-磷酸果糖激酶1是糖酵解过程的主要限速酶，是糖酵解过程中的主要调节点。
至此，糖酵解完成了代谢的第一个阶段。
催化反应：果糖-6-磷酸+ATP→果糖-1,6-二磷酸+ADP辅助因子：Mg2+催化机制：镁离子将ATP外侧的两个磷酸基团作用，使磷原子更容易接受孤对电子的亲和进攻，使两个磷原子之间的氧桥所共用的电子对向氧原子一方转移，ATP的磷酸集团有利于氧桥断裂，并与果糖-6-磷酸分子结合，生成果糖-1,6-二磷酸。
果糖-1,6-二磷酸酶
果糖-1,6-二磷酸酶果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose-1,6-bisphosphatase，简称为 FBPase）是一种参与葡萄糖代谢的酶，存在于几乎所有真核生物、许多原核生物以及一些病毒中。
它是Gluconeogenesis（糖异生）途径中的一个重要酶，负责将2分子果糖-1,6-二磷酸（FBP）水解为2分子磷酸果糖（F6P），从而使糖异生途径前进。
该酶是糖异生途径和糖原合成途径中的限速酶之一，在空腹时，肝脏中糖异生途径占主导地位，FBPase的活性是肝脏维持正常生理状态所必需的。
结构与功能FBPase 主要由 3 个结构域构成：N 端结构域、中间结构域和 C 端结构域，这些结构域在进化过程中具有高度的保守性。
N 端结构域含有磷酸化酶催化所需的脯氨酸残基，是酶催化和调节的关键区域。
中间结构域含有两个反向同构的催化中心，这些催化中心使 FBPase 能够高效地水解两个 FBP 分子，从而生成两个 F6P。
C 端结构域则对物质基础进行分类和整合，为 FBPase 酶学和生物学特性的整合提供基础。
FBPase 对许多环境因素，如 pH 值，离子强度和温度等，均表现出高度的敏感性。
稳定剂和抑制剂都能够显著地影响酶的活性。
对于细胞与机体内的 FBPase 来说，该酶的调节显得尤为重要。
急性调节通常由磷酸化和解磷酸化等化学修饰实现，而长期调节则主要由基因表达调控实现。
FBPase 的磷酸化和解磷酸化磷酸化和解磷酸化修饰对于 FBPase 的调节非常重要。
当细胞需要进入糖异生途径时，活性化的酶被磷酸化，并透过蛋白水解酶4的参与，磷酸化 FBPase 的活性在糖异生途径的起始阶段被激发，以产生更多的葡萄糖。
与此相反，当细胞需要停止进行糖异生途径时，F6P 是其调节的关键物质，彼时解磷酸化的 FBPase 更方便形成稳定的 F6P/FBP 催化活性平衡，从而使糖异生途径的前进效率下降。
改变 FBPase 的活性和构象调整代表了一种非常快速和可靠的方式，调整葡萄糖代谢产物的浓度，从而使细胞适应外界环境的需求。
MMP-2、MMP-14、TIMP-2在胃癌组织中的表达及意义
MMP-2、MMP-14、TIMP-2在胃癌组织中的表达及意义张金玲;费雁;陈伟;冯刚【摘要】Objective To examine the expression of MMP-2, MMP-14 and TIMP-2 in gastric cancer and its clinical significance. Methods The expression of MMP-2,MMP-14 and TIMP-2 was immunohistochemically detected in 80 samples of gastric cancer tissues and 30 adjacent normal gastric tissues. Results The positive expression rate of MMP-2 and MMP-14 was 75.00% and 82. 50% respectively,in gastric cancertissues,significantly higher than that in normal gastric tissues(36. 67% and 33. 33% ,respectively) (P<0. 01). The positive expression rate of TIMP-2 was 45. 00% and 40. 00% in gastric cancer tissues and normal gastric tissues with no significant difference being found. The expression of MMP-2 and MMP-14 in gastric cancer tissues was closely correlated to the cell differentiation,invasion,lymph node metastasis and TNM stages(P<0. 01). But the expression of TIMP-2 in gastric cancer tissues was only related to the lymph node metastasis (P<0. 05). The expression levels of MMP-2 and MMP-14 were significantly higher in survival time <2 years group than in survival time ≥2 years group(P<0. 01). Conclusion MMP-2 and MMP-14are over-expressed in gastric cancer. Combined detection for MMP-2/MMP-14 or MMP-2/MMP-14/TIMP-2 may help evaluate the malignancy of gastric cancer and predict the prognosis of patients with gastric cancer.%目的探讨基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、14及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-2)在胃癌中的表达及其意义.方法用免疫组织化学方法 (SP法)检测80例胃癌手术患者胃癌组织及30例同期癌旁≥5 cm正常组织中MMP-2、MMP-14及TIMP-2的表达.结果①在胃癌、正常胃组织中,MMP-2阳性表达率分别为75.00%和36.67%,MMP-14阳性表达率分别为82.50%和33.33%,差异有统计学意义(均P＜0.01);TIMP-2阳性表达率分别为45.00%和40.00%,差异无统计学意义.②癌组织中,MMP-2、MMP-14的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结有无转移和TNM临床分期密切相关(均P＜0.01).TIMP-2的表达仅与淋巴结有无转移相关(P＜0.05).③生存期＜2年患者的MMP-2、MMP-14表达率明显高于生存期≥2年患者(均P＜0.01).结论胃癌组织中,MMP-2、MMP-14高表达,联合检测MMP-2、MMP-14或MMP-2、MMP-14、TIMP-2可作为胃癌恶性程度及预后判断的指标.【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(042)002【总页数】4页(P227-230)【关键词】胃癌;基质金属蛋白酶-2;基质金属蛋白酶-14;基质金属蛋白酶组织抑制因子-2【作者】张金玲;费雁;陈伟;冯刚【作者单位】华中科技大学同济医学院附属普爱医院肿瘤科,武汉,430033【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，年死亡率高，其确切病因尚未完全明了。
PFKFB3在结直肠腺癌中的表达及其临床意义
PFKFB3在结直肠腺癌中的表达及其临床意义周延杰;李涛;丁延玲;张家慧;汤盛楠;孙晓春【摘要】目的:探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatases 3 isozyme,PFKFB3)在结直肠腺癌中的表达及其意义.方法:选取31例结直肠腺癌患者手术切除的癌组织及其对应的癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测PFKFB3 mRNA表达,免疫组织化学法检测PFKFB3蛋白的表达,并探讨免疫组化阳性表达率与临床病理参数间的关系.结果:qRT-PCR结果显示,31例结直肠腺癌组织PFKFB3基因的相对表达量为1.93±1.73,明显高于其相对应的癌旁组织,差异有统计学意义(t=-2.985,P<0.01).免疫组织化学结果显示,结直肠腺癌组织及其对应的癌旁组织PFKFB3阳性表达率分别为61.3%(19/31)和3.2%(1/31),差异有统计学意义(P<0.01).PFKFB3的高表达与肿瘤直径、分化程度、侵袭、转移及治疗前癌胚抗原水平有关(均P<0.05).结论:PFKFB3对结直肠腺癌具有潜在的临床诊断价值,且与肿瘤的恶性程度存在一定的相关关系.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(027)001【总页数】3页(P82-84)【关键词】结直肠腺癌;6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶同工酶3;免疫组织化学【作者】周延杰;李涛;丁延玲;张家慧;汤盛楠;孙晓春【作者单位】江苏大学医学院,江苏镇江212013;江阴市人民医院检验科,江苏江阴214001;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013【正文语种】中文【中图分类】R735.34结直肠癌是消化系统常见恶性肿瘤。
果糖-1,6-二磷酸酶在肝癌组织的表达及其对预后的影响解析
癌旁组织中ＦＢＰＩ表达。采用配对秩和检验比较肝癌组织与癌旁组织中ＦＢＰｌ的表达水平，应用，
检验分析ＦＢＰｌ表达与Ｉ临床病理特征的关系。应用Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ法和Ｌｏｇ．ｒａｎｋ检验分析ＦＢＰｌ表达 水平与患者生存期的关系。结果肝癌组织中ＦＢＰＩ的表达水平明显低于癌旁组织，差异有统计学 意义（Ｚ＝７．９５２，Ｐ＜０．０１），ＦＢＰｌ在＞３ ｃｍ的肝癌组织中表达显著低于≤３ ｃｍ的肝癌组织（Ｐ＜ ０．０１）。美国肿瘤联合会（ＡＪＣＣ）分期中，Ⅲ一Ⅳ期肝癌组织ＦＢＰｌ表达水平低于Ｉ～Ⅱ期（Ｐ＜ ０．０１），且ＦＢＰｌ低表达的肝癌患者平均生存期显著低于ＦＢＰｌ高表达组［１５．２９个月比５０．１７个月， ９５％可信区间（ｃ，）：１９．７１—３８．３０，Ｐ＜０．０５］。结论肝癌组织中ＦＢＰｌ表达水平显著下降，ＦＢＰｌ 低表达患者预后较差，ＦＢＰｌ与肝癌预后相关，可作为判断肝癌患者预后的参考指标。
Ｆｕｎｄｓ（ＢＬ２０１４０３４）；Ｊｉａｎｇ一
万方数据
主堡塞墅处登盘查垫！！生！旦蔓！！鲞苤兰塑垦！也』量婴坠！ｇ：垒ｅ趔！！！！：Ｙ！！：！！：塑！：！
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ“３３３ Ｐｒｏｊｅｃｔ”Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｆｕｎｄｅｄ
・１０８９・
ＳＵ
Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（ＢＲＡ２０１３０５４，ＢＲＡ２０１４０６４）
注：ＡＪＣＣ：美国肿瘤联合会；ＦＢＰＩ：果糖．１，６一二磷酸酶；部分资料缺 失：包括肿瘤大小缺失ｌ例，ＡＪＣＣ分级缺失３例
３．ＦＢＰｌ表达与患者总生存期的关系：ＦＢＰｌ表达水
平与患者生存期（０Ｓ）密切相关，结果提示ＦＢＰｌ低表达 患者平均生存期为３４．８８个月，而ＦＢＰｌ高表达患者的 平均生存期为５０．１７个月［９５％可信区间（ｃ，）：１９．７１～ ３８．３０］，两组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），ＦＢＰｌ 高表达患者累积生存率明显高于ＦＢＰｌ低表达患者（表
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ｗｅｒｅ
ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＦＫＦＢ３ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ
ｃａｎｃｅｒ
ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）．Ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｉｅｓ ｏｆ ｓｔｏｍａｃｈ
ｃｅＨｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｒ．
ａｎｓｗｅｌｌ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｍｅｔｈｙｌ ｔｈｉａｚｏｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ（ＭｒＩ’１１）ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔ１１ａｔ ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌ Ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｅｏｍ． ｐａｒｅｄ ｔｏ ａｄｉａｃｅｎｔ ｎｏｎ—ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ．ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ ｅｍｂｏｌｕｓ，ａｎｄ ＴＮＭ ｓｔａｇｅ．Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ ＰＦＫＦＢ３ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ＭＧＣ８０３ ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎ－ ｃｌｕｓｉｏｎ ＰＦＫＦＢ３ ｍｉｇｈｔ ｐａｌｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｔｏｍａｃｈ Ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ；
ｓｉＲＮＡ来干扰ＰＦＫＦＢ３在ＭＧＣ８０３细胞中的表达，结果
荧光定量ＰＣＲ系统上进行，反应条件：预变性９５℃
１
ｍｉｎ，变性９５℃５ Ｓ，退火和延伸６０℃３０ Ｓ，共进行４０
个循环。ＰＦＫＦＢ３基因在癌组织和癌旁组织中的 ｍＲＮＡ表达水平差异采用相对定量法即用２。△觚‘法表
示。
４．ＭＴＦ实验：（１）按步骤４的方法转染ＭＧＣ８０３
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１６．１１．０３７
【摘要】
目的检测６．磷酸果糖激酶一２／果糖双磷酸酶－２同工酶３（ＰＦＫＦＢ３）在胃癌组织中的
表达，分析ＰＦＫＦＢ３对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法用实时定量反转录聚合酶链反应 （ＲＴ—ｑＰＣＲ）方法检测８７例胃癌患者癌和癌旁组织中ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ表达水平，并用统计学方法分 析ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ表达水平与Ｉ临床病理特征的相关性。用小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）干扰胃癌细胞 ＭＧＣ８０３中ＰＦＫＦＢ３的表达，并用噻唑蓝（Ｍ，ＩＴＩ’）法比较干扰后胃癌细胞增殖能力的改变，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ 法比较干扰后胃癌细胞迁移能力的改变。结果８７例胃癌患者癌组织中ＰＦＫＦＢ３的ｍＲＮＡ水平平 均是癌旁组织的２．１倍。胃癌组织中ＰＦＫＦＢ３的高表达与脉管内癌栓形成、淋巴结转移和ＴＮＭ分 期明显相关。ｓｉＲＮＡ干扰胃癌细胞中ＰＦＫＦＢ３的表达后，胃癌细胞的增殖能力和迁移能力的明显下 降。结论ＰＦＫＦＢ３在胃癌癌发生发展过程中发挥重要作用。
细胞４８ ｈ后，以每孔５ ０００个细胞接种于９６孑Ｌ板中。
ＭＧＣ８０３细胞４８ ｈ后，将细胞密度调整至１
Ｘ
１０６／ｍｌ，
向Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室中加人１００ Ｉｘｌ细胞悬液。（２）将
Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室置人２４孔板，在小室下层加入６００斗ｌ含 １０％胎牛血清的完全培养基，培养２４ ｈ。（３）取出小 室，用无菌棉签擦去上室面细胞，用４％多聚甲醛固定
１５
ｏＣ、５％ＣＯ：条件下常规培养和传代。主要试剂与 仪器：ＲＰＭＩ １６４０细胞培养基及胎牛血清购自美国 Ｇｉｂｃｏ公司；２条ＰＦＫＦＢ３小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）和
ｔｉｓｓｕｅｓ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ
ｒｅｖｅｒｓｅ
ａｎｄ ｉｔｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
ａｓ
ｗｅｌｌ
ａｓ
ｉｔｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ＰＦＫＦＢ３ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ｑＰＣＲ）ａｎａｌｙ．
探讨ＰＦＫＦＢ３在胃癌组织中表达及意义。
资料与方法
１．一般资料：８７例胃癌患者为２０１３年１月至 ２０１５年１２月在南京医科大学第二附属医院普外科住 院接受手术治疗的胃癌患者，术前均未接受放化疗以
万方数据
・２５６４・
主堡塞验生Ｅ型盘查！Ｑ！！生！！旦箜塑鲞筮！！翅垦丛！』垦翌！！垡：盟！！！些竺！！！鱼：！尘：塑：盟！：！！
ｏｆ肌彬ｎｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ２ＪＤＤＪＪ，吼ｉｎａ（Ｈｕａｎｇ ｒＱ，Ｗａｎｇ Ｊ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１１，Ｃｈｉｎａ（ｙｎ昭Ｐ）； Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｎ８喀ｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎ锄ｉ堍
ｓｉቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＮＡｓ和Ｃｏｎｔｒｏｌ ＲＮＡ，轻轻混匀并室温孵育５
ｐｍｏｌ ｍｉｎ；
两组之间的临床病理特征的比较采用ｒ检验，以Ｐ＜
０．０５为差异有统计学意义。
结 果
（３）用５０斗ｌ的Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ稀释１斗ｌ的Ｌｉｐｏｆｅｅｔａｍｉｎｅ
ＲＮＡｉＭＡＸ，轻轻混匀并室温孵育５ ｍｉｎ；（４）将（２）与 （３）的混合液轻轻混匀，室温孵育２０ｍｉｎ；（５）将（４）的 混合液加入含有细胞的５００斗１无血清培养基中，轻轻 混匀后培养６ ｈ后，将无血清培养基移去，更换完全培 养基后继续培养４８ ｈ。按照如下的实时定量反转录聚 合酶链反应（ＲＴ．ｑＰＣＲ）方法检测干扰效率。 ３．ＲＴ—ｑＰＣＲ：将组织标本以及细胞总ＲＮＡ按照 Ｔｒｉｚｏｌ试剂说明书进行提取，并按ｃＤＮＡ反转录试剂盒 说明合成ｃＤＮＡ。目的基因ＰＦＫＦＢ３的引物序列为：正
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ
ｒａｉｎ，结晶紫染色２０ ｍｉｎ。（３）揭下滤膜，晾干后用
ＲＮＡｉＭＡＸ以及Ｔｒｉｚｏｌ（总ＲＮＡ提取试
中性树胶固定封片。显微镜下观察计数穿膜的细胞 数。 ６．统计学方法：应用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．Ｏ进行统 计分析。计量资料用均数±标准差（面±ｓ）表示，实验 组和对照组的两两比较均采用Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｔ检验，我们按 照ＰＦＫＦＢ３在癌组织中的ｍＲＮＡ表达水平倍数高低将 ８７例患者分为高表达组（４４例）和低表达组（４３例），
及肿瘤靶向治疗。本研究得到南京医科大学第二附属 医院伦理委员会的批准。胃癌细胞株ＢＧＣ８２３、 ＳＧＣ７９０１、ＭＧＣ８０３的培养：胃癌细胞株均购自中国科 学院上海生命科学研究所细胞资源中心，按照其推荐 用含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ １６４０培养液培养，并在
３７
测量各孔的吸光度（Ａ）值，绘制细胞生长曲线。 ５．Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验：（１）按步骤４的方法转染
组织中ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ水平平均是癌旁组织的２．１倍 （Ｐ＜０．０５）。
２．胃癌组织中ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ的表达水平与临床 病理特征的相关性：为了分析ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ表达水 平与临床病理特征的相关性，按照８７例胃癌患者
ＰＦＫＦＢ３
ＣＡＧｌＴＣＣＴＡＣＴＣＡＡ，ＩＴＩ’ＣＣＡＡ一３’。内参基因Ｂ－肌动蛋 白（Ｂ．ａｃｔｉｎ）引物序列为：正义链：５’一ＣＡＣＧＡＴＧ—
虫堡塞坠处登盘查！Ｑ！！生！！旦筮！！鲞筮！！翅堡！ｉ！』垦翌！！婆：盟！！！坐！竺！Ｑ！！：！！！：ｊｊ：№：！１
・２５６３・
・临床研究・
６一磷酸果糖激酶一２／果糖双磷酸酶一２
同工酶３在胃癌中的表达和意义
杨鹏黄义勤王杰
作者单位：２１００１１南京医科大学第二临床医学院（杨鹏）；２１００１１南京医科大学第二 附属医院普通外科（黄义勤、王杰） 通信作者：王杰，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｊｉｅ３３０１＠１６３．ｃｏｍ
【关键词】
移
胃癌；
有氧糖酵解；
６－磷酸果糖激酶一２／果糖双磷酸酶一２；
细胞增殖；
细胞迁
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ６一ｐｈｏｓｐｈｏｆｒｕｃｔｏ一２一ｋｉｎａｓｅ／ｆｒｕｃｔｏｓｅ－２。６一ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ一 ３ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ№ｎｇ Ｐｅｎｇ，Ｈｕａｎｇ Ｙｉｑｉｎ，Ｗａｎｇ Ｊｉｅ Ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｇｅｎｅｒａｌ
义链：５’一ＣＣＴＣＡＣＴＣＧＣＡＧＣＣＡＣ ｒＩ－Ｉ＇ＣＴ一３’；反义链：５’－
１．ＰＦＫＦＢ３在胃癌患者的癌组织中高表达：我们 用ＲＴ—ｑＰＣＲ法比较了８７例胃癌患者癌组织和癌旁组 织中ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ表达水平差异。结果发现７８例 （８９．６％）患者癌组织中ＰＦＫＦＢ３的表达水平高于癌旁 组织，其中有４５例患者（５１．７％）癌组织中ＰＦＫＦＢ３的 表达水平高于癌旁组织２倍以上。８７例胃癌患者癌
ｃａｎｃｅｒ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
６一ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ一３；
Ａｅｒｏｂｉｃ ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ；６一ｐｈｏｓｐｈｏｆｒｕｃｔｏ一２一ｋｉｎａｓｅ／ｆｒｕｅｔｏｓｅ一２， Ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ： Ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
６．磷酸果糖激酶．１（ＰＦＫ一１）是糖酵解途径的一个 关键酶，其最重要的变构激活剂是２，６．双磷酸果糖 （１７２，６Ｐ２），而６一磷酸果糖激酶一２／果糖双磷酸酶－２同 工酶３（ＰＦＫＦＢ３）是促进Ｆ２，６Ｐ２合成最重要的酶，因 此具有协同促进调节肿瘤细胞糖酵解的作用，ＰＦＫＦＢ３ 已被发现在多种肿瘤组织中高表达¨ｏ。本研究旨在