磷酸果糖激酶(PFK)活性检测试剂盒 微量法
北京索莱宝科技有限公司
第1页，共4页磷酸果糖激酶（PFK）活性检测试剂盒微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC0535规格：100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。试剂三：液体×1支，-20℃保存。试剂四：液体×1支，4℃保存。产品说明：PFK（EC2.7.1.11）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖二磷酸和ADP，是糖酵解过程的关键调节酶之一。PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PFK活性。需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿或96孔板（UV）、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤：一、样本的前处理1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或者200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。北京索莱宝科技有限公司
第2页，共4页2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。3、血清（浆）样品：直接检测。二、测定步骤：1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。2.样本测定（1）在试剂二瓶中加入17mL试剂一和1.13mL蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴5分钟。用不完的试剂4℃保存一周。（2）在试剂三中加入1mL蒸馏水充分混匀，冰上放置备用；用不完的试剂4℃保存一周。（3）在试剂四中加入1mL蒸馏水充分混匀，冰上放置待用；用不完的试剂4℃保存一周。（4）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三、10μL试剂四和170μL试剂二，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1，比色后迅速将比色皿或96孔板连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴或恒温箱中，准确反应10分钟；迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，记录10分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。注意：1、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。2、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。3、不同匀浆组织中PFK活力不一样，做正式试验之前请坐1-2个预实验，若ΔA>0.5，则说明活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液（计算式中乘以相应稀释倍数），或缩短反应时间至2min或5min，使ΔA<0.5，以提高检测的灵敏度。三、PFK活力单位的计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：1、血清（浆）PFK活力的计算:单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果北京索莱宝科技有限公司
第3页，共4页糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/mL）=[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=321×△A2、组织、细菌或细胞中PFK活力的计算:（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/mgprot）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样)÷T=321×△A÷Cpr（2）按样本鲜重计算单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/g鲜重）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=321×△A÷W（3）按细菌或细胞密度计算单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/104cell）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.642×△AV反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。b.用96孔板测定的计算公式如下：1、血清（浆）PFK活力的计算:单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/mL）=[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=535×△A2、组织、细菌或细胞中PFK活力的计算:（4）按样本蛋白浓度计算：北京索莱宝科技有限公司
第4页，共4页单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/mgprot）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样)÷T=535×△A÷Cpr（5）按样本鲜重计算单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/g鲜重）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=535×△A÷W（6）按细菌或细胞密度计算单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmolADP定义为一个酶活力单位。PFK（U/104cell）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=1.07×△AV反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，0.6cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；109，单位换算系数，1mol=109nmol。
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)
北京雷根生物技术有限公司 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)
简介：
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于
哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
Leagene碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种
常用的磷酸酶显色底物，可在碱性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在碱性条件下p-nitrophenol转变成醌式结构，呈较深的黄色，通过分光光度比色法测定400～415nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细
胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该
试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制检测工作液： ① 配制显色工作液： 取出1支pNPP，恢复至室温后溶解于2ml ALP Assay buffer，
混匀，冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6h内用完。
② 配制标准品工作液。 2、 准备样品：
① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离
心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。 ② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的
测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干
扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 ③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或
PBS等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer稀释。 编号 名称 TE0003 100T Storage
ATP酶活性检测试剂盒
ATP酶活性检测试剂盒
（样本无需高速离心样本无需高速离心，，可测Na+k+、Ca2+Mg2+、Ca2+、Mg2+_ATPase)
说明书修订日期：2019.01.22Cat number：KGT026 Store at -20 for for 6 months℃ For Research Use Only（科研专用）
一、试剂盒介绍
ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。 本试剂盒的测定原理是依据ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。 本试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。 二、试剂组份
组份名称 KGT026 50tests 保存条件
试剂A 10mL×3
试剂B 10mL×1
试剂C 10mL×1 2-8℃
试剂D 粉剂×3 -20℃
试剂E 粉剂×1
试剂F 粉剂×1 2-8℃
试剂G 10mL×2 RT
试剂H 粉剂×3
试剂I 粉剂×1 2-8℃
试剂 J：2.5 mol/L 硫酸100mL×1 RT
试剂 K：10 mmol/L 标准磷储液10mL×1 2-8℃
试剂 D：-20℃以下保存 6 个月。用时每支加双蒸水至 5ml，现用现配。余下的-20℃以下可保存一周。 试剂 E：用时每支加双蒸水至 5ml，适当加热溶解，4℃保存 3 个月。 试剂 F：用时每支加双蒸水至 10ml[注 1]，充分加热使其完全溶解，室温保存。 试剂 H：用时每瓶加双蒸水至 40ml 溶解，（溶解后避光 4℃可保存一周）。 试剂 I：用时加水至 100ml 溶解，室温保存 3 个月。 0.5umol/ml 标准磷工作液配制：用时将试剂 K 作 20 倍稀释: 取 0.5ml 加蒸馏水定容至 10ml。定磷剂的配制：按双蒸水：2.5mol/L 硫酸：试剂 H：试剂 I=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，
辅酶类检测
辅酶类检测
辅酶是一小有机非蛋白分子，其用途为在酵素（酶）内载运化学基。许多辅酶是磷化水溶性维他命。但非维他命物质也可能是辅酶，如ATP－磷酸基的生化载具。在细胞内，反应后的辅酶可以被再生，以维持其胞内浓度在一个稳定的水平上。由于辅酶的再生对于维持酶反应体硫胺素系的稳定是必要的，因此，辅酶再生系统在实验室以及工业中具有广泛应用。
辅酶
迪信泰检测平台采用生化的方法检测辅酶类物质，使用相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测辅酶类物质的活性变化。目前可检测的辅酶类物质包括NADH、NADPH、乳酸脱氢酶、乙醛脱氢酶、柠檬酸合酶和丙酮酸脱羧酶等。此外，迪信泰检测平台还提供HPLC法测定辅酶类物质的服务，以满足您的不同需求。
pH值对丙酮酸脱羧酶活性的影响
迪信泰检测平台可检测辅酶类项目
NADH氧化酶((NOX))活性检测
乳酸脱氢酶((LDH))活性检测
6-磷酸葡萄糖脱氢酶((G6PDH))活性检测
NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)/ NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测
乙醛脱氢酶(ALDH)活性检测
硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)活性检测
NAD激酶(NADK)活性检测
柠檬酸合酶(CS)活性检测
丙酮酸脱羧酶(PDC)活性检测
醇脱氢酶(ADH)活性检测
胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测
NADP磷酸酶(NADPase)活性检测
NAD-苹果酸酶(NAD-ME) /NADP-苹果酸酶(NADP-ME)活性检测
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)活性检测
肌酸激酶(CK)活性检测
脂肪酸合成酶(FAS)活性检测
NADH含量检测
NADPH含量检测
生化法测定辅酶类样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL，测定样品不返还，请您保留备份。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
南京建成 产品目录及价格表 17-3-22
氧化抗氧化、科研试剂：序号产品中文名A151α-岩藻糖苷酶（AFU）测试盒（比色法）A149辅酶Q10测试盒（比色法）A147叶绿素测试盒（比色法）A127NADPH氧化酶活性测试盒（比色法）A095-2ATP含量测定试剂盒（化学发光法）A090细胞色素C氧化酶活性测试盒(生化法）A075乙醛脱氢酶（ALDH）活性测试盒（比色
A056-2糖化血红蛋白（GHb）测定试剂盒（酶法，
双试剂）（微板法）A054-2脂肪酶（LPS）测定试剂盒（微板法）
A027-2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）测定试剂盒
（速率法）（紫外）
A015-3总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒
（FRAP法）微板法
A015-2总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒
（ABTS法）微板法A011维生素B2（VB2）荧光检测试剂盒A010维生素B1（VB1）荧光检测试剂盒A146内源性硫化氢（H2S）测定试剂盒A145植物可溶性糖含量测试盒（比色法）A144植物原花青素测试盒（比色法）A143植物总酚测试盒（比色法）A142植物类黄酮测试盒（比色法）A141丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒（紫外比色A140果胶酶测试盒（比色法）A139几丁质酶测试盒（比色法）A138纤维素酶（CL）测试盒（比色法）A137苯丙氨酸解氨酶（PAL）测试盒（比色法）A136多酚氧化酶（PPO）测试盒（比色法）A135山梨醇脱氢酶测试盒（紫外比色法）A134细胞色素b5含量测试盒（比色法）A133羧酸酯酶（CarE）测试盒（比色法）
A132NADPH-细胞色素C还原酶（NCR）测试盒
（比色法）A131磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶试剂盒（紫外比色法）A130磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）测试盒
（紫外比色法）A129磷酸果糖激酶（PFK）测试盒（紫外比色A128柠檬酸（CA）含量测试盒（比色法）A126半胱氨酸（Cys）含量测试盒（比色法）A125谷氨酸脱氢酶（GLDH）测试盒（紫外比色A124谷氨酰胺酶（GLS)测试盒（比色法）A123抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒（紫外
体外诊断试剂分类优选资料
体外诊断试剂产品分类表
（一）、临床血液学和体液学检验试剂
血液学检验试剂（盒）
1.1.1血液一般检验试剂（盒）
品名举例：
血液分析仪用溶血剂
网织红细胞试剂
血液分析仪用稀释液
血液分析仪用清洗液
血液分析仪用鞘液
血液分析仪用染色液
1.1.2溶血实验试剂（盒）
品名举例：
葡萄糖—6—磷酸脱氢酶荧光斑点试验试剂（盒）
血红蛋白A2试剂（盒）
胎儿血红蛋白分析仪试剂（盒）
糖化血红蛋白分析仪试剂（盒）
高铁血红蛋白还原试验试剂（盒）
Hb—F碱变性试验试剂（盒）
Hb—F酸洗脱试验试剂（盒）
血浆游离血红蛋白测定试剂（盒）
硫血红蛋白分析试剂（盒）
丙酮酸激酶活力测定试剂（盒）
镰状细胞试验试剂（盒）
其它溶血试验试剂（盒）
红细胞自身溶血试验试剂（盒）
血浆血红蛋白测定试剂（盒）
血红蛋白电泳检查试剂（盒）
异常血红蛋白分析试剂（盒）
一氧化碳血红蛋白检测试剂（盒）
血清结合珠蛋白（HP）测定试剂（盒）
镰状细胞试验试剂（盒）
1.1.3血栓与止血检验试剂（盒）
品名举例：
凝血酶原时间（PT）测定试剂（盒）
肝促凝血酶原激酶(HPT) 试剂（盒）
肝素或类肝素抗凝物质测定试剂（盒） 肝素辅因子II（HC—II）测定试剂（盒）
纤溶酶（PLM）活性测定试剂（盒）
纤溶酶原（PLG）活性测定试剂（盒）
组织先溶酶原激活物（t—PA）测定试剂（盒）
组织纤维蛋白酶激活剂、抑制剂—1复合体试剂（盒）
纤溶酶原激活抑制物（PAI）活性测定试剂（盒）
纤维蛋白溶酶原试剂（盒）
纤维蛋白溶酶—α2—血纤维蛋白溶酶复合体试剂（
盒）
α2—纤溶酶抑制物（α2—PI）活性测定试剂（盒）
α—2抗纤溶酶（α—PA）测定试剂（盒）
血清纤维蛋白降解产物（FDP）测定试剂（盒）
纤维蛋白肽A试剂（盒）
凝血酶原消耗试验试剂（盒）
凝血酶原第七凝血因子试验及血栓试剂（盒）
可溶性纤维蛋白单体复合物蛋白物测定试剂（盒）
索莱宝 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px GPX）活性检测试剂盒说明书-微量法
第 1 页，共 4 页谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：BC1195规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2瓶4℃保存试剂二液体10 μL×1瓶4℃保存试剂三液体30mL×1瓶4℃保存试剂四液体15 mL×1瓶4℃保存试剂五液体5mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支 4℃保存稀释液液体20 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入3.3 mL稀释液，充分溶解； 2、试剂二：临用前按2 μL试剂二：10 mL蒸馏水的比例稀释试剂二，现用现配； 3、试剂三：瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；4、标准品：10 mg还原型谷胱甘肽。临用前加入0.405 mL稀释液溶解为80 μmol/mL的标准溶液备用。产品说明：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GPX
能够催化还原型谷胱甘肽（
GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。GPX催化H2O2氧化GSH，产生GSSG，GSH能与DTNB生成在412nm处有特征吸收峰的化合物，412nm下吸光度的下降即可反应GPX的活性。注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管。操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取0.05 g组织，加入1 mL提取液）进行冰浴匀浆。5000 rpm，4℃离心10 min，取上清置冰上待测 (如上清不清澈可以离心更长时间)。Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088 第 2 页，共 4 页2、细菌、细胞：按照细胞数量104个：提取液体积（mL）500~1000:1的比例（建议500万细胞加入1 mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3 min）然后5000 rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测 (如上清不清澈可以离心更长时间)。3、血清（浆）等液体：直接测定。二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412 nm，蒸馏水调零。2、将80 μmol/mL标准液用稀释液稀释为0.08 μmol/mL的标准溶液，现用现配。3、操作表：(在1.5 mL离心管中依次加入下列试剂)测定管对照管样本上清液（µL）20-试剂一（μL）202037℃下预热5min试剂二（µL）101037℃下反应5min试剂三（μL）200200样本上清液（µL）-20充分混匀，4000 rpm常温离心5 min，取上清于EP管或者96孔板中。试剂名称(μL)测定管对照管标准管空白管稀释液---100上清液100100--标准液--100-试剂四100100100100试剂五25252525 充分混匀，室温静置15 min，测定412 nm下的吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A对照管-A测定管，ΔA标准=A标准管-A空白管。三、GPX活性计算1、抑制百分率的计算抑制百分率=(A对照管-A测定管) ÷（A对照管-A空白管）× 100%尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。2、GPX活性计算（1）按蛋白浓度计算活力单位定义：每mg蛋白在反应体系中每分钟催化1 nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。GPX (U/mg prot) =ΔA测定÷（ΔA标准÷C标）×1000×V酶促÷（Cpr×V样）÷T=200×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr第 3 页，共 4 页（2）按样本质量计算活力单位定义：每g样本在反应体系中每分钟催化1 nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。GPX (U/g 质量)= ΔA测定÷（ΔA标准÷C标）×1000×V酶促÷(V样÷V样总×W)÷T=200×ΔA测定÷ΔA标准÷W（3）按细胞数量计算活力单位定义：每104个细胞在反应体系中每分钟催化1 nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。GPX (U/104 cell)=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标）×1000×V酶促÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T=200×ΔA测定÷ΔA标准÷细胞数量（4）按液体体积计算活力单位定义：每mL液体在反应体系中每分钟催化1 nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。GPX (U/mL)= ΔA测定÷（ΔA标准÷C标）×1000×V酶促÷V样÷T=200×ΔA测定÷ΔA标准C标：标准液混合物的浓度：0.08 μmol/mL；V酶促：酶促反应体系体积，0.25 mL；V样：酶促反应中加入样本体积，0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，5 min；细胞数量：以万计；W：样本质量，g；1000：换算系数，1 μmol=1000 nmol。注意事项：1、吸光度若大于1.5时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。2、建议一次不要做过多样本以免检测时间过长影响显色，使测定不准确。实验实例：1.取0.1 g小鼠肝脏组织加入1 mL提取液进行匀浆研磨，取上清稀释40倍后再按照测定步骤操作，用96孔板测得A测定管=0.152，A对照管=0.278，A标准管=0.370，A空白管=0.064，计算∆A测定=A对照管-A测定管=0.126，∆A标准=A标准管-A空白管=0.306，按样本质量计算酶活得：GPX (U/g 质量)=200×ΔA测定÷ΔA标准÷W×40（稀释倍数）=32941 U/g 质量。2.取0.1 g杨树叶片加入1 mL提取液进行匀浆研磨，用96孔板测得A测定管=0.199，A对照管=0.259，A标准管=0.370，A空白管=0.064，计算∆A测定=A对照管-A测定管=0.060，∆A标准=A标准管-A空白管=0.306，按样本质量计算酶活得：GPX (U/g 质量)=200×ΔA测定÷ΔA标准÷W=392 U/g 质量。相关发表文献：[1]Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019; 59.(IF4.18)[2]Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,et al. Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model. Journal of Functional Foods. June 2018;(IF3.197)[3]Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen,et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. Feb 2019;(IF3.547)[4]Wang H, Li Y Y, Qiu L Y, et al. Involvement of DJ-1 in ischemic preconditioning-induced delayed cardioprotection in vivo[J]. Molecular medicine reports, 2017, 15(2): 995-1001第 4 页，共 4 页相关系列产品：BC1170/BC1175还原型谷胱甘肽（GSH）含量检测试剂盒BC1180/BC1185氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量检测试剂盒BC1150/BC1155硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）活性检测试剂盒BC1210/BC1215γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）活性检测试剂盒
南京建成 产品目录及价格表 17-3-22 2
氧化抗氧化、科研试剂：序号产品中文名A151α-岩藻糖苷酶（AFU）测试盒（比色法）A149辅酶Q10测试盒（比色法）A147叶绿素测试盒（比色法）A127NADPH氧化酶活性测试盒（比色法）A095-2ATP含量测定试剂盒（化学发光法）A090细胞色素C氧化酶活性测试盒(生化法）A075乙醛脱氢酶（ALDH）活性测试盒（比色
A056-2糖化血红蛋白（GHb）测定试剂盒（酶法，
双试剂）（微板法）A054-2脂肪酶（LPS）测定试剂盒（微板法）
A027-2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）测定试剂盒
（速率法）（紫外）
A015-3总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒
（FRAP法）微板法
A015-2总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒
（ABTS法）微板法A011维生素B2（VB2）荧光检测试剂盒A010维生素B1（VB1）荧光检测试剂盒A146内源性硫化氢（H2S）测定试剂盒A145植物可溶性糖含量测试盒（比色法）A144植物原花青素测试盒（比色法）A143植物总酚测试盒（比色法）A142植物类黄酮测试盒（比色法）A141丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒（紫外比色A140果胶酶测试盒（比色法）A139几丁质酶测试盒（比色法）A138纤维素酶（CL）测试盒（比色法）A137苯丙氨酸解氨酶（PAL）测试盒（比色法）A136多酚氧化酶（PPO）测试盒（比色法）A135山梨醇脱氢酶测试盒（紫外比色法）A134细胞色素b5含量测试盒（比色法）A133羧酸酯酶（CarE）测试盒（比色法）
A132NADPH-细胞色素C还原酶（NCR）测试盒
（比色法）A131磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶试剂盒（紫外比色法）A130磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）测试盒
（紫外比色法）A129磷酸果糖激酶（PFK）测试盒（紫外比色A128柠檬酸（CA）含量测试盒（比色法）A126半胱氨酸（Cys）含量测试盒（比色法）A125谷氨酸脱氢酶（GLDH）测试盒（紫外比色A124谷氨酰胺酶（GLS)测试盒（比色法）A123抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒（紫外
6-磷酸果糖激酶-2果糖-2,6-二磷酸酶3对人脐静脉内皮细胞管腔形成的影响
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research
2217 ·研究原著·
曹阳，男，1988年生，四川省仁寿县人，汉族，西南医科大学在读硕士，主要从事眼底病方向的研究。 通讯作者：吕红彬，博士，主任医师，西南医科大学附属医院眼科，四川省泸州市 646000 文献标识码:B 投稿日期：2019-09-21 送审日期：2019-09-24 采用日期：2019-11-14 在线日期：2019-12-30 Cao Yang, Master candidate, Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China Corresponding author: Lü Hongbin, MD, Chief physician, Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China 6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2，6-二磷酸酶3对人脐静脉内皮细胞 管腔形成的影响 曹 阳1，胡 萍1，田 敏1，韦 芳2，顾 青2，吕红彬1 (1西南医科大学附属医院眼科，四川省泸州市 646000；2上海市眼底病重点实验室，上海市 200080) DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2599 ORCID: 0000-0001-9070-3292(曹阳) 文章快速阅读： 文题释义： 6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2，6-二磷酸酶3(PFKFB3)：糖酵解作为血管内皮细胞中提供能量的主要方式，而6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2，6-二磷酸酶作为糖酵解中重要的刺激剂，在肿瘤新生血管方面具有重要作用，在此次实验中主要用于说明在高糖环境下对血管内皮的作用。 糖尿病性视网膜病变：是糖尿病中微血管严重并发症之一，一旦产生视网膜新生血管，将严重影响工作人群的视力，此次实验主要研究脐静脉内皮细胞在高糖环境中PFKFB3的作用，以期找到缓解视网膜新生血管的新靶点。 摘要 背景：糖尿病性视网膜病变中关于新生血管的研究多局限于血管内皮生长因子，而6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2，6-二磷酸酶(phosphofructokinase-2/fructose-2，6-bisphosphatase，PFKFB3)也有一定的作用。 目的：探讨PFKFB3小干扰RNA(siRNA)对高糖环境下人脐静脉内皮细胞的作用及机制。 方法：将人脐静脉内皮细胞分为4组：正常糖组(5.5 mmol/L 葡萄糖)、正常糖+PFKFB3-siRNA组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、高糖+PFKFB3-siRNA组。正常糖+PFKFB3-siRNA组和高糖+PFKFB3-siRNA组以PFKFB3-siRNA转染人脐静脉内皮细胞。采用Western blot检测PFKFB3的沉默表达效果，并选取沉默效果最佳者进行后续实验。体外管腔形成实验检测细胞成管能力，实时荧光定量PCR检测PFKFB3的mRNA表达，Western blot检测PFKFB3及磷酸化AKT/AKT的蛋白表达。 结果与结论：①PFKFB3-siRNA能明显抑制PFKFB3的蛋白表达(P < 0.01)；②与正常糖组相比，正常糖+ PFKFB3-siRNA组管腔形成总长度增加(P < 0.05)，高糖组管腔形成总长度明显减少(P < 0.01)，高糖+ PFKFB3-siRNA组管腔形成总长度无明显变化(P > 0.05)；与高糖组相比，高糖+PFKFB3-siRNA组管腔形成能力明显增加(P < 0.05)；与正常糖组相比，高糖组中PFKFB3的mRNA及蛋白表达均明显升高(均P < 0.01)；与高糖组相比，高糖+PFKFB3-siRNA组的PFKFB3蛋白表达降低(P < 0.05)；③与正常糖组相比，正常糖+PFKFB3-siRNA组与高糖组中磷酸化AKT/AKT比值均降低(P < 0.01)，而高糖组+PFKFB3-siRNA组磷酸化AKT/AKT蛋白比值无明显变化(P > 0.05)；与高糖组相比，高糖+PFKFB3-siRNA组磷酸化AKT/AKT蛋白比值升高(P < 0.01)。提示采用siRNA沉默PFKFB3基因表达可抑制人脐静脉内皮细胞中PFKFB3的表达，促进管腔形成能力，其机制可能与下调AKT表达有关。 关键词： PFKFB3；高血糖状态；血管生成；磷酸化AKT；siRNA-MateTM；糖尿病性视网膜病变；人脐静脉内皮细胞；管腔形成 中图分类号：R453；R587.1；R318 基金资助： 四川省教育厅资助项目(17ZA0428)，项目负责人：吕红彬；2017年度泸州市人民政府-西南医科大学科技战略合作项目(2017LZXNYD-J01)，项目负责人：吕红彬 缩略语： 磷酸果糖激酶2/果糖-2，6-二磷酸酶：phosphofructokinase-2/fructose-2，6-bisphosphatase，PFKFB 文章描述— (1)沉默PFKFB3对高糖环境下血管内皮细胞管腔形成能力有影响，其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关； (2)PFKFB3有望成为治疗糖尿病性视网膜病变中新生血管新的分子靶点。 脐静脉 内皮细胞 正常糖对照组： 正常糖+PFKFB3-siRNA组： 高糖组： 高糖+PFKFB3-siRNA组： 检测指标： (1)检测PFKFB3、磷酸化AKT的表达； (2)检测内皮细胞管腔形成的能力。 结论： (1)采用siRNA沉默PFKFB3基因表达可抑制人脐静脉内皮细胞中PFKFB3的表达； (2)促进管腔形成能力，其机制可能与下调AKT表达有关。 曹阳，胡萍，田敏，韦芳，顾青，吕红彬. 6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2，6-二磷酸酶3对人脐静脉内皮细胞管腔形成的影响[J]. 中国组织工程研究，2020，24(14):2217-2222. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2599
一种缓解体力疲劳功能制剂的科学研究
第
23期范轶欧:一种缓解体力疲劳功能制剂的科学研究-33 -
一种缓解体力疲劳功能制剂的科学研究
范轶欧
（山东
省疾病预防控制中心，山东济
南
250000）
摘要：目的对由枸杞子水提物、淫羊鳌水提物、西洋参提取物、新资源食品玛咖粉以及现代营养素原料富硒酵母组成的复方制剂进行缓
解体力疲劳功能性及安全性相关的科学研究。方法一、功能试验，将小鼠随机分为4大组,每大组再设置对照组，低、中、高剂量组4小
组，剂量分别为0
山35,0.47,1.41 g/kg - bw。经口给予受试物样品30 d,结果，低、中、高剂量组小鼠的负重游泳时间比对照组明显延长（P
山5、p
山S'Peoi）,中、高剂量组的小鼠血清尿素含量均显著性低于对照组（
P<0
山5、P<0
山5），高剂量组小鼠肝糖原含量显著性高
于对照组（
P<0.01），小鼠游泳后休息0 min的血乳酸含量结果为，中、高剂量组显著性低于对照组（P<0.05,P<0.01），休息20 min的血乳
酸含量显示为中、高剂量组显著性低于对照组（
P<0.05,P<0.01）,中、高剂量组小鼠三个时间点的血乳酸曲线下面积均显著性小于对照
组（P<0.05,P<0D1）^、毒理试验中，通过急性毒性试验和遗传毒性实验，可知本品是安全无毒的。结论该复方制剂产品具有缓解体
力疲劳的功 , 安全性。
关键词
：中药;玛咖粉;富硒酵母;缓解体力疲劳;安全
中图分类号
:TQ461 文献标识码
：A 文章编号
：1008-021X（ 2020）23-0033-03
目前，快速生活节奏给众人带来极大负压,使人体极易出
现疲劳现象，随时间累积，会出现若干“慢性疲劳综合征”，最普
遍症状表现为身体免疫力逐渐下降，
甚至会致使机体的器官发
生病变。当前，缓解疲劳成为当前医学界和保健食品界的研究
热点。其中，很多传统中药譬如西洋参、淫羊a
、枸杞,等均有
多个科学研究证实其具有缓解体力功能。但目前关于中药与
具有抗疲劳功能的营养素硒酵母原料以及新资源食品玛咖粉
乳酸菌的乙醇耐受机制及其在食醋生产中的应用
现代食品科技
91 乳酸菌的乙醇耐受机制及其在食醋生产中的应用
张霖，夏程程，王文悦，余帆，肖柯，易弛，樊鑫，朱晓青，肖俊锋，李琴，汪超，穆杨，周梦舟*
（湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室，工业发酵省部协同创新中心，
湖北省食品发酵工程技术研究中心，湖北武汉 430068）
摘要：传统固态发酵食醋因其丰富的菌群在风味、品质等方面有着不可比拟的优势，乳酸菌作为固态食醋发酵
中重要的功能微生物，广泛应用于食品、生物等领域。然而，食醋在发酵过程中乳酸菌会受到高乙醇环境的胁迫，
因此探究乳酸菌如何在高乙醇环境下生存具有积极意义。该研究选择耐乙醇副干酪乳杆菌（PC-5）和不耐乙醇植物
乳杆菌（PR-7）作为实验对比菌株，通过检测生物指标发现：在体积分数为8%的乙醇环境下，PC-5的多糖含量占
比和细胞膜通透性分别提高至0.56%和75%，且显著高于PR-7。此外，代谢途径中的己糖激酶（Hexokinase，
HK）、6-磷酸果糖激酶（6-Phosphofructokinase，PFK）、丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase，PK）的活性均高于
PR-7，并分别提高至99.82、2.78、3.43 U/mg。最后，在食醋不同发酵阶段中加入PC-5使其与酵母菌实现共同发酵，
结果发现：共发酵食醋体系中多酚的生成和总抗氧化能力比单菌发酵分别提升了32.14%和55.56%。因此乳酸菌对
食醋发酵有着良好的促进作用，为乳酸菌参与食醋共发酵提供了良好的理论依据。
关键词：乳酸菌；细胞膜；乙醇胁迫；混菌发酵
文章编号：1673-9078(2024)03-91-101 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2024.3.0322
Ethanol Tolerance Mechanism of Lactic Acid Bacteria and Its Application in
Vinegar Fermentation