病毒性传染病实验室诊断技术进展
病毒性传染病快速检测方法的原理及发展趋势 答案
病毒性传染病快速检测方法的原理及发展趋势人副流感病毒的病原学特征及流行病学规律1、HPIV的治疗中（）只能在早期使用B、利巴韦林、干扰素和蛋白酶抑制剂2、下列有关于HPIV的说法中，错误的是（）E、HPIV已成为能够导致最沉重疾病负担及影响经济的病毒之一3、HPIV的实验室检测手段有（）A、LLC-MK2（恒河猴肾细胞）4、有关HPIV的病原学特征说法错误的的是（）B、病毒粒子呈多形性、无包膜，直径约125～250nm5、下列关于几个亚型的HPIV的季节流行特征的说法中，错误的是（）C、HPIV2的几乎每年均可检出，发病高峰期为春夏季人呼吸道合胞病毒的病原学特征及流行病学规律1、下列选项中（）属于HRSV的实验室检测B、Hep-2细胞单层2、（）是目前临床上唯一用于治疗HRSV感染的药物A、利巴韦林3、下列关于HRSV的临床表现中错误的是（）B、大多数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎4、HRSV的致病机包括（）E、以上都是5、HRSV的病原学特征不包括（）B、HRSV病毒粒子呈球形和棒状两种形态，病毒颗粒约120~300 nm 人禽流感病毒及实验室检验技术1、血凝（HA）试验原理是HA能与人或其它动物多种红细胞表面（）受体结合引起红细胞凝集B、N－乙酰神经氨酸酶2、中国流感/人禽流感监测信息系统至少有（）个国家级网络实验室A、603、人禽流感病毒检测接种鸡胚，样本需要在温度33-35℃、湿度40-60%条件下孵育（）A、2-3天4、以下哪项不属于人禽流感病毒核酸检测方法（）D、鸡胚接种5、微量血抑（HI）试验应制备相应亚型的（）个血凝单位的抗原B、8H7N9等禽流感病毒及实验室检验技术1、以下哪项不是人H7N9病例的临床特征（）C、激素治疗有效2、双抗体夹心ELISA法检测的缺点是（）E、重复性不好3、甲型流感病毒根据HA和NA的抗原性不同可分为（）个HA亚型和（）个NA亚型A、18；114、微量血抑试验需制备相应亚型的（）个血凝单位的抗原D、85、普通PCR与实时荧光PCR的比较，认识错误的是（）A、实时定量PCR容易被污染。
鸭病毒性肝炎的流行病学实验室诊断及防控措施
鸭病毒性肝炎的流行病学实验室诊断及防控措施鸭病毒性肝炎（Duck viral hepatitis，DVH）是由鸭病毒性肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）引起的一种急性传染病，主要感染家禽类动物，尤其是鸭子。
在鸭子养殖业中，鸭病毒性肝炎是一种较为常见的疾病，对鸭子的生产和发展造成了很大的危害。
为了及时诊断和控制鸭病毒性肝炎的流行，实验室诊断是非常重要的手段之一。
鸭病毒性肝炎的实验室诊断主要包括病毒检测和血清学检测。
1. 病毒检测：主要采用病毒分离和鉴定的方法。
通过采集病鸭的肝脏组织或者血液样本，在细胞培养物中进行病毒分离，并观察是否形成病毒性病变。
然后通过电镜观察病毒的形态特征，或者进行病毒核酸的检测和测序来鉴定病毒菌株的类型。
2. 血清学检测：通过血清中抗体的检测来诊断鸭病毒性肝炎。
常用的方法有：(1) 中和试验：采集疑似病鸭的血清，与已知含有鸭病毒性肝炎抗体的血清混合。
观察混合液在细胞培养上的效应，如有中和效应，则说明该病鸭体内存在鸭病毒性肝炎抗体。
(3) ELISA检测：通过人工合成的鸭病毒性肝炎抗原来检测血清中的鸭病毒性肝炎抗体。
ELISA检测方法简单、快速，且具有较高的敏感性和特异性，是常用的检测方法之一。
在防控鸭病毒性肝炎方面，主要采取以下措施：1. 隔离病鸭：发现病鸭后，及时将其隔离，并采取相应的治疗措施。
避免病鸭与健康鸭接触，防止病毒的传播。
2. 确保饮水和环境的清洁：及时清理饮水设施和鸭舍，保持环境的清洁和卫生，减少病毒的滋生和传播。
3. 加强饲养管理：合理调整饲养密度，加强营养管理，提高鸭群的抵抗力和免疫力，降低发病率。
4. 进行疫苗接种：根据病情和流行病学调查结果，选择合适的疫苗进行接种，提高鸭群对鸭病毒性肝炎的抵抗能力。
鸭病毒性肝炎的流行病学实验室诊断和防控措施是非常重要的，可以有效地减少疫情的发生和传播，维护鸭子养殖业的可持续发展。
病毒性肝炎的实验室诊断
病毒性肝炎的实验室诊断
王建设;朱启镕
【期刊名称】《中华实用儿科临床杂志》
【年(卷),期】2007(022)022
【摘要】病毒性肝炎的病因诊断主要依靠实验室检查.甲型肝炎病毒IgM敏感度和特异度经充分评价,是临床病原诊断的可靠方法.乙型肝炎病毒(HBV)感染实验室指标可表现为多种模式,遇到少见模式要注意复查,HBV-DNA可判断病毒复制活跃程度,并可用于治疗效果检测.抗-丙型肝炎病毒(抗-HCV)适合于筛查丙型肝炎,可结合S/C比值判断其临床价值,HCV-RNA是活动性和治疗效果监测的指标.丁型肝炎病毒(HDV)感染仅见于HBsAg阳性者,HBsAg和HDV-IgG同时阳性足以诊断.戊型肝炎的诊断需综合HEV-IgM和临床、流行病史.
【总页数】2页(P1683-1684)
【作者】王建设;朱启镕
【作者单位】复旦大学附属儿科医院,传染病学研究室,上海,200032;复旦大学附属儿科医院,传染病学研究室,上海,200032
【正文语种】中文
【中图分类】R725.1
【相关文献】
1.鸭病毒性肝炎的临床特点、实验室诊断与防治措施 [J], 邓艳文;
2.鸭病毒性肝炎的流行特点、临床表现、实验室诊断及其防控 [J], 梁宛楠;李建华;
方超;李艳飞;
3.戊型病毒性肝炎血清学实验室诊断潜在风险研究 [J], 王国猛;张丽萍
4.一例鸭病毒性肝炎与圆环病毒混合感染的实验室诊断 [J], 赵亭; 王益民; 胡峰; 李玉峰
5.鸭病毒性肝炎的流行病学、实验室诊断及防控措施 [J], 李永波
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传染病诊疗与救治新进展
传染病诊疗与救治新进展一、诊断技术的革命分子诊断技术，尤其是实时荧光定量PCR技术，已经成为许多传染病诊断的核心。
这项技术不仅提高了检测速度，还极大提升了检测的特异性和灵敏度。
巢式PCR和反转录PCR等技术的应用，使得我们能够更早地发现低浓度的病原体，从而更有效地控制传染病的扩散。
免疫诊断技术，如ELISA技术的广泛应用，为传染病的早期诊断提供了可靠的手段。
快速诊断技术如胶体金免疫层析技术，因其简便性和快速性，在传染病，尤其是突发公共卫生事件的诊断中发挥了不可替代的作用。
二、治疗药物的创新抗病毒药物的研发，如针对特定病毒的整合酶抑制剂和神经氨酸酶抑制剂，为我们对抗病毒性疾病提供了新的武器。
抗生素的研发同样取得了重要进展，如替加环素和贝达喹啉等新型抗生素的诞生，使得我们对付耐药菌有了新的策略。
免疫调节剂的应用，为治疗某些传染病提供了新的思路。
这些药物能够调节机体免疫反应，减轻炎症损伤，提高治疗效果。
这在新型冠状病毒疫情中的应用，为患者的恢复提供了有力支持。
三、防控措施的演进疫苗接种，作为预防传染病的基石，新型疫苗的研发和应用，如重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗等，提高了接种的便利性和疫苗的保护效果。
免疫球蛋白、抗毒素等生物制品，在传染病防控中也扮演着重要角色。
疫情监测与预警系统的发展，使得我们对传染病的监控更加精细化和实时化。
全球疫情监测网络和我国的国家传染病监测系统，都能够实时收集和分析疫情数据，为决策提供科学依据。
公共卫生政策的制定和执行，如隔离措施、公共场所卫生管理等，有效地阻止了传染病的扩散。
同时，公共卫生教育也在提高公众健康意识方面发挥了重要作用。
传染病的诊疗与救治，是一个涉及多个学科的复杂过程。
从诊断技术的革新，到治疗药物的突破，再到防控措施的升级，每一个环节都是连贯的，共同构筑起抵御传染病侵袭的坚固防线。
然而，面对不断变异的病原体和新型传染病的威胁，我们仍需保持警惕，不断探索和应用新技术、新方法，以保护人类的健康和生命安全。
牛病毒性腹泻病诊断技术研究进展
牛病毒性腹泻病诊断技术研究进展1. 引言1.1 牛病毒性腹泻病简介牛病毒性腹泻病是一种由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的传染性疾病，主要影响牛群的生产性能和健康状态。
该病在全球范围内广泛存在，给养殖业造成了严重的经济损失。
牛病毒性腹泻病可导致牛的消化系统受损，表现为腹泻、发热、厌食、体重下降等症状，严重时甚至会导致牛的死亡。
病毒通过接触传播、空气传播和食物传播等途径感染牛只，传播速度快，传染性强。
目前，牛病毒性腹泻病的诊断技术已经得到了广泛应用，包括传统诊断方法、分子诊断技术、免疫学诊断技术等。
这些诊断技术的不断进步，为病毒性腹泻病的早期诊断和有效防控提供了重要的支持。
本文将深入探讨牛病毒性腹泻病的诊断技术研究进展，分析各种诊断方法的优缺点，展望诊断技术的发展前景，并探讨诊断技术的应用前景和局限性，旨在为进一步提高牛病毒性腹泻病的诊断水平和防控能力提供参考。
1.2 诊断技术的重要性牛病毒性腹泻病是一种常见的传染病，严重影响了牛的健康和生产。
随着畜牧业的发展和国际贸易的增加，对牛病毒性腹泻病的诊断技术要求也越来越高。
诊断技术的重要性在于提高疫情监测和控制的效率，保障牛的健康和生产。
传统的诊断方法存在着诊断时间长、准确率低和操作复杂等问题，无法满足当前病毒性腹泻病疫情防控的需求。
推动诊断技术的进步和创新显得尤为重要。
随着生物技术的发展，分子诊断技术成为牛病毒性腹泻病诊断的重要手段。
通过检测病原体的DNA或RNA，能够快速准确地确定病毒性腹泻病的病原体，提高了诊断的敏感性和特异性。
免疫学诊断技术也在牛病毒性腹泻病的诊断中发挥关键作用，如ELISA、PCR等技术已成为常用的诊断手段。
综合诊断技术的应用情况也逐渐增加，为疫情的监测和控制提供了更多选择。
诊断技术的重要性不仅体现在提高疫情监测和控制的能力，还体现在保障畜牧业的持续发展和国际间的贸易往来。
推动牛病毒性腹泻病诊断技术的研究和应用具有重要的现实意义和广阔的发展空间。
牛病毒性腹泻病诊断技术研究进展
牛病毒性腹泻病诊断技术研究进展牛病毒性腹泻病是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的一种严重的传染病，主要通过接触传播，导致牛群中呈现腹泻、发热、食欲不振、消瘦等临床症状，严重者可引发死亡。
随着现代畜牧业的发展和全球化贸易的日益频繁，牛病毒性腹泻病的防控工作变得日益重要。
为了更快、更准确地诊断疫情并及时采取相应的防控措施，各国科研机构和生物技术公司纷纷投入到牛病毒性腹泻病的诊断技术研究中，不断推出更为先进和便捷的诊断方法。
本文将对牛病毒性腹泻病诊断技术研究的进展进行综述。
一、传统的诊断方法传统的牛病毒性腹泻病诊断方法主要包括临床症状观察、病理学检查和实验室检测。
临床症状观察是最为直观和简便的检测手段，但其准确性较低，易受主观因素干扰。
病理学检查主要是通过对死牛进行尸检和病理组织学检查来确定病情，这种方法无法对存活牛进行及时诊断。
实验室检测是目前应用最广泛的诊断方法，包括病毒分离、抗体检测和核酸检测等。
病毒分离方法操作复杂、耗时长，并且需要高度洁净的实验条件，不适用于普通的养殖场。
抗体检测虽然快速简便，但无法区分感染和疫苗免疫引起的抗体产生。
核酸检测虽然准确性高，但由于其需要专业的实验室设备和技术，且操作复杂，因此并不适用于基层实验室的诊断。
二、新技术的应用随着生物技术的不断进步，牛病毒性腹泻病的诊断技术也呈现出新的发展趋势。
目前，包括PCR、ELISA、免疫荧光和基因序列分析等在内的新技术应用已经成为诊断工作中的重要手段。
PCR技术具有快速、准确、灵敏的特点，可以直接检测病毒核酸，对于牛病毒性腹泻病的早期诊断非常有利。
ELISA技术可以通过检测血清中的抗体水平来确定牛群的感染情况，操作简便且经济实惠，适用于大规模的筛查工作。
免疫荧光技术结合了抗体的特异性和荧光物质的特异性，可以直接观察到病毒在细胞中的位置和数量，是一种非常直观、准确的检测方法。
基因序列分析是一种最为先进的诊断技术，可以通过对病毒基因进行全面分析，确定其分类和变异情况，为流行病学调查和病毒防控提供重要信息。
鸭病毒性肝炎的流行病学实验室诊断及防控措施
鸭病毒性肝炎的流行病学实验室诊断及防控措施鸭病毒性肝炎（DVHE）是由鸭病毒性肝炎病毒引起的急性传染病，主要侵害家禽中的鸭，尤其是肉鸭。
该病在世界范围内都有发生，给鸭的养殖业带来了巨大的经济损失。
对鸭病毒性肝炎的流行病学实验室诊断及防控措施至关重要。
一、流行病学调查1. 流行病学调查是对鸭病毒性肝炎的传播途径和流行规律进行的重要手段。
通过病例调查、病源动物的追踪、环境样品的采集和检测等方式，了解病毒的传播途径和传染性，为防控提供重要依据。
2. 流行病学调查要求及时、准确地获取相关资料和数据，包括发病地区的疫情情况、鸭群养殖密度、鸭群的发病率和死亡率、病原学检测等信息，为后续的防控工作提供科学依据。
二、实验室诊断1. 病毒学检测：借助分子生物学技术对鸭病毒性肝炎病毒进行检测和鉴定，主要包括PCR、RT-PCR等技术，用以快速、准确地检测病原体的存在和传播情况。
2. 血清学检测：利用ELISA、HI等血清学技术对鸭血清中的抗体进行检测，以验证感染情况和进行流行病学调查。
3. 免疫组化检测：采用免疫组化技术对患病鸭体内的组织标本进行病理学检测，以观察病变情况，为后续的临床治疗提供依据。
三、防控措施1. 加强饲养管理：保持鸭舍的清洁卫生，定期对饲养环境进行消毒和通风，控制饲养密度，避免交叉感染。
2. 饲料卫生安全：鸭的饲料中要加入相应的抗病毒类药物或疫苗，定期对饲料进行检测，确保饲料的卫生安全。
3. 合理免疫接种：定期对鸭群进行疫苗接种，并确保接种质量，提高鸭群的免疫力。
4. 强化监测和检测：建立健全的监测体系，定期对鸭群进行病原学检测，确保疫情的及时发现和控制。
5. 加强人员培训和宣传教育：加强养殖管理人员的防控意识和能力培训，提高疾病防控的重要性和科学方法。
传染病实验室检查
传染病实验室检查1.三大常规检查（1）血液常规大部分细菌性传染病白细胞总数及中性粒细胞增多，唯伤寒减少，布鲁氏菌病减少或正常。
绝大多数病毒性传染病白细胞部数减少且淋巴细胞比例增高，但流行性出血热、流行性乙型脑炎总数增高。
血中出现异型淋巴细胞，见于流行性出血热。
传染性单核细胞增多症。
原虫病白细胞总数偏低或正常。
（2）尿常规、流行性出血热、钩端螺旋体病患者尿内有蛋白、白细胞、红细胞、且前者尿内有膜状物。
黄疸型肝炎尿胆红质阳性。
（3）粪常规菌痢、肠阿米巴病，呈粘脓血便和果浆样便；细菌性肠道感染多呈水样便或血水样便或混有脓及粘液。
病毒性肠道感染多为水样便或混有粘液。
2.病原体检查（1）直接检查脑膜炎双球菌、疟原虫、微丝蚴、溶组织阿米巴原虫及包囊，血吸虫卵，螺旋体等病原体可在镜下查到及时确定诊断。
（2）病原体分离依不同疾病取血液、尿、粪、脑脊液、骨髓、鼻咽分泌物、渗出液，活检组织等进行培养与分离鉴定。
细菌能在普通培养基或特殊培养基内生长，病毒及立克次体必须在活组织细胞内增殖，培养时根据不同的病原体，选择不同的组织与培养基或动物接种。
3.免疫学检查免疫学检查是一种特异性的诊断方法，广泛用于临床检查，以确定诊断和流行病学调查。
血清学检查可用已知抗原检查未知抗体，也可用已知抗体检查未知抗原。
抗体检查抗原的称反向试验，抗原抗体直接结合的称直接反应，抗原和抗体利用载体后相结合的称间接反应。
测定血清中的特异性抗体需检查双份血清，恢复期抗体滴度需超过病初滴度4倍才有诊断意义。
免疫学检查包括：（1）特异抗体检测：①直接凝集试验；②间接凝集试验；③沉淀试验；④补体结合试验；⑤中和试验；⑥免疫荧光检查；⑦放射免疫测定，⑧酶联免疫吸附试验；（2）细胞免疫功能检查常用的有皮肤试验，E玫瑰花形成试验，淋巴细胞转化试验，血液淋巴细胞计数，T淋巴细胞计数及用单克隆抗体检测T细胞亚群以了解各亚群T细胞数和比例。
4.分子生物学检测利用同位素32P或生物素标记的分子探针可以检出特异性的病毒核酸。
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第1个PCR循环完成后
21
30次循环后靶序列扩增的数量
1 cycle = 2 Amplicon
2 cycle = 4 Amplicon
3 cycle = 8 Amplicon
4 cycle = 16 Amplicon
5 cycle = 32 Amplicon
6 cycle = 64 Amplicon
与疾病相关的各种蛋白（细胞因子、酶、激 素、受体）的基因表达的检测；
药物基因组学、耐药基因的检测，等等
15
简单介绍实验原理
PCR
(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)
荧光实时定量PCR （real time PCR） NASBA （依赖核酸序列的扩增）
16
PCR原理:实质就是体外基因复制技术
10
分子诊断的功能及扩展
病毒载量与治疗
例3. HIV病毒载量与传播
15127人 30个月
流行病学调查415对伴侣 HIV阳转22%（90/415） 51人RNA<1500copies/mL 全阴
11
分子诊断的功能及扩展
病毒载量与治疗
例4. 血浆EBV载量与鼻咽癌复发
15个二年持续缓解： 0 copy/mL
3’
Complete
5’ 4. Detection
24
3’
定量PCR与定性PCR测定的区别
定量PCR测定的是扩 增的指数扩增期;
定性PCR测定的是扩 增的终点（平台期）
25
市场上常见的实时荧光PCR仪
罗氏Lightcy乐icycler
ABI7000
分子生物学诊断技术进展
张正 北京大学人民医院
1
主要内容：
分子生物学诊断技术在病原学检测中的应用
简单介绍实验原理
以PCR、荧光实时定量PCR、NASBA为例
分子诊断技术在以下病原研究的应用进展
乙型肝炎 丙型肝炎 结核分枝杆菌
2
病原学检测常用的实验室技术
细胞培养与鉴定（“金标准”）、动物实验 血清学、免疫学诊断技术 电镜技术
分子生物学诊断技术
3
分子生物学诊断技术方法简介
1、主体技术
循环扩增
恒温
具体方法举例
PCR （聚合酶链反应） Real-time PCR, RT-PCR，巢式PCR，复合PCR PCR-ELISA，微孔板杂交，荧光探针标记法
LCR（连接酶链反应） NASBA（依赖核酸序列的扩增，主要用于RNA） SDA（链置换扩增术） CPT（环状探针技术 ） bDNA（枝链核酸信号放大系统 ） 杂交捕获 （如：检测HPV-DNA的试剂盒）
7 cycle = 128 Amplicon
No. of No. Amplicon Cycles Copies of Target
1
2
2
4
3
8
4
16
5
32
6
64
20
1,048,576
30
1,073,741,824
22
荧光PCR原理 – TaqManTM技术
λ
R 5’
Q 3’
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收， 所以检测不到荧光，此种现象称为荧光共振能量转移。
23
荧光PCR原理 – TaqManTM技术
Q 3’ 5’
Q 3’ 5’
Q 3’ 5’
Taq
3’ 5’
Taq
3’ 5’
R 5’
R
R
Taq
R
Taq
R
l
R
3’
Extension Step
3’ 1. Strand Displacement
5’
2. Cleavage
3’
5’
3. Polymerization
HIV-1血清阴性而RNA阳性 0.2-6.6%
-Am. J. Chin Athol. 2000
14
分子生物学技术在其它领域的应用
在基础研究领域中的应用； 遗传病的基因诊断和产前基因诊断：
如血友病、地中海贫血等 肿瘤基因和肿瘤标志物表达(mRNA)的检测； 骨髓移植、器官移植供体配型选择； 法医学、动植物学、古人类学、古生物学；
18
PCR 循环 第二步–引物与靶序列退火
引物与解为单链的DNA上互补序列杂交在一起，称之为退火。55℃左右19
PCR 循环 第三步 - 引物延伸
在DNA聚合酶催化作用下，以dNTPs为原料（底物），从引物的3’端A开 始, 沿着5’→3’的方向，合成每条模板的互补链，此称引物延伸。72℃20左 右
高危---16，18，31，45 低危--- 6，11
8
分子诊断的功能及扩展
病毒载量与治疗
例1.
---北京地坛医院谢尧提供
9
分子诊断的功能及扩展
病毒载量与治疗
例2. HBV---干扰素 HBV<100pg/mL 11/30 阴转 HBV>100pg/mL 1/30 阴转 (HBeAg HBeAb)
靶序列
Mg2+
dCTP dGTP dUTP dATP
Primer
Taq DNA聚合酶
加热变性95 °C
AmpErase
靶序列引物退火55 °C 引物延伸72 °C
17
PCR 循环 第一步 – 加热变性
靶序列
靶序列
从外周血白细胞或绒毛、羊水细胞提取的DNA约1ug，在含有 适当缓冲液、引物、dNTPs（dATP、dCTP、dGTP及dTTP）等 的反应混合物中，在94℃下热变性1-4分钟，使之解为单链。
线性探针分析法（LiPA） 杂交保护分析法（HPA）
4、质谱
利用色、质谱结合PCR技术
6
分子诊断的功能及扩展
病原的诊断和鉴别诊断 病原分型 病毒载量监测---个体化治疗的依据 疗效及预后标志 其他：病原感染中发生、发展各阶段
7
分子诊断的功能及扩展
疾病分型及意义 例如：HPV （30/100）
4
分子诊断技术方法简介
2、多标靶同时检测
多重PCR 毛细管电泳 以测序分析为基础的检测技术
5
分子诊断技术方法简介
3、核酸杂交
DNA荧光原位杂交（FISH） 将标记的探针直接原位杂交到染色体或DNA纤维切片上，再 用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来 检测DNA序列在染色体或DNA纤维上的定位。
10个复发：
32250 copies/mL
17个随访：临床恶化前半年病毒载量升高
12
耐药病原的分子诊断
WHO：人类死亡1/3是长期用药的毒副作用 HBV的YMDD变异 HIV耐药
13
血制品筛查
300余万的血清阴性样品，分子生物学复测：
HBV：47 HCV：10 HIV-1：2
-2001年剑桥资料