冰冻切片检查注意事项
冰冻切片实验方案和HE染色
2-3人一组，分为7组（上课时需携带实验步骤）冰冻切片操作方法及步骤：1取材：(昆明小鼠各个组织或器官)取材时不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm。
2包埋：取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。
小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。
注意：大组织进行包埋时，只要使组织固定在支承器上即可，切勿浪费包埋剂。
3修平：将冷冻好的组织块，夹紧于切片机直承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
注意：修平过程中，正确使用切片机，不要一次性大量切割组织块，以防损毁切片刀。
4切片：调好切片的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10um间。
5调防卷板：制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。
这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。
6切片工作完成后，将冷冻机内的所有废物清理干净，切勿乱扔。
冰冻切片时的注意事项：1 防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。
有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。
因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
2 多例多块组织同时需做冰冻且片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。
3 放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。
4 组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。
临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。
小鼠脑冰冻切片的染色注意事项
小鼠脑冰冻切片的染色注意事项
对于小鼠脑冰冻切片的染色，需要注意以下几点：
1. 组织固定：在进行切片前，需要对小鼠脑组织进行固定，以保持其形态结构。
常用的方法包括冷冻、乙醛固定、福尔马林固定等。
2. 切片厚度：对于小鼠脑切片的染色，切片的厚度是非常重要的。
一般来说，切片的厚度应该在20-30μm之间，过厚或过薄都会影响染色效果。
3. 染色方法：小鼠脑冰冻切片的染色有许多方法，如免疫组化、荧光染色等。
需要根据实验的需要选择合适的染色方法。
4. 试剂的选择：选择合适的试剂可以提高染色效果。
例如，对于免疫组化染色，需要选择能够与目标蛋白特异结合的抗体。
5. 染色时间：染色时间也是影响染色效果的重要因素。
染色时间过短可能导致染色不充分，过长则可能影响细胞结构。
综上所述，小鼠脑冰冻切片的染色需要注意上述几点，以保证染色效果的准确性和可重复性。
检验科检查项目适应症及禁忌症
病理学检查适应症和禁忌症一、常规病理学检查：适应症：使用于通过手术切取、钳夹、穿刺等方法获取的人体组织；禁忌症：标本严重自溶、腐败、干枯的组织及标本过小，不能或难以制片的组织不宜进行常规病理学检查。
二、术中冰冻切片病理学检查：适应症： 1、需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤、良性肿瘤或恶性肿瘤等），以决定手术方案的标本； 2、了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤浸润范围，有无区域淋巴结转移等；3、确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留；4、确认切除的组织、如甲状腺、输卵管及异位组织等。
慎用范围及禁忌症： 1、涉及截肢和其他严重致残的根治性手术切除的标本，其病变性质宜于手术前通过常规病理活检确定。
2、以下情形不宜做手术术中冰冻切片病理学检查（1）、疑为恶心淋巴瘤；（2）、标本过小（材料直径小于或等于0.2cm者）；（3）、术前易于进行常规活检者；（4）、脂肪组织、骨组织及钙化组织；（5）、需要依据核分裂相计数判断良、恶性的软组织肿瘤；（6）、主要依据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性肿瘤；（7）、已知具有传染性的标本，如结核病，病毒性肝炎、艾滋病等。
三、脱落细胞学检查适应症：1、各种体液（胸腔积液、腹腔积液、心包积液及脑及液）中的脱落细胞学检查； 2、各种黏膜表面如食道粘膜、泌尿道粘膜及宫颈脱落细胞学检查。
3、各种肿物的细针穿刺物、组织印片细胞学检查。
禁忌症：无。
检验科检查项目适应症与禁忌证一、生化全套检查检查项目：包括肝功能、肾功能、心肌酶谱、血脂、电解质等。
适应症：参照以下相关内容（一）肝功能检查：总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、白蛋白/球蛋白（A/G）、总胆红素（TBil）、直接胆红素（DBil）、间接胆红素（IBIL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、AST/ALT、碱性磷酸酶（ALP）、γ -谷氨酰转肽酶(GGT) 、胆碱酯酶（CHE）。
适应症：体检、各种肝胆疾患、急慢性肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝脏肿瘤、用药过程中监测肝脏功能、有机磷中毒以及相关疾病的治疗复查。
妇产科手术中的快速病理诊断
妇产科手术中的快速病理诊断陈乐真随着各种新技术在病理诊断上的应用，病理诊断水平已提高到一新阶段。
但是，常规冰冻切片对于临床医师在手术中明确诊断，决定治疗方案，仍是一个不可替代的重要手段。
一、冰冻切片的用途1.决定病变性质：女性生殖系统肿瘤，特别是卵巢肿瘤类型繁多，术前不易确诊，妇产科医生在手术中仅凭肉眼观察，难以确定肿瘤性质。
由于良性与恶性肿瘤手术切除范围不同，特别是对于生育期妇女要决定是否保留其生育能力，必须对送检组织作冰冻切片进行快速诊断，这将有助于手术中确定下一步处理方案。
据文献报告和我院资料统计，冰冻切片诊断卵巢恶性肿瘤的准确率为93.5%～97.0%。
因此，手术中冰冻切片是一个快速确定诊断和决定手术范围的一个重要手段。
2.鉴别卵巢恶性肿瘤是原发癌或是转移癌：对于卵巢癌，特别是卵巢早期转移癌，肉眼观察难以确定，冰冻切片确定诊断对于临床医师很有帮助。
3.鉴别一些腹膜表面的粟粒样病变：在输卵管、卵巢、阔韧带、大网膜表面常见一些粟粒大小结节，肉眼观察难以确定病变性质，可取小结节作冰冻切片。
有4种病变需要鉴别：(1) Walthards细胞巢，是一种胚胎残留组织，为实性细胞巢或有囊性变，具有移行细胞的形态特点，有的见有核沟，有的见鳞状细胞改变，如果病理医生不熟悉此病变，容易误诊为转移癌。
(2)粟粒性结核，可见到结核结节。
(3)转移癌，见到癌组织结构。
(4)子宫内膜异位症，见有子宫内膜组织结构。
4.确定盆腔炎性包块的性质：输卵管、卵巢的正常结构被破坏，粘连紧密形成一包块，是否为结核性病变，送冰冻切片检查可确定诊断。
5.辨认组织：由于恶性肿瘤浸润性生长，妇科肿瘤手术偶尔会损伤盆腔脏器，特别是输尿管，这时可作冰冻切片，确定组织结构。
6.确定盆腔内发育不良的性腺组织：行冰冻切片检查可确定是卵巢组织，还是睾丸组织。
二、手术中快速诊断方法简介1.冰冻切片诊断：是最常用的方法，开展冰冻切片诊断工作必须具备3个基本条件：(1)冰冻切片机。
病理快速冰冻技术
快速冰冻病理技术一、概述二、快速冰冻的目的三、准备工作四、快速冰冻切片制备五、快速冰冻的注意事项一、概述●冰冻病理是通过手术切取一小块活组织，通过特制的包埋剂，将组织冻结于-20度左右，切成薄片并染色，进行镜下观察、诊断，以帮助临床医生确定手术方案的一项技术。
●是临床手术科室与病理科的一种紧急会诊。
快速冰冻病理技术发展1.1818年由Pieter 首先创造发明的。
2.1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技 术列为正式诊断方法。
3.1960年Cryostat冰冻切片机正式应用于临床后，冰冻切片质量有了很大提高。
目前, 此项技术已普遍应用于临床，解决手术中的病理诊断问题。
随着冰冻切片技术和临床外科手术的发展，要求做冰冻的病例逐年增多。
如：乳腺、甲状腺、卵巢等等。
二、快速冰冻的目的主要：1.确定病变的性质（炎症、肿瘤及其良恶性）；2.确定切除肿瘤的边缘有无癌组织残留以 明确手术范围。
3.确认切除的组织例如甲状旁腺、输卵管及异位组织等。
4.确定切除的淋巴结有无转移及转移程度。
乳 腺 纤 维 腺 瘤乳 腺 浸 润 癌淋巴结转移癌（交界性）卵巢粘液性囊腺瘤三、准备工作1．快速活检患方知情同意书相关临床医师应向患者和（或）患者授权人说明快速活检的意义和局限性，取得患者和（或）患方的同意，并在《手术中快速活检患方知情同意书》上签字。
冰冻快速病理诊断知情同意书●术中冰冻快速病理学检查是实施手术过程中与手术方案相关的病理诊断手段，如确定病变的性质、病变扩散情况、 确定边缘或切端有无病变残留等，但因技术方法的限制，如时间短促、取材有限等，存在一定的局限性和误诊的可能性（通常是5%的误诊率）。
某些病例难以快速做出明确诊断，需待常规石蜡切片进一步完成诊断，故向病人及家属说明。
2.向病理科递交快速活检申请单临床手术医师应提前向病理科递交快速活检申请单（须手术前一天完成）申请单需填写：患者的病史；重要的影像学；实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。
石蜡切片、冰冻切片实验技术服务
石蜡切片、冰冻切片实验技术服务
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。
制作过程较石蜡切片快捷、简便，因而多应用于手术中的快速病理诊断。
【技术原理】
组织经固定后，含有大量水分，使用乙醇从低浓度到高浓度将组织内的水分逐渐置换出来，以利于透明剂和石蜡的进入，这个过程称为脱水。
组织脱水后，必须经过一种既能与乙醇相结合，又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用使石蜡浸入组织，这种溶剂使组织呈现出不同程度的透明状态，这个过程称为透明。
组织经过脱水、透明后用石蜡作为支持剂浸入组织内，使组织变硬并将组织包裹在内，有利于切片，这个过程称为浸蜡。
浸蜡后的组织块用石蜡包成块，使组织达到一定的硬度和韧度有利于切片。
【实验流程】
案例展示
技术总结
【常见问题】
1、切片上卷或皱起
切片刀角度过大或过小，调整角度以5°为宜。
2、切片有空洞及破碎不齐
切片时慢一点，轻削组织。
3、切片有褶皱
切片时对准蜡块表面轻轻哈气。
【注意事项】
1、组织硬度较大，容易发生切片碎裂，需经软化或脱钙；
2、摊片时间过长，组织中心易开裂；
3、摊片时间过短，组织有褶皱，影响后续染色拍照；
4、特殊组织的切片，在后续染色过程中容易出现掉片的情况，比如皮肤、脑组织；
5、切片太厚，容易导致染色程度过深。
冰冻切片
冷冻切片一、恒温冷冻切片将组织在恒温冷冻切片机里切片。
冷冻腔内的温度一般设置为-18至-25℃，根据不同组织调节不同的腔温，平时应将冷冻头放置于冷冻台上。
冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态。
(1)、当冰冻组织取好后，有速冻开关的机器可先将开关打开，再在冷冻头上放少量的OCT或羧甲基纤维素(可用普通胶水代替)，放上组织，速冻。
(2)、待组织冻结后，将冷冻头装到切片机上(3)、粗切，修出切面细切几张，用毛笔刷去刀上组织片(4)、放下抗卷板，开始切片，切片厚度一般为5～6微米，切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇中固定，固定时间为10～20秒(5)、水洗(6)、苏木素1分钟(7)、水洗(8)、盐酸酒精分化1秒钟(9)、水洗(10)、温水蓝化(11)、伊红2～5秒钟(12)、梯度酒精快速脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
冰冻切片的注意事项:(1) 速冻：是冰冻切片的关键，因为只有速冻才能减少组织内的冰晶，最好的办法是将速冻头迅速压在组织上，冻好后就可切片。
特别适用于较脆的组织。
而含有脂肪较多的组织，最好放在液氮里处理。
在液氮里冷冻要注意不要冻过头，2～3秒钟就要拿出来看一下，只要有4/5的组织已经冻住就可以了，待冷冻头拿出后刚好全部冻住，否则就会引起组织发脆，或冷冻头与组织分离。
(2)固定：切片后应立即放入甲醇中固定，不能等切片干后再固定，后者容易造成细胞退变。
固定液有很多种，根据我们的实践，认为甲醇作用快，收缩小，染色较清晰，是冰冻切片最理想的固定液。
如加5%冰醋酸较果更好。
(3)包埋剂：可用普通胶水代替，但要加入适量的水（胶水与水的比例大约在2：1左右）。
太稀了，容易损伤切片刀；太稠了，粘在切片上不容易洗掉,影响切片的质量。
(4)冰冻用切片刀不仅要磨的快，而且要磨的直，否则切出的片子就不会平整,不能进入抗卷板。
最好能使用一次性刀片。
(5)如组织发脆，可等几分钟后再切，也可用手在组织上稍稍加温；如果用手去摸组织块，最好戴手套，或用玻片间的纸夹在手与组织之间，以防感染。
冰冻切片机使用规程
冰冻切片机使用规程一、操作前的准备1.检查设备是否处于良好的工作状态，包括电源、切片刀具等是否安装正确并紧固。
2.确认冷冻切片机内部是否有残留的食材或污垢，如有应及时清理。
3.确保冷冻切片机附近的工作区域整洁有序，并保持通风良好。
二、操作过程1.冷冻切片机的使用应由专业操作人员进行，确保具备相关知识和技能，并佩戴必要的个人防护设备，如手套和护目镜。
2.打开冷冻切片机的电源开关，并调整温度和切片厚度到所需设置。
3.将待切食材放置于切片机的切片台上，并确保食材的位置正确和稳定。
4.通过手动或自动控制切片机进行切片。
在手动操作中，要保持手指或其他物品远离切片刀具，避免意外伤害。
5.切片过程中，要时刻观察切片情况，并根据需要进行调整和修正，确保切片质量和效率。
6.切片完成后，关闭切片机的电源，并等待切片刀具停止旋转后再清理和维护。
三、安全措施1.禁止在切片机运行时手指或其他物品接触刀具。
2.禁止在刀具运转时进入刀具周围的工作区域。
3.禁止将手指或其他物品插入切片台的进料口和刀具的出料口。
4.禁止用湿手触摸切片机的电源开关、温度和厚度调节旋钮等部分。
5.切片机在工作中产生的噪音和震动较大，操作人员需保持平稳站立，以免发生摔倒或其他意外。
6.切片机在使用后要及时关机，并断开电源，以免发生意外事故。
四、日常维护1.每日使用结束后，应对切片机进行清洁。
首先关闭电源，然后用湿布擦拭切片台和其他表面，以去除食材残留和污垢。
切勿将水直接浇在切片机上，以免损坏电路和机械部件。
2.定期对切片刀具进行检查和维护，包括清理刀具表面的食材残留和磨损情况。
如有需要，及时更换刀具。
3.保持切片机周围环境的清洁和通风，确保设备的正常工作和寿命。
4.定期进行设备检修和维护，如三个月或一年一次，以保持设备的良好运行状态。
五、事故应急处理1.如在操作过程中发生意外事故，应立即停止切片机的运行，并关闭电源，以防止进一步的伤害。
2.对于操作人员的受伤情况，应第一时间进行救助，并及时将伤者送往医疗机构进行进一步处理。
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手术中冰冻切片检查规范
一、手术中冰冻切片检查注意事项
(一) 手术中冰冻切片检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题，尤其需要临床医师与病理医师间的密切合作。
(二) 手术中冰冻切片检查要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片的观察，向手术医师提供参考性病理诊断意见，由于组织未得到充分有效的固定、脱水以及切片较厚等等，与石蜡切片病理诊断的准确率有一定的差距，一般仅限于良、恶性的鉴别。
与常规石蜡切片的病理诊断相比，手术中冰冻切片检查具有更多的局限性和误诊的可能性，误诊率5%以上。
有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。
(三) 有关临床医师应于手术前向患者和／或患者授权人说明手术中冰冻切片检查的意义和局限性等，取得患者和／或患方的知情和理解。
患者和／或患者授权人应在由医院制定的《手术中冰冻切片检查知情同意书》签署意见和签名。
(四) 主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交手术中冰冻切片检查申请单，填写患者的病史，重要的影象学、实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。
一般不接受电话预约和临时申请手术中冰冻切片检查。
（五）手术中冰冻切片检查的手术标本在切除后应立即送到病理科，并注明手术的部位，重点部位应做标记或加以说明。
同时手术
标本应保持新鲜，不要加用固定液或用含水溶液清洗，以免影响制片和诊断。
（六）手术中冰冻切片检查诊断报告一般在手术标本送达病理科后30分钟内做出。
并以书面文字形式通知临床手术科室。
特殊情况（如标本过大，取材过多，或多个冰冻标本同时送检等），报告时间可以超过30分钟。
（七）工作开展时间：手术中冰冻切片检查的开展时间为周一至周五，周六和周日如有需要可提前预约。
（八）手术医师应在手术后及时填写常规石蜡病理检查申请单到病理科，以便病理科及时发出常规病理报告。
二、手术中冰冻切片检查适用范围
(一) 需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤／良性肿瘤或恶性肿瘤等），以决定手术方案的标本。
(二) 了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。
(三)确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。
三、手术中冰冻切片检查慎用范围
涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。
需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。
四、手术中冰冻切片检查不宜应用范围
五、(一)疑为恶性淋巴瘤。
六、(二)过小的标本。
七、(三)术前易于进行常规活检者。
八、(四)脂肪组织、骨组织和钙化组织。
九、(五)需要依据核分裂象计数判断良、恶性的软组织肿瘤。
十、(六)主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、
恶性的肿瘤。
十一、(七)已知具有传染性的标本（例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等）。
敦煌市医院医务科
敦煌市医院病理科 2014年11月13日。