超声-微波协同法提取湖州铁线莲中黄酮工艺的研究
响应面法优化莲花总黄酮超声辅助提取工艺及其抗氧化性的研究
浙江海洋大学学报(自然科学版) Journal of Zhejiang Ocean University(Natural Science)
文章编号：2096-4730(2019)05-0436-06
Vol.38 No.5 Sep., 2019
响应面法优化莲花总黄酮超声辅助提取工艺及其 抗氧化性的研究
Abstact： In order to explore the optimum technological conditions for ultrasonic assisted ethanol extrac
tion of total flavonoids from lotus flower and the antioxidant activity of extracts, on the basis of single factor ex periments, the ratio of materials, ethanol volume fraction and extraction time were selected as independent variables, and the extraction rate of flavonoids was the response value. The ox-Benhnken experiment with three factors and three levels was designed to optimize the extraction rate of total flavonoids from lotus flower. The extraction rate was determined by Prussian method. Antioxidant activity. The results showed that the optimum technological conditions for ultrasonic-assisted extraction of total flavonoids from lotus were as follows: material ratio 1:30 (g * mL_1), ethanol volume fraction 70%, extraction time 29 min and extraction times 2 times. Under this condition, the extraction rate of total flavonoids from lotus was 14.07%. It is close to the predicted value of
超声波协同法提取荷叶中总黄酮的研究
超声波协同法提取荷叶中总黄酮的研究作者：李海梅胡佳佳来源：《中国科技博览》2014年第03期摘要：采用超声波协同提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺：提取时间20min，料液比1：30，乙醇浓度60%，温度50℃，验证试验证明实际提取率为4.85%。
关键词：超声波法；荷叶总黄酮；协同提取中图分类号：P631.5荷叶为睡莲科莲属植物莲的叶。
荷叶中的黄酮类化合物主要是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。
本课题以荷叶为研究对象，利用超声波协同法提取总黄酮，从而增加荷叶的附加值，将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。
1材料与方法1.1试验材料原料：荷叶（湖北武汉）：新鲜、无污染荷叶，采摘后洗净，用烘箱60℃烘干。
主要试剂：芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、盐酸、锌粉等均为分析纯。
1.2黄酮测定方法用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。
得到回归曲线方程：y=0.5095x+0.0019，R2=0.9997。
式中：y，提取液吸光度；x，提取液黄酮类物质浓度，mg/ml。
1.3荷叶总黄酮单因素试验与分析称取一定量的荷叶，在不同反应条件下，即处理时间、料液比、乙醇浓度、提取温度，测定总黄酮的提取率，从而比较选取最佳反应条件。
1.4荷叶总黄酮响应面分析2结果与分析2.1不同超声波处理时间对荷叶总黄酮提取率的影响称取荷叶0.2g，在料液比为1：30、乙醇浓度为60%、温度为50℃的条件下，分别对不同超声波处理时间的荷叶测定总黄酮的提取率。
从图1看出，在处理时间为20min条件下，荷叶总黄酮的提取率最高。
2.2不同料液比对荷叶总黄酮提取率的影响称取荷叶0.2g，在乙醇浓度为60%、处理时间为20min、温度50℃的条件下，分别对不同料液比的荷叶测定总黄酮的提取率，比较选取最佳料液比。
由图2可知，料液比为1：30时，荷叶总黄酮提取率最高。
正交实验法优化超声-微波协同提取枸杞中总黄酮的工艺研究
正交实验法优化超声-微波协同提取枸杞中总黄酮的工艺研究王琳琳;尚冀宁;徐丽娟【摘要】采用超声-微波协同提取技术对枸杞中总黄酮进行快速提取.在单因素实验的基础上,结合正交实验优化提取条件,以总黄酮提取率为指标,得出超声-微波协同提取枸杞中总黄酮的最佳提取工艺.结果显示,最佳提取条件为:提取功率300 W,提取温度50℃,乙醇浓度60％vol,料液比1:20,提取时间20 min,在此条件下的提取率为1.98％.并在最佳条件下比较乙醇回流法、超声波提取法、微波提取法和超声-微波协同提取法总黄酮的提取率,结果显示,超声-微波协同提取法提取率最高.【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2019(000)004【总页数】5页(P17-21)【关键词】枸杞;总黄酮;超声-微波协同提取;紫外-可见分光光度【作者】王琳琳;尚冀宁;徐丽娟【作者单位】银川能源学院石油化工系,宁夏银川750100;银川能源学院石油化工系,宁夏银川750100;银川能源学院石油化工系,宁夏银川750100【正文语种】中文【中图分类】TS261.2;TS261.7枸杞是宁夏地区名贵中药材和重要经济作物，具有滋肝补肾、益精明目的功效[1]。
枸杞一直被广泛应用于调节免疫力、预防和降低心脑血管疾病发病率、保护肝脏、抗衰老等领域[2]。
枸杞的化学成分主要为枸杞多糖、甜菜碱、色素、维生素和黄酮类化合物等活性成分[3-4]。
其中，枸杞中的黄酮类化合物具有止咳、平喘、祛痰等功效[5-6]，并且具有降低胆固醇、扩张血管、增强心脏收缩能力、减少心脏搏动次数和清除身体自由基等作用，从而引起了国内外的广泛关注[7-10]。
目前对黄酮类化合物的提取方法最主要为溶剂回流提取法[11-12]、超声波提取法[13-16]和微波提取法[17-19]。
而超声-微波协同提取法提取枸杞中的总黄酮目前尚未报道。
超声-微波协同提取法是在超声波提取和微波提取基础上发展的一种新型提取方法，它兼顾超声波和微波的优点，同时又弥补各自的不足，提取过程中利用超声波产生的强烈空化效应和微波的高选择性等作用，可使植物细胞中的有效成分快速进入溶剂，提高有效成分的提取率，有效缩短提取时间，并且避免高温对活性成分的破坏，因此超声-微波协同提取技术被广泛应用于提取植物中的生物碱、多糖、黄酮类等生物活性物质[20-23]。
超声波-微波辅助提取构树叶总黄酮的条件优化及其抗肿瘤活性研究
超声波-微波辅助提取构树叶总黄酮的条件优化及其抗肿瘤活性研究摘要】目的优选构树叶总黄酮的提取工艺条件及构树叶总黄酮抗肿瘤生物活性的研究。
方法通过单因素实验考察超声波时间、超声波温度、超声波功率等级对构树叶总黄酮提取得率的影响。
通过紫外分光光度计测定总黄酮含量。
利用MTT法检测构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖的影响。
通过光学显微镜观察经药物处理48h后人肝癌HepG-2细胞的形态学变化。
结果超声波辅助提取的最佳条件：超声波时间40min，超声波功率等级为80%，超声波温度为50°。
12mg/ml构树叶总黄酮作用肝癌细胞72小时，抑制率可达64.53%。
经倒置显微镜观察，可见肝癌细胞发生凋亡现象。
结论本工艺采用超声法对药材进行微波法提取前处理，可以极大提高构树叶总黄酮的得率，该工艺操作简单，节能环保，可适用于大规模生产；构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞的增殖有抑制作用，并呈现剂量依赖性和时间依赖性。
构树又称楮树是桑科构树属落叶乔木，广泛分布于我国的温带，该树种具有生长迅速，适应性强，易繁殖等特点。
构树不仅是我国宝贵的园林资源，也是重要的药用资源，构树叶、果实、根、茎都可入药。
构树叶又称楮叶，能清热利湿，止凉止血的功效，在《本草纲目》中也曾记载“去风湿肿胀……，癣疮”。
[12]随着天然药物化学、药物分析、药理学的发展，国内外学者发现构树属提取物具有抗菌、抗毒、抗氧化等做作用，并分离出有效作用成分是黄酮类和生物碱类。
本实验在微波辅助提取法研究的基础上，运用超声-微波辅助提取法对构树叶总黄酮提取工艺研究，旨在为构树叶资源的开发利用提供一定的工艺参考，也为天然药物抗肿瘤的研制提供科学依据。
1 材料与方法1.1材料、试剂与仪器1.1.1实验材料与试剂实验所用构树叶采集于桂林医学院药用植物园，由药学院天然药化教研室傅鹏博士鉴定，将采集构树叶在自然光照下晒干，粉碎后筛取80目粉末，贮存玻璃干燥器中；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所提供）；实验所用水为蒸馏水；乙醇、氯仿、等试剂均为分析纯；MTT (噻唑蓝，Amresco公司，批号0793)、小牛血清（杭州四季青生物公司）、DMSO（二甲基亚砜，Sigma公司）、胰酶粉（上海佳和生物公司）。
微波法提取东北铁线莲总黄酮工艺研究
１ ２ １ 检测 波 长 的选 择 ．．
精 确 称取 ７ ０℃ 减压 干燥 至恒 重 的
木 犀 草 素 对 照 品 １ １ ｇ 置 于 ２ 量 瓶 中 ， 入 无 水 甲 ． ０ｍ ， ５ｍＩ容 加
江苏农业 科学
２ １ 年第 ３ ０１ ９卷第 ４期
王 晓林 ， 方 丽 ， 海 燕．微 波 法提 取 东 北 铁 线 莲 总 黄 酮 工 艺研 究 ［ ］ 钟 郭 Ｊ ．江 苏 农 业 科 学 ，０ １３ （ ：５ ３ ７ ２ １ ，９ ４） ３５— ５
微 波 法 提取 东 北 铁 线 莲 总黄 酮 工 艺研 究
类 物 质 的研 究 尚未 见 报 道 ， 研 究 采 用 微 波 法 对 东 北 铁 线 本
莲 总 黄 酮 的提 取 工 艺 进 行 了研 究 ， 察 了 微 波 法 的 提 取 能 力 ， 考
液 。 称 取 干 燥 至 恒 重 的东 北 铁 线 莲 干 浸 膏 ０ ２ ， 于２ Ｌ ．５ｇ 置 ５ｍ
系 。微 波 法 可 用 于东 北 铁 线 莲 总 黄 酮 的 提 取 。
关 键 词 ：东北 铁 线 莲 ；总 黄 酮 ；正 交 试 验 ； 波 法 微 中图分类号 ： ２４２ Ｒ ８ ． 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ２—１０ （ ０ １ ０ ０ ５ ０ １０ ３ ２ ２ １ ）４— ３ ５— ３ Ｋ ３０ Ｑ ２ ０型 超 声 清 洗 萃 取 仪 （ 山 市 超 声 仪 器 制 造 厂 ） Ｒ 昆 ； Ｅ一 ５ Ａ 型 旋 转 蒸 发 仪 （ 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂 ） Ｗ５—１０ Ｐ型恒 ２ 上 ； ０Ｓ 温水 浴锅 （ 海 申生 科 技 有 限公 司 ） 木 犀 草 素 对 照 品 （ 国 上 ； 中 药 品 生物 制 品 检 定 所 ） 东 北 铁 线 莲 购 于 安 徽 省 亳 州 市 华 申 ； 药 业 有 限 公 司 ； 水 乙 醇 、 水 甲 醇 均 为 分 析 纯 ； 为 重 蒸 无 无 水
微波技术在植物黄酮提取中的应用研究进展
超声波辅助法提取植物黄酮的工艺研究
超声波辅助法提取植物黄酮的工艺研究常波;毛明婷;谭云;叶峻【摘要】为探究植物总黄酮的提取方法,采用热水浸提法、索氏提取法、微波提取法和超声波提取法分别提取了荷叶中总黄酮含量,并优化了超声波辅助法提取甜荞、苦荞、玉米须、荷叶等样品中总黄酮的最佳料液比、提取液体积分数、超声时间、超声温度及超声功率等工艺条件.结果表明:超声波辅助提取法所得植物总黄酮的得率最高,且操作简单;所提取样品总黄酮得率顺序为:荷叶﹥苦荞﹥玉米须﹥甜荞,其中荷叶中总黄酮得率为0.6677％.【期刊名称】《价值工程》【年(卷),期】2018(037)033【总页数】4页(P242-245)【关键词】超声波;甜荞;玉米须;荷叶;苦荞;黄酮【作者】常波;毛明婷;谭云;叶峻【作者单位】成都师范学院化学与生命科学学院,成都611130;成都师范学院化学与生命科学学院,成都611130;成都师范学院化学与生命科学学院,成都611130;成都师范学院化学与生命科学学院,成都611130【正文语种】中文【中图分类】TS2090 引言黄酮类物质广泛存在于蔬菜、药用植物及农产品加工下脚料中的一大类化合物，是植物在生长过程中产生的次级代谢产物。
研究表明：黄酮类化合物具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎和免疫调节、抗病毒、解毒护肝和细胞保护、影响心血管疾病与内分泌代谢等药理作用[1-6]，具有极高的应用和科研价值，在医药、食品等领域具有广阔的应用前景[7]，并已开发出黄酮类的药品及保健食品。
传统植物黄酮的提取方法主要有：索氏提取法、热水浸提法、碱液提取法等，存在溶剂使用量大，操作繁重以及高温使黄酮类物质变质等缺点[8]，而具有能耗低、效率高等优点的超声技术应用较少。
许刚等[8-15]利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的黄酮成分进入溶剂，从而增加提取率，缩短提取时间，节约溶剂，并可避免高温对提取成分的影响。
本研究以具有降压保健作用的甜荞、苦荞、玉米须、荷叶等为研究对象，采用乙醇浸提和超声波辅助方法提取黄酮类化合物，探究了各样品中黄酮提取的最佳工艺条件；并以芦丁标准品为对照品，用紫外分光光度法对提取物进行了测定与比较，为植物黄酮的综合开发、应用提供参考。
响应面优化超声波-微波协同提取凤眼莲黄酮工艺及其不同部位黄酮抗氧化活性分析
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１ 材 料
１ ． １ 药 材与试 剂 湖州 铁线 莲地 上部 分 干药材 由浙 江 省大东 吴 药业 有 限公 司 提供 ； 山奈 酚 （ 标 准 品） 由上 海 金 穗生 物 科
３ ０
湖 州 师 范 学 院 学 报
第 ３ ８卷
山奈 酚 标 准 品 ）溶 液 的 标 准 曲 线 图 Ｆ ｉ ｇ ． １ Ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｏ ｆ ｋ ａ ｅ ｍｐ ｆ ｅ ｒ ｏ ｌ （ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ） ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ
一
Ⅱ， 上 海天 美科 学仪 器有 限公 司 ） ．
２ 方 法 与 结 果
２ ． １ 标准 曲线 的建 立
称取 ２ ． ０ ｍｇ山奈 酚 （ 标准 品 ） ， 加入 ７ Ｏ ９ ， ６ （ Ｖ： Ｖ） 的乙醇 ３ Ｏ ｍＬ溶解 ， 振荡 ３ ｍｉ ｎ ， 静置 １ ５ ｍｉ ｎ ， 定 容
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ６一 Ｏ ９ —１ Ｏ 基金项 目： 湖 州 师 范 学 院求 真 学 院“ 大学生创新创业训练计划” （ ２ ０ １ ６ —７ １ ； ２ ０ １ ６ —７ ６ ） ． 通信作者 ： 孙来玉 ， 实 验师 ， 研究方 向： 生物医药与食品安全． Ｅ— ｍａ ｉ ｌ ： ｓ ｕ ｎ ｌ ｙ ＠ｚ ｊ ｈ ｕ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ｎ
技有 限公 司生 产 （ 批号 ： ２ ０ １ ２ ０ ６ ０ ６ ） ； 其 余试 剂都 为分 析纯 ．
１ ． ２ 仪 器
超 声一 微 波协 同萃取仪 （ Ｃ Ｗ 一２ ０ ０ ， 新 拓微 波溶 样 测试 技 术有 限公 司 ） ； 紫外 可见 分光 光 度计 （ ＵＶ１ １ ０ ０
考 察 提取 液 料 比 、 微波功率、 提取 时 间和 温 度 ４ 个 因素 对 提 取 效 果 的影 响 ， 得出最佳提取 工艺为液料 比 １ ５：１ 、 微 波 功率 １ ６ ０ Ｗ、 时间 ３ ５ ｓ 、 温度 ３ ５℃ ， 提取率达 Ｏ ． ７ ０ ６ ｍｇ ／ ｇ ． 该 工 艺简 便 、 稳定 ， 适 用 于 湖 州 铁 线莲 总 黄 酮 的 提取 ． 关键词 ： 湖 州铁 线 莲 ； 黄 酮 ；超 声一 微 波 ；正 交设 计
液最 大 吸收 波长 为 ３ ７ ０ ． ５ ｎ ｍ． 在 此波 长下 测定 ６种 浓度 标 准 液 的吸 光度 ， 以吸 光度 为 纵 坐标 ， 浓 度 为 横 坐
标 绘制 标准 曲线 （ 见图 １ ） ． 经 回归 分析 ， 线 性方 程为 Ｙ一 １ １ ９ ． １ ４ ２ ９ ｘ— Ｏ ． ０ １ ５ ６ ６ ７ （ Ｒ。 一Ｏ ． ９ ９ ９ ５ ３ ５ ） ．
第３ ８卷
第１ Ｏ期
湖 州 师 范 学 院 学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｈｕ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ｖｏ １ ． ３ ８ Ｎ０ ． １ Ｏ
０ｃ ｔ ． ， ２ ０１６
２ ０ １ ６年 １ Ｏ月
超声～ 微波协 同法提取湖州 铁线莲 中黄酮工艺 的研 究
陈海 兰 ，黄 佳 丽 ，鲍 舒 霞 ，王 琦 焕 ，吴 皓 ，钱 坤 ，孙 来 玉
（ 湖 州 师 范 学 院 生 命 科 学 学 院 ，浙 江 湖 州 ３ １ ３ ０ ０ ０ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） 摘 要： 以 乙醇 为 溶 剂 ， 采 用 超声 一 微 波 协 同萃 取 法 提取 湖 州 铁 线 莲 中 的黄 酮 ， 以单 因素 实验 和 Ｌ ９ （ ３ ） 正 交 试 验 分 别
植 物 中黄酮 的 提 取 方 法 主 要 有 普 通 的 加 热 回 流 ］ 、 索 氏提取［ ８ ］ 、 微 波 辅 助 提 取 ］ 、 超 声 辅 助 提
取Ｌ １ 、 超 声波 辅助 提取 ［ １ 幻 等． 本研 究 以 乙醇 为溶 剂 ， 采用 超声 和微 波协 同辅 助萃 取方 法 提取 湖 州铁 线 莲 中
２ ． ２ 黄 酮 的提取
将 铁线 莲干 药材 在 ６ Ｏ℃干燥 １ ２ ｈ ， 粉碎 ， 过４ ０目筛 ， 备 用． 称取 １ ． ０ ０ ０ ｇ湖州 铁线 莲粉 末放 入烧 杯 中 ， 加入 ７ ０ 的 乙醇溶 液 ， 移 人超 声微 波协 同萃 取仪 配 套 的 三角 瓶 中 ， 于４ Ｏ Ｈｚ 超 声 波和 一 定 功率 的 微 波协 同提 取 ， 抽滤． 取０ ． ５ ｍＬ滤 液 ３份 ， 加７ Ｏ ％ 乙醇 ２ ． ５ ｍＬ ， ３ ７ ０ ． ５ ｒ ｉ ｍ处 测 吸光度 ， 计 算 平均值 ， 按 照公式 ： 浓度 （ ｍｇ ／ ｍＬ ） ×稀释倍 数 ×提取 液的体积 （ ｍＬ ） 计算产 量．
至 １ ０ ０ ｍＬ， 配 制成 工作 母液 ． 分别 取 ０ ． ３ ｍＬ、 ０ ． ６ ｍＬ 、 ０ ． ９ ｍＬ、 １ ． ２ ｍＬ 、 １ ． ５ ｍＬ 、 １ ． ８ ｍＬ母 液 ， 加 ７ ０ 乙 醇 至 总体 积 ３ ｍＬ， ７ ０ 乙醇为 空 白对照 ， 山奈 酚 标准 液 在 ２ ０ ０ ～５ ８ ０ ｎ ｌ Ｔ ｌ 波 长 范 围 内扫 描 ， 得 出 山奈 标 准溶
中图分类号 ： Ｒ２ ８ ４ ． ２ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ９— １ ７ ３ ４ （ ２ ０ １ ６ ） １ ０ — ０ ０ ２ ９ — ０ ４
湖州铁 线莲 （ Ｃ ｌ ｅ ｍａ ｔ ｉ ｓ ｈ ｕ ｃ ｈ ｏ ｕ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ Ｔａ ｍｕ ｒ ａ ） ， 又名金剪刀、 铜 脚 威灵 仙 、 吴 兴铁 线 莲 等 ， 为 毛茛 科 铁 线 莲属 植 物 ， 主产于 浙江 湖州 ， 具有 抗 癌 、 解毒、 祛风 湿 、 消肿 止 痛等 药 用 疗效 ， 民 间用 煎 服 、 外 敷等 方 法 治 疗 深部 脓肿 、 风 湿性 关 节 炎 、 前列 腺炎 、 脑 瘤 已有 悠 久 的 历 史 ［ １ ］ ， 且疗效显 著， 但 其 有 效 成 分 还 没 有 定 论Ｌ ５ ． 本课 题 组前 期 的研 究 表 明 ， 湖 州铁线 莲 的黄 酮类 物质 具有 比较 明显 的活 性效 应 ， 特别 是 山奈 酚 ．