微生物的鉴定中常用地生理生化试验
微生物生理生化鉴定
提问：志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产 气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。应该产 生什么现象？
大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，
大多数能分解乳糖，不产生H2S。应该是什
么现象？
沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳
糖，大多数产生H2S，多数产气。
沙门氏菌的TSI试验
吲哚试验：用来检测细菌对色氨酸的利用能力。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色 氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚本身无色，不能 直接观察到，当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂 时，可形成红色的玫瑰吲哚。
吲哚试验
大肠杆菌：+ 产气杆菌： –
阳性 阴性
甲基红试验：用来检测细菌发酵葡萄糖的产 酸能力。当细菌代谢糖大量产酸时，就会使 加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色 （pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红 反应阳性。
1、淀粉的水解试验
菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。 培养基：固体淀粉培养基。 溶液或试剂：卢戈氏碘液。 器材：无菌培养皿，接种环，试管架。
1、淀粉的水解试验
操作步骤：
（1）无菌操作制备淀粉固定培养基平板。
（2）将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别在同一平 板不同的部分划线接种，在平板的反面分别写 上菌名。
使吲哚溶于乙醚中。静置片刻，待乙醚层浮于液面后 形成明显的乙醚层，再沿管壁加入吲哚试剂8-10滴。 如有吲哚存在，则乙醚层呈现玫瑰红色，为阳性反应。
H2S试验
尿素酶（Urease）试验：
有些细菌能产生尿素酶， 将尿素分解、产生2个分子 的氨，使培养基变为碱性， 酚红呈粉红色。
1、未接种
微生物生理生化鉴定
1、淀粉的水解试验
微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必 须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸 收利用。
微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规实验法。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体个原理如下：1、淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（1—枯草杆菌，5—大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2、明胶水解试验：穿刺接种于明胶培养基中的细菌，若能产生明胶酶利用明胶，则该培养基在4摄氏度条件下会处于液体状态，从而区别于正常条件下4摄氏度时固态的明胶培养基。
3、糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
4、IMVC实验包括四个试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细胞血检查。
①吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
②甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙算和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
③柠檬酸盐利用试验：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，而有些细菌则不能利用。
由于细菌不断地利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基PH由中性变为碱性，培养基中的指示剂有浅绿色变为蓝色。
④伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验 VP）：某些细菌在代谢过程中，能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，后者与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者乙醛化合生成乙酰甲基甲醇。
微生物的生理生化试验
一、糖类代谢试验
5、β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
二、蛋白质代谢试验
不同细菌分解蛋白质能力不同，可利用不 同氮源来合成菌体蛋白质，可通过检测加 入蛋白质分解后的产物或PH变化来鉴定细 菌。
二、蛋白质代谢试验
1、吲哚（indole）试验（又称靛基质试验） 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌分解蛋白胨中色氨酸生成的吲哚与试剂 中的二甲氨基苯甲醛作用生成红色的玫瑰吲哚。 方法：纯培养物接种蛋白胨水后35℃培养24-48h沿 管壁徐徐加入Kovac氏试剂或欧氏试剂0.5ml观察。 结果：两层液体交界处出现红色为阳性，无色为阴 性。
2、凝固酶试验
目的：常用于鉴别葡萄球菌。 原理：金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维 蛋白原转变为纤维蛋白附着于细菌表面产生凝固。分为 与细胞壁结合的凝固酶（玻片法）与菌体生成后释放在 培养基中的游离凝固酶（试管法）。 玻片法：在玻片上加生理盐水与血浆个一滴，观察凝集 情况 试管法：三只含1：4血浆0.5ml的试管各接种待检菌、 阳性菌株和肉汤阴性菌株，待检菌出现凝固且阴性对照 不凝固为阳性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：某些细菌将丙二酸盐作为唯一的碳源时，丙 二酸盐被分解成为碳酸钠，使培养基变碱性。 结果：培养基变蓝色为阳性，颜色无变化为阴性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验
三、碳源和氮源利用试验
3、醋酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源同时利用醋酸盐 作为唯一碳源时，分解醋酸钠产生二氧化碳和水与 钠离子结合生成碳酸钠使培养基呈碱性，指示剂由 绿变蓝。 结果：斜面上有菌落生长且培养基变蓝色为阳性。
细菌常用生理生化鉴定
细菌鉴定中常用的生理生化反应录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
微生物鉴定中常用的生理生化实验
球菌。
3.将接种后的试管置于20度中培养3~5天。 4.观察明胶液化情况。
穿刺接种
1)手持试管。 2)旋松棉塞。 3)右手拿接种针在火焰上将针 端灼烧灭菌接着把在穿刺中可能伸入 试管的其他部位，也灼烧灭菌； 4)用右手的小指和手掌边拔出 棉塞。接种针先在培养基部分冷却， 再用接种针的针尖沾取少量菌种。 5)将接种过的试管直立于试管 架上，放在37℃或28℃恒温箱中培 养。24h后观察结果 注意：若具有运动能力的细菌， 它能沿着接种线向外运动而弥散， 故 形成的穿刺线较粗而散、反之则 细而密。
运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，这过程可
通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
淀粉遇碘液会产生蓝色，在细菌水 解淀粉的区域，用碘液测定时不再 产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
2.明胶液化试验：
明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质，在25℃以下可维持凝胶状
态，以固体形式存在，而在25℃以上明胶会液化。
(三)、尿素实验
1.取2支尿素培养基斜面试管，用记号笔标明各管欲接种的菌名。 2. 分别接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌。 3.将接种后的试管置于35°C中培养24~28小时。 4. 观察培养基颜色变化。
（四）、硫化氢试验
1.用接种针将大肠杆菌、产气肠杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培 养基中。 2.置于37度培养48小时后，观察有无黑色硫化铅的产生。
丙酮酸等，使pH升至大约6。因此大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
6.柠檬酸盐试验：
柠檬酸盐试验是用来检测柠檬酸是否被利用。
有些细菌利用柠檬酸盐作为碳源；而另一些细菌不能利用柠
檬酸盐，如产气肠杆菌。
实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验
实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验摘要本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。
最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。
关键词微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验前言类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。
因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
一、实验目的1、大分子水解试验证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
2、糖发酵试验了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
3、IMViC试验了解IMViC的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶（endoenzymes）.许多细菌产生胞外酶(exoenzymes)，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1、大分子水解试验：微生物对大分子如淀粉、蛋白质和油脂不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后才能被微生物吸收利用。
细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌鉴定中常用的生理生化反应细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。
其代谢产物也不同。
例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。
酸的生成可通过指示剂来确定。
在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。
气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气泡来证明。
（3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验）许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。
此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。
因为甲基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。
如果某些细菌，如产气菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。
因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。
（4）大分子代谢的实验。
靛蓝基质（口服吸收）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌不能直接利用大分子淀粉。
它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
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3．假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？
答：由于产生的CO2溶于水的量少且碳酸酸性若，因此颜色不变化，仍为紫色。德汉氏小管中有气柱。
4．讨论IMViC试验在医学检验上的意义。
2.油脂水解实验
（1）培养基制备
将溶化的油脂培养基冷至50℃左右时，充分振荡，使油脂均匀分布，无菌操作倒入平皿中，待凝。
（2）接种
用记号笔将平板划成四部分，分别将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄菌、铜绿假单胞菌分别划十字线接种于平板的相对应部分的中心。在平板反面用记号笔写上菌名。
（3）培养
将上述已接种的平板倒置于37℃培养箱中培养48小时。
一、实验目的
1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理
由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下：
5.吲哚实验
（1）培养基制备
将配制好的蛋白胨水培养基分装于试管中后放入灭菌锅中进行湿热灭菌。
（2）接种
用记号笔在各试管上标明所接种的菌名。取盛有蛋白胨水培养基的试管2支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种产气肠杆菌。
（3）培养
将上述已接种的试管置于37℃培养箱中培养48小时。
6.甲基红实验
（1）培养基制备
试管3
试管4
试管5
试管6
颜色变化
变红
变黄
阴性/阳性
+
—
结论
大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH
产气肠杆菌转化有机酸为非酸性末端产物
表6.甲基红试验结果
六、思考题
1．你怎么样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？
答：菌苔周围产生水解圈，可知淀粉在细胞外被水解，应该是细菌将淀粉酶分泌到胞外所致，因此为胞外酶。
2．不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？
答：可以鉴别某些疾病是由大肠杆菌还是产气肠杆菌引起的。
5．解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？
答：某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚，是红色物质，便于观察。
七、实验小结
空白
试管1
试管2
试管3
试管4
试管5
颜色变化
黄色
黄色
紫色
是否产气
是
是
否
阴/阳性
+
+
—
结论
大肠杆菌可以分解葡萄糖，同时产酸产气。
普通变形杆菌能分解葡萄糖，同时产酸产气。
对照组
表3.葡萄糖发酵培养基实验结果
（2）乳糖发酵培养基
图3.接种大肠杆菌的乳糖发酵培养基图4.接种普通变形杆菌的乳糖发酵培养基
(左)和空白的乳糖发酵培养基(右)
“+”表示产酸或产气，“—”表示不产酸不产气
样品
大肠杆菌
普通变形杆菌
空白
试管1
试管2
试管3
试管4
试管5
颜色变化
黄色
紫色
紫色
是否产气
是
否
否
阴/阳性
+
—
—
结论
大肠杆菌可以分解乳糖，同时产酸产气。
普通变形杆菌不能分解乳糖，故不产酸不气。
对照组
表4.乳糖发酵培养基实验结果
3.IMViC试验
（1）吲哚试验
样品
“+”表示阳性，可以水解淀粉，“—”表示阴性，不可以水解淀粉
菌种
阴/阳性
结论
大肠杆菌
—
不可以水解淀粉
枯草芽孢杆菌
+
可以水解淀粉
金黄色葡萄球菌
—
不可以水解淀粉
铜绿假单胞菌
—
不可以水解淀粉
表1.淀粉水解实验结果
（2）油脂水解试验
“+”表示阳性，可以水解油脂，“—”表示阴性，不可以水解油脂
菌种
阴/阳性
结论ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
将配制好的葡萄糖蛋白胨水培养基分装于试管中后放入灭菌锅中进行湿热灭菌。
（2）接种
用记号笔在各试管上标明所接种的菌名。取盛有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管2支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种产气肠杆菌。
（3）培养
将上述已接种的试管置于37℃培养箱中培养48小时。
五、实验结果
1.大分子物质的水解试验
（1）淀粉水解实验
3.葡萄糖发酵实验
（1）培养基制备
将配制好的葡萄糖发酵培养基分装于试管中同时向每只试管中加入一支德汉氏小管后放入灭菌锅中进行湿热灭菌。
（2）接种
用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。取盛有葡萄糖发酵培养基的试管2支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌。
（3）培养
将上述已接种的试管置于37℃培养箱中培养48小时。
大肠杆菌
产气肠杆菌
试管1
试管2
试管3
试管4
试管5
试管6
是否产生红色物质
是
否
阴性/阳性
+
—
结论
大肠杆菌可以分解色氨酸为吲哚
产气肠杆菌不能分解色氨酸为吲哚
表5.吲哚试验结果
（2）甲基红试验
图5.接入大肠杆菌的葡萄糖蛋白胨水培养基图6.接入产气肠杆菌的葡萄糖蛋白胨水培养基
样品
大肠杆菌
产气肠杆菌
试管1
试管2
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料
1.菌种
大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，
铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），
产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
4.乳糖发酵实验
（1）培养基制备
将配制好的乳糖发酵培养基分装于试管中同时向每只试管中加入一支德汉氏小管后放入灭菌锅中进行湿热灭菌。
（2）接种
记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。取盛有乳糖发酵培养基的试管2支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌。
（3）培养
将上述已接种的试管置于37℃培养箱中培养48小时。
通过本次实验我们证实了不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统；了解了糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用以及IMViC的原理；并掌握了微生物大分子物质水解实验的原理和方法以及通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
2.培养基
固体油脂培养基，固体淀粉培养基，葡萄糖发酵培养基（5支，附德汉式小管），乳糖发酵培养基（5支，附德汉式小管），蛋白胨水培养基。
3.溶液和试剂
革兰氏染色用卢戈氏碘液，甲基红指示剂，乙醚和吲哚试剂，无菌水。
4.仪器和其他用品
平板，试管，接种环，试管架，电子天平，称量纸，玻璃棒，三角瓶，烧杯，药匙，标签纸，酒精灯，滴管。
大肠杆菌
+
可以水解油脂
枯草芽孢杆菌
+
可以水解油脂
金黄色葡萄球菌
+
可以水解油脂
铜绿假单胞菌
-
不可以水解油脂
表2.油脂水解试验结果
2.糖发酵试验
（1）葡萄糖发酵培养基
图1.接种普通变形杆菌的葡萄糖发酵培养基图2.接种大肠杆菌的葡萄糖发酵培养基
“+”表示产酸或产气，“—”表示不产酸不产气
样品
大肠杆菌
普通变形杆菌
四、实验步骤
1.淀粉水解实验
（1）培养基制备
将固体淀粉培养基熔化后冷却至50℃左右，无菌操作制成平板。
（2）接种
用记号笔将平板划成四部分，分别将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌在不同位置划线接种。在平板反面用记号笔写上菌名。
（3）培养
将上述已接种的平板倒置于37℃培养箱中培养48小时。
1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。