结核病实验室诊断
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤：
1.痰液样本收集：患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本，
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理：痰液样本经过预处理，包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养：将预处理后的痰液接种到培养基上，通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定：通过常规培养、染色和生化试验等方法，鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验：对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验，以确定
哪些药物对其具有抗菌作用，从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准，因为它能够准确检测到结核分枝杆菌，并且可以确定其对药物的敏感性，为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是，该方法需要相对较长的时间（通常需要几周）来进行培养和鉴定，因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
结核实验室检查项目
结核实验室检查项目包括痰涂片、痰培养、结核菌素试验和胸部X线检查等。
1. 痰涂片：通过显微镜观察痰液中的结核杆菌是否存在，是诊断结核病的常用方法之一。
2. 痰培养：将痰液置于培养基上进行培养，检测结核杆菌的生长情况，可以确定病原体的种类和药物敏感性。
3. 结核菌素试验：注射结核菌素后观察皮肤反应，判断是否感染了结核杆菌。
阳性结果需要进一步确认是否为活动性结核病。
4. 胸部X线检查：通过X光照射胸部，观察肺部是否有结核病变，如结节、空洞等。
对于早期病变或隐匿性病变的发现具有重要意义。
这些检查项目可以帮助医生确定患者是否患有结核病，并指导治疗方案的选择和调整。
同时，这些检查也有助于监测治疗效果和预防结核病的传播。
结核病实验室检查
结核病实验室检查结核病是一种严重的传染病，通常由结核分支杆菌引起。
这种病菌会侵入肺部并引起肺结核，而也可以通过血液传播到其他部位，如淋巴、骨髓和肝脾等。
在许多地方，特别是在发展中国家，结核病仍然是一种普遍的疾病，因此及早诊断和治疗至关重要。
结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
结核病实验室检查通常涉及多种类型的检测，例如：1.酸杆菌检测结核分支杆菌是酸杆菌，因此酸杆菌检测是一种常用的实验室检查方法。
该方法不需要复杂的设备并且具有高度的特异性和灵敏度。
患者的样本可以是咳嗽的痰液、唾液或肺组织，也可以通过胃镜获得胃肠液。
如果酸杆菌检测呈阳性，则可以确诊结核病。
但是，该方法也存在一些局限性，例如在一些情况下不能检测出结核分支杆菌，如某些菌株可以耐受某些药物。
2. 结核抗体检测结核抗体检测是另一种可以用于诊断结核病的实验室检查方法。
该方法通常使用ELISA（酶联免疫吸附试验）或其他类似方法检测患者的血清中是否存在结核抗体，如果测试结果呈阳性，则表示患者可能感染了结核分支杆菌。
但是，结核抗体检测的结果可能会出现假阳性或假阴性的情况，这限制了其在临床实践中的应用。
3.结核病PCR检测PCR检测是检查抗原核酸序列的一种方法。
由于PCR技术可以扩增极微量的DNA，并且非常特异和灵敏，因此可以检测出非常小的感染量。
在结核病中，PCR检测可以用于检测结核分支杆菌的DNA，以确认病原体的存在。
但是，该方法对样本中的DNA污染非常敏感，因此必须进行严格的实验室操作和质量控制。
总之，结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
这些测试方法都具有不同的优缺点，并且结果可能受到许多因素的影响。
因此，必须在临床实践中综合考虑这些方法的结果和临床表现，以取得最佳的诊断结果。
同时，实验室技术人员必须受过专业培训，严格遵守操作规程，以确保准确诊断和最佳治疗效果。
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病实验室诊断技术
GenoType MTBDR and 诊断结核感染及对利福 MTBDRplus；INNO- 平和异烟肼药物敏感性 LiPA Rif.TB
Frane; LW Scientific; Zeiss
诊断结核患者
Cepheid GeneXpert
诊断结核感染及对利福 平的耐药性
WHO推荐的结核新诊断技术
方法 DNA微阵列芯片法
有前景的几种新技术
❖ 分子诊断技术:GeneXpert（Cepheid公司） ❖ 分子线性探针技术:INNO-LIPA（Innogenetics公司） ❖ 反向点杂交技术:GenoType MTBDR （Hain Lifescience）
分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（亚能生物） ❖ 基因芯片技术：微阵列芯片法（博奥生物） ❖ 细胞免疫学技术：T-SPOT.TB（Oxford Immunotec公司）
目前诊断方法回顾
细菌学检测方法 ： 涂片、常规培养、快培 其他辅助检查方法：皮试、结核抗体
目前诊断方法的局限性
涂片的缺点： 敏感性低； 特异性差； 无法区别死菌与活菌
培养的缺点： 耗时久，一般需4~8周； 阳性率低，约30%~50%；特异性差， 无法区别MTB与NTM
皮试的缺点： 敏感性低特异性差 抗体检测缺点：敏感性低特异性差
新型诊断技术产品比较
企业 美国 Cepheid
比利时 Innogenetics 德国 Hain Lifescience 中国 亚能生物
中国 博奥生物
英国 Oxford Immunotec
方法
产品特点
GeneXpert
同时检测MTBC和判断利福平耐药； 快速；简便；安全
线性探针杂交法 （INNO-LIPA）
➢ 新的实验诊断技术可弥补传统方法的不足，提高诊 断的灵敏度和特异性，但各有缺点或不足，难以完 全满足临床检测需求，因此，新型结核杆菌诊断技 术及产品的研发势在必行。
结核病实验室诊断技术2017.10.13
• 绝对浓度法 • 比例法
• 液体培养法
基于固体培养基；时间：4周 多种药物
基于液体培养基，时间：4-12天 INH/RFP/SM/EMB/PZA
结核分枝杆菌药物敏感试验
不同药敏方法的差异
三者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法等方面都有一定差 别，导致结果有很少一部分不相符
比例法和绝对浓度法检测结果的一致率4 药均高达96 %以上,对于 结核分支杆菌,二种方法测试 SM INH RFP EMB的耐药率均无显著 性差异
涂片显微镜检查的敏感性
观察到的AFB
AFB估计数量 涂片阳性的可能性(%)
数量
( /ml)
• 0 in ≥100 fields
< 1,000
<10
• 1-2 in 300 fields 5,000 – 10,000
50
• 1-9 in 100 fields about 30,000
80
• 1-9 in 10 fields
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
利用固体罗氏鉴别培养基的鉴别：
中性罗氏 培养基
+
噻吩-2-羧酸 肼TCH
+
对硝基苯 甲酸PNB
+
菌型鉴定 NTM
+
+
-
人型Mtb
+
-
-
牛型Mtb
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
• 原理：硝基苯甲酸还原酶机制
绝大部分非结核分枝杆菌能将对硝基-苯甲酸（PNB ）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸（PABA），而 绝大部分（98%以上）MTBC缺乏对硝基-苯甲酸（PNB ）还原酶活性，为对氨基-苯甲酸（PABA）将对硝基苯甲酸（PNB）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸 （PABA） • 局限：鉴定周期长15天-30天，特异性不高
诊断结核的三个标准
诊断结核的三个标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传播途径主要为空气传播。
诊断结核病需要依据一定的标准，而且需要综合考虑患者的临床表现、实验室检查和影像学检查等多方面的信息。
在临床实践中，医生们通常会根据以下三个标准来诊断结核病。
首先，临床症状是诊断结核病的重要依据之一。
结核病的临床表现多样，常见的症状包括慢性咳嗽、咳痰、低热、盗汗、消瘦等。
特别是慢性咳嗽伴有咳痰，尤其是带血丝的痰，是结核病的典型症状。
此外，结核病还可引起胸痛、呼吸困难、乏力等症状。
因此，对于有这些症状的患者，医生应高度怀疑结核病的可能性。
其次，实验室检查也是诊断结核病的重要手段之一。
结核分枝杆菌的培养和鉴定是确诊结核病的金标准。
此外，结核分枝杆菌的抗酸染色检查和基因扩增技术（PCR）检测也是常用的实验室检查手段。
这些检查可以直接检测结核分枝杆菌的存在，对于临床疑似结核病的患者具有重要的诊断意义。
最后，影像学检查对于诊断结核病也是至关重要的。
胸部X线检查是最常用的影像学检查手段，可以发现肺部结核病的病变。
而对于肺外结核病，如骨关节结核、淋巴结结核等，CT、MRI等影像学检查则具有更高的诊断敏感性和特异性。
因此，在诊断结核病时，医生们需要充分重视影像学检查的结果。
综上所述，诊断结核病需要综合考虑患者的临床表现、实验室检查和影像学检查等多方面的信息。
只有综合运用这三个标准，才能更准确地诊断结核病，为患者提供及时有效的治疗。
因此，医生们在临床实践中应当重视这三个诊断标准，提高对结核病的诊断水平，为控制结核病的传播做出积极的贡献。
结核病实验室检测流程标准
结核病实验室检测流程标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传染性强，严重威胁人类健康。
为了及时发现和诊断结核病，实验室检测是必不可少的一环。
本文将从标本采集、实验室检测和结果判读三个方面，介绍结核病实验室检测流程标准。
一、标本采集结核病的标本采集是实验室检测的第一步，其质量直接影响后续检测结果的准确性。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，采集的标本应包括痰液、胸腔积液、尿液、脑脊液等。
在采集痰液时，应让患者深呼吸数次，然后咳出痰液，避免口腔分泌物的污染。
采集胸腔积液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
采集尿液时，应让患者在清晨第一次排尿时采集，避免尿液的稀释。
采集脑脊液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
二、实验室检测结核病的实验室检测主要包括涂片法、培养法、PCR法等。
涂片法是最常用的检测方法，其操作简单、快速，但灵敏度较低。
培养法是检测结核分枝杆菌的“金标准”，其灵敏度高，但需要较长的培养时间。
PCR法是一种新兴的检测方法，其灵敏度高、特异性强，但需要较高的技术水平和设备支持。
实验室检测应在严格的无菌条件下进行，避免标本污染和交叉感染。
检测结果应及时记录和报告，确保患者能够及时接受治疗。
三、结果判读结核病的实验室检测结果应根据临床表现和其他检查结果进行综合判读。
涂片法和PCR法的阳性结果可以初步诊断结核病，但需要进一步的确认。
培养法的阳性结果可以确诊结核病，但需要排除其他细菌感染。
实验室检测结果应及时通知临床医生，以便制定合理的治疗方案。
综上所述，结核病实验室检测流程标准包括标本采集、实验室检测和结果判读三个方面。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，实验室检测应遵循相应的操作规范，结果判读应综合考虑临床表现和其他检查结果。
只有严格按照标准操作，才能确保结核病的及时发现和诊断，保障人民群众的健康。
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结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。
结核杆菌自动阅片技术
• 2016年2月至2016年3月，本院对308例涂片进行人工阅片 和计算机自动阅片比对试验；结果符合的为286例，总符 合率为92.58%。
药物 耐药 例数 耐药率 % RFP 80
15.7
INH 146
28.6
SM 94
18.4
EMB 58
11.4
CPM 50
9.8
OFX 61
11.9
ETH PAS 41
8.0
LVF 53
结核分枝杆菌体外药敏试验
1
挑取菌落 磨菌、稀释
2
接种菌液
3
孵育7-10天
4
显色， 读取结果
结核分枝杆菌液体微量药敏
结核分枝杆菌体外药敏试验
结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验
收集我院2015年8月至11月的临床分离菌株511例， 使用液体微量显色法进行了利福平、异烟肼、链霉素、 乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水 杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、 卡那霉素、氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的体外药敏试 验 。其中MDR-TB菌株75例（14.7%）。
•
• •
③索状因子：可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关
④硫酸脑苷酯：抑制吞噬溶酶体形成，具有抗吞噬作用 ⑤ 蜡质D，可刺激机体的迟发型超敏反应。
• （3）结核杆菌主要引起细胞免疫反应，属于传染性免疫
结核病患者的常规检验
• • • • 三大常规（血常规、尿常规、大便常规） 血沉 血流变检测 肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性 均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓 形成
——[Eur Respir J 2011; 37(2):371]
结核病实验室诊断技术简介
细菌学 免疫学 分子生物学 其他
1.涂片 2.培养 3.药敏 4.菌型鉴定
1.结核抗体 2.结核蛋白 芯片 3.体外r-干 扰素试验 4.结核杆菌 分泌抗原
1.实时荧光 定量PCR NA 3.RNA 4.耐药基因 突变 5.菌型鉴定 6.测序
• 辅助治疗检测：肝功能、肾功能、血脂、血糖。。。。
• NSE 、AFU等指标用于鉴别诊断。 • CA 125标志的使用，可以作为结核病疗效判断指标。结核病与肺部 肿瘤患者均升高。
——《中国实用内科杂志》2003年 第2期
结核病患者的常规检验
• 超敏C反应蛋白：肺结核是结核分枝杆菌感染导致机体细胞免疫功能下降的 慢性呼吸道传染病，患者血清中HS—CRP、免疫球蛋白、补体可发生改变。
——《微循环学杂志》
常规检测，无特异性。
结核病患者的常规检验
• 腺苷脱氨酶（ADA）:其血清/浆膜腔积液比值更有意义。
• C反应蛋白 （CRP）: X线提示有空洞的结核病人比没有 空洞的结核病人以及健康人显著升高。但是CRP正常不能 排除结核病。
——Infection.17(1):13-4,1989 Jan-Feb
——《中国实验诊断学》 2009年01期
• •
降钙素原（PCT） 肺结核患者血清PCT水平明显低于社区获得性肺炎（CAP）患者，HIV阴性 的肺结核患者血清PCT水平并不会明显增高，故可用于PTB和CAP的鉴别诊 断，但当PCT水平大于正常值时，其预后价值较差。可作为肺结核和肺结核 伴感染诊断的辅助指标。
结核分枝杆菌体外药敏试验
固体 培养法
结核杆菌体外 药敏试验
MIC 测定法
液体
仪器法
液体
微量法
结核分枝杆菌体外药敏试验
Drug free Isoniazid Ethambutol Inoculum media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 ++++ ++ 3 10-5 26 9 0 % resistant 34.6 0.1 Interpretation Resistant Susceptible
结核病实验室诊断
1. 结核病背景资料 2. 结核病常规检验 3. 结核病实验室诊断
4.体外r-干扰素释放试验
5.小 结
背景—结核病流行现状
全球有三分之一人口（20亿）
感染了结核杆菌
我国现患肺结核病人达500万， 占全球病人总数的1/4
背景—结核病感染、传播、发病过程
播散 Disseminates 诊断 Diagnosis 发作 Onset 细菌在人 体复制 潜伏感染 染
背景—结核分枝杆菌基础
• （1）结核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入
机体，最常见为经呼吸道感染引起肺结核。 • （2）结核杆菌无内毒素和外毒素，也不产生侵袭性酶，其致病性主 要与其细胞壁内含大量脂质有关。主要包括： • • ①磷脂：可刺激单核细胞增生，与结核结节和干酪样坏死形成有关 ②分枝菌酸：与抗酸染色性有关
1.HPLC 2.质谱技术 3.流式技术
结核分枝杆菌形态学检测
涂片
染色
镜检
1.直接抹片法 2.离心制片法
1.抗酸染色 2.荧光染色
1.普通显微镜 2.荧光显微镜 3.自动阅片技术
结核杆菌离心制片技术
2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行 直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：
治疗 Treatment
康复 Recovery
肺病或其他疾病
痊愈
复发
≥ 2 个月（months）
时间表Time
背景—当前结核病的研究
新型抗结核药物(50%)
新型快速诊断技术(40%)
新型结核疫苗(10%)
JID 2012:205 (Suppl 2), S147.
背景—结核分枝杆菌基础
• 结核分枝杆菌（M. tuberculosis） 简称为结核杆菌（tubercle bacilli）。早在1882年，德国细菌 学家柯赫（Robert Koch）就已证明 结核分枝杆菌是结核病的病原菌。 本菌可侵犯全身各组织器官，但以 肺部感染最多见。 • 在微生物分类中，结核分枝杆菌属于 放线菌门、放线菌纲、放线菌目、分 枝杆菌科、分枝杆菌属 • 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、 非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆 菌是人类主要的致病菌