酶工程论文.
生物化工论文酶工程的发展
目录酶工程的前景 (2)酶工程的发展 (2)酶制剂： (3)国外酶制剂发展 (3)国内酶制剂发展 (4)酶的固定化 (4)酶固定化的现状 (4)酶固定化的进展 (5)( 1 ) 新载体 (5)（2）新方法 (5)（3）新机理 (5)酶的遗传修饰与化学修饰： (6)遗传修饰 (6)( 1) 多位点定点突变技术 (6)( 2) 酶定向进化技术 (7)化学修饰 (7)酶生物反应器 (8)生物反应器的发展 (8)1、以代谢流分析为核心的生物反应器 (8)2、动物细胞大规模培养生物反应器 (9)3、带pH测量与补料控制的摇床──摇床应用技术的发展 (10)4、生物反应器中试系统设计 (10)5、大型生物反应器设计与制造技术研究 (10)酶的应用现状 (11)酶工程在污染处理中的作用： (11)酶工程在农产品加工上的应用： (11)酶工程在饲料工业中的应用 (12)酶工程在食品领域的应用 (12)酶工程在中药有效成分提取及转化中的应用 (13)酶工程在中药提取中的应用； (13)酶工程在中药活性成分转化中的应用 (14)课程建议： (14)本课程优点： (14)本课程的改进建议： (14)参考文献 (15)酶工程，从定义上来说，是酶制剂在工业上的大规模应用，主要由酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和生物反应器四个部分组成。
简而言之，酶工程就是将酶或者微生物细胞，动植物细胞，细胞器等在一定的生物反应装置中，利用酶所具有的生物催化功能，借助工程手段将相应的原料转化成有用物质并应用于社会生活的一门科学技术。
它包括酶制剂的制备，酶的固定化，酶的修饰与改造及酶的反应器等方面内容。
酶工程的前景酶因其反应的专一性，高效性和温和性的特点，已和生物工程，信息科学和材料科学构成了当今的三大前沿科学。
而作为生物工程的重要组成部分，将在未来的发展中，在世界科技和经济发展中起着主导和支柱作用。
而工业用酶日益广泛地应用于化学，医药，纺织，农业，日化，食品，能源，化妆品以及环保等行业。
酶工程技术在医药制药领域的应用论文(共2篇)
酶工程技术在医药制药领域的应用论文（共2篇）本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！第1篇：酶工程技术在医药制药领域的应用一、酶工程技术研究进展1固定化酶酶工程的最初10年，主要兴趣在发展固定化方法和载体，探索其应用的可能性。
第一代固定化生物催化剂的特征是单酶的固定化，发展了吸附、共价、交联和包埋等数十种固定化方法。
现已有20多种利用单酶活力的固定化生物催化剂在世界上获得工业应用。
2多酶系统的固定化固定化单酶不可能引起发酵工业的根本变革。
大多数生物化学产品的合成和转化必须依赖一连串酶反应，而且需要辅助因子和ATP的参与。
早在70年代初已尝试将催化顺序反应的几种酶共固定，发现物质转化的速度比溶液中酶混合物高。
70年代后期，辅酶的保持和再生又特别受到重视。
ATP和NAD在大分子化后可保持在半透膜内，往返于催化合成的酶与再生它们的酶之间。
已知的酶有50%以上需要辅因的存在参与酶促反应。
ATP、FAD、NAD、PLP与PQQ的再生都可能通过固定化技术获得不同程度的解决，其中包括这些辅因的固定化与其他酶促反应相偶联或对辅因进行化学修饰及利用这些辅因的类似物与衍生物等。
实验发现应用固定化辅因及其衍生物对酶的活力具有良好作用，如thioNAD与A-PAD对马肝醇脱氢酶的活力比NAD更有效。
亚细胞成份都是天然地巧妙定位的多酶集合体，从理论上推测，固定化各种细胞器就可能有效地利用各种多酶系统。
我们曾固定化了羊精囊微粒体、鼠肝微粒体、线粒体和细胞质，为了克服固定化细胞器不够稳定的缺点，KangFuGu等人《构建了一种含有固定化多酶系统和NAD的人工细胞，用于将氨或尿素转变成必需的氨基酸，取得了良好结果。
3固定化细胞从单酶-多酶-细胞器固定化的进一步延伸就是进行完整细胞的固定化，其中包括微生物细胞，动物细胞与植物细胞的固定化。
酶工程技术在现代生物化工中的研究与应用
酶工程技术在现代生物化工中的研究与应用第一篇范文酶工程技术在现代生物化工中的研究与应用随着科学技术的不断发展，生物化工领域的研究与应用日益广泛，酶工程技术作为一种具有高效、专一、温和的生物催化技术，在现代生物化工中发挥着越来越重要的作用。
本文将从酶工程技术的研究和应用两个方面进行探讨。
一、酶工程技术的研究酶工程技术的研究主要集中在酶的筛选、改造和固定化等方面。
1. 酶的筛选：通过基因工程、蛋白质工程等手段，筛选具有特定催化活性和适应性的酶。
近年来，随着测序技术的不断发展，越来越多的酶被鉴定和描述，为酶工程提供了丰富的资源。
2. 酶的改造：通过基因突变、蛋白质工程等方法，对酶的结构进行改造，提高其催化效率、稳定性和底物范围。
目前，已成功改造了许多酶，如脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶等。
3. 酶的固定化：将酶固定在一定载体上，使其具有更好的稳定性和重复使用性能。
固定化酶技术已成为现代生物化工领域的关键技术之一，常用的固定化方法有物理吸附、共价结合、包埋等。
二、酶工程技术在现代生物化工中的应用酶工程技术在现代生物化工中的应用广泛，涵盖了食品、医药、环保、能源等多个领域。
1. 食品工业：酶工程技术在食品工业中主要用于面包制作、乳品加工、饮料生产等。
如使用酵母酶改善面团性质，使用乳糖酶分解乳糖，提高乳制品的口感和营养价值。
2. 医药领域：酶工程技术在医药领域具有重要作用，可用于药物合成、基因治疗、生物制药等。
如使用酶催化合成抗生素、激素等药物，使用重组酶治疗遗传病、心血管疾病等。
3. 环保领域：酶工程技术在环保领域具有广泛应用前景，可用于废水处理、废气净化等。
如使用微生物酶分解石油烃类污染物，使用纤维素酶降解农业废弃物，实现资源化利用。
4. 能源领域：酶工程技术在能源领域也有所应用，如生物燃料的生产、生物燃气的研究等。
通过改造酶的结构，提高其对底物的催化活性，从而提高能源转化效率。
第二篇范文探索酶工程技术：现代生物化工的加速器想象一下，如果我们能够精确地调整和优化自然界中最优秀的催化剂——酶，会发生什么？答案是，我们可以解锁生物化工领域的无限潜力。
食品酶工程论文
湖南农业大学课程论文学院：食品科技学院班级：XXXX级食科3班姓名： X X X 学号：XXXXXXXXXXXX 课程论文题目：淀粉酶在食品行业的用途课程名称：食品酶工程评阅成绩：评阅意见：成绩评定教师签名：日期：年月日淀粉酶在食品行业的应用学生：X X X(食品科技学院XXXX级食科3班，学号XXXXXXXXXXXXX)摘要：酶工程是现代生物工程的一个分支，是当今最具有发展前景的学科之一。
酶工程工业在我国起步虽晚，但发展很快，从六十年代中期起步，至今短短的三十多年，已初步建成了完整的酶工业，产品已被广泛用于味精、淀粉糖、酿造、啤酒、食品、纺织、洗涤剂、有机酸以及医药等行业。
酶制剂的应用，促进了这些行业的发展，反过来人们也逐步认识了酶制剂，促进了酶工业自身的发展。
淀粉酶为重要的酶制剂，是酶制剂中用途最广、用量最大的一种。
在食品加工工业中，它用于面包生产中的面团改良；啤酒生产中供糖化及分解未分解的淀粉；婴幼儿食品中用于谷类原料的预处理；酒精生产中用于糖化和分解淀粉；果汁加工中用于淀粉的分解和提高过滤速度。
还广泛用于糖浆制造、饴糖生产、蔬菜加工、粉状糊精生产、葡萄糖制造业中。
在医药工业可用作辅助消化药。
另外，还可用于纺织印染工业。
关键词：淀粉酶食品应用一、淀粉酶在焙烤食品中的应用随着人民生活水平的日益提高和食品工业的不断发展，人们对面粉的品种和品质提出了愈来愈高的要求。
面粉生产企业为适应市场新的需求，近年来陆续开发生产了各类专用面粉，在生产面包、馒头等制作发酵食品的专用面粉时，除面粉的面筋、灰分、粗细度、粉质曲线稳定时间等常规质量指标外，面粉工作者越来越关注面粉的α—淀粉酶活性。
理论与实践表明：面粉的α—淀粉酶活性，直接影响到面粉的发酵力和发酵食品的质量，特别是低糖主食面包。
一般情况下，正常季节收获的小麦加工的面粉中α—淀粉酶的含量普遍不足，国外面粉生产企业通常的做法是在生产这类面粉时，添加麦芽粉或真菌α—淀粉酶，用来提高面粉中α—淀粉酶的活性，以改善和提高发酵食品的质量。
酶工程论文 端粒酶
课程论文（20 12 -20 13 学年第 2 学期）课程名称：酶工程学生姓名：专业班级：学院：学号：学生成绩：关于端粒和端粒酶研究进展的综述摘要端粒是存在于真核细胞线形染色体末端的一段特殊的DNA和蛋白质的复合物，对于维持染色体稳定性具有十分重要的意义，端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白逆转录酶,是一种RNA依赖性的DNA聚合酶，由RNA和蛋白质组成的核糖核蛋白（RNP）复合体。
端粒的长短和端粒酶的功能异常与细胞衰老、肿瘤诊断和遗传疾病综合症有密切关联。
并促进了目前正处于临床检测的基于以端粒酶活性及表达为目标的癌症治疗新策略的发展。
综述了端粒和端粒酶发现、功能、应用及发展前景的综述。
关键词端粒端粒酶染色体末端细胞衰老肿瘤细胞遗传综合症对于真核生物而言，一个细胞核内往往存在多条染色体，而每条染色体末端都存在一个特殊结构——端粒，该结构对于防止不同染色体之间末端的融合和维持染色体的完整性具有十分重要的意义，一些研究还发现端粒长度与衰老和癌症存在密切关系，成为当前生命科学领域的研究热点之一。
精细的生化研究揭示了负责染色体DNA末端合成的端粒酶这一早就预测到的对其内在RNA模板具有依赖性的酶的存在。
端粒酶的缺失将导致端粒重复结构在连续的细胞分裂中逐渐缩短，生命力受到抑制，并在复制衰老过程中以细胞死亡终结。
人体中，编码端粒酶复合物的基因编码元件发生的突变将导致以癌变、干细胞再生和组织维持缺陷为特征的遗传疾病发生。
许多能够无限增值的癌细胞能通过提高端粒酶活性来维持端粒结构稳定。
端粒酶的发现深刻地影响着生物医药的研究并促进了目前处于评估阶段的癌症治疗的发展。
1端粒的概念和结构1.1 端粒端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构，是由端粒DNA和与端粒DNA特异结合的端粒结合蛋白组成的核糖核酸的蛋白质复合物[1]，位于真核生物染色体末端，维持染色体的稳定，从而保证DNA的完整复制。
1.2 端粒的结构端粒是存在于真核细胞线形染色体末端的一段特殊的DNA和蛋白质的复合物，平均长度约为5 ～15kb,是DNA链自身回并与多种端粒结合蛋白复合而成[2]。
酶工程综述论文
脂肪酶的研究进展及其在饲料中的应用项伟波(浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院浙江宁波315100)摘要：脂肪酶(triacylglycerol acylhydrolases,E.C.3.1.1.3)在自然界广泛的存在，它可催化三酰甘油酯的水解和合成。
脂肪酶在生活、生产的各个领域中具有重要的作用，有很高的商业使用价值，本文从脂肪酶的来源、结构、性质、制备方法入手，重点论述了其在猪、禽、鱼类饲料方面，国内外所得到的研究成果，为我们以后在饲料中开发应用脂肪酶提供一些参考。
关键词：脂肪酶、应用、饲料、微生物脂肪酶(1ipase EC 3．1．1．3)是广泛存在于动植物和微生物中的一种酶，在脂质代谢中发挥重要的作用。
在油水界面上，脂肪酶催化三酰甘油的酯键水解，释放含更少酯键的甘油酯或甘油及脂肪酸。
除此之外，还有多种酶活性，如催化多种酯的水解、合成及外消旋混合物的拆分。
脂肪酶在生物体内具有相当重要的生理功能，外源脂肪需要经过脂肪酶消化分解后才能透过细胞膜，体内脂肪的储藏和水解也需要脂肪酶，脂肪酶也参与细胞内脂类代谢。
脂肪酶分解三酰甘油产生的单酰甘油、脂肪酸和甘油除了作为生物体的能源外，还是合成磷脂、鞘脂等具有重要生理功能的类脂的前体。
脂肪酶反应条件温和，具有优良的立体选择性，并且不会造成环境污染，因此，在食品、皮革、医药、饲料和洗涤剂等许多工业领域中均有广泛应用。
但由于脂肪酶结构和性质的多样性、稳定性较差、底物不溶于水、提纯困难，以及生产成本较高等问题，其研究和应用相对蛋白酶和淀粉酶要少，在饲料中的应用研究还处于起步阶段。
一、脂肪酶的来源脂肪酶广泛地存在于动植物和微生物中。
植物中含脂肪酶较多的是油料作物的种子，如蓖麻子、油菜子，当油料种子发芽时，脂肪酶能与其他的酶协同发挥作用催化分解油脂类物质生成糖类，提供种子生根发芽所必需的养料和能量；动物体内含脂肪酶较多的是高等动物的胰脏和脂肪组织，在肠液中含有少量的脂肪酶，用于补充胰脂肪酶对脂肪消化的不足，在肉食动物的胃液中含有少量的丁酸甘油酯酶。
酶工程教学实践与探讨教育论文
酶工程教学实践与探讨教育论文关键词:酶工程教学内容科研实践21世纪是生命科学和生物技术世纪。
生命科学和生物技术的持续创新和重大突破,是新世纪科学技术进展的重要标志,由其引领和孕育的生物经济将引起全球经济格局的深刻改变和利益结构的重大调整。
生物技术将会对世界经济格局和国力竞争产生重要影响,并促使人类的观念、生活方式等产生深刻变革。
酶工程是生物技术的一个重要组成部分。
其应用范围已普及工业、医药、农业、化学分析、环境爱护、能源开发和生命科学理论讨论等各个方面。
如何使酶工程的教学适合时代进展的需要,培育合格的从事酶工程讨论及生产的技术人才, 是从事酶工程教学环节中不容忽视的问题。
笔者将工作中的教学体会介绍如下。
1. 教学内容的合理化1.1 注意绪论的讲解,激发同学的学习爱好绪论是一部书的开篇,主要起到介绍和导读的作用。
在绪论部分老师向同学展现本门课程学习的思路、主要内容、重点内容、主要观点与其它学科领域的联系等,让同学对该课程有一个充分的了解。
同时, 在绪论中老师还可利用生动、鲜亮的例子使同学们了解酶工程在生物技术领域中的重要地位;酶工程进展的历史、现状和进展前景, 以及在经济进展中的地位;主要的工业产品、讨论的热点与难点等。
生动、精彩的开头既能调动同学对该门课程的学习爱好, 也能使同学在后继课程的学习中理清思路、明确目标,并利于同学对所学内容的深化理解。
1.2 讲授内容主干清楚、条理分明1.3 适时更新教学内容21世纪的今日,生物技术产业不断、快速的进展。
酶工程作为生物工程的重要组成部分,每时每刻都会有新的技术、新的产品消失。
酶制剂工业给社会带来的效益额以约18%的速度不断增加。
估计今年将到达30亿美元。
因此,对生物工程专业的同学讲授酶工程的课程更要注意内容的支配,以教材为主的同时,帮助其他的参考资料。
例如,我们将郭勇编着的《酶工程》作为指定的教材,同时融合熊振公平编着《酶工程》,梅乐和等编着《现代酶工程》,孙君社等编着《酶与酶工程及其应用》,孙俊良编着《酶制剂生产技术》,沃尔夫冈?埃拉(Wolfgang Aehle)主编《工业酶—制备与应用》等参考书籍,以及期刊和在线资料的内容,对教学内容随时加以补充和更新。
食品加工中酶工程的运用探究-食品安全论文-社会学论文
食品加工中酶工程的运用探究-食品安全论文-社会学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——摘要：通过阐述酶工程的内涵特征, 对酶工程在食品加工中应用进行探讨, 旨在为促进食品加工的有序进行研究, 并提供一些思路。
关键词：酶工程,食品加工,应用酶的生产、应用的科学技术过程即为酶工程, 其是一门依托工程方式方法将相关原料转化为有价值物质并应用于社会生活的科学技术。
近些年, 伴随酶工程的广泛推广, 食品种类、质量呈现出明显提高的趋势, 为食品产业创造了极大的经济效益。
作为一项新型的环保工程, 酶工程在食品加工有着十分可观的应用潜力。
由此可见, 对酶工程在食品加工中的作用开展研究, 有着十分重要的现实意义。
1 酶工程概述酶工程, 亦可称之为蛋白质工程学, 自应用层面而言, 其是经由酶学理论与化学工程相结合对酶开展研究。
通过将酶或细胞器、动植物细胞、微生物细胞等置于相应的生物反应装置中, 借助酶的催化作用, 依托工程方式方法将原料转化成产物的一门新兴技术。
酶大多源自动植物及微生物。
酶的生产指的是经由人为的科学计划, 同时经由人工控制而收获对应需求酶的过程。
因为酶在生物体内含量十分低, 所以工业领域绝大部分酶均是通过微生物发酵来生成的。
酶的生产方法, 主要包括有: (1) 发酵法。
发酵法指的是经由微生物发酵以获取对应需求的酶。
通常包括有原生质体发酵、液体深层发酵、固体发酵等一系列方式。
(2) 提取法。
提取法指的是运用相关技术, 直接从细胞或者组织中对酶进行提取。
提取法操作便捷, 然而对原材料要求较为严苛, 因而仅适用于一些资源较为丰富的地区。
(3) 化学合成法。
化学合成法需要投入较高的成本, 且仅可合成一些现有化学结构的酶。
因而, 该种生产方法现阶段依旧停留在实验室合成阶段。
2 酶工程在食品加工中应用在当前社会发展新形势下, 食品加工行业相关人员要紧紧跟随社会前进步伐, 不断开展改革创新, 强化对先进技术的学习借鉴, 切实促进食品加工的顺利开展。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
酶的固定化方法
李启东 0810135
酶在现代生物生产中扮演着重要角色。
酶作为一种生物催化剂，因其催化作用具有高度专一性、催化条件温和、无污染等特点，广泛应用于食品加工、医药和精细化工等行业。
但在使用过程中，人们也注意到酶的一些不足之处，如酶稳定性差、不能重复使用，并且反应后混入产品，纯化困难，使其难以在工业中更为广泛的应用。
为适应工业化生产的需要，人们模仿人体酶的作用方式，通过固定化技术对酶加以固定改造，来克服游离酶在使用过程中的一些缺陷。
本文结合当前酶的固定化研究和本人的一些观点，论述酶的固定化简史和方法。
酶的固定化有很多优点。
将酶固定化以后，既保持了酶的催化特性，又克服了游离酶的不足之处，使其具有一般化学催化剂能回收反复使用的优点，并在生产工艺上可以实现连续化和自动化。
事实上，早在1916年，Nelson和Griffin就用吸附的方法实现了酶的固定化，他们将蔗糖酶吸附在骨炭粉上，发现吸附以后酶不溶于水而且具有和液体酶同样的活性，然而这个重要的发现长期以来没有得到酶学家的重视。
直至1953年Grubhofer和Schleith将聚氨基苯乙烯树脂重氮化，然后将淀粉酶、羧肽酶、胃蛋白酶和核糖核酸酶等酶与这种载体结合，制成了固定化酶。
酶的固定化方法很多，包括吸附法、包埋法、共价结合法、交联法、无载体固定化和不同固定方法联用。
固定化以尽可能保持酶的催化活性及专一性、酶与载体必须有一定的结合程度、固定化酶应有最小的空间位阻、固定化酶的成本适中等为原则。
（一）吸附法
利用酶与载体之间的范德华力、疏水相互作用、离子键和氢键等作用力实现固定化，分为物理吸附法和离子吸附法。
物理吸附法常用的有机载体如纤维素、胶原、淀粉及面筋等；无机载体如活性炭、氧化铝、皂土、多孔玻璃、硅胶、二氧化钛、羟基磷灰石等。
该法操作简单、价廉、条件温和，载体可反复使用，但酶和载体结合不牢固，在使用过程中容易脱落，使用受限。
常与交联法结合使用。
离子吸附法是通过离子键使酶与载体相结合的固定化方法。
所使用的载体是某些离子交换剂，如DEAE-纤维素和混合胺类(ECTEOLA)-纤维素等（阴离子交换剂）、IRC-50、IR-200、Dowex-50等（阳离子交换剂）。
该法吸附容量一般大于物理吸附剂，操作简便、条件温和、酶活
力不易丧失等优点。
（二）包埋法
将酶包埋在高聚物的细微凝胶网格中（凝胶包埋法）或高分子半透膜内（微胶囊包埋法）的固定化方法。
凝胶包埋法常用的载体有海藻酸钠凝胶、角叉菜胶、明胶、琼脂凝胶、卡拉胶等天然凝胶以及聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和光交联树脂等合成凝胶或树脂。
微胶囊包埋即将酶包埋在各种高聚物制成的半透膜微胶囊内的方法。
常用于制造微胶囊的材料有聚酰胺、火棉胶、醋酸纤维素等。
（三）共价结合法
是将酶与聚合物载体以共价键结合的固定化方法。
包括溴化氰法、乙基氯甲酸酯法、碳二亚胺法、重氮法、3-氨基丙基三乙基氧硅烷法、戊二醛活化法、叠氮法。
下面简要列举一些共价结合法。
溴化氰法是用溴化氰将含有羟基的载体，如纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等，活化生成亚氨基碳酸酯衍生物，然后再与酶分子上的氨基偶联，制成固定化酶。
任何具有连位羟基的高聚物都可用溴化氰法来活化。
由于该法可在非常缓和的条件下与酶蛋白的氨基发生反应，近年来已成为普遍使用的固定化方法。
尤其是溴化氰活化的琼脂糖已在实验室广泛用于固定化酶以及亲和层析的固定化吸附剂。
重氮法是将酶蛋白与水不溶性载体的重氮基团通过共价键相连接而固定化的方法，是共价键法中使用最多的一种。
常用的载体有多糖类的芳族氨基衍生物、氨基酸的共聚体和聚丙烯酰胺衍生物等。
叠氮法是将载体活化生成叠氮化合物，再与酶分子上的相应基团偶联成固定化酶。
含有羟基、羧基、羧甲基等基团的载体都可用此法活化。
如CMC、CM-sephadex（交联葡聚糖）、聚天冬氨酸、乙烯-顺丁烯二酸酐共聚物等都可用此法来固定化酶，其中使用最多的是羧甲基纤维素叠氮法。
由上面的例子可以看出，用共价键结合法制备的固定化酶，酶和载体之间都是通过化学反应以共价键偶联。
由于共价键的键能高，酶和载体之间的结合相当牢固，具有酶稳定性好、可连续使用较长时间的优点。
但是采用该法时，载体活化的难度较大，操作复杂，反应条件较剧烈，制备过程中酶直接参与化学反应，易引起酶蛋白空间构象变化，需要严格控制操作条件才能获得活力较高的固定化酶。
（四）交联法
是使用双功能或多功能试剂使酶分子之间相互交联呈网状结构的固定化方法。
由于酶蛋白的功能团，如氨基、酚基、巯基和咪唑基，参与
此反应，酶的活性中心构造可能受到影响，而使酶失活明显。
尽可能地降低交联剂浓度和缩短反应时间将有利于固定化酶活力的提高。
常用的双功能试剂有戊二醛(最常用)、己二胺、异氰酸衍生物等。
戊二醛和酶蛋白中的游离氨基发生Schiff反应，形成希夫碱，从而使酶分子之间相互交联形成固定化酶。
（五）无载体固定化
无载体固定化是指无外来惰性载体的情况下固定酶。
具有回收方便、较高的催化比面积、较高的催化活性、稳定性高、孔径较大方便物质进出、制备简单、成本低、容易实现多种催化剂共交联等优点。
现如今已经成为酶学研究的重点方向。
包括交联溶解酶、交联酶晶体、交联酶聚集体、交联喷雾干燥酶等形式。
（六）不同固定方法联用
综合以上的固定化方法我们可以发现，不同的固定化方法各有自己的优缺点，在实际操作中，经常把各种固定化方法联合使用，从而获得最佳的固定化效果。
要针对需要固定化酶的实际情况，选择合适的联合使用方法，得到最佳效果。
酶的固定化方法很多，我们要不断的探索新的方法，不断改进酶的固定化方法。
从而更好的服务于生产和生活的需要。