冰冻切片详细说明
医院冰冻切片技术操作规程
冰冻切片技术操作规程
1.接通电源开关，打开箱内照明灯，设定或调整切片温度（-25℃左右）。
将切片刀装入持刀架上固定。
2.将待切样品以OCT包埋在持物托上置于切片机冷冻台冷冻，打开速冻开关。
待切片机箱内温度达到设定温度及样品冻硬后，将样品连同持物托一同置于持物架上，固定。
3.右手转动旋转轮，左手间断按动样品前进开关，使样品徐徐向前推进，直至组织平面完全修出平整。
4.调整好防卷板至刀刃平行，定好欲取切片的厚度标尺（6-10微米），放下防卷板，速度均匀的转动切片机旋转轮，切片。
5.打开防卷板，用玻片吸附切片，切片会自然附贴于玻片上。
以95%乙醇固定1-3分钟即可进行染色。
6.染色完毕后，将持物托上的剩余组织放入有编号的包埋盒内并固定。
将持物托用水洗涤干清、擦干备用。
7.将切片机中的碎组织彻底清理干净，用棉花蘸无水酒精轻轻擦拭防卷板及刀架。
8.关闭箱内照明灯，将切片机温度调至保持温度（-6℃）。
冰冻切片步骤很全面
冰冻切片步骤很全面冰冻切片是一种常用的实验技术，在生物学、医学研究、组织学观察等领域有着广泛应用。
以下是一份详细的冰冻切片步骤，旨在提供全面的指导。
注意，不同的实验目的可能会有一些差异，因此请根据实际需求调整步骤。
1.準备1.1获取你所需的样本。
这个样本可以是活体动物的组织，也可以是固定处理后的组织。
1.2准备冷冻介质。
通常使用的冷冻介质包括液氮、干冰和冷冻套。
液氮是一种非常冷的液体，可以迅速冻结样本。
干冰是固态二氧化碳，可以提供较低的温度。
冷冻套是一种装置，可以通过循环冷却剂来维持全套工具的较低温度。
1.3准备工具和设备。
这些工具和设备通常包括切片机、切片模具、刀片、显微镜片和刷子。
1.4调整工作环境。
确保实验室温度适宜、空气流通，并消毒工作台和其他工具。
2.样本取样和固定2.1根据实验目的，选择合适的样本区域。
例如，在动物研究中，你可能需要选择大脑的特定区域。
2.2切下样本。
使用手术器械，例如手术剪刀和手术刀，在样本区域周围切下足够大小的组织块。
2.3快速固定样本。
使用适当的固定液将样本固定。
常用的固定液包括10%缓冲福尔马林和4%聚乙二醇。
将样本完全浸没在固定液中，确保完全固定，避免其损伤。
3.冷冻3.1冷冻样本。
将固定的样本迅速置于冷冻介质中。
如果使用液氮，直接将样本放入液氮中。
如果使用干冰，将样本放入常温下事先准备好的干冰盒中，并立即放入冷冻套中。
3.2冷冻条件。
根据样本的性质和实验要求，选择适当的冷冻条件。
通常情况下，液氮的温度低于-150°C，而干冰的温度大约为-78°C。
3.3冷冻时间。
样本的冷冻时间取决于其大小和固定液的穿透性。
通常情况下，较小的样本需要较短的冷冻时间，而较大的组织块需要较长的冷冻时间。
一般而言，冷冻时间为几个小时到几天。
4.切片4.1为切片做准备。
在切片之前，将切片模具放在切片机上，并冷却至所需的温度。
同时，将刀片插入切片机。
4.2取出样本。
冰冻切片
冷冻切片一、恒温冷冻切片将组织在恒温冷冻切片机里切片。
冷冻腔内的温度一般设置为-18至-25℃，根据不同组织调节不同的腔温，平时应将冷冻头放置于冷冻台上。
冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态。
(1)、当冰冻组织取好后，有速冻开关的机器可先将开关打开，再在冷冻头上放少量的OCT或羧甲基纤维素(可用普通胶水代替)，放上组织，速冻。
(2)、待组织冻结后，将冷冻头装到切片机上(3)、粗切，修出切面细切几张，用毛笔刷去刀上组织片(4)、放下抗卷板，开始切片，切片厚度一般为5～6微米，切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇中固定，固定时间为10～20秒(5)、水洗(6)、苏木素1分钟(7)、水洗(8)、盐酸酒精分化1秒钟(9)、水洗(10)、温水蓝化(11)、伊红2～5秒钟(12)、梯度酒精快速脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
冰冻切片的注意事项:(1) 速冻：是冰冻切片的关键，因为只有速冻才能减少组织内的冰晶，最好的办法是将速冻头迅速压在组织上，冻好后就可切片。
特别适用于较脆的组织。
而含有脂肪较多的组织，最好放在液氮里处理。
在液氮里冷冻要注意不要冻过头，2～3秒钟就要拿出来看一下，只要有4/5的组织已经冻住就可以了，待冷冻头拿出后刚好全部冻住，否则就会引起组织发脆，或冷冻头与组织分离。
(2)固定：切片后应立即放入甲醇中固定，不能等切片干后再固定，后者容易造成细胞退变。
固定液有很多种，根据我们的实践，认为甲醇作用快，收缩小，染色较清晰，是冰冻切片最理想的固定液。
如加5%冰醋酸较果更好。
(3)包埋剂：可用普通胶水代替，但要加入适量的水（胶水与水的比例大约在2：1左右）。
太稀了，容易损伤切片刀；太稠了，粘在切片上不容易洗掉,影响切片的质量。
(4)冰冻用切片刀不仅要磨的快，而且要磨的直，否则切出的片子就不会平整,不能进入抗卷板。
最好能使用一次性刀片。
(5)如组织发脆，可等几分钟后再切，也可用手在组织上稍稍加温；如果用手去摸组织块，最好戴手套，或用玻片间的纸夹在手与组织之间，以防感染。
一文带你了解冰冻切片_1
一文带你了解冰冻切片发布时间：2021-03-22T13:16:34.660Z 来源：《医师在线》2020年11月21期作者：宋体梅[导读] 一文带你了解冰冻切片宋体梅（蓬安县人民医院；四川蓬安637800）冰冻切片指的是采用切片机对冷冻状态下的组织进行直接切片，实际上是通过水作为包埋剂，冰冻组织至坚硬状态后切片。
在冰冻切片前，不采用化学药品处理或加热组织，以此大大缩短纸片时间。
同时该纸片法无需脱水透明和浸蜡等步骤，多用于脂肪、神经组织和部分组织化学的纸片，作为一种高效的切片方式在临床诊断中广泛应用。
一、术中为何要做冷冻切片？众所周知，手术病理诊断中通常会做快速冷冻切片，但是很多人不一定了解为什么要做冷冻切片，其他切片也可以代替冷冻切片吗？常标准石蜡切片是临床病理检查中最常用的方法。
通常的做法是将脏器切除，并进行一系列后续的技术处理，包括固定、脱水、石蜡浸渍、包埋、切片、染色。
正常切片过程至少需要24小时完成，检查医师用显微镜观察分析，做出病理诊断，前后约需要3天。
一些外科医生没有太多的等待时间，需要在手术过程中立即了解病变的性质，从而缩小手术范围，进行合理的处理，这需要手术中的医生进行病理诊断，因此需要活检诊断速度快、效率高，冷冻切片时间短，通常需要30分钟左右的时间来完成整个诊断过程，外科医生可根据病理诊断改进手术方式，避免多次二次麻醉和手术，大大降低了患者的重复费用。
二、如何开展冷冻切片？（一）取材应尽可能地在短时间内取得新鲜的材料，避免组织产生死后变化。
（二）速冻为了保护细胞内的酶活性，缩短切片标本的制备时间，通常需要在取样后冷冻组织块，降低组织温度，缩短冷却时间，避免冰晶的形成。
实验室冷冻切片最常用的方法为液氮冷冻切片法，具体操作方式为将软塑料帽或专用小盒放入组织中，如组织块过小，则加入COT浸泡包埋介质组织，准备小杯、液氮，将小盒放入小杯中，当小盒底部与液氮沸腾气化反应时，保持小盒原位避免浸入液氮中，但是10到20秒，组织就会迅速冻结成碎片。
冰冻切片步骤 很全面
冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。
它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。
在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程，大大缩短了制片时间。
同时，由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤，因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的方法应用在临床诊断。
1.取材：应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。
2.速冻：为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要，一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻，使组织温度骤降，缩短降温的时间，减少冰晶的形成。
液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。
具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。
若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用。
3．固定：样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4℃冰箱预冷5-10min 让OCT胶浸透组织。
取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。
组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE）上30min。
4.切片：恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-10μm。
切片时，低温室内温度以-15℃～-20℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
切好室温放置30min后，入4℃丙酮固定5~10min，烘箱干燥20min。
PBS洗5min×3。
进行抗原热修复，微波热修复也可，室温自然冷却。
可用3%H2O2孵育5~10min，消除内源性过氧化物酶的活性。
第三节冰冻切片介绍
第三节冰冻切片介绍冰冻切片术是一种常用的组织学技术，可以用于研究人体组织和动物组织的结构和功能。
它可以提供组织的横断面，便于观察不同结构的细胞和组织。
本文将介绍冰冻切片的原理、步骤和应用。
一、冰冻切片的原理冰冻切片是通过将组织固定在低温下进行切割，从而得到组织横切面的方法。
冷冻技术能够减少组织的变性和破坏，可以保留细胞和组织原有的形态和结构。
在常温下，组织中的脂质和蛋白质会被破坏，切片过程中也容易产生伤口和变形。
而低温冷冻可以减少这些问题的发生，使切片更加准确和可靠。
二、冰冻切片的步骤1.组织固定：将新鲜组织（或已加工处理的组织）固定在适当的固定液中，如4%的甲醛。
固定的时间根据组织的性质和要研究的问题而定，一般在几小时到几天之间。
2.组织置于冰箱中冷冻：将固定的组织置于冷冻器中进行冷冻，通常是在-20摄氏度以下。
冷冻的时间根据组织的大小和要研究的问题而定，约为几小时到一天。
3.制备冰冻切片：将冷冻的组织取出，放在切片机的架子上。
使用冰冷的刀片对组织进行切割，得到所需的冰冻切片。
切片的厚度根据组织的性质和要研究的问题而定。
4.切片上薄片：将冰冻切片绕在切片刀上，并用玻璃刀刮去多余的细胞和组织。
然后将切片放在玻璃片上，并以适当浓度的甘油溶液滴在切片上，使切片保持湿润。
5.染色和保存：根据需要将切片进行染色，使用常用的染色方法如血液染色、免疫染色等。
染色完成后，将切片放在一个干燥的玻璃片上，然后用封闭剂将切片封闭，以防止切片的变形和损坏。
最后，将切片保存在适当的环境中，避免阳光暴晒和湿气侵入。
三、冰冻切片的应用冰冻切片技术在医学研究和临床诊断中有广泛的应用。
1.病理学研究：冰冻切片可以用于观察组织的病理变化，如细胞增生、坏死和变异等。
通过冰冻切片技术，可以更加准确地诊断和鉴定疾病。
2.免疫组化染色：冰冻切片可以进行免疫组织化学染色，用于检测和定位特定蛋白质的表达。
通过这种方法，可以研究细胞和组织中特定分子的分布和功能。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
冰冻切片技术原理
冰冻切片技术原理冰冻切片技术是生物学领域中常用的一种技术，用于获得活体组织的高分辨率、高质量的切片样品。
这种技术能够保留组织的细胞结构和功能状态，并且可以用于进一步的光学显微观察、免疫染色和分子生物学分析。
冰冻切片技术主要包括冰冻、固定和切割三个步骤。
首先，冰冻是冰冻切片技术的第一步。
样品通常是通过浸泡在液氮中或使用特殊冷冻剂使之迅速冷冻。
在快速冷冻的过程中，水分子会形成冰晶，冻结组织细胞内的各种分子和结构，并起到了一个固定的作用，以保留细胞结构的完整性。
其次，固定是冰冻切片技术的第二步。
固定可以用于进一步固定组织内的分子和结构，以增加样品的稳定性和可视性。
常用的固定剂有乙醛、戊醛和混合溶液等。
固定可以通过交联细胞中的蛋白质和核酸，以防止其在切割过程中的失去或变性。
最后，切割是冰冻切片技术的第三步。
切割一般使用切片机或显微镜下的微操纵器进行。
切割机通常可以根据需要调整切片的厚度，一般为几微米至几十微米。
在切割过程中，样品需要保持冷冻状态，以保持细胞结构的完整性。
切割的刀片也需要保持锋利和无尘，以避免样品受到污染或结构损坏。
冰冻切片技术的原理主要是基于快速冷冻和固定的原理。
在快速冷冻过程中，组织内的水分子迅速形成冰晶，使细胞和组织的分子结构被固定，以保持其形态和功能的完整性。
同时，固定剂的使用可以进一步固定组织内的分子和结构，增加样品的可视性和稳定性。
通过冰冻切片技术可以获得高分辨率、高质量的切片样品，并可在进一步的显微观察、免疫染色和分子生物学分析中使用。
冰冻切片技术的优点在于它能够保留细胞和组织的细微结构和功能状态。
相比于传统的石蜡包埋切片技术，冰冻切片技术更适用于需要保留细胞结构和功能的研究。
此外，冰冻切片技术还可以用于多种组织类型的切割，如生物样本、植物组织、动物组织等。
总之，冰冻切片技术通过快速冷冻和固定的原理，可以获得高分辨率、高质量的切片样品。
它保留了组织的细胞结构和功能状态，并可用于进一步的显微观察、免疫染色和分子生物学分析。
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冰冻切片详细说明切片技术最早期是从冰冻切片开始，后来逐步有了发展和更新，冰冻切片弥补了石蜡切片和火棉胶切片之不足，石蜡切片和火棉胶切片需时太久，且在制片中要使用许多化学试剂，石蜡切片还需要加温过程，因而某些重要的不稳定的组织成分如脂类、酶以及抗体等，可能被溶解和破坏。
冰冻切片过程较简单，无须经过上述步骤，组织中的水分起着包埋剂的作用，组织经固定或不固定即可进行冰冻切片，切片厚度一般可在6-8微米，组织没有收缩，易保持生活时原有状态，是保存脂肪组织，许多神经组织特殊染色方法和组织化学方法，特别是酶的活性十分理想的切片方法，对于外科临床诊断和现代免疫荧光诊断，冰冻切片也很重要。
一、直接冰冻切片法冰冻切片多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。
组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。
1．恒冷箱切片就是将组织在恒冷箱的切片机切片。
目前恒冷箱切片机的品种较多。
此种切片适用于科研和教学上的连续切片。
要求预先开动电源（预冷准备），配多种固定组织台，以便更换组织。
2．甲醇制冷器制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装制，其冷却速度比较快，属于开放式，作一般常规冰冻切片用。
3．二氧化碳冰冻法将组织用蒸馏水洗后，放在冰冻切片机的冷冻台上，加蒸馏水少许。
打开冷冻台的二氧化碳开关，二氧化碳气体喷出，待组织出现冷霜时，将二氧化碳关闭，即可切片。
若组织冷冻过硬则切片易碎；组织冷冻硬度不足，则切片呈粥糜状，需用间歇方法继续冷却。
硬度一般在刚开始解冻时最合适，应迅速切片。
4．半导体致冷冰冻切片法将组织置半导体致冷台上，滴加少许蒸馏水，调好切片机的厚度。
⑶移至25%明胶溶液内浸6-24h。
⑷25%明胶包埋，连同包埋器放入冰箱内使明胶迅速凝固，取出后在空气中蒸发10min 。
⑹蒸馏水洗后，置冰冻切片机或滑动式切片机切片。
切片可保存于10%甲醛液中。
⑺依检查目的而进行染色，染色后一般不经乙醇脱水及二甲苯透明，而用下述明胶溶液或其他类似的明胶溶液封片：果糖26g,明胶1.1g，钾矾0.75g，麝香草酚水溶液1.15ml。
先将果糖溶于麝香草酚饱和液，置于56℃温箱内12h，加明胶后在水浴内加温熔化，过滤后加钾矾。
于100ml溶液内加甲醛2ml防腐。
三、冰冻切片粘片法2．Lillie明胶粘片法将切片放入1%明胶水溶液数分钟，捞出置于载玻片上，将多余液体倾3．乙醇明胶粘片法切片浸入0.1%或0.75%明胶溶液（以40%乙醇配制）数分钟，捞于载片上，经室温短时干燥，入氯仿1min ,经95%及70%乙醇洗去氯仿，再经蒸馏水洗后染色。
四、冰冻包埋液包埋切片OCT Compound 法现在国内外有许多厂家用高分子材料配制成冰冻切片包埋液，将冰冻包埋液直接可直接在切片机组织卡盘（chuck）上加少许包埋液，在其固化前嵌入组织块，然后再于组织周围加入少许包埋液稳定。
常规切片，厚度2-100微米。
或者在盛标本的包埋模具内，挤出适量冰冻包埋液，放入组织块或细胞沉淀块，加包埋剂完全淹没组织块，如有气泡可用针头或吸头吸出。
速冻：将盛有组织细胞和包埋液的模具，正置于切片机冷室内冰冻10分钟，至包埋液固化。
也可将盛有组织的模具置于液氮或-40-70度冰箱冰冻固化保存，用前取出置于切片机冷室内平衡温度（否则损坏刀片）。
冰冻包埋液是由高分子聚合物组成的透明粘稠液体，速冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与冰冻切片——组织块的准备1.调整好组织与刀片的方向这是冰冻切片准备中极为重要的方面，使用冰冻切片组织包埋液可以使这项工作变得简单，在我的工作中我总结出一些经验可供参考。
a.脂肪放在最后切。
脂肪由于硬度不够，对绝大多数组织均合适的温度却切不好脂肪组织，如果一刀下去，组织中的脂肪先接触刀片，就会破碎并使整个片子损坏。
如果脂肪最后接触刀片，则切片过程不受干扰。
最糟糕的情况是脂肪部分先接触刀片而没有冰冻切片包埋液（如西奈山品牌）的保护，冰冻包埋液可以给片子提供一个起始的缓冲，如果没有包埋，脂肪就会切碎并把整个片子破坏。
当切片过程中由于脂肪的出现而影响质量时，我要么把摇柄转回去尽量避免，要么把脂肪挖出来。
b.组织与刀片垂直或成角是关键。
让我们假设组织由起始端、中间部分及末尾端三部分构成，起始端容易卷缩，或受到刷子的损害，还可能由于操作者的犹豫而引起片子的厚薄不均，这些都增加了假象的风险。
末尾端在贴片时容易拉长，最好的是中间部分，最不可能出现假象，并且组织学上最干净，这是片子中最理想的部分。
非常坚实的组织容易产生横皱，切片时应包埋成角且尽可能的加温。
成角包埋就像坐着船冲浪一样，如果你直线行驶，就会承受波浪线上最大的冲击，如果成角行驶，波浪线就会拉伸，所受的颠簸也会减小。
跟公路上的减速脊一样的原理。
上皮和粘膜贴附的组织如皮肤，胃肠，膀胱，子宫，颈部等，应当使上皮面垂直于刀片（见下图）。
2.组织块的温度任何组织都有一个理想的切片温度，在此温度下切片，组织片以平滑均一的形式流过刀片，几乎没有卷缩。
当温度、组织类型、刀片均处于理想状态时，切片十分流畅，几乎不用刷子。
如果温度太低，片子容易卷曲和破碎；如果温度太高，片子就会皱成一堆。
如果需要加温，只需要把大拇指置于组织块面几秒钟；如果需要降温，可以使用机子的精确低温包埋系统，简单的做法就是把过冻的冻台放在组织面上几秒钟，大多数的冰冻切片机都有一种热吸收器可以使用。
3.组织块的填涂——基本的修复填涂可以解决组织块自身的缺陷，下面我举几个具体的例子。
(1)扁平包埋组织的填涂包埋扁平的组织时，只有一层薄薄的包埋物贴附在底面，而且包埋物会轻微地收缩与组织块分离，如果想以最小的休整开始切片，那么收缩的空间必须填涂上包埋物，如果不填涂，切片时组织便会与包埋物分离，从而很难获得一张完整的片子。
下面这个简单的技巧可以使你获得一个整齐的组织面。
(2) 针头的移除在工作中经常会收到布满针头的标本，有时候针头会穿过整个组织，导致刀片的损坏并使片子一分为二，下面有一种简单的解决办法。
接到标本后快速冰冻。
2、切片厚度6—7微米。
3、切片完整，无污染，无皱褶。
4、切片完成后立即固定。
5、染液，脱水液必须及时更换。
6、封固前必须经酒精脱水，环保组织液透明，湿封。
7、封片时不得有气泡，不得有树胶外溢。
8、标签必须贴于玻片左侧，编号字迹必须清楚。
9、制片工作一般应在15—20分钟内完成。
10、冰冻报告后及时将“冰对”组织放入环保组织固定液内。
11、每天操作完成后，及时对机器进行清理和消毒。
（3）缝线的移除同样的方法移除组织块中的缝合线（4）挖凿的技术当组织块中某些部分不需要或阻碍我们获得高质量的切片时，我们就可以将它挖除掉。
最好的例子就是脂肪组织干扰切片，常见于切除的淋巴瘤用于检查是否癌转移。
如果脂肪先于组织块中的其他部分接触刀片，你首先可以试着转动组织块，如果不行，就可以将它挖掉，然后用冰冻包埋液填充。
学会看片子这里指的是片子滑过刀片时就要辨别出质量的好坏，如果到镜下才发现片子的缺陷那就无法挽救。
1.观察片子的厚薄尽管冰冻切片机可以设置厚度，但人为辨别片子的厚度是否合适仍然很重要。
片子太薄看起来象半透明的镜纸，片子太厚看起来混浊、柔性差，对我来说，5-6um的片子较合适，象一张薄的打印纸。
3.片子上的条纹垂直于刀片的细条纹为刀片缺口所致，这往往是切到钙化组织、针头或缝线的结果。
4.波浪线样的横皱这是切片机零件松动的征象，可能需要修理，切片时刀片有移动或支撑刀片的机子有移动时，1.尽可能的削掉不需要的脂肪组织当我准备切淋巴结时，我会先检查一遍，小心翼翼地除掉表面及髓内的脂肪，结内的脂肪用解剖刀刮擦掉，被膜线附近的脂肪用刀切除，这样就不需要切开整个淋巴结被膜。
有人会说，我把一些组织去掉后，可能导致漏判一些阳性的淋巴结，但我的经验是好的干净的片子比含有太多脂肪的差片子更容易获得阳性的结果。
当你在休整组织或切片的过程中脂肪组织意外出现时，你也可以使用前面的挖凿技术。
2.调整组织块的方向使脂肪最后接触刀片切片时尽量避免脂肪先接触刀片，因为脂肪会脱离包埋物，在切片上留下一个洞，如果不能避免，也要在其周围加上包埋物，让包埋物先接触刀片。
3.保证刀片、台面的干净及组织块的冷冻程度切片机的台面和刀片必须保持干净，假如你弄碎了一张片子必须即时用一块干纱布清理干净，但要防止刀片割手，如果你发现切出来的片子有条纹或者堆积成束，可能是组织粘着在刀片的下方了，必须除掉刀片上的组织，并将刀片清理干净。
组织块越冷就越容易切脂肪，只是其他非脂肪组织就变得坚硬难切，同时水性的组织会裂开，这就有必要在切片温度的最冷端和最温端取一个二者兼顾的中间值，以使脂肪和非脂肪组织都能切好。
我一般将组织块冻在-24度，可以获得满意的结果，冷冻喷雾剂有用，但要注意先清掉切片机内的污秽。
用刷子敏捷地做出这套动作，那你肯定也能对脂肪组织切出理想的片子，脂肪在片子上会留下空的间隙，但它们之间的纤维条却保存完好。
下面这块乳腺癌及其周围有数毫米覆盖着墨水的脂肪组织，假如你调整好组织块的方向使脂肪边缘垂直于刀片，肿瘤组织就切得好，脂肪切片的角度会有变动，也会留下空隙，但总有一条墨迹线指示着边缘的所在。
很多时候我都用这种方法来区别肿瘤和脂肪组织。
冰冻切片的基本技术1.从锋利的刀片开始我发现使用新的锋利的刀片时常常做出高质量的片子。
我觉得在医疗场合中某些尽量省钱的做法显得有些因小失大。
一般我对每位患者的标本都使用一组新的刀片，当片子的质量开始下降时，我会立刻更换刀片。
某些组织如质地较硬的胶原和钙化组织会使刀片很快变钝，因此，经常更换刀片显得很有必要，有时候我在切片过程中要连续更换2-3次刀片。
2.坐着还是站着我切片时总是坐在一张凳子上。
要学会把刷子作为一种便捷的辅助工具来操作，从而精细地控制显微厚薄程度的片子。
切片时俯身弯腰，颈部过伸的姿势有些不妥，要尽量处于放松和舒适的姿势以便能最大程度控制你的左手。
3.刷子我是一位刷子的使用者。
我相信要想切好片子首先学会使用刷子。
刷子的作用就在于粘住片子并把片子弄到台子上。
冷冻的片子会自发的卷缩并从刷子上脱离下来，因此，我使用一把有硬毛、夹取面宽的刷子。
我发现来自中国的野猪毛十分坚硬，非常管用。
你可以花3美元从工艺店买一把1/4英寸长的#2号扁平无色的刷子，把毛削成一个角度。
由于是个有角的头端，加上握持刷子成一定的角度，这样刷子与组织接触时就会象扫帚一样的平。
我不能理解为什么有人使用脆弱的骆驼毛刷子，组织片很容易从这些柔软的毛上掉下来。
4.握持刷子左手象拿笔一样握持刷子，将第五指轻压于台面上以稳定握笔的手(或根据手和切片机尺寸的大小置于你感觉合适的地方)，这样可以保证操作者动作的灵活及可控性。
我把刷子削成一个角度，大致与左手握持刷子的角度相同，这样使刷子平着接触组织的1/4。