水质常规指标测定操作方法
水质常规指标测定操作方法
一、COD：
化学需氧量COD（Chemical Oxygen Demand），是在一定的条件下，采用一定的强氧化剂处理水样时，所消耗的氧化剂量。它是表示水中还原性物质多少的一个指标。采用重铬酸盐法测定（参看GB11914-89）
方法原理：
在强酸性溶液中，用一定量的重铬酸钾氧化水样中还原性物质，过量的重铬酸钾以试亚铁灵作指示剂，用硫酸亚铁铵溶液回滴。根据硫酸亚铁铵的用量算出水样中还原性物质消耗氧的量。
方法的适用范围：
用0.25mol/L浓度的重铬酸钾溶液可测定大于50mg/L的COD值，未经稀释水样的测定上限是700mg/L，用0.025mol/L浓度的重铬酸钾溶液可测定5~50mg/L的COD值，但低于10mg/L时测量准确度较差。
所需仪器和实验用品：
1.硫酸汞：化学纯
2.硫酸-硫酸银试剂：向2500ml浓硫酸中加入25g硫酸银，放置1~2天，使之溶解，
并混匀，使用前小心摇动。
3.重铬酸钾标准溶液（1/6K2CrO7=0.25mol/L）：称取预先在120℃烘于2h的优级纯
重铬酸钾12.258g溶于水中，移入1000m容量瓶，稀释至标线，摇匀。
4.硫酸亚铁铵标准溶液[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O≈0.1mol/L]：称取39.5g硫酸亚铁铵溶于
水中，边搅拌边缓慢加入20ml浓硫酸，冷却后移入1000ml容量瓶中，加水稀释
至标线，摇匀。临用前，用重铬酸钾标准溶液标定。
标定方法：准确吸取10ml重铬酸钾标准溶液于500ml锥形瓶中，加水稀释至110ml
左右，缓慢加入30ml浓硫酸，摇匀。冷却后，加入3滴试亚铁灵指示液（约0.15ml），
用硫酸亚铁铵溶液滴定，溶液的颜色由黄色经蓝绿色至红褐色即为终点。
c[(NH4)2Fe(SO4)2]=0.25×10/V
式中：c----硫酸液铁铵标准溶液的浓度（mol/ L）；
V---硫酸亚铁铵标准滴定溶液的用量（ml）。
5.试亚铁灵指示液：称取1.458g邻菲啰啉，0.695g硫酸亚铁溶于水中，稀释至100ml，
贮于棕色瓶内。
6.滴定台，酸式滴定管
7.COD消解管与COD消解仪
实验步骤：
取1ml水样，加入到COD消解管，加1ml去离子水，再加入1ml重铬酸钾，再加入
3ml的硫酸－硫酸银，置于COD仪消解2小时。消解后冷却半小时左右，用硫酸亚铁氨滴定。滴定时，将消解后的混合液倒入锥形瓶，加入1滴1，10-菲绕啉指示剂，摇匀，用硫酸亚铁氨滴定，溶液颜色由黄色经蓝绿色变为红褐色即为终点。记录滴定所用体积。
结果表示：
水样COD浓度（mg/L）=COD系数*水样滴定体积。
COD系数测定方法：于150ml锥形瓶中加入2ml的重铬酸钾，8ml去离子水，再加入3ml浓硫酸，冷却后加入一滴指示剂，用硫酸亚铁铵滴定，溶液颜色由黄色经蓝绿色变为红褐色即为终点。记录滴定所用体积。
COD系数=重铬酸钾浓度*2 *8*1000/滴定体积
总磷：
总磷包括溶解的、颗粒的、有机的和无机磷。采用钼酸铵分光光度法（参看GB11893-89）方法原理：
在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵、酒石酸锑氧钾反应，生成磷钼杂多酸，被还原剂抗坏血酸还原，则变成蓝色络合物，通常即称磷钼蓝。
方法的适用范围：
本方法最低检出浓度为0.01mg/L(吸光度A=0.01时对应的浓度)；测定上限为0.6mg/L。所需仪器和实验用品：
1.硫酸：1+1
2.过硫酸钾，50g/L溶液：将5g过硫酸钾溶于去离子水，并稀释至100ml。
3.10%抗坏血酸：溶解10g抗坏血酸于去离子水中，并稀释至100ml。贮于棕色瓶中，
在约4℃可稳定几周。如颜色变黄，则弃去重配。
4.钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵于100ml水中。溶解0.35g酒石酸锑钾于100ml水中，
在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300ml（1+1）硫酸中，加酒石酸锑氧钾溶液
并且混合均匀。贮于棕色瓶中，在约4℃至少稳定两个月。
5.磷酸盐贮备溶液：将优级纯磷酸二氢钾于110℃干燥2h，在干燥器中放冷。称取
0.2197g溶于水，移入1000ml容量瓶中。加（1+1）硫酸5ml，用水稀释至标线。
此溶液每毫升含50μg磷（以P计）。
6.磷酸盐标准使用液：吸取10ml磷酸盐贮备液于250ml容量瓶中，用水稀释至标线。
此溶液每毫升含2μg磷。临用时现配。
7.50ml比色管
8.分光光度计
实验步骤：
取水样（使含磷量在测量范围内）加到50ml的比色管，去离子水定容到25ml，加入4ml过硫酸钾，摇匀，高压锅消解。冷却30min，用去离子水定量到50ml，加入1ml抗坏血酸，摇匀，15S后加入2ml钼酸盐，摇匀，显色15min后，单波长700nm下比色，空白样调零。同时做一个空白，用去离子水代替水样，操作步骤同上。
标准曲线的绘制：向10支比色管中，分别加入磷酸盐标准使用液0.0，0.50，1.00，3.00，5.00，10.00ml，15ml。加水至25ml，然后操作步骤同水样测试操作步骤。以水做参比，测定吸光度。扣除空白试验的吸光度后，和对应的磷的含量绘制工作曲线。
结果表示：
总磷含量（mg/L）=m/v
式中：m—由校准曲线查得的含磷量（μg）
V—测定用试样体积，ml
三、正磷：
采用钼酸铵分光光度法
所需仪器和实验用品：
1.硫酸：1+1
2.过硫酸钾，50g/L溶液：将5g过硫酸钾溶于去离子水，并稀释至100ml。
3.10%抗坏血酸：溶解10g抗坏血酸于去离子水中，并稀释至100ml。贮于棕色瓶中，
在约4℃可稳定几周。如颜色变黄，则弃去重配。
4.钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵于100ml水中。溶解0.35g酒石酸锑钾于100ml水中，
在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300ml（1+1）硫酸中，加酒石酸锑氧钾溶液并且混合均匀。贮于棕色瓶中，在约4℃至少稳定两个月。
5.磷酸盐贮备溶液：将优级纯磷酸二氢钾于110℃干燥2h，在干燥器中放冷。称取0.2197g
溶于水，移入1000ml容量瓶中。加（1+1）硫酸5ml，用水稀释至标线。此溶液每毫升含50μg磷（以P计）。
6.磷酸盐标准使用液：吸取10ml磷酸盐贮备液于250ml容量瓶中，用水稀释至标线。
此溶液每毫升含2μg磷。临用时现配。
7.50ml比色管
8.分光光度计
实验步骤：
取1ml水样加到50ml的比色管，用去离子水定量到50ml，加入1ml抗坏血酸，摇匀，15S后加入2ml钼酸盐，摇匀，显色15min后，单波长700nm下比色，空白样调零。步骤基本与总磷测试步骤相同，不同之处在于测总磷需要消解，而测正磷不需要消解。
四、总氮：
采用碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法（参看GB-11894-89）本法可测定水中亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、无机铵盐、溶解态氨及大部分有机含氮化合物中氮的总和。
方法原理:
在120℃~124℃的碱性介质条件下，用过硫酸钾作氧化剂，不仅可将水样中的氨氮和亚硝酸盐氮氧化为硝酸盐，同时将水样中大部分有机氮化合物氧化为硝酸盐。而后，用紫外分光光度法分别于波长220nm与275nm处测定其吸光度，按A=A220-2A275计算硝酸盐氮的吸光度值，从而计算总氮的含量。其摩尔吸光系数为1.47×103L/（mol·cm）。
方法的适用范围：
该法主要适用于湖泊、水库、江河水中总氮的测定。方法检测下限为0.05mg/L；测定上限为4mg/L。
所需仪器和实验用品：
1.碱性过硫酸钾溶液：称取40g过硫酸钾，另取15g氢氧化钠，溶于去离子水中，稀
释至1000ml，溶液存于聚乙烯瓶内。
2.（1+9）盐酸溶液
3.硝酸钾标准贮备液：称取0.7218g经105~110℃烘干4h的优级纯硝酸钾溶于去离子
水中，移至1000ml容量瓶中，定容。此溶液每毫升含100μg硝酸盐氮。加入2ml 三氯甲烷为保护剂，至少稳定6个月。
4.硝酸钾标准使用液：将贮备液用去离子水稀释10倍而得。此溶液每毫升含10μg硝
酸盐氮。
5.25ml比色管
6.紫外分光光度计
7.压力蒸汽消毒器或民用压力锅，压力为1.1~1.3kg/cm2，相应温度为120~124℃。实验步骤：
取1ml水样（取样体积视水样含氮量而定，以在检测范围内为宜，最多加10ml）加到25ml比色管，去离子水定容到10ml，加入5ml碱性过硫酸钾，摇匀，用高压锅消解。冷却30min，加入1＋9盐酸1ml，定容到25刻度线，摇匀，在UV下比色，去离子水调零。同时做一个空白试验，用去离子水代替水样，操作步骤同上。
标准曲线的绘制：向10支比色管中，分别加入硝酸盐氮标准使用液0.0，0.50、1.00、2.00、3.00，5.00，7.00，8.00ml。用去离子水稀释至10ml标线。加入5ml碱性过硫酸钾，塞紧磨口塞，摇匀，用纱布及绳子裹紧管塞，以防迸溅出。用高压锅消解。操作步骤同水样测试操作步骤。根据所得吸光度与氮含量绘制标准曲线。
结果表示：
总氮含量（mg/L）=m/v
式中：m—从标准曲线上查得的含氮量（μg）；
V—测定用试样体积，ml。
五、氨氮：
氨氮是水体中的营养素，可导致水富营养化现象产生，是水体中的主要耗氧污染物，对鱼类及某些水生生物有毒害。可采用水杨酸分光光度法（参看GB7481-87）
方法原理：
在亚硝基铁氰化钠存在下，铵与水杨酸盐和次氯酸离子反应生成蓝色化合物，在波长697nm具最大吸收。
方法的适用范围:
本法最低检出浓度为0.01mg/L，测定上限为1mg/L。适用于饮用水、生活污水和大部分工业废水中氨氮的测定。
所需仪器和实验用品：
1.氨氮显色液：称取50g水杨酸，加入约100ml水，再加入160ml 2mol/L氢氧化钠
溶液，搅拌使之完全溶解。另取50g酒石酸钾钠溶于水中，与上述溶液合并稀释
至1000ml。存放于棕色瓶中，加橡胶塞，本试剂至少稳定一个月。注：若水杨酸
未能全部溶解，可再加入数毫升氢氧化钠溶液，直至完全溶解为止，最后溶液的
pH为6.0~6.5。
2.亚硝基铁氰化钠：称取0.1g亚硝基铁氰化钠置于10ml具塞比色管中，溶于水，
稀释至标线。此溶液临用前配制。
3.次氯酸钠溶液：取市售或自行制备的次氯酸钠溶液，经标定后，用氢氧化钠溶液
稀释成含有效氯浓度为0.35%，游离碱浓度为0.75mol/L的次氯酸钠溶液。存放于
棕色瓶中，本试剂可稳定一周。
4.铵标准贮备液：称取3.819g经100℃干燥过的优级纯氯化铵溶于水中，移入1000ml
容量瓶中，稀释至标线。此溶液每毫升含1mg氨氮。
5.铵标准中间液：吸取10ml铵标准贮备液移入100ml容量瓶中，稀释至标线。此溶
液每毫升含0.1mg氨氮。
6.铵标准使用液：吸取10ml铵标准中间液移入1000ml容量瓶中，稀释至标线。此
溶液每毫升含1μg氨氮，临用时配制。
7.10ml比色管
8.分光光度计
9.滴瓶
实验步骤：
取1ml水样（取样体积视水样含氮量而定，使氨氮含量不超过8μg）加到10ml比色管，加去离子水到8ml左右，加入1ml氨氮显示液，再加入2滴亚硝基铁氰化钠，2滴次氯酸钠，定容到10ml，摇匀，显色1小时，在单波长697nm下比色，去离子水调零。同时做一个空白试验，用去离子水代替水样，操作步骤同上。
标准曲线的绘制：向一组6个10ml容量瓶中分别加入铵氮标准使用液0、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00ml。按照水样测试方法进行测试，得出一组吸光度值，从各个标准溶液测得的吸光度值扣除空白试验的吸光度，绘制以氨氮含量（μg）对校正吸光度的校准曲线。结果表示：
氨氮含量（mg/L）=m/v
式中：m—由校准曲线查得的氨氮量（μg）
v--水样体积，ml
六、亚硝氮：（亚硝酸盐氮）
亚硝酸盐是氮循环的中间产物，不稳定。根据水环境条件，可被氧化成硝酸盐，也可
被还原成氨。采用亚硝氮分光光度法（参看GB7493-87）
方法原理：
在磷酸介质中，pH值为1.8±0.3时，亚硝酸盐与对-氨基苯磺酰胺反应，生成重氮盐，再与N-（1-萘基）-乙二胺偶联生成红色染料。在540nm波长处有最大吸收。
方法的适用范围：
本法适用于饮用水、地表水、地下水、生活污水和工业废水中亚硝酸盐的测定。最低检出浓度为0.003mg/L；测定上限为0.2mg/L亚硝酸盐氮。
所需仪器和实验用品：
1.显色剂：500ml烧杯内置入250ml水和50ml磷酸，加入20.0g 对氨基苯磺酰胺。
再将1.00gN-（1-萘基）-乙二胺二盐酸盐溶于上述溶液中，转移至500ml容量瓶中，用水稀至标线，摇匀。贮存于棕色瓶中，保存在2~5℃，至少可稳定一个月。
2.亚硝酸盐氮标准贮备液：称取1.232g亚硝酸钠溶于150ml水中，转移至1000ml容
量瓶中，用水稀释至标线，每毫升含约0.25mg亚硝酸盐氮。本溶液贮于棕色瓶中，加入1ml三氯甲烷，保存在2~5℃，至少可稳定一个月。
3.亚硝酸盐氮标准中间液：分别取50ml 硝酸盐标准贮备液（使含12.5mg亚硝酸盐
氮），置于250ml容量瓶中，用水稀释至标线。此溶液每毫升含50μg亚硝酸盐氮，中间液贮于棕色瓶中，保存在2~5℃，至少可稳定一周。
4.亚硝酸盐氮标准使用液：取10ml亚硝酸盐标准中间液，置于500ml容量瓶中，用
水稀释至标线。每毫升含1μg亚硝酸盐氮。此溶液使用时，当天配制。
5.磷酸ρ=1.7g/ml。
6.50ml比色管
7.分光光度计
实验步骤：
取1ml水样（取样体积视水样含氮量而定，以在检测范围内为宜）置于50ml比色管，去离子水定容到50ml，加入1ml亚硝氮显色剂，摇匀，显色20min，单波长540nm下比色，去离子水调零。同时做一个空白试验，用去离子水代替水样，操作步骤同上。
标准曲线的绘制：向一组6个50ml比色管中分别加入亚硝酸盐氮标准使用液0、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00ml。加入1ml显色剂，密塞，混匀。静置20min后，在2h以内，于波长540nm处，以水为参比，得出一组吸光度值，从各个标准溶液测得的吸光度值扣除零浓度空白管的吸光度，获得校正吸光度，绘制以氮含量（μg）对校正吸光度的校准曲线。结果表示：
亚硝酸盐氮浓度（mg/L）=m/v
式中：m—由水样测得的校正吸光度，从校准曲线上查得相应的亚硝酸盐氮的含量（μg）；
v--水样体积，ml
七、硝氮：（硝酸盐氮）
水中硝酸盐是在有氧环境下，亚硝氮、氨氮等各种形态的含氮化合物中最稳定的氮化合物，亦是含氮有机物经无机化作用最终的分解产物。采用紫外分光光度法（参看HJ/T346-2007）
方法原理:
利用硝酸根离子在220nm波长处的吸光值定量测定硝酸盐氮。溶解的有机物在220nm 处也会有吸收，而硝酸根离子在275nm处没有吸收。因此，在275nm处作另一次测量，以校正硝酸盐氮值。
方法的适用范围：
本法适用于清洁地表水和未受明显污染的地下水中硝酸盐氮的测定，其最低检出浓度为0.08mg/L，测量上限为4mg/L硝酸盐氮。
所需仪器和实验用品：
1.盐酸：c=1mol/L
2.硝酸盐氮标准贮备液：称取0.722g经105~110℃干燥2h的优级纯硝酸钾溶于水，
移入1000ml容量瓶中，稀释至标线，加2ml三氯甲烷作保存剂，混匀，至少可稳
定6个月。
3.0.8%氨基磺酸溶液：避光保存于冰箱中。
4.50ml比色管
5.分光光度计
实验步骤：
取1ml水样（取样体积视水样含氮量而定，以在检测范围内为宜）置于50ml比色管，去离子水定容到50ml，加入1mol/L盐酸1ml，再加入0.1ml的氨基磺酸，摇匀，UV下比色，去离子水调零。（进用户程序，TN）同时做一个空白试验，用去离子水代替水样，操作步骤同上。
校准曲线的绘制：于5个200mL容量瓶中分别加入0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL 硝酸盐氮标准贮备液，用新鲜去离子水稀释至标线，其浓度分别为0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/L 硝酸盐氮。按水样测定相同操作步骤测量吸光度。通过吸光度与硝酸盐氮含量绘制标准曲线。
结果表示：
硝酸盐氮浓度（mg/L）=m/v
式中：m--相对于校正吸光度的硝酸盐氮含量（μg）
v--水样体积，ml
八、污泥浓度（SS）
污泥浓度是指曝气池中污水和活性污泥混合后的混合液悬浮固体数量。单位：mg/L。
所用仪器和实验用品：
1．定量滤纸
2. 坩埚
3．烘箱
4．干燥器，备有以颜色指示的干燥剂
5．分析天平，感量0.1mg
实验步骤
1．将坩埚和定量滤纸在103~105℃烘干，干燥期内冷却，称重，反复直至获得恒重或称重损失小于前次称重的4%；重量为m0；（通常提前一天烘，第二天取用）2．将样品100ml用事先烘好的的滤纸过滤（为提高过滤速度，应采用真空泵进行抽滤），将滤好的污泥放入原来恒重的坩埚中，放入103~105℃的烘箱中烘干取出在干燥器中冷却至平衡温度称重，反复干燥至恒重或失重小于前次称重的5%或0.5mg(取较小值)，重量为m1；
结果表示：
SS= (m1- m0)/0.1
九、BOD
是表示水中有机物等需氧污染物质含量的一项综合指标。它说明水中有机物处于微生物的生化作用进行氧化分解，使之无机化或气体化时所消耗水中溶解氧的总数量，其单位以ppm（毫克／升）表示。
BOD的测定方法：标准稀释法（参见GB7488-87）
其测定原理是：水样经稀释后，在20℃±1℃条件下培养5天，求出培养前后水样中溶解氧含量，二者的差值为BOD5。如果水样五日生化需氧量未超过7mg/L，则不必进行稀释，可直接测定。很多较清洁的河水就属于这一类水。溶解氧测定方法一般用碘量法。
实验仪器、设备
1．20℃±1℃恒温培养箱。
2．5～20L下口玻璃瓶。
3．250mL溶解氧瓶：带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。
4．1000mL量筒。
5．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长20cm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。
实验试剂
1．磷酸盐缓冲溶液：将0.85g磷酸二氢钾（KH2PO4）、2.175g磷酸氢二钾（K2HPO4）、3.34g磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）和0.17g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至100mL。
此溶液的pH应为7.2。
2．硫酸镁溶液：将2.25g硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至100mL。
3．氯化钙溶液：将2.75g无水氯化钙溶于水中，稀释至100mL。
4．氯化铁溶液：将0.025g氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水中，稀释至100mL。
5．盐酸溶液（0.5mol/L）：将4mL（ρ=1.18g/mL）盐酸溶于水，稀释至100mL。
6．氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：将2g氢氧化钠溶于水，稀释至100mL。
7．亚硫酸钠溶液（c 1/2Na2SO3=0.025mol/L）：将0.1575g亚硫酸钠溶于水，稀释至100mL。此溶液不稳定，需当天配制。
8．葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖和谷氨酸在103℃干燥1h后，各称取15mg溶于水中，移入100mL容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。此标准溶液临用前配制。
9．稀释水：在5～20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。然后用无油空气压缩机或薄膜泵将此水曝气2～8h，使水中的溶解氧接近于饱和，也可以鼓入适量纯氧。瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量达8 mg/L左右。临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。稀释水pH应为7.2，其BOD5应小于0.2mg/L。
10．接种液：可选用以下任一方法获得适用的接种液。
①城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清液供用。
②表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10min，取上清溶液供用。
③用含城市污水的河水或湖水、污水处理厂的出水。
④当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3～8km处取水样作为废水的驯化接种液。如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。一般驯化过程需要3～8天。
11．接种稀释水：取适量接种液，加于稀释水中，混匀。每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1～10mL；表层土壤浸出液20～30mL；河水或湖水10～100mL。接种稀释水pH 应为7.2，其BOD5在0.3～1.0mg/L之间为宜。接种稀释水配制后应立即使用。
实验步骤
1．水样的预处理：
①水样的pH值若超出6.5～7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调pH值近于7，但用
量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
②水样中含有铜、锌、铅、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液
的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数，降低毒物的浓度。
③含有少量游离氯的水样，一般放置1～2h，游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能
消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。其加入量的计算方法是：取中和好的水样100 mL，加入1+1乙酸10mL，10%（m/V）碘化钾溶液1mL，混匀。以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度，计算水样中所需亚硫酸钠溶液的量。
④从水温较低的水域或富营养化的湖泊采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，充分振摇，以赶出过饱和的溶解氧。从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。
2．水样的测定：
①不经稀释水样的测定：对于溶解氧含量较高、有机物含量较少的清洁地表水，可不经稀
释，而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使其产生气泡。以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许，加塞水封（瓶内不应有气泡）。立即测定其中一瓶溶解氧，将另一瓶放入培养箱中，在20±1℃培养5d后，测其溶解氧。
②需经稀释水样的测定：对于污染的地表水和大多数工业废水，需要稀释后再培养测定。根据实践经验，稀释倍数（指稀释后体积与原水样体积之比）用下述方法计算。
a．一般稀释法：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水（或接种稀释水）至800mL，用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。
按不经稀释水样的测定步骤，进行装瓶，测定当天溶解氧和培养5天后的溶解氧含量。另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白，分别测定5天前、后的溶解氧含量。
ｂ．直接稀释法：在溶解氧瓶内直接稀释。在已知两个容积相同（其差小于1mL）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后引入稀释水（或接种稀释水）至刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。其余操作与上述一般稀释法相同。
在BOD5测定中，一般采用碘量法测定溶解氧。如遇干扰物质，应根据具体情况采用其他测定法。
3．BOD5计算：
①不经稀释直接培养的水样：
BOD5（mg/L）=C1－C2
式中：C1——水样在培养前的溶解氧浓度，mg/L；
C2——水样经5天培养后，剩余的溶解氧浓度，mg/L。
②经稀释后培养的水样：
BOD5(mg/L)=[( C1-C2)-(B1-B2)×f1]/f2
式中：
C1——稀释后的水样在培养前的溶解氧浓度，mg/L；
C2——稀释后的水样经5天培养后，剩余的溶解氧浓度，mg/L；
B1——稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧浓度，mg/L；
B2——稀释水(或接种稀释水)经5天培养后，剩余的溶解氧浓度，mg/L；f1——稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例；
f2——原水样在培养液中所占比例。