长期毒性试验共31页文档
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
▪ 高剂量组--产生明显或严重的毒性反应，或个 别动物死亡（但死亡率应控制在 20% 以内）；
▪ 空白对照--溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形剂有毒性时则增加 正常对照组
<3月，大鼠♂♀各20只/组 ≥3月，大鼠♂♀各30只/组 大动物6-8只/组（♂♀各半）
5.剂量及分组
在选择合适的剂量时还应考虑到：
非啮齿类动物
2周
2周
1月
1月
3月
3月
6月
6月
6月
9月
7.观察及测定指标
Ø 试验前，啮齿类动物至少应进行5天的适应性观察，非啮齿类动物 至少应驯养观察1~2周，应对动物进行一般观察及血液生化学指标的 检测。
Ø 试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的观察。
Ø 试验结束时，必须留1/3的动物做恢复期的观察试验，其观察期时 间一般不超过28天。
变换注射部位 ▪ 必要时改变给药途径
5.剂量及分组
▪ 至少3个给药组, 单位: mg(ml,IU) /kg 或 /m2 ▪ 以不等浓度等容量给药 ▪ 低剂量组--高于有效剂量，不出现毒性反应(一般为动物有效剂量
或临床治疗量的2~3倍)
▪ 中剂量组（1-n个）--产生轻微或中等度毒性反应 按 低剂量X高剂量计算
经济合作与开发组织(OECD) 提出：
如果一种化合物以1000mg/kg 的剂量，按规定期限连续给药， 不产生任何可观察到的毒性反 应，而且根据结构相关药物的 已有资料，估计不会产生毒性 的话，就不需要再用三个剂量 来进行试验，除非预期临床需
要更高的剂量。
6.给药方法及时限
▪ 每天给药，每周必须给药 7 天。给药期限长（3个月或以上） 的药物每周至少应给药6天。
狗可分别采用30~50倍、15~25倍和5~10倍临床剂量
猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验
5.剂量及分组 ——限度试验
我国SFDA规定： 如小鼠急性毒性的口服 给药剂量大于 5g/kg， 注射给药剂量大于 2g/kg 仍未产生毒性反 应和死亡，或仅个别动 物有毒性反应时，可考 虑只做一个高于临床拟 用剂量50倍(狗用30倍) 的剂量组。
▪ 每天给药最好固定时间。
按我国药政管理部门的要求，长期毒性试验的给药期限一般为临 床疗程的3~4倍时间。 创新药品试验周期应不少于90天， 超过 180天的新药可以在试验开始90天后，同时进行I期临床试验。
6.给药方法及时限
临床拟用 给药时间
﹤5天 ﹤2周
2-4周
1-3月
﹥3月
毒性试验期限
啮齿类动物
①药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应 适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有 可能出现毒性作用；
②药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增 毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。
③药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和 性的药物，则应酌情增加剂量。
5.剂量及分组
Ø（4）最大耐受量法（MTD法） 狗可采用大鼠一半左右的剂量。
Ø（5）临床拟用剂量法（ACD法）根据大鼠急性毒性 (MTD)
Ø（6）等效剂量法
大鼠3个月：分别为1、1/3及
根据临床拟用剂量（3个月）
1/10MTD；
采用50~100倍、25~50倍和10~20倍临床剂量
狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。
犬
单笼饲养，定量喂食。
Beagle 狗实验前至少驯 养 1~2 周;
杂种狗应先检疫，驱虫。
雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过 5只
2.饲养管理
主要因素
温度(℃ ) 湿度 换气次数 气流速度 压力 洁净度 落下细菌 照明 噪声 臭气
小鼠、大鼠 20-26 40-60% 10-15次/h 13-18cm/s 正压 100000级 ＜＝3个/皿
150-300 Lux
＜60 db
氨浓度＜20 ppm
动物类别 豚鼠、家兔 18-28 40-60% 10-15次/h 13-18cm/s 正压 100000级 ＜＝3个/皿
150-300 Lux
＜60 db
氨浓度＜20 ppm
犬 18-28 40-60% 10-15次/h 13-18cm/s 负压
一、长期毒性试验的目的意义
▪ 确定毒性剂量： Toxic dosage ▪ 发现安全范围： Safety margin ▪ 研究毒性反应： Toxic reaction: 性质、程度、
量毒关系、产生时间，达峰时间, 持续时间及反 复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性
▪ 找到毒性反应靶器官： Target organ ▪ 明确毒性反应是否可逆： Reversibility
3.受试物
▪ 受试物应能充分代表临床试验受试物和上市药品；
▪ 因此受试物应采用制备工艺稳定、符合临床试用质量 标准规定的样品；
▪ 一般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批号 含量（或规格） 、保存条件及配制方法等。
4.给药途径
▪ 与临床给药途径一致 ▪ 混入饲料或饮水中灌服时： ▪ 保证受试药分布均匀 ▪ 在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定 ▪ 计量准确 ▪ 临床iv 时, 大鼠给药周期＞1月，可用ip代替，im或sc应
▪ ♂♀各半，数量相同 。或选用敏感性别的动物
2.饲养管理
▪ 严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素。
ห้องสมุดไป่ตู้
室内温度
湿度
环境因素
光照 通风条件
饮水质量
饲料或饲料配方
2.饲养管理
啮齿类动物
适宜温度为 18~27 ℃ 。 相对湿度为 40%~70%。 光照宜持续 12 小时明亮，12 小时黑暗。 通风条件良好。 所用饲料应符合动物的营养标准。
————确定“DOSTR”
二、长期毒性试验的基本内容和要求 1.试验动物
▪ 二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Beagle犬), 必要时用猴；
▪ 动物应写明供应单位信息，品系及生产合格证号；
▪ 大鼠6-8周龄，体重差异不超过平均体重的20％。3个月 以上可选5-6周龄大鼠；
▪ Beagle犬4-12月龄；
可供参考的具体方法 Ø（1）半数致死量法（LD50法） Ø（2）短期蓄积试验过渡法
大鼠3个月:采用约LD50的1/10、 1/50和1/100剂量，狗各剂量组 可采用一半剂量。
根据药代动力学最大有效安全浓 度（MCD）
Ø（3）药代动力学法（MBS法）
大鼠3个月:采用大鼠的1.0 、 3.3~6.6 和10~20 MCD;
▪ 空白对照--溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形剂有毒性时则增加 正常对照组
<3月，大鼠♂♀各20只/组 ≥3月，大鼠♂♀各30只/组 大动物6-8只/组（♂♀各半）
5.剂量及分组
在选择合适的剂量时还应考虑到：
非啮齿类动物
2周
2周
1月
1月
3月
3月
6月
6月
6月
9月
7.观察及测定指标
Ø 试验前，啮齿类动物至少应进行5天的适应性观察，非啮齿类动物 至少应驯养观察1~2周，应对动物进行一般观察及血液生化学指标的 检测。
Ø 试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的观察。
Ø 试验结束时，必须留1/3的动物做恢复期的观察试验，其观察期时 间一般不超过28天。
变换注射部位 ▪ 必要时改变给药途径
5.剂量及分组
▪ 至少3个给药组, 单位: mg(ml,IU) /kg 或 /m2 ▪ 以不等浓度等容量给药 ▪ 低剂量组--高于有效剂量，不出现毒性反应(一般为动物有效剂量
或临床治疗量的2~3倍)
▪ 中剂量组（1-n个）--产生轻微或中等度毒性反应 按 低剂量X高剂量计算
经济合作与开发组织(OECD) 提出：
如果一种化合物以1000mg/kg 的剂量，按规定期限连续给药， 不产生任何可观察到的毒性反 应，而且根据结构相关药物的 已有资料，估计不会产生毒性 的话，就不需要再用三个剂量 来进行试验，除非预期临床需
要更高的剂量。
6.给药方法及时限
▪ 每天给药，每周必须给药 7 天。给药期限长（3个月或以上） 的药物每周至少应给药6天。
狗可分别采用30~50倍、15~25倍和5~10倍临床剂量
猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验
5.剂量及分组 ——限度试验
我国SFDA规定： 如小鼠急性毒性的口服 给药剂量大于 5g/kg， 注射给药剂量大于 2g/kg 仍未产生毒性反 应和死亡，或仅个别动 物有毒性反应时，可考 虑只做一个高于临床拟 用剂量50倍(狗用30倍) 的剂量组。
▪ 每天给药最好固定时间。
按我国药政管理部门的要求，长期毒性试验的给药期限一般为临 床疗程的3~4倍时间。 创新药品试验周期应不少于90天， 超过 180天的新药可以在试验开始90天后，同时进行I期临床试验。
6.给药方法及时限
临床拟用 给药时间
﹤5天 ﹤2周
2-4周
1-3月
﹥3月
毒性试验期限
啮齿类动物
①药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应 适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有 可能出现毒性作用；
②药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增 毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。
③药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和 性的药物，则应酌情增加剂量。
5.剂量及分组
Ø（4）最大耐受量法（MTD法） 狗可采用大鼠一半左右的剂量。
Ø（5）临床拟用剂量法（ACD法）根据大鼠急性毒性 (MTD)
Ø（6）等效剂量法
大鼠3个月：分别为1、1/3及
根据临床拟用剂量（3个月）
1/10MTD；
采用50~100倍、25~50倍和10~20倍临床剂量
狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。
犬
单笼饲养，定量喂食。
Beagle 狗实验前至少驯 养 1~2 周;
杂种狗应先检疫，驱虫。
雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过 5只
2.饲养管理
主要因素
温度(℃ ) 湿度 换气次数 气流速度 压力 洁净度 落下细菌 照明 噪声 臭气
小鼠、大鼠 20-26 40-60% 10-15次/h 13-18cm/s 正压 100000级 ＜＝3个/皿
150-300 Lux
＜60 db
氨浓度＜20 ppm
动物类别 豚鼠、家兔 18-28 40-60% 10-15次/h 13-18cm/s 正压 100000级 ＜＝3个/皿
150-300 Lux
＜60 db
氨浓度＜20 ppm
犬 18-28 40-60% 10-15次/h 13-18cm/s 负压
一、长期毒性试验的目的意义
▪ 确定毒性剂量： Toxic dosage ▪ 发现安全范围： Safety margin ▪ 研究毒性反应： Toxic reaction: 性质、程度、
量毒关系、产生时间，达峰时间, 持续时间及反 复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性
▪ 找到毒性反应靶器官： Target organ ▪ 明确毒性反应是否可逆： Reversibility
3.受试物
▪ 受试物应能充分代表临床试验受试物和上市药品；
▪ 因此受试物应采用制备工艺稳定、符合临床试用质量 标准规定的样品；
▪ 一般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批号 含量（或规格） 、保存条件及配制方法等。
4.给药途径
▪ 与临床给药途径一致 ▪ 混入饲料或饮水中灌服时： ▪ 保证受试药分布均匀 ▪ 在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定 ▪ 计量准确 ▪ 临床iv 时, 大鼠给药周期＞1月，可用ip代替，im或sc应
▪ ♂♀各半，数量相同 。或选用敏感性别的动物
2.饲养管理
▪ 严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素。
ห้องสมุดไป่ตู้
室内温度
湿度
环境因素
光照 通风条件
饮水质量
饲料或饲料配方
2.饲养管理
啮齿类动物
适宜温度为 18~27 ℃ 。 相对湿度为 40%~70%。 光照宜持续 12 小时明亮，12 小时黑暗。 通风条件良好。 所用饲料应符合动物的营养标准。
————确定“DOSTR”
二、长期毒性试验的基本内容和要求 1.试验动物
▪ 二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Beagle犬), 必要时用猴；
▪ 动物应写明供应单位信息，品系及生产合格证号；
▪ 大鼠6-8周龄，体重差异不超过平均体重的20％。3个月 以上可选5-6周龄大鼠；
▪ Beagle犬4-12月龄；
可供参考的具体方法 Ø（1）半数致死量法（LD50法） Ø（2）短期蓄积试验过渡法
大鼠3个月:采用约LD50的1/10、 1/50和1/100剂量，狗各剂量组 可采用一半剂量。
根据药代动力学最大有效安全浓 度（MCD）
Ø（3）药代动力学法（MBS法）
大鼠3个月:采用大鼠的1.0 、 3.3~6.6 和10~20 MCD;