小鼠(BALBc)未分化型免疫球蛋白重链可变区(VH)基因的克隆 1,2)
BALBc小鼠介绍
BALBc小鼠介绍
来源：
1913年，贝格(Bagg)从美国商人欧希尔(Ohio)处购得的白化小鼠原种，以群内方法繁殖。
麦克·多威尔(MacDowell)在1923年开始作近交系培育，至1932年达26代，命名为BALB/c品系。
安德尔文特(Andervont)等人使BALB/c广为传播和应用。
1985年我国从美国NIH引进到中国医学科学院实验动物研究所，为BALB/c第180代。
毛色：白化。
主要特性：
①乳腺肿瘤自然发生率低，但用乳腺肿瘤病毒诱发时发病率高;卵巢、肾上腺和肺的肿瘤在该小鼠有一定的发生率。
②易患慢性肺炎。
③对放射线甚为敏感。
④与其他近交系相比，肝、脾与体重的比值较大。
20月龄的雄鼠脾脏有淀粉样变。
⑤有自发高血压症，老年鼠心脏有病变，雌雄鼠均有动脉硬化。
⑥对鼠伤寒沙门氏菌补体敏感，对麻疹病毒中度敏感。
对利什曼原虫属、立克次氏体和百日咳组织胺易感因子敏感。
应用：
Balb/C是另外一种广泛使用的实验小鼠。
这个品系具有白化、免疫缺陷的特征，是一个近交品系。
Balb/C是一种极为温顺的品种，有着易于繁殖和雌雄体重差异小的特点。
值得注意的是Balb/C对致癌物极其敏感，常用于肺癌、肾癌等实验动物模型的建立。
另外，对BALB/c品系注射矿物油可迅速引发浆细胞瘤，该品系被广泛应用于杂交瘤和单克隆抗体的生产。
BALB/c小鼠在癌症治疗和免疫学研究中有着广泛应用。
广泛地应用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学研究，以及单克隆抗体的制备等。
小鼠白血病抑制因子基因的克隆、表达及其对维持鸡原始生殖细胞未分化状态的影响
２ 山东 省 实 验 动 物 中心 ，济 南 ２００ ． ５０ ２ ３ 南 京 农 业 大 学 动 物科 技 学 院 ， 京 ２０ ９ ． 南 １０ ５
４ 中 国农 业 科 学 院 畜牧 研 究 所 ，北京 １０ ９ ． ００４
１ Ｉｓｉ ｔ ｆＬｆ ｃｅ ｃ ｓ Ｉ ｉｈ ｎ Ｍｅ ｉｉｅ Ｕｎｖ ｒｉ ． ｎ ｔｕｅ ０ ｉｅＳ ｉｎ ｅ ， １ ｓ ａ ｄ ｃｎ ｉｅ ｓｔ ｔ ａ ｙ，Ｔｌ ’ ｎ ２ ０ Ｏ， Ｓ ａ ｇ ０ ｇ，Ｃｈｎ ａ ａ ７１ ０ ｊ ｈｎｄｎ ｉａ ２．Ｓｈ ｎ ｏ ｇ Ｉｒｖｎ ｉｌＣｅ ｔｒ０ ｍｂ ｒｔＩ ｉ ｌ ，Ｊｎ ｎ ２ ０ Ｏ ａ ｄ ｎ ’ ｉｃａ ｎｅ ｆＩ ｏ ａｏ＿ Ａｎｍａｓ ｉａ ５ Ｏ ２，Ｃｈ ｎ ０ ｙ ｉａ
ｅｂ『ｉ ｍ ｎｏ ｃ胁ｒ ｌ ｔ Ｅ ）细 胞 中 ，４ 后 收集 细胞 上 清 液 ，蛋 白印 迹 均 检 测 到 小 鼠 白血 病 抑 制 因 子 （ ＬＦ 的 表 ｎ Ｕ ａ ，ｃ Ｆ ｂｓ ８ｈ ｍ Ｉ） 达 。 以 ｃ Ｆ细胞 作 饲养 层 ，分 七 组 来 培 养 鸡 Ｐ ｃ ，结 果 发 现 四 组 和 五 组 培 养 的 Ｐ ｃ 生 长 状 态 最 好 ，三 组 传 代 后 Ｅ Ｇｓ Ｇｓ
Ｓ ａｔ ｔ ｅ
ｃ ｌ ｎ ｔ ｅ ｕｎ ｉ ｒ ｎ ｉ ｔ ｄ ｅ ｌ ｉ ｈ ｄ ｅ ｔａ ｅ ｓ
Ｙ ＡＮＧ Ｎ — ＨＵ Ｊｎ ＨＩＷｅ— ｅ ｇ ，ＭＥＮ Ｃ ｕ ． ａ ，Ｄ ｉＸｉ ａ Ｎａ ，Ｚ ｉｇ ，Ｓ ｉＦ ｎ Ｇ ｈ ｎ Ｈｕ Ｕ Ｌ— ｎ
ｔｅ ｍｅｈ ｄ ｏ ｉｏ ｔｍｉ ｅ ｍｅ ｉｔ ｎ， ａ ｄ ｃ ｌ ｃｅ ｈｅｓ ｐ ｍ ａａ ｔａｔｒｃ ｎｒｆｇ ｔ ｇ ｔ ｅｌｌｒｍｅ ｉｍ ｈ ｔ ０ ｆｌ ｛ｃａ ｎ ｄａｉ ｐ ０ ｎ ０ｌ ｔｄ ｔ ｕ ｅ ｔｎ ｆｅ ｅ ｔｉ１ａｉ ｈｅｃ ｌ ａ ｄｕ ｅ ｌ ｎ ｕ
BALBc小鼠叠朊蛋白基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备的开题报告
BALBc小鼠叠朊蛋白基因的克隆、表达及多克隆抗
体的制备的开题报告
（该报告为科研项目的开题报告，仅供参考）
一、研究背景
叠朊蛋白（Histone）是由碱性蛋白质组成的一类核心蛋白质，与DNA缠绕在一起，构成染色质的基本单位——核小体。
叠朊蛋白具有调控基因表达、DNA修复、染色质结构维护等生命活动的重要作用，近年来受到越来越多的关注。
BALB/c小鼠作为一种广泛应用于人类疾病模型和免疫学研究的动物模型，其叠朊蛋白基因的克隆和多克隆抗体的制备有助于深入研究其生物学功能和相关疾病的发病机制。
二、研究内容
1. BALB/c小鼠中叠朊蛋白基因的克隆：使用PCR技术，利用参考序列设计引物，克隆BALB/c小鼠中的叠朊蛋白基因，并验证克隆的准确性和完整性。
2. 叠朊蛋白基因的表达：利用真核表达载体，在细胞中表达叠朊蛋白基因，并通过Western blot方法鉴定表达蛋白的多态性和纯度。
3. 多克隆抗体的制备：将表达的蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠，采集其血清制备多克隆抗体，并进行抗体纯化和鉴定。
三、研究意义
本研究将为深入研究BALB/c小鼠叠朊蛋白的生物学功能和相关疾病的发病机制提供实验基础和技术支持。
同时，本研究还可以为其他相关疾病的研究提供重要的参考和借鉴。
小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备
小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备董林;王艳萍;沈志强;余为一【期刊名称】《安徽农业大学学报》【年(卷),期】2009(36)2【摘要】为了获取小鼠Ii编码基因,利用原核表达系统进行诱导表达,提取纯化目的蛋白并制备其相应抗体,应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清。
结果扩增出了与预期大小相同的700bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii基因同源性高达99.2%～99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5ku的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体。
成功克隆了小鼠Ii编码基因,有效进行了诱导表达,并制备了具有良好免疫学活性的特异性抗Ii抗体。
【总页数】5页(P247-251)【关键词】恒定链;基因克隆;表达;抗体【作者】董林;王艳萍;沈志强;余为一【作者单位】山东省滨州畜牧兽医研究院;安徽农业大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S852.4;R-332【相关文献】1.小鼠 LIGHT 胞外段基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备 [J], 徐莎;杨赟;余坚;周艺;陈丽丽2.小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因特异片段的克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J], 童睿;潘红春;马静静;朱国萍;郝家胜3.小鼠PD-1 胞外区基因片段表达、纯化及其多克隆抗体的制备 [J], 覃晓琳;刘朝奇;唐国慧;金羽4.小鼠TLR-2N末端基因的克隆表达和抗体制备 [J], 杨翠兰;赵文忠;刘艳君;朱平;富宁5.小鼠DHRS4基因原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备 [J], 张廷银;闫银侠;黄东阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
BALBc 小鼠
BALB/c是一种免疫缺陷的小鼠，是免疫学实验中常用的小鼠种类，是白变种实验室老鼠，与众多常用亚系一样，起源于小家鼠Mus musculus。
从1920年它们在纽约诞生至今，BALB/c小鼠在全球研究机构繁衍了超过200代，广泛用于免疫学、生理学的动物实验。
BALB/c(巴比赛)的外表与“ICR”和“NRH”小鼠很难分辨，都长着一对红宝石般的眼睛，一身光润洁白的皮毛。
只是BALB/c鼠的遗传背景为近交系，由亲兄弟姐妹遗传繁殖，因而它们之间的个体差异就小，遗传基因更纯，整体素质更好BALB/c小鼠乳腺癌发病率低，但随着年龄增长，患其他癌症（如肺癌和肾癌）的几率大为增加。
乳腺肿瘤发生率约为10%~20%。
有一定数量的卵巢、肾上腺和肺部肿瘤、白血病的发生。
肺癌发病率雌性26%，雄性29%。
白血病发病率雌性12%，雄性10%。
血压与其他近交系小鼠相比为最高，有自发高血压症。
老年小鼠心脏有某些病变，雌雄小鼠常有动脉硬化。
几乎全部20月龄的雄性小鼠均有淀粉样变。
对鼠伤寒沙门氏菌C`5敏感，对麻疹病毒中度敏感，易患慢性肺炎，对放射线极度敏感。
富于网状内皮细胞的器官（如肝、脾）与体重相比，所占比值很大。
常用于单克隆抗体和免疫学研究。
BALB/c小鼠生产性能好，繁殖期长，一般无相互侵袭习性，比较容易群养。
平均寿命：有的记载雄鼠为509天，雌鼠为561天；有的记载雄鼠为648天，雌鼠为816天。
平均体重252日龄雄鼠为30 g，雌鼠为28g。
(1)遗传背景：①起源：1913年H.Bagg博士获得白化原种。
1923年由Mac Dowcll近交培育而成。
1 932年第26 代引到Snell(加/c，小写字母c是毛色隐性上位recessive epistasis基因，表示白化albino) 。
1935年引到Andervont处。
1951年72代引到NIH。
1985年1 80代从NIH引到IMLAS②近交代数：180(NIH,1985)，186(Hok,1985)。
BALB／C小鼠免疫耐受模型的建立及移植人体肺肿瘤初步研究
BALB／C小鼠免疫耐受模型的建立及移植人体肺肿瘤初步研究金荣;丁献义;等【期刊名称】《癌变．畸变．突变》【年(卷),期】2001(013)004【摘要】免疫耐受性是机体免疫系统接触某一抗原后形成的特异性无应答状态。
为给临床研究深入开展创造条件。
建立能移植成活人体肿瘤的免疫耐受动物模型十分必要。
本文用在以往实验研究中发现的一种能促进人体肿瘤原代细胞在体外培养有增殖反应的郑氏植物蛋白，诱导洲40人刚出生二天的BALB／C小鼠，于每只小乳鼠背部皮下注射0.1ml郑氏植物蛋白，在首次注射后的2中末再加强一次，过3周后即成为动物模型。
用同样的方法以生理盐水替代植物蛋白为对照组。
按常规方法进行肿瘤移植术。
标本肿瘤组织是取自经河北医大第四医院确诊并手术治疗的肺癌患者，在离体后4h内剪成2mm3左右的小块接种到实验支持动物背部皮下。
两周后取移植肿瘤包块内组织再接种于另一只实验小鼠腹腔。
目测结果：观察实验组小鼠背部的移植肿瘤块生长情况，发现移植10d后会形成包块，触之发软，于2周后移植肿瘤成活，再移植于另外模型小鼠腹腔传代，其成功率达90％（36／40）。
而对照组的移植瘤组织块在2、3周内逐渐缩小消失，移植成功率为零。
移植存活瘤的病理学检查：经HE染色镜检可见到呈团状或散在分布的癌细胞，细胞核增大，形态不一，杂，核膜增厚，染色质增多分布不均匀，均肺癌细胞相似。
将移植肿瘤组织制备成细胞悬波行FCM（美国FACS，420型）分析，结果显示细胞DNA指数（DI）为1.15-1.23，增殖指数（PI）为22.6%-26.4%，有异倍体存在，是肿瘤细胞的特征。
结果表明该植物蛋白有与人肿瘤相关抗原类似的作用，可诱导BALB／C小鼠产生对人体肿瘤的免疫耐受，使移植瘤成活。
本实验初步成功还可能与所选择的动物为刚出生不足两天的乳鼠有关。
因为免疫细胞在个体发育早期过程中，对抗原易形成耐受。
对成活移植肿瘤的生物学特性及其应用价值有待进一步探讨。
人类个体发育中的免疫球蛋白重链可变区基因谱型
人类个体发育中的免疫球蛋白重链可变区基因谱型
人类免疫球蛋白重链可变区基因谱型是一组基因序列，编码人类免疫球蛋白（抗体）的重链可变区。
在人类个体发育过程中，免疫球蛋白重链可变区基因谱型会发生多次基因重排和基因突变，以产生多样性的抗体，以对抗各种外来病原体。
免疫球蛋白重链可变区基因谱型包括数百个基因，分为不同的家族和亚家族。
每个家族和亚家族都有多个基因，每个基因编码免疫球蛋白重链可变区的不同部分。
这些基因之间存在变异，通过基因重排和基因突变的方式，可以在人类免疫系统中生成数以亿计的独特抗体。
具体的免疫球蛋白重链可变区基因谱型因个体而异，其中一些背后的机制仍然不完全清楚。
研究表明，个体的基因组和免疫系统的遗传差异对免疫球蛋白重链可变区基因谱型的形成和多样性起着重要作用。
不同的基因谱型可以在人类个体中产生抗体的多样性，从而增强身体对不同病原体的免疫能力。
BALB／c小鼠乳腺癌4 T1细胞株移植模型的建立
BALB／c小鼠乳腺癌4 T1细胞株移植模型的建立严丽;李莉;郝芳;申伟;张霖雷;郭浩【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】目的：应用来源于BALB/c小鼠的4T1乳腺癌细胞株建立BALB/c小鼠乳腺癌模型，选择最佳的模型制作方法。
方法：90只BALB/c小鼠随机分为3组，每组30只，分别接种1×106 ml-1、1×107 ml-1、1×108 ml-14T1乳腺癌细胞株细胞悬液。
每组小鼠再随机分两组分别接种于胸壁和侧腹壁。
比较各组的成瘤时间、成瘤率和8周存活率，并用C-erbB-2免疫组化法检查肿瘤病理状态。
结果：细胞浓度为1×107 ml-1时，肿瘤成瘤率高，生长稳定；4 T1细胞不同部位接种不影响成瘤率及生长；C-erbB-2免疫组织化学检查均为阳性。
结论：应用1×107 ml-1浓度的4T1细胞进行接种是最佳的模型制作方法。
【总页数】3页(P794-796)【作者】严丽;李莉;郝芳;申伟;张霖雷;郭浩【作者单位】河北医科大学第二医院腺体外科，石家庄 050000;河北医科大学组织胚胎学教研室，石家庄 050017;河北医科大学第二医院腺体外科，石家庄050000;河北医科大学第二医院腺体外科，石家庄 050000;河北医科大学第二医院腺体外科，石家庄 050000;河北医科大学第二医院腺体外科，石家庄 050000【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株与顺铂敏感细胞株荷瘤BALB／c小鼠移植瘤P-gp蛋白表达的影响 [J], 高原;王哲;陈奇;王莹;井欢;潘茜;于丹;刘春英2.BALB/ C 小鼠乳腺癌移植模型的研究 [J], 谢富华;王润秀;李昌武;梁念慈3.小鼠乳腺癌TM40D细胞株移植模型建立及其C-erbB-2的测定 [J], 刘晓安;武正炎;王汉晋4.BALB/c小鼠可移植性乳腺癌（MA-901）动物模型的建立及其组织病理学研究[J], 欧阳卓志5.稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型的建立 [J], 王进;董晓强;赵鑫;朱新国;赵华;张江磊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
１ ）此项研究为中国科学院科学基金资助， 部分工作得到
日本 大 阪大 学 Ｔ． ｎｏ 教 授的 指导。 Ｈｏ ｊ
２ ）本所杨建清、 甲 王润芝、 董 有、 齐云祥参加部分工作， 周
武林 同志照 像 ， 此 致 谢。 特 木 文于 １８ 年 １ ９５ ０月 ２ Ａ收 到。 ４
１ ９
总 Ｄ Ａ 和 Ｃ ａ ｎ 总 Ｄ Ａ 以及标记 的 Ｎ ｈｒ ４ ｏ Ａ Ｎ
［ 〕 Ｈｏｊ， ： ８ ． ｂｒｔ ｙ ｎ ａ １ ２． ５ ｎｏ Ｔ １ ０ Ｌ ｏａ ｒ Ｍａｕｌ － ０ ． ９ ａ ｏ ， ［ ］ Ｌ ｄｒ Ｐ： ８ ． ｉ ｔｉ Ａ ｅｉ ｎ ２６ ５ ３ ． ６ ｅｅ， １ ２ Ｓ ｃ ｉｃ ｍ ｒ ａ， ． ６ ． ９ ｃ ｎｊ ｃ ４ ． ｔ ］ Ｋｅ ， Ｊ ｅ ａ ：１７． ． ｉ Ｓｉ Ａ ａ． Ａ ７ ｍｐ Ｄ ． ｌ ９９ Ｐ ｏ Ｎａ ． ． ｄ Ｕ ， ． ｔ ｒ ｌ ｃ ｃ Ｓ
中克隆出未分化型免疫球蛋白重链可变 区 Ｖ Ｈ
基因。并对其进行了初步的研究。免疫球蛋白 的重链和轻链可变区的空间叠折形成 了 抗 原－ 抗体结合位点，这对于结合特异抗原具有重要 作用［７ １ 。因此克隆与研究免疫球蛋白可变区基 ， ２ 因对于认识抗体的特异性 、多样性都有一定的
３ 杂交探针的制备 ．
以把这些有同源性的 ＩＥ作为一个亚组 ，以这 ｇ
ｔ ］ 杨志兴，杨学成：１８０国外医学， １ ９３ 分子生物学分册， ５４； ４－２０ （） ２ －２０ １ ［ 〕 杨志兴等：１８ ２ ９３ ０遗传，５４； －４０ （） ４ － １ ０－
ｔ 〕 杨 建清等 ： １８ ．遗 传学 报 ，１（ ） ６ １ ３ ９４ １１ ； 一１ｏ ［ ４］ Ｈ ｎｏ Ｔ ｅ ａ ： １８． ｌ Ｓ ｒ ｇ ａｂｒ ｍ ． ｏｊ， ｔ ． ｌ ． ９０ Ｃ ｄ ｉ Ｈ ｒｏ Ｓ ｐ ｏ ｐｎ ｙ ，
意 汇， 义‘。 ， ‘
个重组子中， 克隆到 ８个 Ｖ Ｈ基因， 并从其 中之
每馏份 ５１， ０１ 共收集 ４ 个馏份， ｚ ０ 测定各馏份的
Ｖ Ｄ Ｈ ＮＡ 探针。比度约为 ７５ ＩＳＰ ． Ｘ Ｃ Ｍ。 实 Ｏ 验表明， Ｓｐａｅ Ｇ－５柱层析分离纯化 Ｖ 用 ｅｈｄｘ ７ Ｈ
收集合拼 ７ １ －１ 个馏份， 为标记的 我们从相当于一个小鼠基因组的１ Ｘ ０ 放射性强度， ． １ ２ ０
（ 上接第２页） ０ 克隆到 ８ 个免疫球蛋白重链可变区 Ｖ 基因。 Ｈ 我
不 同亚组的 Ｖ Ｈ基因作探针， 还会克隆到不同 的亚组的 Ｖ Ｈ基因。 可见研究免疫球蛋 白重链 Ｖ 基因的克隆和基因的数量对揭示免 疫 球 蛋 Ｈ 白的多样性和特异性有重要帮助。
参 考 文 献
们参照 Ｈ ｎ 球蛋白重链可变区 Ｖ ．ｂ Ｏ Ｈ
基因的 Ｄ ＮＡ片段。
Ｄ Ａ探针， Ｎ 较之用酚提取法杂交与自 显影效果
为佳 。
材料与方法
（ 一） 材料
４预杂交和杂交 ．
照文献 ［， １］ ３ ５ ０进 ，
行 ，但有所改进。预杂交是将吸印的滤膜放人
受 体 菌 Ｆ ｃｌ Ｌ ３２ ＿ ｏ Ｂ ９ ，小 鼠 （ ０１ ，表 达 型 Ｏ ． ｍｌ 免疫球蛋白重链 ＩＥ 的可变区基因 片 段 等 由 ｇ Ｔ Ｈｎ ． ｊ ｏ 。所赠。 Ｅ ｔｌ Ｌ ３２总 ＤＮ 和 ． ｌ ９ ｏ Ｂ ＇ Ａ Ｃ ａ ｎ 总 Ｄ ｈｒ ４ ｏ Ａ ＮＡ为自己制备ｏ Ｎａ Ｉ Ｄ ｓ 和 ｅ Ｄ ＮＡ 聚合酶 Ｉ Ｓ ｍａ产品。 Ｅｏ Ｉ酶国 系 ｉ ｇ ｃＲ
（Ｉ） （２ ）
回收到 ５ ｋ ． ｂ的含 Ｖ ０ Ｎ基因的 ＤＮ Ａ片段。我
图 ２ ｃ Ｒ 酶切免没球蛋白重链 Ｖ Ｌｏ ７ Ｉ ｙ克隆 Ｄ Ａ Ｎ
电泳及 其放 射 自显影结 果 （ ） ｏ １ Ｅ Ｒ ｃ Ｉ酶切 后电泳 圈 ； （ ）放 射 自显影后 的阳性 ／ ｌ
翻译溶液 Ｉ １ ，然后取 Ｉ ２ 和Ｉ液 和１５１ １０ ， １ 液 Ｏｌ Ｉ ， ｕ
ＩＦ， Ｄ Ｏｃ ＶＦ ＮＡ探针 ２ ｇ ３ Ｐａ ｄ Ｔ ２ｌ ｉ ｌ ， ｚ ２ １ ， － －Ｃ Ｐ ｚ ， ０Ｃ 加无菌水至 １０ ０川，在 １１１ 的水浴上 反 应 ５ ℃ １ ． ５小时后， 终止反应， 通过 Ｓｐａｅ Ｇ ７（ Ｘ ｅｈｄｘ ５ － １ ５ｍ床体积）柱分离纯化标 记 的 ＤＮＡ探 针。 ｃ
产品。 －－－Ｃ Ｐ（ ＂ ａｄＴ 英国进口， Ｐ 由中科院生物
物理所与微生物所支援） Ｔ 。 Ｂ与 Ｌ Ｂ培 养基 ， 杂交缓冲液等均照文 ｗ ｒ Ｍｏｓ Ｇ ｎ Ｌｂａ （ Ａ Ｂｃ ｒ ｔ Ｎ Ｂ ｎ ｕ ｅｅ ｒｒ Ｂ Ｌ ｝） ｏ ｈ ｅ ｏ ｅ ｉ ｙ
４ ． ３ ９ ０． ５ ９１ － ２
个 Ｖ 基因作探针进行吸印杂交，所得到的 ８ Ｈ
个球蛋白 ＶＩ Ｉ基因克隆则代表了小鼠一个基 因 组中一个 Ｖ 、基因亚组包含有 ８ 个基因。 这一 结果是与 Ｌｄｒ和 Ｋｅ ｅｅ ｍｐ等所报道的免疫 球 蛋白重链 Ｖ 。基因包括 ５ １ － ０个亚组， 每个亚 组包含 ８ 基因， 一个小鼠基因组中有 ４ －８ 个 ０ ０ Ｖ Ｈ基因的推论基本一致［８１ 我们如若使用 Ｌ ，。 ７９ ，
遗传
Ｉ Ｅ） Ａ （ ｅｉ ） （ ） １－ ２ １ ８ Ｉ ＩＴ Ｓ Ｂ ｉ ｇ ８ ； Ｅ Ｉ Ｒ ｊ ｎ ６ ９ ０ ６ ９
小鼠 （Ａ Ｂｃ 分化 Ｂ Ｌ ／）未 型免疫 球蛋白 链 重 可变区 （ ｖ ）基因的克隆‘ ， ２ ）
杨 兴 曲 志 宝兰 杨 成 刘 民 学 伟 李 文贤 张云 王 伏 陈 虹 湖 军
受体菌 Ｅ ｃｌＬ ３ ２混合 ， ３ ℃ 吸附 １ 分 ． ｉ ９ ｏ Ｂ ７ ０ 图２ 所示。凝胶电泳照片和自显影结果使我们
钟， 加人软琼脂后倒人平皿中， ７ 过夜培养， 发现有两条含有 Ｖ 基因片段的自显影带。５ ３℃ ． ０
再吸印、 杂交和 自显影， 其结果如图 １ 所示。从 ｋ 的明显一条带为 Ｖ， ｂ ，基因片段，显然是无疑 图１ 中可见所获得的噬斑几 乎 １０ 为 阳 性， 的。但是在 Ｃ ａｏ ４ 的左、 ０拓 ｈｒｎ Ａ 右臂 Ｄ ＮＡ 带间 证明了我们得到克隆确系免疫 球蛋 白 Ｖ ｙ基因 的一条不太明显的自显影带 ，它恰好相当琼脂 克隆。 糖电泳上的相应的一条不完全酶切的 ７ ０ ｃＲ －２ ｋ ｂ片段包装在 Ｃ ａｏ ４ 的左、 ｈｒｎ Ａ 右臂之间构成的， 因为插人的 小鼠 Ｄ ＮＡ 是 Ｅｏ ｃＲ Ｉ不完全酶切， 所以尚会 保留一定的 Ｅｏ ｃＲ Ｉ切点， 因此再用 Ｅｏ ｃＲ Ｉ酶 切时依酶切程度不同也会出现较多的带，如图 ２的 （） １ 中所见。 除 Ｃ ａｏ ４ 的左、右臂 ｈｒｎ Ａ Ｄ Ａ片段之外， Ｎ 尚可发现有 ５ 条带。此外，从 图 ２的 （）中所看到的在 ２．ｋ ２ １ ｂ下部的浅的 ８ 自显影带， 也含有 Ｖ 基因片段。 我们初步分析
文献 【 ］进行。 ２ ６ 克隆的 Ｖｙ基 因片段 的 Ｅ ｏ ｌ酶 切与杂 ． ｃＲ
Ｌ Ｒ
一 ２。 一 １８
一 —
夕６ ． ５５ ．
・ ４． 一 ８ — 一 ３４ １８ ．
交
照文献 〔， 进行。 ３ １］ ０
结果 与讨 论
（ 一） 获得了小鼠未分化型免疫球蛋白靛
链 可变区 ＶＨ基因克隆 ， 并用 Ｅ ｏ Ｉ酶 切从 中 ｃＲ
（ 黑龙 江省 科 学院 应用 微生 物研 究 所 ， 尔滨 ） Ｅ基 因 的。
２ Ｄ Ａ的吸印转移 ． Ｎ
述。
照文献 ［， ３５所 ］
首先分别配制缺口
２０
厂， 了 军
丫 犷 ｌ’
丁 。 ６’ 了 ９ ９ １０ １ 抢
论
魂 几
几 ． 且 ． １ ． ． ．． １
了 粼 尸 日 守 川 只
工
・
力 月 八 二 Ｌ 刁
，， ． 且
ｌ ｅ ， ． Ｊ
ｔ 工 一 月 Ｊ月
ｈ
， 二
月卜
１
２
３
４
５
图 ｊ
ｊ
乙
ｓ
４
云
异。但是在等电点聚焦电泳的带谱中，它们之 间的差异是很明显的， 肾脏比肝脏多第 ３，１， ＇１＇ １＇ １， １‘ ３， 和 ５五条带 ， ４ 比肝脏少第 ９ 和 １‘ ’ １两 参
Ｖ ｆ探针 ＤＮＡ，密封 后在 ４ 士１ 过夜 ，取 出 ， ２ ℃
ｋｂ
后用 ２ ＳＣ ０１ ＤＳ溶液洗 ４次（ Ｘ －．％Ｓ Ｓ 室温下） ， 每次 ５ 分钟， 然后换 ０１ Ｓ －．０Ｓ 液洗， ．多ＳＣ ０１ ＤＳ Ｊ ａ ５－６ ℃洗 ３ 间隔 １ ０ ０ － 次， ５分钟， 出置 ８℃ 干 取 ０ 燥， 做放射自显影。 ５由阳性克隆中提取纯化 总 Ｄ ． ＮＡ 照
了８ 个免疫球蛋白 Ｖ ＊基因克隆。 从其中之一 进行复筛。复筛方法是用干热灭菌的牙签挑取
带，Ｌ Ｒ分Ｖ表示 Ｃ ａ ｎ 的左、 ． ｊ ｈｒ ４ ｏ Ａ 右臂 Ｄ Ａ 带二 Ｎ
任意一个阳性噬斑， 悬浮在 １０１ Ｍ Ｓ４ 酶切， 。 汤琼脂糖上电泳，电泳后使 Ｄ Ａ ０１ １Ｍ Ｍ ０ ４ ０ ｇ 在 ． ７ Ｎ 溶液中， 轻轻地摇动， 使之均匀分布， 再与１０ ０月 转移到滤膜上， 再进行杂交和自显影， 其结果如
２ ３． ３
条带。总的看来从带谱来区分组织间 Ｌ Ｈ 同 Ｄ
工酶的差异性 ，等电点聚焦电泳的带谱比一般 电泳的带谱分辨能力要高得多。这样前一方法 能提高我们对各组织的 Ｌ Ｈ同工酶特异性 的 Ｄ 识别能力。
［ ］ Ｒ 、Ｒ Ｇ ｅ ａ． １６． ｉ ｃ．１３ ４ １ ５ ｏ。 ． ｔ ： ９６ Ｓ ｅ ｅ ５ ：１ １． ． ｌ ｃ ｎ ， 汇 」 Ｗｉｏ ， Ｃ ｅ ａ． １６． ｄ Ｐｏ． ２ ： １５． ６ ｌ ｎ Ａ． ｔ ： ９４ Ｆ ． ｃ ３ ２ ８ ｓ ． ｌ ｅ ｒ ，