食品中合成着色剂测定
高效液相色谱法同时测定食品10种合成着色剂
分析与检测高效液相色谱法同时测定食品10种合成着色剂□罗长琴重庆市万州食品药品检验所摘要：在食品工业发展过程中不可避免地要使用添加剂，其中合成着色剂因其性质稳定以及色彩明亮等具有广泛的 应用空间。
人们长期食用合成着色剂对身体具有一定的危害，因此应当对此进行控制。
本文选取了一定样本与试剂，运用 高效液相色谱法同时测定了食品中含有的10种合成着色剂，得到了比较满意的实验效果。
关键词：高效液相色谱法；食品；合成着色剂1材料选择与方法1.1仪器选择与试剂本次实验中选择的仪器是高效谱相色谱仪。
合成着色剂的标液为曰落 黄、亮蓝、柠檬黄、苋菜红以及胭脂 红，为0.5 mg/mL。
80%的诱惑红为 SIGMA-ALDRICH。
甲醛是液相色谱淋 洗液，60 m L的甲醒与40 m L的甲酸 进行混合，蒸馏水与20%的柠檬溶液 进行调节，将p H值调为6。
其他选择 的试剂是分析纯。
1.2溶液配制方法进行不同浓度的标准物质储备液的配制工作，喹啉黄为0.97 mg/mL，亮蓝为0.25mg/mL，日落黄、柠檬黄、靛蓝、胭脂红、胭脂红与苋菜红为0.5 mL,新红为0.75 mg/mL，诱惑红 为0.8mg/mL,选取2m L的储备液放置到50 m L的星瓶之中，加水混合 均匀以后将其配制成标准溶液。
基于 此绘制相应的峰面积与标准曲线。
1.3样品处理方法在样品处理方法上，首先配制样 品的溶液，根据聚酰胺吸附法进行色 素的提取工作，样品浓缩之后加水进 行溶解定容，在包括赤藓红的样品中 运用50%的甲醇进行溶解定容，之后 进行HPLC分析。
1.4液相色谱分析条件本次实验中的色谱柱为Agilent-ZORBAXSB-C 5n m, 4.6 m m X 250 mm,有机相为甲I S乙腈(3 :1), 进行梯度洗脱工作，通过多通道检测，最终达到的波长：亮蓝为625 nm，靛蓝为290 nm,新红、赤藓红与苋菜红为529 nm，柠檬黄与喹啉黄为428 nm，胭脂红与诱惑红为507 nm，日落黄为483 nm。
团体标准编制说明
团体标准编制说明《谷物食品中合成着色剂的测定–碳酸氢钠提取法》工作简况一、任务来源根据检测机构和质控样生产公司对谷物类食品中合成着色剂测定标准的需求，由宁夏粮油产品质量检测中心、江苏安舜技术服务有限公司、宁夏农林科学院和宁夏化学分析测试协会联合提出《谷物食品中合成着色剂的测定–碳酸氢钠提取法》的申请，由宁夏化学分析测试协会组织专家审议通过，于2020年11月提出了《谷物食品中合成着色剂的测定–碳酸氢钠提取法》的编制申请并获批，由申请单位宁夏粮油产品质量检测中心组织实施，筹备标准的编写。
二、标准的起草单位及起草人本标准起草单位：宁夏回族自治区粮油产品质量检测中心、江苏安舜技术服务有限公司、宁夏农林科学院、宁夏化学分析测试协会。
本标准主要起草人：张春娥、廖若宇、刘新保、孙悦、胡海祥，孙华，郭雨、袁海静、王芳、高晖、赵静、张小飞。
三、编制背景柠檬黄和日落黄的价格低廉, 作为食品药品的染色剂能使食品外观呈现出与蛋黄相差无几、诱人的黄色, 虽然我国《食品添加剂使用标准》规定了谷物制品中柠檬黄和日落黄的使用限量，但是长期过量食用会对人体产生危害。
柠檬黄是一种食品常用的食品添加剂，添加适量柠檬黄的食品颜色饱满鲜亮，常用于饮料、蜜饯、酱腌菜等食品中。
据报道，目前有不法商贩将柠檬黄添加到馒头制品中，制作出颜色鲜亮的掺假“玉米馒头”，柠檬黄是一种水溶性的偶氮染料，长期食用将对大众的身体健康产生负面影响。
近年来的“毒豆芽”和“染色馒头”事件表明，不法商贩会在食品中非法添加对人体有害的工业合成色素从而谋取利益。
因此，相关监管部门应加大对食品中的色素是否按相关规定添加使用，亟需构建精准的色素检测技术。
目前的国标检测方法在饮料和酒类等液体中色素的检测中应用良好，检测样品加标回收率高，但是在谷物加工品和面制品中色素提取工艺受限，样品加标回收率低。
而且，在食品安全风险监测任务中，存在样品种类多，检测内容多样化而标准适用范围单一的问题，标准不适用于规定检测任务的现象，可能会存在含有违禁成分或是添加剂超出 GB2760-2014 规定的最大使用限量标准要求而检不出的隐患。
食品中9种人工合成着色剂的检测
广东化工2019年第11期·196·第46卷总第397期食品中9种人工合成着色剂的检测吴嘉彦，戴辉(品测(上海)检测科技有限公司，上海201108)The Determination of Nine Synthetic Colors in FoodWu Jiayan,Dai Hui(Pince Testing Co.,Ltd.,Shanghai201108,China)Abstract:This study was based on the national standard method,and use ammonia-70%methanol(1︰99V/V)as extract solvent.Sample solution was purified by weak anion solid phase extraction,and finally carried out by the ultra high pressure liquid chromatography with ultraviolet detector.Analyses were separated by gradient elution and measured by the different waves.Nine types synthetic colors in food that could be measured simultaneously.The limitation of determination was0.2mg/kg,the range of calibration curves was0.2~10mg/L,the range of recoveries was85.0%~110.0%and the repeatability was2.0%~8.9%).Keywards:synthetic colors；colors in food；ultra high pressure liquid chromatography食品着色剂，又称食用色素，是种以给食品着色为主要目的的添加剂。
食品中6种人工合成着色剂的快速检测
联 系人 简 介 ： 恒 （９ ６ ） 女 ， ： 帅 ， 士 ， 究 刘 １７ ， ：程 ｌ 顾 研
色谱 分 析 。 Ｅ ｉ ｍａ
１６ ２
化 学研 究 与 应 用
第２ ３卷
测波长 在 可见 光 区 ， １ ． ％ 亚 铁 氰 化 钾 溶 液及 以 ０６
（ ｈ ｎ ｄ ｒｄ ｃ ｕ ｌｙＳ ｐ ｒ ｓ ｎ＆ ｈｓ ｃ ｔ ｎ ｌｓ ｔ Ｃ ｗ ｇ ｕ６ ０ ４ ，Ｃ ｉ ） Ｃ ｅ ｇ ｕ Ｐｏ ｕ ｔ ａ ｔ ｕ ｅｖ ｉ Ｑ ｉ ｉｅ ｉ ｃｉ ｎ ｜ｍｅ ｔ ｎ ｄ １ ０ １ ｈｎ ｐ ｏ ｉ ａ
Ａｂ ￣ ｃ ｔ Ａ ｏ ｅ ｍｅｈ ｄ ｏ ｆ ｓ ｅｅ ｍｉａ ｉｎ ｆ ｓｘ ｉｄ ｏ ｙ ｔ ｅ ｉ ｏ ） ｎ ｓ ｎ ｏ ｄ ｌ Ｉｇ ｐ ｒ ｒ ｎ ｅ ｉ ｕｄ ｓ ｒ ； ： ｎ ｖ ｌ ｃ ｔｏ ｆ ｒ ａ ｔ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｏ ｉ ｋ ｎ ｓ ｆ ｓ ｎ ｈ ｔ ｃ ｂｒ ｔ ｉ ｆ ｏ ｓ ’ ｄ ｈ ｅｆ ｍａ ｃ ｌ ｉ ｏ ｃ ａ ｙ ｏ ｑ
成 为色 素分 析 的主 流 。 高效 液 色 谱 法 是 一 种 很 好 的分 离技 术 ， 用 高 效 液 相 色 谱 法 测定 人 １ 合 应 ： 成着 色剂 准 确 度 高 、 法 灵 敏 、 现 性 好 ， 国家 方 砸 为 标 准方 法 ， 样 品 的前 处 理 技 术 广 泛 采 媚 的 是 色 但
在 可见 光 ， 样 品 中 的杂 质 在 可 见 光 区 一般 元 且
此 探 寻一 种 简便 、 速 、 确 、 耗 、 境 污 快 准 低 环
小 的检 测 方 法 ， 保 障 食 品 安 全 具 有 深远 的 意 对
液相色谱法测定食品中合成着色剂
液相色谱法测定食品中合成着色剂作者：***来源：《食品安全导刊·下》2024年第05期摘要：目的：建立一种液相色谱法测定食品中合成着色剂的方法。
方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用液相色谱仪（配二極管阵列检测器）测定，外标法定量。
结果：11种合成着色剂在0.2～10.0 μg·mL-1线性关系良好，线性相关系数为0.999 4～1.000 0，加标回收率为94.2%～109.6%，相对标准偏差在0.55%～5.52%。
柠檬黄、喹啉黄、日落黄、胭脂红、新红和赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红和靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。
结论：该方法的重复性好、灵敏度高、实用性强，可以同时测定食品中多种合成着色剂的含量。
关键词：合成着色剂；液相色谱法；固相萃取Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid ChromatographyZHU Xiaolei（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction着色剂在食品加工过程中可以改善食品的口感和外观，但过量使用会对人们的健康造成不良影响。
HPLC法测定保健食品胶囊壳中合成着色剂含量
HPLC法测定保健食品胶囊壳中合成着色剂含量黄玉琴（宁德市食品药品检验检测中心，福建宁德 352100）摘 要：目的：建立一种高效液相色谱法测定保健食品胶囊壳中7种合成着色剂含量的方法。
方法：用60 ℃热水溶解胶囊壳，通过聚酰胺SPE固相萃取柱富集洗脱，得到含有合成着色剂的待测样，经安捷伦ZORBAX C18色谱柱分离，甲醇-乙酸铵溶液作为流动相梯度洗脱，各合成着色剂的特征波长为检测波长，DAD检测器检测，外标法定量。
结果：7种合成着色剂分离效果良好，在1～20 µg/mL呈现良好线性关系，相对系数均大于0.999 0，回收率为86.42%～96.70%，RSD均小于1%。
检出限为0.5 mg/kg，定量限为 2.0 mg/kg。
采用该方法对13批明胶空心胶囊和4批保健食品胶囊壳进行测定，均检测出国标允许使用的合成着色剂。
结论：该方法操作简便、准确可靠，适用于保健食品胶囊壳中合成着色剂的测定。
关键词：高效液相色谱法；合成着色剂；明胶空心胶囊；保健食品胶囊壳Determination of Synthetic Colorant in Capsule Shell ofHealth Food by HPLCHUANG Yuqin(Ningde Testing Center for Food and Drug Control, Ningde 352100, China) Abstract: Objective: To establish a method for the determination of seven synthetic colorants in health food capsule shell by HPLC. Methods: the capsule shell was dissolved in 60 ℃ hot water, enriched and eluted by polyamide SPE solid phase extraction column to obtain the sample to be tested containing synthetic colorant. It was separated by Agilent ZORBAX C18 chromatographic column, and gradient eluted by methanol ammonium acetate solution as mobile phase. The characteristic wavelength of each synthetic colorant was the detection wavelength, detected by DAD detector and quantified by appearance method. Results: the separation effect of the seven synthetic colorants is good, showing a good linear relationship in the range of 1～20 µ g/mL, the relative coefficients are greater than 0.999 0, the recovery is 86.42%～96.70%, and the RSD is less than 1%. The detection limit is 0.5 mg/kg and the quantitative limit is 2.0 mg/kg. 13 batches of gelatin hollow capsules and 4 batches of health food capsule shells were determined by this method, and the synthetic colorants allowed by the national standard were detected. Conclusion: the method is simple, accurate and reliable. It is suitable for the determination of synthetic colorants in health food capsule shell.Keywords: high performance liquid chromatography; synthetic colorants; Gelatin hollow capsule; health food capsule shell如今人们对于合成着色剂的添加认知多是在饮料、果冻、熟肉制品中，在这些食品中，国家规定其能够添加一定量的合成色素，但本文所探究的保健食品胶囊壳是否超范围添加合成着色剂却往往容易被人们所忽视。
食品中合成着色剂的测定标准操作规程
目录Table of Contents一、目的Objective -------------------------------------------------------------------------------------------2二、适用范围Scope -----------------------------------------------------------------------------------------2三、职责Responsibilities -----------------------------------------------------------------------------------2四、工作程序Contents --------------------------------------------------------------------------------------2五、相关文件Related Documents -------------------------------------------------------------------------3六、相关记录Related Records -----------------------------------------------------------------------------3七、历史修订记录Revisions ------------------------------------------------------------------------------3八、附录Appendix ------------------------------------------------------------------------------------------4文件审批记录Review And Approval1 目的为了规范食品中合成着色剂的检测。
高效液相色谱法对肉制品中人工合成着色剂的测定
名称测定结果(mg/L)回收率(%)平均本底值加标量加标实测值柠檬黄5.720.024.192.080.080.393.2苋菜红10.520.027.691.580.073.892.1胭脂红0.020.018.492.080.075.294.0日落黄0.020.018.793.580.075.794.6亮兰0.020.018.492.080.074.192.6高效液相色谱法对肉制品中人工合成着色剂的测定文/王群于洪芳刘强合成着色剂作为一种添加剂广泛用于食品中,国家对其使用有明确的限量标准,但在市场上却时有发现这些人工合成着色剂被滥用,对它的检测监管是相当重要的,国标中测定这些人工合成着色剂方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法,但无论哪一种方法都涉及样品前处理。
国标中第一法高效液相色谱法是将食品中人工合成着色剂用聚酞胺吸附法制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和峰面积比较进行定量。
在大量的实验过程中发现,当遇到含有多量蛋白质、脂肪等固体样品如熟肉制品时,按国标法测定提取色素困难,合成着色剂无法被聚酞胺粉完全吸附,样品回收率低。
我们在原基础上加以改进,能较好地将样品中的着色剂提取,从而大大地提高测定的精密度和准确度。
1、材料与方法(1)仪器与试剂。
L C1100高效液相色谱仪,带紫外检测器(Agile nt ,美国);超声波清洗器;乙腈(HPLC 级);石油醚(沸程30℃～60℃);无水乙醇-氨水-水(7+2+1)溶液;乙酸铵溶液(0.02m ol/L),经0.45μm 滤膜过滤;硫酸锌溶液(300g/L);铁氰化钾溶液(150g/L);合成着色剂标准溶液为国家标准物质稀释而成;实验用水为超纯水。
(2)仪器工作条件。
色谱柱:ODS-C184.5m m ×100m m 柱温:30℃;流动相:乙腈:乙酸铵溶液(0.02m ol/L );流速:1mL/m i n ;紫外检测器,254nm 波长;梯度洗脱:0min95%乙酸铵5%乙腈10min 70%乙酸铵30%乙腈12min95%乙酸铵5%乙腈(3)试样处理。
浅谈食品检测中合成着色剂的测定方法
浅谈食品检测中合成着色剂的测定方法俗话说“人是铁，饭是钢，一顿不吃饿得慌”，可见食品对于人类的重要性。
随着全球经济的高速发展，食品安全成了民众关心的大事，如何才能确保食品安全则成为热点问题，其中作为食品安全的一种监控手段，食品检测的重要性就在过程中凸显出来了。
食品中的着色剂的检测是食品检测中的一项重要检测项目，受到了相关部门的高度关注。
鉴于此，作者全面分析了食品检测中合成着色剂的检测方法，以期提高食品检测的效率，保障食品安全。
标签：食品检测；合成着色剂；测定方法与食品安全相对的就是食品安全危害，食品安全危害可以大致分为生物危害、化学危害和物理危害。
食品添加剂就是化学危害的一个重要来源。
按照国家食品添加剂的管理规定，对允许使用的添加剂按照规定量添加使用不会对人产生危害，但是对于在食品添加剂名单上明确规定不可以添加或是超量添加允许添加的添加剂，都会产生食品安全危害。
合成着色剂目前的使用范围广、用量大，长期过量摄入会对人体产生很大的危害。
但是要想对为数繁多的食品进行是否含有合成着色剂的检测，则需要采取适宜的测定方法，方可提高检测效率，提高监管力度和监管的有效性，从而打击违法添加有害物质的行为，保障人民的生命安全。
1 合成着色剂概述着色剂作为食品添加剂使用的主要作用就是改变食品的色彩，是一种相对传统的食品色彩调节方法。
根据市场调查分析，消费者在购买食品时，一般会考虑食品的色、香、味、形情况，同时，根据研究显示，食品的色彩对于人的食欲有刺激作用，可以勾起消费者的购买欲。
因此，食品生产商为了所生产食品的销量，在食品色彩上大下功夫，着色剂也就被广泛的应用开来。
近年来，国际国内的食品安全事故频发，其中不乏着色剂的滥用导致的食品安全事故。
事故频发导致了民众对于着色剂产生了怀疑与强力排斥，同时也受到了国家相关部门的关注与大力监督治理，在消费者的排斥与国家部门的监管下，着色剂滥用的情况得到了一定的遏制。
但是一些不法商家为了经济利益，不惜冒着触犯法律的风险，试图通过食品检测的漏洞来避免不法行径被发现。
食品中八种人工着色剂的测定——高效液相色谱法
Science and Technology & Innovation ┃科技与创新·95·文章编号：2095－6835（2015）16－0095－02食品中八种人工着色剂的测定——高效液相色谱法张璐璐，耿 莉，张岩岩（阜阳市产品质量监督检验所，安徽 阜阳 236000）摘 要：采用固相萃取—高效液相色谱法检测了8种人工合成着色剂。
从加标回收率结果来看，本方法符合要求。
采用高效液相色谱法同时检测8种人工合成着色剂，有利于节约检测时间和检测资源，为基层检测部门日常的合成着色剂检测提供参考条件。
关键词：高效液相色谱法；着色剂；色素；固相萃取中图分类号：TS202.3 文献标识码：A DOI ：10.15913/ki.kjycx.2015.16.095人工合成着色剂又称人工合成色素，常以苯、甲苯等为原料，先制备色素中间体，再将一种或两种中间体进行磺化、偶合、缩合和偶氮化等化学反应而制成。
现有的检测标准有《食品中合成着色剂的测定》（GB/T 5009.35—2003），使用高效液相色谱仪检测新红、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、赤藓红、亮蓝。
按照《食品中诱惑红的测定》（GB/T 5009.141—2003）规定，使用纸色谱法测定食品中的诱惑红。
按照《食品中的诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量测定 高效液相色谱法》（SN/T 1743—2006）规定，使用高效液相色谱法检测诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄。
《水果罐头中合成着色剂的测定 高效液相色谱法》（GB/T 21916—2008）规定，使用高效液相色谱检测罐头中柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红。
不同标准共涉及柠檬黄、新红、酸性红、诱惑红、靛蓝、赤藓红、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝10种人工合成色素，而且以上四种标准的检测条件各不相同，这就给检测工作带来了巨大的不便，不但浪费了我们宝贵的检测时间，还要购置大批实验设备，造成极大的浪费。
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食品中合成着色剂的测定
摘要:食品中合成着色剂高效液相色谱的测定。
方法采用
c18(10?%em,4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱，流动相为乙酸铵+甲醇，流速1.0ml/min，检测波长254nm，柱温设为23℃，进样量20?%el。
本检测方法对gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定进一步细化，使用着色剂小柱代替gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定中色素提取，检测时间缩短，检测结果精确度提高，具有一定的实践指导作用。
关键词:食品合成着色剂
1、前言
食品中合成着色剂是一种已知的有害物质，其随食物被摄入人体内后,很快被肠道吸收。
由于着色剂在人体中具有累积作用,长期过量摄入直接危害到人们的健康特别是对少年儿童的健康危害更为
严重，孩子的肝脏解毒和代谢功能都比较脆弱，如果摄入过多的人工合成色素，会加重肝脏及胃肠道的负担，干扰体内正常的代谢反应，出现不同程度的食欲不振、消化不良、腹痛、腹泻等症状
2、原理
样品经水溶解，通过活化的着色剂小柱吸附色素，用洗脱试剂洗脱，用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3、试验部分
3.1所用试剂
3.1.1水：符合gb/t6682规定的一级水要求
3.1.2 甲醇：色谱纯。
3.1.3 氨水：分析纯
3.1.4乙酸铵溶液（0.02mol/l）：称取1.54g乙酸铵加水至1000ml 溶解，经0.45?%em滤膜过滤
3.1.5标准品：柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝
3.1.6氨化甲醇5%：95ml甲醇加5ml氨水
3.2仪器与设备
3.2.1高效液相色谱仪
3.2.2色谱工作站
3.2.3紫外检测器
3.2.4 c18(10?%em,
4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱
3.2.5固相萃取装置
3.2.6着色剂小柱
3.2.7氮吹仪
3.2.8漩涡混合器
3.2.9高速离心机
3.3方法
3.3.1合成着色剂标准溶液浓度的配制
准确称取标准品着色剂各100mg,置于100 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,该贮备液浓度1mg/ml。
配制50.0?%eg/ml混合使用液，准确吸取储备液各5.0 ml于100 ml容量瓶用水定容至刻度。
3.3.2样品预处理
桔子汁、果味水等：称取20.00g～40.00g，放入100ml烧杯中，含二氧化碳的试样加热驱除二氧化碳
配制酒类：称取20.00g～40.00g，放入100ml烧杯中，加小碎瓷片数片加热驱除乙醇。
硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5.00g～40.00g粉碎试样放入100ml烧杯中，加30ml水，温热溶解，若试样溶液ph值较高，用柠檬酸调ph值到6左右。
巧克力及着色糖衣制品：称取5.00g～10.00g，放入100ml烧杯中，用水反复洗涤色素，到试样无色素为止，合并色素漂洗液为试样溶液。
3.3.3 色素提取
聚酞胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调ph值到6，加热至60℃，将1g聚酞胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以g3垂融漏斗抽滤，用60℃ph=4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5ml收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5ml经滤膜(0．45?%em)过滤，取10?%el进高效液相色谱仪。
液-液分配法(适用于含赤藓红的样品)：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2ml盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5％)10～20ml，振摇提取，分取有机相，重复提取，至到有机相无色，合并有机相，
用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10ml，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10ml，转移至分液漏斗中，加60ml正己烷，混匀，加氨水提取2～3次，每次5ml合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5ml经滤膜(0.45?%em)过滤，取10?%el进高效液相色谱仪。
3.3.4色谱条件
流动相:a相为乙酸铵溶液,b相为甲醇；梯度洗脱：甲醇20%～35%，3%/min;35%～98%,9%/min;98%继续保持6 min。
流速1.0ml/min;柱温23℃,进样20?%el;紫外检测波长为254nm;以色谱峰面积外标法定量。
在此条件下，测得保留时间，样品溶液中主峰和其它杂峰达到完全分离。
3.3.5样品的测定
用干净的25ml比色管称取混匀试样约5g，加少量水混匀溶解静置过夜。
用水定容至刻度，离心10min。
加3ml甲醇3ml水活化着色剂小柱，注意此时不要干柱应立即向着色剂小柱加入5ml样品，加3ml水3ml甲醇进行淋洗，然后加2ml5%氨化甲醇进行解析，着色剂小柱下接塑料小试管收集解析液。
氮吹仪吹干塑料小试管，注意氮气流量不要开太大以免把样液吹出。
再加1ml水，在混匀器上混匀1min，此时注意混匀时样液不要触碰试管盖，处理好进样备用。
3.4样品测定结果
取试样溶液20?%el,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,获取峰面
积,用外标法进行计算，获得合成着色剂含量结果。
4、结果与分析
4.1线性关系考察
在3.3.2色谱条件下,将不同浓度的标准工作液依次从低浓度到高浓度进样,以对照品溶液浓度为横坐标(x),峰面积为纵坐标(y)绘制标准曲线,并计算标准曲线的回归方程及相关系数。
其线性回归方程为：y=2??08x+31012,相关系数r=0.9992,其结果表明线性良好。
4.2检测限考察及方法精密度实验
以产生信号(峰高)为基线噪音标准差3倍的样品浓度作为该方法的检出限即0.24mg/kg。
以同一加标的样品重复测定5次，测得其峰面积的rsd为2.68%，表明本法的精密度良好。
4.3回收率实验
为考察方法的准确度,以现场样品中加入低、中、高三种含量的标准液,然后测定样品溶液和标准溶液计算加标回收率,设计10?%eg、25?%eg、50?%eg三个添加浓度,每个浓度作为2平行,测得回收率为98%。
5、本文测定方法特点
5.1对国家标准gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定检测步骤上进行了取代，比如3.3.3中的色素提取用着色剂小柱代替，节省了检测时间，该方法经过反复试验总结而来。
对食品测定合成着色剂实际操作具有一定的指导作用。
5.2在液相色谱仪上设置梯度洗脱条件时，20%～35%，3%/min需要5min; 3%/min,35%～98%需要7min; 98%继续保持6 min,总共
18min采集完毕。
梯度洗脱条件对样品检测结果的准确性非常重要，因此色谱峰的分离重在色谱条件上。
参考文献:
[1]gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定。