NAA和6-BA浓度配比对铁皮石斛原球茎增殖、分化组织培养的影响
铁皮石斛组培快繁技术研究进展
铁皮石斛组培快繁技术研究进展作者：王朝雯来源：《现代农业科技》2020年第11期摘要; ; 铁皮石斛是濒危药材之一，本文通过查阅铁皮石斛相关文献，对其组织培养繁殖技术研究现状进行了综述，以期为铁皮石斛组培快繁技术研究提供参考。
关键词; ; 铁皮石斛;组织培养;快繁技术中图分类号; ; S567.239; ; ; ; 文献标识码; ; A文章编号; ;1007-5739（2020）11-0068-01; ; ;开放科学（资源服务）标识码（OSID）铁皮石斛为多年生草本植物，可有效提升人体免疫力，具有延缓衰老、增强血管扩张的效果。
由于铁皮石斛种子小且没有胚乳，只有在真菌环境下才有萌发的可能，因而栽培难度较大[1]。
组织培养是快速繁殖铁皮石斛的主要方式，目前国内外专家进行了大量研究，并取得了较为显著的成果。
1; ; 外植体的选取外植体除种子外，还有无菌幼苗茎段。
饶宝蓉等[2]通过分析发现，以种子作为外植体较茎段外植体其无菌系的建立效率较高，种子诱导感染率更低。
同时，种子外植体的长势更加整齐。
总体来说，选取种子作为外植体较为理想。
2; ; 初代培养基选择培养基选择是组培的关键，不同的物种、品种以及外植体材料所采用的培养基也应有所区别。
同时，处于不同培养阶段、基于不同目的而进行的培养，应从培养基上进行区分。
2.1; ; 基本培养基诱导培养基是常见的初代培养基，也可采用分化培養基作为初代培养基。
铁皮石斛有多种培养基，可根据外植体的不同而选择适合的培养基。
林江波等[3]采用SRR检验方法对各处理因子进行检验后发现，从原球茎诱导率方面分析，MS培养基与1/2MS培养基并没有明显差异，而二者与VW培养基的诱导率差异较为明显。
杨立昌等[4]对铁皮石斛的愈伤组织情况进行了分析，结果发现，与MS培养基相比，1/2MS培养基的出芽率更高，表明在激素浓度适合的情况下，培养基的盐含量较低对不定芽的分化更加适合。
2.2; ; 激素及添加物有利于铁皮石斛愈伤组织的培养基种类较多，NAA与IBA等激素的应用较为常见;此外，还有6-BA等激素。
不同激素配比对铁皮石斛组培的影响
Effect of Different Ratio of Hormones on Tissue Culture of Dendrobium ca ndi dum
DENG Ke (Nanyang Agricult ural School ,Nanyang 473000)
Abstract :The st udy was st riving to find o ut t he effect of inducing of callus formatio n during t he rapid p ropagatio n in Dend robi um can di d um , wit h different basical cult ure medium and concent ratio n of hormo nes. The result s showed t hat t he optimal inducing medium was made of N6 among t he different inducing medium of MS ,B5 ,N6 , RM when inducing of callus formatio n ,moreover ,t he best effo rt was adding 1 mg ·L - 1 of 62BA amo ng t he four varies co ncent ration. Key words :Den d robi um can di d um ;tissue cult ure ;callus
铁皮石斛俗称铁皮枫斗[1] ,因其茎节处显褐色 , 又名黑节草[2] ,属于多年附生草本植物 ,常附生于疏 林中的树干或碳岩地区岩石上 、空气湿润凉爽的环 境 ,耐干旱与严寒 ,生于树木上高达 60 cm ,直径 4～ 8 mm ,生于石上者高为 5～20 cm[3] 。河南是石斛 属植物生长的最北界 。
不同激素配比对铁皮石斛兰组培苗生根的影响
通 讯 作 者 ：陈 己任 ，博 士，副教授 。Ｅ － ｍ ａ ｉ ｉ ： ２ ７ ９ ９ ７ ４ ２ ５ ０ ＠ ｑ ｑ ． ｃ ｏ ｍ
项 目来源 ：湖南农业大学校青年科学基金项目 （ １ ３ Ｑ Ｎ １ ９ ） 。
中国园艺文摘
Ｃ ＨＩ ＮＥ ＳＥ Ｈ０Ｒ ＴＩ ＣＵＬ Ｔ ＵＲ Ｅ Ａ Ｂ Ｓ Ｔ ＲＡ ＣＴ Ｓ
不 同激素配 比对铁 皮石斛 兰组培 苗生根 的影 响
朱丽娜 ，陈 己任 ，张 莹 ，陈仕贵 。
（ １ ． 湖南农业大学 园艺园林学院 ，湖南 长沙 ４ １ ０ １ ２ ８ ； ２ ． 湖南农业大 学 农 学院 ，湖南 长沙 ４ １ ０ １ ２ ８ ）
术 ，选取 经组织培 养获得 的不定 芽再生 苗为试 验材料 ，分 别在培养 基 中添加 不 同的激素 ，比较 它们的生 根能 力 ，得 Ｉ ． ３ ． ２ 试验材料 的接 种 将石斛兰不定芽再 生苗形成的丛
出最适 合石斛 兰生根 的培养体 系 ，为 解决石斛 兰生根 难题 提供科学依据 。
添加 ２ ． ０ ｍｇ ／ Ｌ ６ － Ｂ Ａ，此组对 比试 验 中石斛 兰的生根 能
力较其他对比试验生根能力弱。在 Ｆ 、Ｊ 、Ｈ、Ｉ 组试验中，
石斛 兰植株 的生根能 力总 体而言较 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ组 强。而 Ｅ组试验 中 ，石斛 兰植 株的生根 能力最强 ，根 的数 量最多 ， 不 同试验 处理 组铁皮石斛兰生根情况如附 图所示 。
值至 ６ ． ２ ，不 同处理激素 配比如表 １所示。
表 Ｉ 石 斛兰生根 培养基不 同激素配 比
上 品 中药 。其性味 ：甘淡微 咸 。性 属清润 ，清 中有补 ，补 中有清 。对 人体有 驱解 虚热 、益精 强 阴等疗效 。而 且 其花 色鲜艳 、花 形端正 、花期 长 ，具 有很高 的观赏价 值 ，因而 归入洋 兰的范 畴 ，与卡 特兰 、蝴 蝶兰 、，我 国野生石 斛兰 资源丰 富 ，但缺 乏保护 ，野生 资源 数量 明显下 降。石 斛兰 产业生 产类型单 一 ，主 要以盆 花 为主 ，微型 花卉 和切 花 都极 少生 产 ，且 盆 花 品种 匮乏 ， 已不 能满 足 市场 多元 化 的需 求 ；育 种 工 作滞 后 ，生 产和 销 售的观 赏石斛兰 基本上都 是驯养 的野生 石斛兰 和进 口品 种 。研 究针对石斛兰资源短缺 的现状 ，应用组织培养 技
铁皮石斛的组织培养与快速繁殖研究
Final buds 765
Increase rate/ % 354. 74B**
Physical status* +++
B5
168
975
498. 90A
+++
MS
163
638
296. 02C
++
KC
136
388
181. 80D
+
* + ( 细弱) , + + ( 生长一般) , + + + ( 饱满, 健壮) , 下表同. * The physical status of buds were indicated as, + , tiny and thin; + + , or dinary; + + + , plump and vigorous. The same as below. ** 同一列不同字母者表示相互间比较差异达到极 显著水平, 下表同. ** The different capital letter in the same column indicated very significant difference. The same as below.
pH 至 518. 在超净工作台上, 将铁皮石斛试管苗切成 1~ 2 cm 的茎段, 在以上培养基上接种进行芽诱导. 每 组各接种 25 瓶, 随机抽取其中 20 瓶进行生长性状观测. 培养时间均为 1 个月, 培养温度( 25 ? 1) e , 光照强 度1 500~ 2000 1x, 每天光照 12 h, 下同.
2 结果与分析
211 不同基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的影响 4 种基本培养基对铁皮石斛芽诱导效果, 相互之间的比较差异极显著( 表 1) , 其中以 B5 的增殖效果最
基于正交设计的铁皮石斛组织培养和耐盐性研究
基于正交设计的铁皮石斛组织培养和耐盐性研究才真;刘海学;王绪【摘要】利用正交设计法研究不同浓度的蔗糖及不同浓度NAA、6-BA、KT等激素对铁皮石斛组织培养的影响,并对铁皮石斛愈伤组织、分化组织、生根苗的耐盐性进行了分析.结果表明:铁皮石斛愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖15g/L,分化组织增殖的最佳培养基为MS+NAA 0.4mg/L+KT 1.5mg/L+蔗糖15g/L,分化苗生根最适培养基为MS+活性炭1.0g/L+NAA0.4mg/L+蔗糖30g/L.铁皮石斛愈伤组织耐盐临界浓度为0.6％,分化组织耐盐临界浓度在0.3％～0.6％之间,生根苗耐盐临界浓度在0.6％～0.9％之间.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2018(037)007【总页数】4页(P64-67)【关键词】铁皮石斛;组织培养;耐盐性;正交设计【作者】才真;刘海学;王绪【作者单位】天津农学院农学与资源环境学院,天津300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S682.31;S567.23+9铁皮石斛是观赏价值较高的花卉，在国际花卉市场中占有重要地位。
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)又名黑节草、云南铁皮，属于兰科多年生草本植物，是珍稀的药用植物和园艺植物，其含有石斛碱、石斛次碱和石斛宁等多种生物碱，具有滋阴清热、生津益胃、抗肿瘤、抗衰老和扩张血管的作用。
主要分布于中国安徽、浙江、福建等地区。
其茎可以入药，属补益药中的补阴药。
野生铁皮石斛多生长在高山岩石阴面或森林树干上，开花结果少，繁殖能力低，自然条件下发芽率不足5%，最终导致野生铁皮石斛濒临绝迹。
目前，生产上多用组培苗大棚栽培提供铁皮石斛产品，因大棚环境相对密闭，室内温度高、土壤水分蒸发量大，浇水追肥频繁，导致肥料中的盐分容易随水分上升到土壤耕层产生盐害，影响铁皮石斛的栽培效益[1]。
NAA6-BA对铁皮石斛试管苗生长发育和生物碱积累的研究的开题报告
NAA6-BA对铁皮石斛试管苗生长发育和生物碱积累的研究的开题报告一、研究背景铁皮石斛是一种常见的养生植物，生长期长，生长缓慢，由于野生铁皮石斛数量减少，价格昂贵，因此，利用组培技术大量繁殖铁皮石斛苗，成为了研究的热点。
而NAA6-BA是一种常见的生长调节剂，已被广泛应用于植物组织培养中，以促进植物生长和发育。
因此，本课题选择铁皮石斛为研究对象，探究NAA6-BA调节下铁皮石斛试管苗生长发育以及生物碱积累过程，具有重要的实际意义和科学价值。
二、研究目的1.研究不同浓度的NAA6-BA对铁皮石斛试管苗生长发育的影响；2.探究NAA6-BA对铁皮石斛生物碱积累的影响；3.优选NAA6-BA浓度，促进铁皮石斛试管苗的生长和生物碱积累。
三、研究内容1.不同浓度NAA6-BA对铁皮石斛试管苗生长发育的影响：根据生理学原理，选取一定浓度的NAA6-BA，分别培养铁皮石斛试管苗，并观察其生长发育情况。
2.NAA6-BA对铁皮石斛生物碱积累的影响：以铁皮石斛的主要生物碱龙胆苷为指标，对NAA6-BA调制的铁皮石斛试管苗进行生物碱含量测定。
3.分析适宜的NAA6-BA浓度：根据以上结果，分析判断出适宜铁皮石斛生长和生物碱积累的NAA6-BA浓度。
四、研究方法1.实验材料：铁皮石斛试管苗；2.实验仪器：生物安全柜、显微镜、电子天平、吸光光度计等；3.实验步骤：（1）将培养基中的NAA6-BA添加相应浓度的NAA6-BA，分别处理铁皮石斛试管苗；（2）定期观察铁皮石斛试管苗的生长情况并做测量；（3）收获铁皮石斛试管苗，进行生物碱含量测定；（4）根据生长和生物碱含量测定的结果，分析适宜的NAA6-BA浓度。
五、预期结果1.在不同浓度NAA6-BA处理下，铁皮石斛试管苗的生长发育状况不同；2.NAA6-BA能够促进铁皮石斛生物碱的积累；3.从生长和生物碱含量两方面考虑，确定适宜的NAA6-BA浓度。
六、研究意义1.为铁皮石斛大规模有效繁殖提供了科学依据；2.研究NAA6-BA调节强度对铁皮石斛生长发育和生物碱积累的影响，能够探索利用组织培养技术改良铁皮石斛的种质资源，也为药用植物的生产提供了理论基础。
天然植物激素对铁皮石斛组培苗诱导芽分化的影响
天然植物激素对铁皮石斛组培苗诱导芽分化的影响作者：徐艳张家伟来源：《科技视界》2016年第22期【摘要】为减少在植物组织培养中使用化学合成激素导致的环境污染，以铁皮石斛为材料，研究绿豆芽研磨液与化学合成激素对铁皮石斛组培苗诱导不定芽的影响。
结果显示，混合使用合成激素0.5mg/L 6BA+0.1mg/L NAA+150g/L绿豆芽研磨液培养基的效果最好，而单独使用50g/L绿豆芽研磨液亦有良好效果。
【关键词】激素；组织培养；绿豆芽液1 材料与方法1.1 实验材料绿豆芽（自制），仙斛1号组培苗（河源市裕森农林发展有限公司提供），6-BA，NAA，琼脂，糖，WPM；以食品搅拌机将绿豆芽搅拌成浆即为绿豆芽液。
1.2 实验方法实验所用的铁皮石斛品种为仙斛1号，选择生长情况相近的铁皮石斛，去除头部和尾部，保留中间部分的茎节为实验材料。
空白组：以WPM为基础培养基，糖15g/L，琼脂8g/L。
pH 6.8，121℃下灭菌25分钟。
实验组：以WPM为基础培养基，附加不同量的绿豆芽研磨液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L、250g/L），糖15g/L，琼脂8g/L。
pH 6.8，121℃下灭菌25分钟。
对照组：（1）以WPM为基础培养基，再附加不同量的绿豆芽研磨液（50、100、150、200、250g/L），糖15g/L，琼脂8g/L，另加化学合成激素0.5mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA。
pH 6.8，121℃下灭菌25分钟。
（2）以WPM为基础培养基，添加化学合成激素0.5mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA，糖15g/L，琼脂8g/L。
pH 6.8，121℃下灭菌25分钟。
2 结果与分析取生长情况相似的铁皮石斛组培苗茎，插入不同激素组合的WPM培养基中，28℃培养10天，观察其不定芽萌发情况[1-3]。
2.1 无添加激素与绿豆芽研磨液培养基生长情况在空白组实验中，实验材料在未添加绿豆芽研磨液、6-BA和 NAA的条件下，不定芽依然会萌动生长，但芽生长情况不均匀，芽苗细小。
6-BA与NAA不同配比在毛建草组织培养中的作用研究
6-BA与NAA不同配比在毛建草组织培养中的作用研究作者：李文超张明艳叶鹏张育溎靳亚鑫田鹏宇宋敏丽来源：《种子科技》2021年第22期摘要：为了研究6-BA和NAA不同浓度配比对毛建草组织培养的影响，以叶片和叶柄为外植体，分别接种到同时含有0.5 mg/L 6-BA和不同浓度（0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L）NAA的MS培养基上，统计愈伤组织的个数并计算诱导率。
结果发现，相同条件下，叶柄作为外植体时，愈伤组织的生长状况明显优于叶片;当0.5 mg/L 6-BA配比0.2 mg/L NAA时，叶柄长出愈伤组织的个数最多，诱导率达到100%，显著超过了其他组合。
关键词：毛建草;外植体;6-BA;NAA文章编号：1005-2690（2021）22-0025-02 中国图书分类号：S531 文献标志码：B毛建草又称毛尖、岩青兰，据《中药大辞典》记载，岩青兰可全草代茶，主治外感风热、头痛寒热、咳嗽、黄疸性肝炎[1-2]。
近年来，采用不同的方法对毛建草的化学成分进行分析和鉴定[3-5]，已经发现毛建草具有多种药用价值，如抗癌、抗氧化[6]、保护心肌[7]等。
由于毛建草具有很高的经济价值和药用价值，利用植物组织培养技术加速培育毛建草尤为迫切。
目前，张彦广利用萌蘖根部对毛建草进行了初步引种栽培[8]，刘俊等首次建立了毛建草的离体培养快繁体系[9]，宗越等对不同外植体诱导愈伤组织的效果进行了比较[10]，进一步确定了激素配比在诱导毛建草愈伤组织中的关键作用。
本研究以毛建草的叶片和叶柄为外植体，尝试在缺乏茎段的条件下用材料充足的叶片和叶柄快速诱导愈伤组织，为毛建草的人工培育奠定基础。
1 材料和方法1.1 试验材料1.1.1 植物材料在人工气候培养箱中生长4周的毛建草，取其幼嫩的叶片和叶柄作为外植体。
1.1.2 主要试剂无菌水、无水乙醇、细胞分裂素6-BA、萘乙酸NAA、NaOH、蔗糖、琼脂。
1.1.3 主要仪器电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、BIC-300人工气候培养箱、JB-CJ-1000FX洁净工作台。
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NAA和6-BA浓度配比对铁皮石斛原球茎增殖、分化组织培养的影响
作者：李发良
来源：《西部论丛》2020年第03期
摘要：用铁皮石斛原球茎做材料，以组织培养为基础，研究两种植物激素NAA和6-BA 的不同浓度配比对铁皮石斛增殖、分化的影响及最适浓度配比。
结果显示，在原球茎组织培养过程中，两种激素浓度配比的不同使得石斛增殖、分化的效果也不同。
铁皮石斛原球茎增殖较为理想的培养基为MS+NAA 0.7mg/L+ 6-BA 1.5mg/L;铁皮石斛原球茎分化较为理想的培养基为MS+NAA 0.3mg/L+6-BA 2.0mg/L。
建议铁皮石斛原球茎在增殖培养至两个月时及时转瓶以保证其继续生长。
关键词：铁皮石斛;原球茎;组织培养;NAA;6-BA
铁皮石斛（Dendrobiumcandidum）为兰科石斛属多年生常绿草本植物，是一种名贵药材[1]。
铁皮石斛的药用部分是新鲜或干燥茎，具有益胃生津、滋阴清热的功效[2]。
目前，有关铁皮石斛原球茎的研究主要集中于无机盐浓度、碳源以及有机附加物等对其增殖和分化的影响，而关于细胞分裂素和生长素不同浓度配比对其增殖和分化影响的研究较少。
现以铁皮石斛原球茎为研究材料，进一步研究NAA和6-BA对其增殖和分化的影响，以期为铁皮石斛原球茎的再生提供理论基础。
一、材料及实验方法
（一）材料。
铁皮石斛原球茎（取自云南师范大学生命科学学院组培室），所有构成MS 培养基成分的原材料，以及实验所研究激素NAA和6-BA。
（二）培养基的配置。
按照MS培养基配方，先分别配置出充裕的大量元素母液、微量元素母液、有机母液、铁盐母液以及激素母液;接着按配方配置足量的MS培养基并分装到培养瓶中，每个培养瓶中约40ml;再分别按照预设的浓度梯度（见表1）向培养瓶中加入两种激素，并对培养瓶封口、编号。
将封好的培养基放入高温高压灭菌锅中灭菌，取出静止3天后，除凝固外无变化的即为可用。
（三）接种。
选取相同条件下生长良好的原球茎，切割成相同大小的小块。
在超净工作台上接种在之前灭完菌的培养基上。
接种完后将培养瓶置于培养架上培养，培养条件为光照时间14 h/d;光照强度1 000～2 000 lx;温度（25±1）℃;湿度70%～80%。
以上实验均在90 d之内统
计铁皮石斛原球茎增殖和分化的情况（包括芽数、根数以及芽长和原球茎增殖情况）。
重复以上实验3次.实验数据用SPSS软件One-Way ANOVA 分析后进行LSD法检验，P
二、结果与分析
（一）NAA和6-BA对铁皮石斛原球茎增殖的影响。
由表2可知：铁皮石斛原球茎在25种培养基上均能增殖，添加NAA和6-BA均能促进原球茎增殖;当NAA为某一水平时，随着6-BA浓度的增加，原球茎的增殖效果先增后减，当6-BA浓度为某一水平时，随着NAA浓度的增加，对石斛原球茎的分化影响先增后减。
当NAA浓度为0.7mg/L、6-BA浓度为1.5mg/L 时，铁皮石斛原球茎增殖效果相对比其他浓度配比要好，且原球茎的质量更好，簇生，极易松散，色泽嫩绿;因此，铁皮石斛原球茎较为理想的增殖培养基为MS+NAA0.7mg/L+ 6-BA
1.5mg/L。
（二）NAA和6-BA对铁皮石斛原球茎分化的影响。
为研究不同植物激素配比对石解原球茎分化的影响，以MS为基本培養基，附加NAA和6-BA进行激素配比试验。
培养两个月后统计铁皮石斛原球茎分化情况。
由表3可知， MS 培养基无论添加或不添加激素，铁皮石斛原球茎均可分化，但对照组分化程度最低，添加 NAA 和6-BA均能促进原球茎分化。
当NAA为某一水平时，随着6-BA浓度的增加，原球茎的分化效果先增后减，当6-BA浓度为某一水平时，随着NAA浓度的增加，对石斛原球茎的分化有抑制作用。
在从统计学的角度对数据进行双因素分析并进行作图，如图1、图2所示，在NAA 浓度为0.3mg/L、6-BA浓度为2.0mg/L时，有利于铁皮石斛原球茎的分化。
由此得出，铁皮石斛原球茎较理想的分化培养基为 MS+NAA 0.3mg/L+6-BA 2.0mg/L
三、结论与讨论
在植物快繁技术中，组织培养起到很大的作用，外植体愈伤组织的形成及分化又与外源激素的作用密不可分，其中适当浓度配比的生长素和细胞分裂素最为重要[3]。
经过该次试验结果表明，当培养基中不含激素时，原球茎均可增殖与分化; 添加一定浓度的NAA和6-BA 后，增殖程度、分化芽数增大;但随着NAA 浓度的增大，有利增殖但不利于分化; 随着6-BA 浓度（在一定范围内）增大，不利增殖却利于分化。
同时，该试验还发现，随着培养时间的延长，培养基逐渐消耗，原球茎得不到充足的养分，生长趋势下降，逐渐出现变黑现象，甚至死亡。
经分析表明，从实验中获得的数据具有统计学意义。
参考文献
[1] 张红梅，刘建东，王岩花，等.铁皮石斛茎段快繁技术研究[J].山西农业大学学报（自然科学版）， 2010， 30 （6）： 495-499.
[2] 包雪声，等. 中国药用石斛[M].上海：上海医科大学出版社，复旦大学出版社，2001：1-49.
[3] 王忠敏，付淑琴，张莉华，等. 迎春花无菌体系的建立以及茎段和叶片愈伤组织的诱导[J] . 上饶师范学院学报， 2008， 28 （3）： 61-66.。