铁皮石斛组培技术
铁皮石斛种苗组培实施方案
铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。
其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。
下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。
一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。
2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。
3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。
二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。
3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。
三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。
2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。
3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。
四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。
2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。
3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。
五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。
将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。
2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。
通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。
希望这些内容对您有所帮助。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种名贵的中药材，其功效在中医学中被广泛地应用，其价值也随之显现。
因此，对铁皮石斛的栽培技术也越来越重视。
本文将介绍铁皮石斛组培苗的驯化和移栽技术。
1.1 原料选择最好的组培苗原料应该是从皮培苗中选择获取的。
当然，也可以从鳞茎或者幼苗中产生。
但是，由于果园栽培中的种子不太适合组培，因为它经过了处理，可能会影响组培过程，所以建议使用来自自然生长环境的石斛作为组培的原料。
1.2 培养基的配制铁皮石斛的组培需要特定的培养基配方。
通常，最适合的配方为MS基础培养基（Murashige和Skoog，1962年）和B5基础培养基（Gamborg等，1968年）。
常见的培养基成分为植物生长素和愈伤组织生长素。
不同的组合将产生不同的效果。
在这里，我们建议使用进行MS培养（高含量5-10mg / L）和B5基础培养（高含量3-4mg / L）。
1.3 组培过程一般来说，组培过程包括四个阶段：准备工作、预处理、培养和移栽。
具体的组培步骤如下：准备工作：在取材前，需要准备所需的设备和材料（如培养瓶，培养基，工具等），并消毒处理。
接着，将原料表面去除，洗净后用微型刀进行分离和处理。
预处理：首先，在含有10%的漂白水中去除微生物和细胞外污染。
接着，在401液中预处理组织，以去除竹酸（C6H5COOH）的抑制性效果。
然后，进行快速冷却处理，以促进未成熟状态。
培养：将预处理好的组织放入含有所需浓度培养基的培养瓶中，以确保其生长。
对于ICPMS营养元素分析，建议使用60种元素培养液。
需要注意的是，组培过程中对于温度、湿度的控制及光照的安排均需要重视。
移栽：在成熟之后，使用盆栽对其进行移栽。
移栽是铁皮石斛组培苗的一个重要步骤。
为了确保铁皮石斛组培苗的存活率和分化率，需要针对情况进行不同分析，来选择不同的移栽方案。
2.1 种植土的选择铁皮石斛的种植土依个体的存活情况和分化程度而定，一般可选用有机泥炭土或者复合基质。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术近年来，随着铁皮石斛市场的逐渐扩大，人们对其繁育与种植技术的研究也逐渐加强。
铁皮石斛是一种珍稀的地生兰科植物，在人工栽培过程中，由于生长习性和地理环境的差异，常常出现活率低、株型不佳、发根慢等问题，因此组培苗驯化移栽技术成为了关键。
1.组培苗的制备铁皮石斛组培苗的制备要注意选择来源健康的母株，通常以茎尖、中间部位、无病虫害的健壮无性系为材料。
采收后，将茎段嫁接在适宜培养基上，添加适量激素、营养物质等，促进组织的快速增殖，形成小组织块。
小组织块经过连续次分化，形成直径约为5 mm 大小的组培苗。
2.组培苗驯化铁皮石斛组培苗长势缓慢，新生叶片逐渐枯黄，活力下降。
这时需要进行组培苗的驯化。
具体步骤如下：（1）以1/2的原培养基为基础，添加适量食糖和椰子葡萄糖等碳源，增加组培苗的活力和养分供给。
（2）添加适量的生长调节剂，例如GA、KT等激素，调节植物的生长素和细胞分化，促进细胞分裂和增殖。
（3）调节培养容器内的光照、温度和湿度等环境条件，创造适宜的生长环境。
一般来说，组培苗需要在25~30℃温度下培养，湿度控制在70%左右，每天提供12小时光照。
（4）随着时间的推移，组培苗逐渐适应生长环境，长势逐渐恢复，可以开始进行移栽的准备工作。
组培苗移栽是一个需要精细操作的过程，需要注意以下几点：（1）移栽时间的选择。
一般情况下，组培苗在培养基内生长至10个月~1年以上时达到饱满状态，此时适合进行移栽。
（2）移栽环境的准备。
组培苗移栽时需要选择通风良好的环境，同时控制温度和湿度，保持适宜的生长环境。
（3）栽培土壤的选择。
铁皮石斛偏爱沙壤土和松软肥沃的土壤，质地细腻透气。
（4）移栽方法的选择。
可以采用水培、土培和促根剂浸泡等方式进行移栽。
根据以上操作规范，铁皮石斛组培苗的驯化移栽技术可以有效提高组培苗的活率和生长速度，为铁皮石斛的大规模生产提供了良好的技术支持。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种珍贵的中药材，具有极高的药用价值，被广泛用于中药制剂和保健品中。
由于野生铁皮石斛越来越稀少，因此进行铁皮石斛的组培苗驯化移栽技术研究，对于解决野生资源短缺和保护珍稀药材资源具有重要意义。
一、铁皮石斛概述铁皮石斛，又名兰科石斛，为兰科植物，根茎肉质，裸露在地表上，常呈皮革状而有光泽，故名铁皮石斛。
铁皮石斛主要分布在东南亚地区，具有滋阴清热、益肺生津、滋阴补肾等功效，被誉为“滋肺养阴之圣品”。
由于野生资源的过度开采和环境污染，铁皮石斛资源逐渐枯竭，已经成为濒临灭绝的珍稀药材之一。
1. 组培繁殖铁皮石斛的组培繁殖是实现苗木驯化和大规模种植的关键技术之一。
通过嫩茎或叶片等植物组织的离体培养，利用植物生长激素的作用，诱导出新的植物体，并将其移栽到适宜的基质中进行生长。
组培技术不仅能够大幅度提高繁殖效率，还能有效避免病虫害的传播，提高植株的品质和产量。
2. 生长环境控制铁皮石斛对生长环境要求严格，需要适宜的光照、温度、湿度等条件才能正常生长。
在组培苗移栽阶段，需要对生长环境进行严格的控制和调节，确保植株健康生长。
还需要注意防治病虫害，保持植株的健康状态。
3. 移栽技术移栽技术是组培苗驯化的重要环节，它直接影响着植株的生长发育和成活率。
在进行移栽时，需要选择适宜的时间和方法，同时保证移栽后的植株得到适当的护理和管理。
还需要根据不同的生长环境和地理条件，选择适宜的基质，确保植株能够顺利生长。
1. 保护珍稀资源铁皮石斛组培苗驯化移栽技术的应用，可以有效保护珍稀的铁皮石斛资源，减缓其野生资源枯竭的趋势。
通过组培繁殖和移栽技术，可以实现大规模种植，减少对野生资源的依赖，从而达到保护珍稀资源的目的。
2. 提高产量和品质组培苗驯化移栽技术可以提高铁皮石斛的产量和品质。
由于组培苗具有较高的生长速度和较好的抗逆性，因此能够有效提高植株的产量和品质。
由于组培苗能够避免病虫害的传播，因此能够大幅度提高植株的品质。
铁皮石斛组培技术介绍
铁皮石斛组培技术介绍铁皮石斛的组织培养技术，大都以茎段、根尖、原球茎、茎尖和种胚等为外植体。
除了固体培养外，近几年来还出现了铁皮石斛液体悬浮培养。
一、铁皮石斛组培技术（1）茎段培养1.培养条件2.取材与消毒从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净。
在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后，再用0.1%的HgClz 水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次。
3.诱导培养用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基①中进行培养。
15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织。
继续培养20天后，转入培养基②中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物。
4.增殖培养将诱导形成的原球茎转入到增殖培养基中，原球茎增殖速度很快，增殖倍数可达3～4倍，同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1～2片小叶，原球茎的增殖与芽分化同时进行。
5.生根培养待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。
培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90%以上。
6.出瓶苗的过渡管理当苗高3cm以上、具3～4片叶时，便可出瓶移栽。
移栽前，将生根瓶苗打开瓶盖，移至常温下炼苗7天，然后将瓶苗取出，洗去附着在根部的培养基，用0.01%的高锰酸钾溶液浸泡8～10min，栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透水)，放置在遮光度50%～60%、湿度达80%以上的温室中，2 个月后，成活率达90%以上。
（2）种子培养(胚培养)取人工授粉的铁皮石斛果实，用75%的酒精表面消毒，30秒后再用0.1%升汞消毒8分钟，无菌水冲洗4—5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm方块，接种到培养基上，每瓶3—5块。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种珍贵的中草药材，具有极高的市场价值和药用价值。
为了满足市场需求，提高铁皮石斛的生产量和品质，组培苗驯化移栽技术成为关键。
一、组培苗繁殖技术组培是指从植物的体细胞、组织或器官中，在无菌环境下培养成植株的一种技术。
组培苗有良好的一致性和规格性，便于发扬遗传育种作用，提高植物生产效益。
1. 选取无病、无虫、无害虫危害的铁皮石斛茎段或赘生物作为组织培养的材料，并在无菌条件下进行处理。
2. 将茎段或赘生物表皮去除，切成约0.5cm的小段，经无菌条件下的壮苗培养、增殖培养后得到一定量的快速增殖组织。
3. 将增殖组织移入悬浮液或凝胶中，经愈伤组织诱导、悬浮培养、分化培养，得到大量组培苗成活率达80%以上。
组培苗的快速生长对于移栽是非常有利的，但过快的生长也会造成苗期管理难度和移栽后的生长不良。
因此，必须对组培苗的生长进行调控。
1. 光照与照明光照充足有利于组培苗的生长，但过强光照会使组培苗叶片掉水、老化，影响其生长。
组培苗生长需要提供人工光源，照明应充分使用光照周期，例如12/12小时的光照。
2. 适宜温度不同植物对温度的适应性不同。
在组培苗培养中，应根据铁皮石斛生长喜好选择适宜的温度。
保持适宜温度是组培苗健康生长的基本保证。
3. 营养素供应组培苗营养充足是快速增长的重要保障。
组培苗生长需要提供适宜的培养基及养分配制。
可以通过添加植物生长调节剂、有机氮肥等方式，为组培苗提供充足的营养。
组培苗移栽是组培苗技术的最后一步，也是最关键的一步。
组培苗经过一系列处理的苗木，笔者建议采用“半雾化法”移栽。
1. 前期准备准备约5mm*5mm的生石灰渣团作为基质，以铁皮石斛为例，将铁皮石斛盆栽移于干燥通风处进行3天预养。
2. 操作步骤(1) 取出组培苗，将培养基从根部彻底洗掉，将根露出，除去老化和畸形部分，形成整齐鲜活、外形正常、完整的组培苗。
(2) 取适量的生石灰渣，加入适量的水，混合均匀，使其平均含水率达到60%~70%。
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种极具药用价值和观赏价值的兰科植物，由于其在生长过程中对环境条件的要求比较苛刻，使得铁皮石斛的繁殖和栽培工作变得相对困难。
组培苗是一种在人工环境下培植的植物幼苗，通过组培苗技术可以有效地提高铁皮石斛的繁殖速度和存活率，使得铁皮石斛更容易被大规模栽培和传播。
1.材料准备铁皮石斛种子、无菌工作舱、无菌罐、培养基、植物生长调节剂等。
2.种子消毒将铁皮石斛种子进行外层消毒处理，使用75%的乙醇对种子进行表面消毒，消毒时间为3-5分钟。
3.培养基准备将所需的培养基成分按照一定比例混合搅拌均匀，再进行高压灭菌处理，以保证培养基的无菌状态。
4.种子播种将消毒后的铁皮石斛种子均匀撒播在准备好的无菌培养基上，然后将无菌培养基和种子一起装入无菌罐内，进行培养。
5.培养条件将装有种子的无菌罐放入无菌工作舱内，控制适宜的温度、光照和湿度等条件，促进种子的萌发和生长。
6.生长调节剂处理在种子萌发和生长过程中，可以添加适量的植物生长调节剂，以促进组织分化和增加苗木成活率。
1.温室适应期当铁皮石斛组培苗生长到一定阶段后，需要将其从无菌环境中取出，放入温室中逐渐适应外界环境条件，这个过程需要持续一段时间，以确保组培苗顺利过渡到自然环境中。
2.土壤驯化铁皮石斛组培苗在温室适应期结束后，可以将其移植到培土中进行土壤驯化。
选择适宜的培土，如沙壤土或腐殖质土，调节土壤的酸碱度和养分含量，促进组培苗的生长。
3.养护管理在土壤驯化阶段，需要加强对铁皮石斛组培苗的养护管理工作，包括及时浇水、施肥、防治病虫害等，确保组培苗能够顺利生长。
1.移栽时机选择在春季或秋季气温适宜、湿度较大的时候进行移栽，有利于组培苗的生长和成活。
2.移栽方法将驯化好的铁皮石斛组培苗小心地取出培土，植株留心不要受到损伤，然后将植株移植到准备好的地块或盆土中，将根系埋入土壤中，然后轻轻拍实土壤，最后浇适量水。
经过组培苗制备、驯化和移栽，铁皮石斛可以成功地进行大规模繁殖和栽培。
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铁皮石斛的组织培养研究专业班级：姓名：学号：课程：植物组织培养目录摘要 (3)Abstract (4)前言 (5)1.培养基 (6)1.1配方 (6)1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (6)1.3灭菌 (8)2.转接 (9)2.1转接前准备 (9)2.2转接 (9)2.3培养 (9)3.炼苗 (10)3.1炼苗目的 (10)3.2炼苗方法 (10)4.移栽 (11)4.1基质选择 (11)4.2移栽技术要求 (11)5.结论与分析 (12)参考文献 (13)摘要铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。
铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。
铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。
铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。
为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。
关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖AbstractDendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue cultureculture medium adapter rapid propagation前言多年生草本，具有气生根。
茎直立丛生、高30-50cm，肉质稍扁，有节、有槽沟，黄绿色。
单叶互生，叶片革质，无柄，狭长椭圆形或近披针形，叶鞘抱茎。
总状花序腋生，每个花序有花2-3朵，白色，先端淡紫红色。
铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物。
作为我国传统的名贵中药,具有重要的药用价值。
由于长期过度采挖,加之本身繁殖率低,导致其野生资源急剧减少,日趋濒危,现已被列为国家重点保护植物,成为国家重点保护的药材品种。
试验结果表明,MS、N6和B5等3种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的效果, B5要优于其他基本培养基;在激素浓度配中,铁皮石斛原球茎在6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L中,增殖系数最大;天然附加物对铁皮石斛增殖的影响差异很大,实际应用中宜选用香蕉汁为添加剂;在B5+蔗糖30g/L+香蕉汁100mg/L+琼脂5.8g/L基本培养基中,加入的NAA对铁皮石斛芽的生根以1.0mg/L 处理的效果最好,但考虑到NAA价格较贵,且在浓度范围为0.2-1.0之间对生根的影响差异不明显,在实际应用中以选用0.2mg/L的NAA为好;生成的小苗经过炼苗后,在铺有一层苔藓的含有75％锯末+20％泥炭土+5％碎磁片的基质上能够良好的生长。
1.培养基1.1配方根据不同阶段，培养基配方有所差异。
如表1-1表1-1 各种培养基配方不同阶段培养基备注愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH =5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.61.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）配方：10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。
培养基附加物：（1）天然添加物在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
（2）炭源铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长，能使根系长得更加粗壮闭。
唐桂香等认为在培养基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的根数和根长影响小。
注意事项①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序；③煮沸时，小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
1.3灭菌1.3.1培养基灭菌1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0℃。
10min后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
表1-2 灭菌时间统计阶段单锅灭菌（耗时64min）多锅连续灭菌第一锅（耗时63min）第二锅（耗时46min）起始22:218:04 9:30排气22:418:23 9:43T=121℃22:508:32 9:50关闭电源23:10 8:52 10:10气压降至0 23:25 9:07 10:161.3.2外植体灭菌①原材料清洗选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每2 节为一段放入500ml 的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好。
主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等。
②材料二次消毒灭菌将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶拨去。
70% 的酒精速浸25s，用0.1%的升汞溶液浸泡10min 用无菌水冲洗5 次，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以去掉表面药物残留。
2.转接2.1转接前准备1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；2.2转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。
注意事项①操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；②在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s，瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；③转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌。
2.3培养石斛组培常用的温度为(26±1) ℃光强1 600～2 000 lx日照光8~12h/d（1）组培苗在光照度为2000lx ，温度以22 ℃为宜。
(2) 在20 一22 ℃时丛生芽增殖较好，温度超过25 ℃丛生芽就开始分化成苗。
待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。
培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90％以上。
3.炼苗3.1炼苗目的炼苗的主要目的是使组培苗适应外界的环境——温差，湿度差以及微生物环境。
3.2炼苗方法1）将待炼苗的材料放置于欲移栽的环境，不开盖保持4-5天；2）半开盖保持1-2天后，全开盖再炼苗2-3天；方法（整个过程：适应期，半开瓶期，开瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框炼并移栽）。
4.移栽4.1基质选择栽培的基质为火山岩1+椰衣2+木炭1的基质配比石斛兰长势最好，椰衣1+水苔1和块状椰衣的基质配比稍微次之。
多数树皮中含有较多的酚类物质，这对于植物是有害的，而且树皮的C/N比值都较高，直接使用会引起微生物对速效氮的竞争作用，造成N素缺乏，树皮保水性能差。
4.2移栽技术要求将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件下切成至少带有一个茎节地茎段，接种于事先准备好的诱导芽培养基中诱导出芽。
从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多数是无根小苗，需转入1／2MS加马铃薯进行生根和壮苗培养，才能出管移栽。
铁皮石斛不宜深植，种植时根系向四周均匀展开，将基质填充根部、基部必须露出，否则易造成烂根。
移栽后隔5天再浇水效果较好。
30天内每隔1天喷雾1次，水量不宜过多，期间勿施肥，待小苗恢复正常生长后才开始常规的水肥管理。
4.3移栽后期管理营养生长期施用氮肥较高的花多多复合肥（N:P:K=30:10:10），花芽分化期开始施偏重磷钾肥（N:P:K=10:30:20），其余时期施（N:P:K=15:20:25）以促进假鳞茎的生长，采用“薄肥多施”的原则，施肥频率为1次／1周，浓度为0.1%叶面喷施，雨天不施肥。