铁皮石斛组培方案
铁皮石斛种苗组培实施方案
铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。
其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。
下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。
一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。
2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。
3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。
二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。
3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。
三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。
2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。
3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。
四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。
2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。
3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。
五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。
将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。
2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。
通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。
希望这些内容对您有所帮助。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种名贵的中药材，其功效在中医学中被广泛地应用，其价值也随之显现。
因此，对铁皮石斛的栽培技术也越来越重视。
本文将介绍铁皮石斛组培苗的驯化和移栽技术。
1.1 原料选择最好的组培苗原料应该是从皮培苗中选择获取的。
当然，也可以从鳞茎或者幼苗中产生。
但是，由于果园栽培中的种子不太适合组培，因为它经过了处理，可能会影响组培过程，所以建议使用来自自然生长环境的石斛作为组培的原料。
1.2 培养基的配制铁皮石斛的组培需要特定的培养基配方。
通常，最适合的配方为MS基础培养基（Murashige和Skoog，1962年）和B5基础培养基（Gamborg等，1968年）。
常见的培养基成分为植物生长素和愈伤组织生长素。
不同的组合将产生不同的效果。
在这里，我们建议使用进行MS培养（高含量5-10mg / L）和B5基础培养（高含量3-4mg / L）。
1.3 组培过程一般来说，组培过程包括四个阶段：准备工作、预处理、培养和移栽。
具体的组培步骤如下：准备工作：在取材前，需要准备所需的设备和材料（如培养瓶，培养基，工具等），并消毒处理。
接着，将原料表面去除，洗净后用微型刀进行分离和处理。
预处理：首先，在含有10%的漂白水中去除微生物和细胞外污染。
接着，在401液中预处理组织，以去除竹酸（C6H5COOH）的抑制性效果。
然后，进行快速冷却处理，以促进未成熟状态。
培养：将预处理好的组织放入含有所需浓度培养基的培养瓶中，以确保其生长。
对于ICPMS营养元素分析，建议使用60种元素培养液。
需要注意的是，组培过程中对于温度、湿度的控制及光照的安排均需要重视。
移栽：在成熟之后，使用盆栽对其进行移栽。
移栽是铁皮石斛组培苗的一个重要步骤。
为了确保铁皮石斛组培苗的存活率和分化率，需要针对情况进行不同分析，来选择不同的移栽方案。
2.1 种植土的选择铁皮石斛的种植土依个体的存活情况和分化程度而定，一般可选用有机泥炭土或者复合基质。
铁皮石斛组培方案样本
铁皮石斛组织培养方案报告一、实验目二、理解铁皮石斛培养办法和环节, 纯熟掌握外植体取材、消毒、接种、初代培养操作过程。
三、实验器材超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。
四、实验环节配方：依照不同阶段, 培养基配方有所差别。
如表1表1 各种培养基配方配制（以1000ml幼株生根壮苗培养基为例）10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA1）量取800ml蒸馏水于干净大烧杯中, 加热至沸腾；2）精确称量100g香蕉果肉, 切成碎片状, 并倒入上述烧杯中, 加热煮沸5min, 其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序, 量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水烧杯, 混合均匀；4）将2）和3）溶液混合, 然后加入30g蔗糖, 并移取2ml NAA（0.1mg/ml）, 混合均匀；5）加热至沸腾, 加入8g琼脂并煮沸5min, 其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5℃时, 调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内, 33.3ml/瓶。
注意事项:①溶解香蕉蒸馏水尽量多, 以保证香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时, 要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序；③煮沸时, 小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
灭菌：1）检查灭菌锅水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表, 保证灭菌锅各指标和功能正常, 以防事故发生；2）把带灭菌培养基装入锅内, 盖上锅盖, 对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀, 调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后, 关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后, 调节电压至135V, 保持20min；6）关闭电源, 使之自动降温至0℃。
10min后, 打开排气阀和锅盖；7）5—10min后, 取出培养基放于实验台上冷却, 待用。
铁皮石斛组织培养实验流程
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铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种非常珍贵的中草药材，具有很高的药用价值。
由于采集过度和栽培技术不成熟，铁皮石斛的资源逐渐减少，严重威胁着它的生存。
为了保护这一宝贵的药材资源，有必要开展铁皮石斛的组培苗驯化移栽技术研究，以便开展大规模的人工栽培，并确保其资源的可持续利用。
一、铁皮石斛介绍铁皮石斛，是一种地生草本植物，科名为兰科铁皮石斛属，主要分布在广西、云南、贵州等地区。
铁皮石斛具有很高的药用价值，主要用于清热化湿、止咳化痰、润肺化痰等治疗功能。
由于其药用价值很高，因此备受人们的关注和重视。
三、铁皮石斛组培苗驯化技术1. 组培苗培养条件铁皮石斛在组培苗培养时，需要提供适宜的生长环境。
需要利用无菌操作技术，选取健康的母株并取其上茎段作为组培材料。
接着，将茎段表面用75%的酒精进行消毒处理，再将其表皮去除，得到无菌萌发体。
接着在含有植物生长调节物质的培养基上进行培养，控制温度在25-28℃，光照强度在3000-5000勒克斯，使得茎段得以快速生长，形成组培苗。
2. 组培苗移栽技术组培苗移栽技术是将组培苗从培养基上移栽到合适的生长环境中进行生长的技术。
在移栽前需要进行预处理，包括适应周围环境的温度、湿度和光照等条件，使得组培苗适应新的生长环境。
四、铁皮石斛组培苗驯化移栽技术应用铁皮石斛组培苗驯化移栽技术已经在实际生产中得到了应用。
栽培铁皮石斛组培苗不仅有利于提高铁皮石斛的生长速度和产量，同时也有利于保护野生资源，减少对野生铁皮石斛的砍伐和采集，保护生态环境。
通过铁皮石斛组培苗驯化移栽技术，可以实现铁皮石斛规模化、连续化生产，为其在市场上的供应提供了有力的支持。
组培苗移栽技术在实际生产中也具有很高的技术推广潜力，可以带动相关产业的发展，为农民增加经济收入，对于推动农业经济发展具有重要意义。
五、总结铁皮石斛组培苗驯化移栽技术的研究和应用，对于铁皮石斛资源的保护和开发具有重要的意义。
通过推广这项技术，可以有效地实现铁皮石斛的规模化栽培，提高其产量，并为相关产业的发展提供了有力支持。
铁皮石斛组培技术介绍
铁皮石斛组培技术介绍铁皮石斛的组织培养技术，大都以茎段、根尖、原球茎、茎尖和种胚等为外植体。
除了固体培养外，近几年来还出现了铁皮石斛液体悬浮培养。
一、铁皮石斛组培技术（1）茎段培养1.培养条件2.取材与消毒从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净。
在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后，再用0.1%的HgClz 水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次。
3.诱导培养用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基①中进行培养。
15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织。
继续培养20天后，转入培养基②中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物。
4.增殖培养将诱导形成的原球茎转入到增殖培养基中，原球茎增殖速度很快，增殖倍数可达3～4倍，同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1～2片小叶，原球茎的增殖与芽分化同时进行。
5.生根培养待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。
培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90%以上。
6.出瓶苗的过渡管理当苗高3cm以上、具3～4片叶时，便可出瓶移栽。
移栽前，将生根瓶苗打开瓶盖，移至常温下炼苗7天，然后将瓶苗取出，洗去附着在根部的培养基，用0.01%的高锰酸钾溶液浸泡8～10min，栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透水)，放置在遮光度50%～60%、湿度达80%以上的温室中，2 个月后，成活率达90%以上。
（2）种子培养(胚培养)取人工授粉的铁皮石斛果实，用75%的酒精表面消毒，30秒后再用0.1%升汞消毒8分钟，无菌水冲洗4—5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm方块，接种到培养基上，每瓶3—5块。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种珍贵的中草药材，具有极高的市场价值和药用价值。
为了满足市场需求，提高铁皮石斛的生产量和品质，组培苗驯化移栽技术成为关键。
一、组培苗繁殖技术组培是指从植物的体细胞、组织或器官中，在无菌环境下培养成植株的一种技术。
组培苗有良好的一致性和规格性，便于发扬遗传育种作用，提高植物生产效益。
1. 选取无病、无虫、无害虫危害的铁皮石斛茎段或赘生物作为组织培养的材料，并在无菌条件下进行处理。
2. 将茎段或赘生物表皮去除，切成约0.5cm的小段，经无菌条件下的壮苗培养、增殖培养后得到一定量的快速增殖组织。
3. 将增殖组织移入悬浮液或凝胶中，经愈伤组织诱导、悬浮培养、分化培养，得到大量组培苗成活率达80%以上。
组培苗的快速生长对于移栽是非常有利的，但过快的生长也会造成苗期管理难度和移栽后的生长不良。
因此，必须对组培苗的生长进行调控。
1. 光照与照明光照充足有利于组培苗的生长，但过强光照会使组培苗叶片掉水、老化，影响其生长。
组培苗生长需要提供人工光源，照明应充分使用光照周期，例如12/12小时的光照。
2. 适宜温度不同植物对温度的适应性不同。
在组培苗培养中，应根据铁皮石斛生长喜好选择适宜的温度。
保持适宜温度是组培苗健康生长的基本保证。
3. 营养素供应组培苗营养充足是快速增长的重要保障。
组培苗生长需要提供适宜的培养基及养分配制。
可以通过添加植物生长调节剂、有机氮肥等方式，为组培苗提供充足的营养。
组培苗移栽是组培苗技术的最后一步，也是最关键的一步。
组培苗经过一系列处理的苗木，笔者建议采用“半雾化法”移栽。
1. 前期准备准备约5mm*5mm的生石灰渣团作为基质，以铁皮石斛为例，将铁皮石斛盆栽移于干燥通风处进行3天预养。
2. 操作步骤(1) 取出组培苗，将培养基从根部彻底洗掉，将根露出，除去老化和畸形部分，形成整齐鲜活、外形正常、完整的组培苗。
(2) 取适量的生石灰渣，加入适量的水，混合均匀，使其平均含水率达到60%~70%。
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
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铁皮石斛组织培养方案报告一、实验目的了解铁皮石斛培养的方法和步骤，熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。
二、实验器材超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。
三、实验步骤配方：根据不同阶段，培养基配方有所差异。
如表110%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。
注意事项：①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序；③煮沸时，小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
灭菌：1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0℃。
10min后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
表2 灭菌时间统计注意事项：①启动灭菌前，应检查水位、电源、排气阀、安全阀、排气管等，确保正常；②灭菌锅底部应铺垫一层报纸，以防培养瓶机械破损；③灭菌电压不宜超过220V，否则灭菌锅会剧烈摇晃，造成不必要的损害和安全隐患；④当温度达到121℃后，调节电压至135V，并且时不时注意温度的变化，确保温度介于121-122℃之间；⑤气压降至0后，不宜立即揭盖；最好在5-10min后揭盖，这样才能缓和内外“气压和温度差”；⑥揭盖5-10min后，再转移锅内培养基，以免烫伤。
⑦每锅只能灭菌18瓶转接转接前准备1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。
注意事项①操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；②在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s，瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；③转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌。
培养：培养条件：白炽灯12h/黑暗12h＋20℃PDA培养基的配制方法，培养基的湿热灭菌操作一、目的要求1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2．学习并掌握棉塞的制作方法。
二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。
不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。
三、实训材料和用具琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4) 加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
(5)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
(二) 棉塞的制作棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气，保证通气良好，并可减缓培养基水分的蒸发，所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。
正确的棉塞是形状、大小，松紧应与试管口(或三角烧瓶)完全适合。
过紧则妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到灭菌的目的。
棉塞过小往往易掉进试管内，因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。
正确的棉塞头较大，加塞时，应使棉塞长度的1／3留在试管口外，2／3在试管口内（见实训图6-4）。
目前，有条件的实训室已使用坚固的塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞，制作棉塞要选纤维较长的棉花，一般不选用脱脂棉。
因为它容易吸水变湿，造成污染，而且价格也贵。
棉塞制作方法见图6-5实图6-4棉塞实图6-5 棉塞的制作方法（三）斜面与平板培养基的制作斜面与平面培养基是常用的琼脂固体培养基。
将熬制好的琼脂培养基趁热装入试管灭菌后摆鞋面，凝固后即成斜面培养基。
斜面培养基常用于菌种培养、菌种保藏等工作。
将灭菌后的琼脂培养基倾注于无菌培养皿中，凝固后即成平板培养基。
平板培养基常用于分离菌种、菌落计数、菌落形态观察及菌种鉴定等。
斜面与平板培养基的制作过程大致为：溶解原料、融化琼脂、调PH、分装、灭菌和制斜面或平板。
1、溶解原料为加速原料的溶解，最好用热水。
先将原料依次加入到占配制量一半的水中，待全部溶解后在加足水量。
如配方中有马铃薯、麸皮、胡罗卜、豆芽等天然原料，需将其熬制约30min，取出定量滤液，在将所需的其他原料加入滤液中。
2、融化琼脂琼脂的用量可灵活掌握。
用作保藏菌种的培养基，琼脂用量可提高至 2.5%，以增加持水性。
冬季的气温低，琼脂用量可适当减少。
琼脂用前可剪成小段，以利于融化。
待溶液煮沸是再加入，不断搅拌至完全无琼脂块状物时再停止加热。
3、调整PH用洁净干燥的玻璃棒沾一点培养基滴在试纸上，立即与比色板比较。
一般用10%NaOH或HCl调节。
4、分装将培养基趁热倒入垫有纱布的漏斗中，使培养基直接滤至试管或三角瓶中，试管装量一般为管高的1/4左右，三角瓶的装量约为其容量的一半。
勿使培养基玷污容器口部。
口部塞有棉塞，试管每7或9 支扎一捆，棉塞外面包牛皮纸，以防在灭菌过程中被水汽打湿。
5、灭菌分装后的培养基应随即灭菌。
除特殊情况外，一般培养基均用高压蒸汽灭菌，在104kPa 压力下，灭菌20-30min 。
6、制作斜面或平板将灭菌后的试管趁热斜置于棍条上，倾斜度以试管中的培养基约占试管长度的1/2为宜，凝固后即成斜面培养基。
待灭菌后三角瓶内的培养基冷却至45~50时，以无菌操作法向无菌培养皿中倒入培养基，装置以刚覆盖整个培养皿底部为宜（约15ml）,凝固后即成平板培养基。
五、高压蒸汽灭菌法该法使用高压灭菌锅，在121℃，O．105MPa压力下灭菌15～30min。
微生物实训所需的一切器皿、器具、培养基(不耐高温者除外)、无菌水、工作服等物品都可用此法灭菌。
高压蒸汽灭菌锅是能耐一定压力的密闭金属锅，有立式或卧式(实图8-1、2 )两种。
灭菌锅上附有压力表、排气阀、安全阀、加水口、排水口等。
卧式灭菌锅还附有温度计。
有的还有蒸汽人口。
灭菌锅的加热源有电、煤气和蒸汽三种。
高压蒸汽灭菌的操作过程(1) 加水将灭菌锅内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为宜。
立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1／3处。
有加水口者由加水口加入至止水线处。
(2) 装料将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。
放置装有培养基的容器时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。
(3) 加盖摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，打开排气阀。
(4) 排气用电炉或煤气加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出。
一般认为，当排气流很强并有嘘声时，表明锅内空气已排净(沸后约5min)。
(5) 升压当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。
实图7-1 立式灭菌锅实图7-2 卧式灭菌锅1．安全阀2．压力表3．放气阀4．软管5．紧固螺栓6．灭菌桶7．筛架8．水(6)保压当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源，开始计时并维持压力至所需时间。
本实训用121℃、20rnin灭菌。
(7)降压达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到零后，打开排气阀。
放净余下的蒸汽后，再打开锅盖，取出灭菌物品，排掉锅内剩余水。
(8)无菌检查将已灭菌培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无菌生长，则放人冰箱或阴凉处保存备用。
4．化学药品灭菌化学药品消毒灭菌法是用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。
能破坏细菌代谢机能并有致死作用的化学药剂为杀菌剂，如重金属离子等；仅阻抑细菌代谢机能，使细菌不能增殖的化学药剂为抑菌剂，如磺胺类及大多抗生素等。