灵芝多糖提取——水浸提条件的研究
灵芝多糖制备及药理研究进展_石凤敏
作者简介 收稿日期
石 凤 敏 （ 1983 － ） ，女，河 北 承 德 人，博 士，从 事 药 学 研 究， E-mail： shifengmin318@ 163． com。* 通讯作者，副研究员，从 事植物资源开发研究，E-mial： dzmbj@ sohu． com。 2012-01-11
行比较，发现微波法提取多糖具有操作简便、能耗低、省时且 提取率高等优点，并指出该方法可以广泛用于灵芝多糖的工 业化生产［14］。周明等采用热水浸提和超声波 － 微波协同 2 种方法萃取灵芝子实体中的多糖，并对提取时间和料液比等 因素对灵芝多糖提取率的影响进行了研究，发现与常规热水 提取工艺相比，超声波 － 微波协同萃取法可减少 3 /4 的提取 时 间，提取率更高，同时还可有效降低用水量 ，节约水 资
Research Progress of Polysaccharide from Ganoderma lucidum SHI Feng-min et al （ Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences，Peking Union Medical College， Beijing 100193） Abstract The paper introduced the main research achievements on the preparation and pharmacological effect of Ganoderma lucidum polysaccharides （ GLP） ，and then forecasted its development prospect． It was pointed out that polysaccharide was one of the main active components in Ganoderma lucidum with the medical functions of immune regulation，anti-tumor，anti-aging，antioxidant，anti-lipid，etc． ，it was the medical resources with broad development prospect． Key words Ganoderma lucidum； Polysaccharide； Preparation； Pharmacological effect
灵芝多糖实验报告
一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取和鉴定灵芝中的多糖成分，探究灵芝多糖的提取工艺，并对提取得到的灵芝多糖进行初步的生物活性分析。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 灵芝子实体（赤芝或紫芝）- 乙醇、水、硫酸、蒽酮等化学试剂- 蒸馏水、无水乙醇、丙酮等溶剂- 蛋白酶、DNase等酶类- 小鼠、细胞等实验动物和细胞系2. 实验仪器：- 电子天平- 超声波清洗器- 烘箱- 离心机- 恒温水浴锅- 分光光度计- 高效液相色谱仪- 荧光显微镜等三、实验方法1. 灵芝多糖的提取：- 将灵芝子实体洗净、晾干，粉碎成粉末。
- 采用乙醇提取法，将灵芝粉末与95%乙醇按一定比例混合，在超声波清洗器中提取2小时。
- 将提取液过滤，滤液在烘箱中浓缩至一定浓度。
- 将浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，收集沉淀物。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 采用硫酸-蒽酮法对提取得到的沉淀物进行含量测定。
- 采用高效液相色谱法对提取得到的灵芝多糖进行结构分析。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 采用小鼠腹腔巨细胞吞噬实验，检测灵芝多糖的免疫调节活性。
- 采用细胞实验，检测灵芝多糖对肿瘤细胞的抑制作用。
四、实验结果1. 灵芝多糖的提取：- 采用乙醇提取法，从灵芝子实体中提取得到多糖含量为10%左右。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 硫酸-蒽酮法检测结果显示，提取得到的灵芝多糖含量较高。
- 高效液相色谱法分析结果显示，提取得到的灵芝多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等单糖组成。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 小鼠腹腔巨细胞吞噬实验结果显示，灵芝多糖能够显著提高小鼠腹腔巨细胞的吞噬功能。
- 细胞实验结果显示，灵芝多糖对肿瘤细胞具有抑制作用。
五、实验讨论1. 灵芝多糖的提取工艺：- 本实验采用乙醇提取法，结果表明该方法能够有效地提取灵芝中的多糖成分。
- 在实验过程中，提取溶剂的浓度、提取时间、料液比等因素对提取率有显著影响，需要进一步优化。
实验步骤
固体发酵灵芝菌丝多糖提取多糖的最佳提取条件：浸提温度95度，浸提时间40分钟，固液比1:20，提取次数2次。
苯酚—硫酸法测定多糖含量最佳条件：用5%苯酚溶液1.0mL,浓硫酸5.0mL,于室温下放置30min,在490nm波长处测定吸收度.以此作为灵芝多糖含量的测定方法,结果更加准确和稳定。
多糖含量为干重2%左右。
具体步骤：1、将菌丝阴干并粉碎，称取10g样品。
2、用75%的乙醇在60度下作用2-3次，除去脂类杂质。
3、浸提温度95度，浸提时间40分钟，固液比1:20，提取次数2次。
4、将浸提液混合，离心并弃去沉淀。
旋转蒸发浓缩液体至10毫升。
5、加90毫升无水乙醇沉淀多糖（提取糖液在90%乙醇下沉淀）,4度过夜后用无水乙醇洗涤2-3次，热水复溶。
苯酚—硫酸法测定多糖含量糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
1、葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2、标准曲线制作（葡萄糖溶液均定容至1ml）0号试管校对3、待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘以换算系数。
灵芝多糖的研究进展
灵芝多糖的研究进展摘要：灵芝多糖(GLP)是灵芝中的一种重要活性成分，具有很大的开发利用价值，近年来以其独特的保健功能成为研究的热点。
灵芝的菌种筛选，发酵培养基组成和特点，发酵工艺和条件控制，以及灵芝多糖的提取、精制和纯化方法等，各个生产工艺对其含量和活性影响很大。
已有实验证实，灵芝多糖的生物保健功能体现在降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、调节免疫以及活血化瘀等多方面。
本文综述了目前在灵芝菌种筛选、发酵培养、提取分离纯化和医疗保健方面的研究情况,并对灵芝多糖的发展利用前景做了展望。
关键词：灵芝多糖；发酵；提取；纯化Studies on Polysaccharides from Ganoderma lucidumLiu Lili (Major of processing and storage of aquatic products , Class 3,Grade 2011)Instructor Professor Wu Hongmian(Institute of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University,Zhanjiang ,Guangdong,524088)Abstract: Ganoderma lucidum polysaccharides (GLP) is one of the important active ingredient of ganoderma lucidum with a great development and utilization value, in recent years, with its unique health care function, it has became the research focus. The strains filtration of ganoderma lucidum ,compositions and characteristics of fermentation, the processes and conditions control of fermentation, as well as the extraction, refinement and purification methods of the polysaccharides of ganoderma lucidum and so on, each process of production has a great influence of content and activity of GLP. Form the proof of the experiment, ganoderma lucidum polysaccharides’ health care function embodies in lowering blood sugar ,cholesterol-lowering,anticancer, anti-aging, antioxidant ,regulate immune and remove blood stasis and other aspects. This paper is reviewing in the strains filtration of ganoderma lucidum ,fermentation and cultivation ,extraction, separation and purification and medical care, and the development prospect use of ganoderma lucidum polysaccharides.Key words: GLP；fermentation；abstract；purify前言：灵芝属于担子菌纲，多孔菌科，灵芝属大型真菌，自古就有“仙草”、“瑞草”之称[1]。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法灵芝（Ganoderma lucidum）是一种珍贵的中药材，被认为具有多种生物活性成分，如多糖、蛋白质、三萜类及其衍生物等。
其中，多糖是灵芝中最为活性的成分之一，被广泛研究并应用于治疗多种疾病。
因此，有效提取灵芝多糖成分成为目前研究的热点之一。
灵芝多糖是一种大分子水溶性多糖，其化学结构较为复杂。
因此，灵芝多糖的提取方法需要考虑多种因素，如提取剂种类、浸提时间、浸提温度、提取pH值等。
以下将介绍几种常见的灵芝多糖提取方法。
1. 热水浸提法热水浸提法是目前最为常见的灵芝多糖提取方法之一。
该方法需要将干燥的灵芝粉末放入锅中，加入水（一般为灵芝粉末重量的10倍），加热至沸腾，然后继续煮沸2~3小时。
提取过程中可以根据需要调整pH值。
接下来，将提取液过滤并浓缩，随后加入适量的乙醇，混合后反复沉淀，干燥即可得到灵芝多糖。
酸性水提法是利用酸性水溶解灵芝中多糖，并进一步提取的方法。
先将灵芝粉末放入锅中，加入酸性水（如2%的HCl），在40~60摄氏度下回流约2~3小时，再过滤获得提取液，使用乙醇或丙酮沉淀得到灵芝多糖。
4. 超声波提取法超声波提取法是一种无机溶剂、无紧密块质量平衡的物质传递技术，可以提高灵芝多糖的提取率和产量。
该方法需要将灵芝粉末与提取剂（一般为水或酒精）混合，放入超声波提取器中，以适当频率、功率和时间进行超声波处理，进而将多糖分子破坏释放。
提取后用纸滤掉残渣，浸提液中加上酒精反复沉淀、洗涤，最后干燥即可得到灵芝多糖。
总之，不同的提取方法对灵芝多糖的提取效率和产量具有影响，需要根据研究目的和设备条件合理选择。
草栽灵芝多糖肽提取条件的研究
１ 材 料
用 三倍 量 ９ 乙醇沉 淀 ，沉淀 物 为灵芝 多糖 肽 。将 多 ５
糖肽 溶于水 中 ，用上 述方 法 再沉 淀 提 纯 ２次 ；最 后 将 沉淀 的 多糖 肽分 别用 ９ 乙醇 、丙 酮 和 乙醚 各 洗 涤 ３ ５， ９ ６ 次 ，置 于低温 真空 干燥 、称重 。将 上 述 多 糖 肽溶 于 蒸 馏 水 中 ，置 透析 袋 内 （ 流 分 子 量 ＞５ ０ ） 截 ０ ０ ，逆 流 透
维普资讯
浙 江 中 医 杂 志 ２０ ０ ７年 ２月第 ４ ２卷 第 ２期
【 药研 究 】 中
草栽灵芝 多糖肽提取条件的研究
林 树 钱 王 赛 贞 林 志 彬 。 林 树 光
１ 福建省 福 州绿谷 生物 药业技 术研 究所 福建 福 州 ３ ０ ０ ５０ ２
２ ４ 重 金 属 测 定 ：重 金 属 测 定 依 据 为 Ａ ：ＧＢ ． ｓ ／
Ｔ５ Ｏ ． １— ９ ； Ｐｂ： ＧＢ／ Ｏ ９ １ Ｏ９１ ６ Ｔ５ Ｏ ． ２— １ ９ ； Ｈｇ： ９６ ＧＢ／ ０ ９ １ — １ ９ 。 Ｔ５ ０ ． ７ ９ ６
０ ０ ｇ ，美 国 Ｏｈ ｕ ．１） ａ ｓ公 司 产 品 ；ＤＨＪ Ｄ Ⅲ无 压 缩 ２Ｗ 循 环煎 药机 ，韩 国 京西 株 式 会 社 产 品 ；Ｌ ． Ｉ离心 Ｘ１ Ｉ ２ 沉降机 ，上 海 医用 分 析 仪 器 厂 产 品 ；２ ０ ０ ２型 （ Ｓ ＡＦ ） 原子 荧 光 分 光 光 度 计 ，北 京 海 光 光 学 仪 器 厂 产 品 ；
芝 除了多 糖肽 的主要 理化 特 性 与段 木 灵 芝相 似 外 ，多
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法
灵芝是一种珍贵的中草药，在传统中医药和现代药物领域都有重要的应用价值。
灵芝
中的有效成分主要包括多糖、三萜类化合物和蛋白质等。
提取这些有效成分可以增强灵芝
的药用价值，下面将介绍一些灵芝中有效成分的提取方法。
一、多糖的提取方法：
1. 热水提取法：将灵芝切碎，加入适量的开水，水温保持在80-100℃之间，连续浸
泡2-3小时。
之后，过滤得到提取液，再用醇沉淀得到多糖。
2. 酶解法：将灵芝粉末加入含有酶的溶液中，温度保持在50℃左右，酶解2-3小时。
之后通过离心或过滤，得到多糖的提取液。
二、三萜类化合物的提取方法：
1. 乙醇提取法：将灵芝切碎，加入适量的乙醇中，浸泡12-24小时。
之后，过滤得到提取液，再用乙醇沉淀得到三萜类化合物。
2. 超临界流体萃取法：利用超临界二氧化碳作为溶剂，将灵芝粉末加入超临界流体
萃取设备中，进行高温高压的提取。
之后通过减压，得到三萜类化合物的提取物。
需要注意的是，在提取灵芝中有效成分的过程中，应根据具体成分的性质和目的选择
合适的提取方法。
提取过程中也需要控制温度、时间、浓度等条件，以保证提取效果和成
分的纯度。
为了确保提取物的质量和安全性，提取过程中还要注意卫生和消毒，以防止细
菌和其他有害物质的污染。
灵芝中有效成分的提取方法多种多样，选择合适的提取方法可以充分发挥灵芝药用价值。
在提取过程中要严格控制条件，确保提取物的纯度和质量。
提取物的应用还需要进一
步研究和开发，以发挥其在医药和保健品领域的作用。
灵芝多糖的研究及其提取工艺
灵芝多糖提取工艺1、灵芝多糖简介灵芝多糖是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。
不溶于高浓度的酒精 , 微溶于低浓度的酒精及冷水 , 在热水中能全部溶解。
目前已分离到的有200多种，其中大部分为β–葡聚糖，少数为α–葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。
灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。
灵芝多糖中除含有葡萄糖外 , 大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖 , 但含量较少。
单糖间糖苷键连接有1,3、 1,4 和 1, 6 数种。
大多为β型结构 , 少数为α- 型结构。
α-型多糖没有药理活性 ( 药效 ) 。
多数多糖链有分枝 , 部分多糖链含有小分子肤链。
多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。
灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成 , 在 o. 1 摩 / 升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。
多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。
单糖间以β- 1 , 3 、 1, 6 或β-1,4 、 1, 6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性 , 而纯β_-1 ,4- 糖背键连接的则没有药理活性。
此外 , 多糖的药理活性还与其立体构形有关 , 若螺旋形立体结构被破坏 , 其活性则大大下降。
淀粉、纤维素、糊精也是多糖 , 但其构形与灵芝多糖 ( 或其他真菌多糖 ) 不同。
淀粉、纤维素等多糖没有螺旋形立体结构 , 单糖间的连接全是β- 1,4-连接。
纤维素是β-型多糖 , 淀粉、糊精是α-型多糖。
由于其构形不同 , 所以淀粉、糊精、纤维素都没有药理活性。
灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一 ,已分离到的灵芝多糖有 200 多种 , 其中有数十种的结构已被搞清 , 分子量已被测定。
现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。
西藏灵芝多糖的提取工艺研究
西藏灵芝多糖的提取工艺研究目的优化西藏灵芝多糖的提取工艺。
方法以蒽酮-硫酸法作为灵芝多糖含量的测定方法，以多糖提取得率为考察指标，对浸提过程中的温度、时间、次数以及料液比4个因素进行单因素试验和正交试验。
结果灵芝多糖的最佳提取条件为提取温度100 ℃，浸提时间2 h，浸提次数3次，料液比为1∶30。
结论该提取工艺条件稳定，重现性好，可为西藏灵芝多糖的大生产提供参考依据。
[Abstract] Objective To optimize the extraction process for polysaccharides from Ganoderma lucidum of Tibet. Methods Anthrone-sulphuric acid method was used to dectect the content of polysaccharides，extraction rate of polysaccharides was took as inspection indicator，four factors such as temperature，time，number of times and ratio of material to liquid in the leaching process was conducted single-factor test and orthogonal test. Results The optimum temperature of extracting was 100℃，the optimum times of extracting was 2 times，the optimum extracting time was 2 h and ratio of material to liquid was 1∶30 of Ganoderma lucidum polysaccharides. Conclusion The condition of extracting process are stable and it is reproducible，which can provide reference for preparation of polysaccharides from Ganoderma lucidum of Tibet.[Key words] Ganoderma lucidum of Tibet；Polysaccharides；Extraction process；Content determination西藏灵芝Ganoderma lucidum Sheng H. Wu，Y. Cao& Y. C. Dai是广义赤芝Ganoderma lucidum （Curtis）P. Karst.的复合群成员，是目前我国普遍使用的食药用赤芝品种。
超声波酶法提取灵芝多糖的研究
超声波酶法提取灵芝多糖的研究吕京宁浙江大学材料与化学工程学院 高分子化工研究所摘要：灵芝古称瑞草,在我国作为药物有2000多年的历史。
临床和药理研究表明,灵芝具有多种生理活性与药理作用。
而灵芝多糖则是其最主要的有效成分,尤其它还具有抗肿瘤的活性功能。
灵芝多糖的常规提取方法已有报道,这些方法不仅费时,而且收率很低。
目前,超声技术已广泛应用于中药有效成分的提取,本文介绍了采用超声波酶法方法提取灵芝多糖的原理、工艺条件以及应用，与普 通方法相比，该法具有水解效率高，产品质量好等特点，同时还能缩短提取周期，并使反应条件更加温和。
关键词：灵芝多糖 提取 超声波酶法 纯化0 引言多糖因其具有多种生物活性已越来越硬起人们的重视，近年来，对真菌多糖的研究进展很快，灵芝多 糖作为一类非特异性免疫增强剂，具有抗血栓、抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、免疫调节、保肝、降压等作用， 因此在医药领域中具有很高的开发应用前景。
目前分离到的灵芝多糖达200种之多，大部分为β型葡聚糖， 分子量从数千到数万不等，不溶于高浓度乙醇，可在热水中溶解。
但提取灵芝多糖的传统工艺，生产周期 长，工艺复杂，从而增大了生产成本，并受资源来源的影响，使生产和临床应用受到限制。
因此如何有效 提取和分离纯化灵芝多糖是目前工作的重点 [1] 。
现代生物技术已广泛应用于许多领域，迄今为之，一批发酵工程产物已由实验室走向工业化生产，此 过程中，分离提纯技术起到了关键作用。
随着科学技术的发展，超临界萃取、超声波、微波、超滤、凝胶 电泳分离、新型吸附剂层析分离、真空冷冻干燥提取分离等技术，已经应用到中药及其天然植物研究及生 产领域中。
天然植物药用成分大多为细胞内产物，提取时多需进行细胞破碎，而现有的机械和化学方法有 时难于取得理想的破碎效果。
本研究表明，利用超声波产生的强烈振动、超高的速度、强烈的空化效应、 搅拌作用等，可加速药物有效成分进入溶剂 [2,3] ，具有提高得率，缩短提取时间，节约溶剂，有利于保护 有效成分等优点，此技术在中药有效成分提取、分离与制备工艺中已广泛应用 [4,5] 。
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第12卷 第1期天津农学院学报Vol112,No11 2005年3月Journal of Tianjin Agricultural College March,2005文章编号:1008-5394(2005)01-0012-04灵芝多糖提取———水浸提条件的研究Ξ张志军,李淑芳,刘建华(天津市林业果树研究所,天津300112)摘 要:为确定灵芝多糖的提取条件,以苯酚-硫酸法作为灵芝多糖的测定方法,对浸提过程中的温度、时间以及固液比3个因素进行了单因素试验和正交试验。
结果表明,灵芝多糖的最佳提取条件为浸提温度90℃,浸提时间2.0h,料液比1∶15;浸提温度对多糖提取率的影响最大,其次为浸提固液比和浸提时间。
关 键 词:灵芝;多糖;水浸提中图分类号:TS202.1 文献标识码:AStudy on Extracting Conditions ofPolysaccharides from Ganoderma L ucidumZHA N G Zhi2j un,L I S hu2f ang,L IU Jian2hua(Tianjin Forestry and Pomology Institute,Tianjin300112,China)Abstract:Using phenol2sulphuric acid method to detect the contents of polysaccharides,the optimum extraction conditions with water of polysaccharides from Ganoderm a L ucidum were determined by single2factor test and orthogonal test.The results show that the optimum temperature of extracting with water was90℃,the optimum extracting time was2.0h and water∶Ganoderm a L ucidum was15∶1.The main influencing factor was temperature,next is extracting time and water∶Ganoderm a L ucidum.K ey w ords:Ganoderm a L ucidum;polysaccharides;extracting with water 灵芝(Ganoderm a l uci dum(Leyss:Fr)Karst)是担子菌纲、多孔菌科灵芝属真菌,在我国自古就有“仙草”的美誉。
在《神农本草经》和《本草纲目》中,都记载了灵芝的药效,它能“治胸中结,溢心气”,“入“益肺气”、“益脾气”、“益精气”、“益肝气”等,对全身五脏之气均有“保神”、心生血,助心充脉”,“安神”、补益作用[1]。
现代医学研究表明,灵芝用于治疗肝、肾病,高血压,高血脂,神经衰弱,心血管疾病以及抗肿瘤等都有良好的临床疗效。
灵芝作为日常生活的保健滋补品,也已引起了世界各国的广泛注意和高度重视。
多糖是灵芝中具有生物活性的主要有效组分之一,其保健功能是目前保健食品以及药品功能因子中研究的焦点之一。
20世纪70年代,灵芝多糖的研究开发进入了一个崭新的发展时期,30a后,人们对灵芝多糖这一类重要生命物质产生了新的认识,并使其成为目前最为活跃的研究领域之一。
现有研究结果表明,灵芝的抗肿瘤活性是由于具有特定结构的多糖,灵芝多糖除了具有增强免疫功能以及抑制肿瘤的功能以外,还有显著的抗突变,降血脂、血糖,抗病毒等功效[2,3]。
目前,关于灵芝多糖的提取常用的方法为水、稀酸、稀碱以及二甲基亚砜等溶剂[4]。
二甲基亚砜虽然是一种提取多糖的良好溶剂,但价格昂贵,对有效成分损耗大,工艺过程繁复,工作量大,生产不易控Ξ收稿日期:2005-01-04基金项目:国家新产品计划项目“灵芝多糖的高效制备研究”(033911511)作者简介:张志军(1970-),男,内蒙古锡林浩特人,助研,学士,主要从事农产品加工及其科研开发工作。
联系电话:(022) 27795268。
第1期张志军,等:灵芝多糖提取———水浸提条件的研究・13・制,人为因素多,且生产中产生的废液易对环境造成污染,并且对人体有害,不适合工业化生产和应用,不符合当今产业发展的趋势。
用稀酸提取时,要求时间短,温度最好不要高于5℃,因此,生产中要考虑制冷,而这又增加了成本。
用稀碱提取,虽然可以提高多糖的提取率,但对多糖的生物活性有很大影响[5]。
因此,我们采用水浸提工艺,本文主要针对灵芝多糖的水浸提条件进行了优化研究。
1 实验材料与方法1.1 材料、仪器和试剂材料:赤芝,来自天津市林业果树研究所食用菌研究室。
仪器:752-C紫外可见分光光度计、分析天平、植物粉碎机。
试剂:标准葡萄糖、苯酚、硫酸。
1.2 实验方法1.2.1 多糖含量测定:采用苯酚-硫酸法[6]。
1.2.2 材料处理:取一定量干燥灵芝碎片,经植物粉碎机破碎后,加入一定比例水在一定温度下浸提一定时间,得到灵芝多糖的水浸提液。
1.2.3 标准溶液的制备:取标准葡萄糖20mg于500mL容量瓶中,加水定容至刻度。
1.2.4 标准曲线的制作:精确量取标准葡萄糖溶液0.0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8mL,各以水补至2.0mL,然后加入6%苯酚1.0mL、浓硫酸5.0mL,静置10min,摇匀,室温放置20min后于490nm处测定吸光度。
横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得到标准曲线如图1。
图1 标准曲线1.2.4 灵芝多糖提取液稀释至适当倍数后,精密吸取1.0mL,按照标准曲线的方法测定吸光度,计算得灵芝多糖含量。
2 结果与讨论2.1 不同浸提时间对灵芝多糖提取的影响浸提时间对多糖提取的影响如图2所示。
浸提时间越长,提取效果越好,当浸提时间到2h时,提取量基本不再增加,说明此时提取液中的多糖已经达到平衡。
因此,浸提时间2h提取效果最好。
・14・天津农学院学报第12卷图2 不同浸提时间对多糖提取量的影响2.2 浸提料液比对灵芝多糖提取的影响料液比即浸提时的加水量。
加水量越大,多糖溶出就越容易,相应提取效果也会更好。
但是加水量过大,对后续的浓缩操作会带来不便。
如图3所示,加水量在1∶15时,提取量趋于稳定,因此料液比应选择1∶15。
图3 料液比对灵芝多糖提取量的影响2.3 浸提温度对灵芝多糖提取率的影响随着温度的升高,分子运动的速度越快,越易于多糖在水中溶出。
如图4所示,浸提温度越高,多糖的提取效果越好,在80～90℃之间,提取量的增加趋于平缓。
在实验过程中,温度100℃为沸腾状态,随着浸提时间的延长,浸提液会减少,从而会影响多糖的提取量,而且,温度太高,也有可能影响到多糖的生物活性。
因此,最适温度范围在80～90℃之间。
图4 浸提温度对灵芝多糖提取量的影响第1期张志军,等:灵芝多糖提取———水浸提条件的研究・15・2.4 正交试验为了确定各因素对多糖提取效果的影响大小,对以上3因素进行了正交试验。
因素水平见表1。
表1 正交试验因素水平表水 平浸提温度/℃A浸提时间/hB料液比C170 1.01∶10280 1.51∶15390 2.01∶20正交试验结果以及数据分析见表2和表3所示。
表2 正交试验结果及其直观分析表试验号温度A/℃时间B/h料液比C D多糖提取量g/(1kg灵芝) 11(70)1(1.0)1(1∶10)1 1.5121(70)2(1.5)2(1:15)2 2.1331(70)3(2.0)3(1∶20)3 2.8642(80)1(1.0)2(1∶15)3 4.2652(80)2(1.5)3(1∶20)1 5.3662(80)3(2.0)1(1∶10)2 5.2973(90)1(1.0)3(1∶20)2 5.8183(90)2(1.5)1(1∶10)3 6.3993(90)3(2.0)2(1∶15)1 6.99K1 6.49611.58113.19013.86040.597K214.91113.88013.38113.230K319.19015.13614.02613.507R12.694 3.5550.8360.353表3 方差分析表变异来源自由度平方和方差F A262821.1631410.58 1.803B236225.3618112.68C233805.1616902.58D233734.8216867.41误差e469960.1817490.05总和8 F(0.1)=1.80从正交试验结果看出,最佳提取条件为:A3B3C3,即浸提温度90℃,浸提时间2.0h,料液比1∶20;由方差分析和直观分析得出,三因素以料液比对多糖提取的影响程度最小,而且料液比太大还会影响浓缩操作,因此料液比最后确定为1∶15为好。
3 结论3.1 水浸提灵芝多糖对提取效果的影响大小排列为:浸提温度>浸提时间>料液比。
3.2 灵芝多糖最佳水浸提条件是:浸提温度90℃,浸提时间2.0h,料液比1∶15。
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