HPLC培训教程
HPLC原理及基础应用培训
◎ 紫外吸收检测器（Ultraviolet Absorption；UV）
• 紫外光通过流动池，检测通过的光强度变化。如果流出色谱柱的物质吸收了光的能量，在检测器上就可以检
出，结果转换为电信号。还可以通过光栅调节，得到连续波长的紫外可见吸收光
• 信号强度根据比尔定律：A（吸光度） = abc
a=单位吸光度；b=流动池池长；c=样品的浓度
• ••
以上所述检测器均与光的吸收有关 可 见 光 、紫 外 光 、荧 光
光波范围：
3 高效液相色谱的结构—色谱柱（检测器）
10~400nm 400~800nm
手机通讯主要是中频~超高频，5G主要频段为28GHz 波长λ 300000000m/s 10.7mm 2800000000Hz
3 高效液相色谱的结构—色谱柱（检测器）
目标物质多，分离度好，分析时长短
谢谢
色谱图是某一波长下各个采集时刻的吸光度值描点得到的图；
光谱图是某一时刻各个波长下的吸光度值描点得到的图
4 Agilent 1260使用及维护注意事项
液相色谱梯度洗脱的方法设置： 等度洗脱
4 Agilent 1260使用及维护注意事项
梯度洗脱
压力线
梯度线
4 Agilent 1260使用及维护注意事项
HPLC原理及基础应用培训
1
液相色谱法简介
目
2
液相色谱应用范围
3
高效液相色谱法的结构
录 CONTENTS
4
Agilent 1260液相色谱使用注意事项
1 液相色谱法简介
◆ 色谱法起源
1903年，俄国科学家通过分离植物色素，发现了色谱的吸附原理，并于30年代开始广泛应用，当 年主要是薄层色谱，高效液相色谱法的广泛应用始于上世纪70年代。
高效液相色谱法指导培训讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
离子抑制色谱（ion suppression chromatography）——调节流动相的pH值， 抑制组分的解离，增加组分在固定相中的溶解 度，改善峰形，以达到分离有机弱酸和弱碱的 目的。
离子对色谱（ion pair chromatography）— —将反离子加入流动相中，与呈解离状态的被 测物作用，生成脂溶性的中性离子对络合物， 从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度， 改善分离效果，达到分离目的。
高效液相色谱法指导培训 讲义
胶束色谱(micellar chromatography)
• 表面活性剂在水中超过某一浓度（临界浓度） 时，多余的表面活性剂不再溶解，聚集而成 胶束（胶粒）。
• 以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束 色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系， 不是真溶液；流动相中不含有机溶剂。
过滤——用滤膜 脱气——采用
过滤或垂熔漏斗 超声或过滤的方
过滤
法
冲洗
使用含酸、碱、缓冲液的流动相后， 必须用不含盐的有机溶剂-水冲洗！
高效液相色谱法指导培训 讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
▪进样阀
高效液相色谱法指导培训 讲义
定量圈 1
正相色谱（normal phase）
流动相极性小于固定相极性的分配色谱 法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:
氨基柱、氰基柱、硅胶柱。 常用流动相为极性小的有机溶剂。
反相色谱（reversed phase）
流动相极性大于固定相极性的分配色谱法 称为反相分配色谱法。常用的分析柱有： ODS( C18)， C8， C2。
人力资源HPLC培训教程
人力资源HPLC培训教程HPLC（高效液相色谱）是分析化学中常用的一种分离技术，其在制药、化工、环境等领域都有广泛应用。
为了满足人力资源岗位对HPLC分析技术的需求，许多培训机构开设了专门的HPLC培训课程。
本文将介绍HPLC培训的相关内容及其意义。
一、HPLC培训的内容1. HPLC原理及仪器操作：包括HPLC分析的原理、仪器概述、柱、检测器等基础知识的学习和讲解。
由于HPLC是一种比较复杂的分析技术，因此对于初学者来说，仪器操作的学习尤为重要。
2. 样品制备及样品的预处理：样品制备和样品的预处理是HPLC分析的前提和基础。
关于样品的制备与预处理，包括样品采集、样品处理、样品的提取、前处理等，许多HPLC培训机构也会专门设置该内容的教学环节。
3. 色谱条件控制：色谱条件的控制将直接影响分析结果的准确性和精度，在HPLC培训中，教学内容中也应该包括对于色谱柱的优选、流动相及流速的控制、检测器的优选等这些内容。
4. 色谱图解及数据分析：液相色谱分析的结果呈现形式为色谱图，因此，图谱的解读及数据的分析都是HPLC培训的必修内容。
需要专业培训师的授课帮助，学生才能够更加细致地了解这部分内容，从而轻松驾驭新的工作任务。
二、HPLC培训的意义1.提高就业竞争力。
从事化学、药物制造、医学、食品卫生等行业，需要有HPLC分析技术的人才，而具备这种技能的人比例并不是很高，因此，学习和掌握这种技术，可以提高自身的就业竞争力。
2. 增加薪资待遇。
掌握HPLC技术可以为个人带来可观的经济收入，由于HPLC技能对于企业业务开展带来的极大益处与巨大优势，所以职业人士掌握这类技术后薪资收入水平显著提高。
3. 职业技能提高。
HPLC培训可以帮助职业人员提高专业技能，进而更好地为企业或者行业发挥自己的价值。
身具HPLC技能的人才在企业中拥有的职业规划能力也更强。
4. 为自己开创一条新道路。
在参加HPLC培训的过程中，学员最好学会树立自己的专业方向，也就是说，学习HPLC技术可以为自己的职业生涯开辟一条崭新的道路。
HPLC培训教程
HPLC培训教程HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是一种高效液相色谱技术，被广泛应用于化学、生物化学、药学等领域中的分析和纯化过程。
HPLC培训教程旨在向初学者介绍HPLC的原理、仪器组成、样品制备、方法开发以及常见问题解决等方面的知识。
一、HPLC原理HPLC是一种基于色谱原理的分析方法，通过在固定填充物（固定相）上进行流动相（液相）与样品之间的相互作用，实现对样品的分离和定量分析。
其主要原理包括分配作用、吸附作用和离子交换作用。
二、HPLC仪器组成HPLC仪器主要由流动相系统、分离柱、检测器和数据处理系统组成。
流动相系统包括溶剂供应部分和混合部分，用于供给流动相。
分离柱是药物分离的关键，通常由填料柱和色谱柱两部分组成。
检测器用于检测分离柱出口的组分，并生成相应的信号。
数据处理系统将检测器信号转化为可读取的结果。
三、样品制备样品制备是HPLC分析的关键步骤，正确的样品制备可以确保分离柱正常工作并获得准确的结果。
常见的样品制备包括溶解、过滤、稀释和净化等。
溶解样品时要选择适当的溶剂，并根据样品性质进行必要的处理。
过滤可以去除杂质颗粒和减少背景噪声。
稀释可以使样品浓度适合分析要求。
净化可以去除干扰物，保证仪器的稳定性和分析结果的准确性。
四、方法开发HPLC方法开发是为了针对特定的分析目标选择适当的仪器参数和操作条件。
方法开发的关键是选择分离柱和优化流动相组成与流速，以获得较好的分离效果和分析结果。
在方法开发过程中，应该考虑分析目标、样品矩阵、仪器性能以及分析时间等因素，进行试错实验，根据实验结果进行参数调整，直到得到满意的分析方法。
五、常见问题解决在HPLC分析过程中，常常会遇到一些问题，需要及时解决。
常见问题包括峰形异常、峰分离不佳、信号漂移、背景噪声等。
为了解决这些问题，需要对仪器进行校准和维护，检查和修复分离柱，优化操作条件等。
此外，还可以通过尝试不同的分析方法或更换试剂等方法进行排除。
HPLC高效液相色谱法培训解析说课讲解
11
超声波振荡脱气
将流动相置 于超声波清洗机 中，用超声波振 荡10~30min， 即可。
吹氦脱气
用在液体中比空 气中溶解度低的氦 气，以60mL／min 的流速缓缓地通过 流动相10~15min， 除去溶于流动相中 气体。
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高压输液泵
• 是HPLC系统中最重要的部件之一。 • 输液泵的性能好坏直接影响到整个系统
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梯度洗脱装置
• 用途：梯度洗脱。 等度(isocratic)
• 高效液相洗脱方式 梯度(gradient)
低压梯度（外梯度） • 梯度洗脱方式
高压梯度（内梯度）
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低压梯度
• 在常压下将两种或多种溶剂按一定比例输 入泵前的比例阀中混合后，再用高压泵将 流动相以一定的流量输出至色谱柱。
• 常见的是四元泵，如waters 2690/2695； Agilent 1100。
不能使用气相色谱尖头微量注射器，否则 会损坏六通阀。 • 进样方式：有部分装液法和完全装液法
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进样方式
• ①部分装液法：注入的样品体积应不大于 定量环体积的50%，并要求每次进样体积 准确、相同。
• ②完全装液法：注入的样品体积应最少是 定量环体积的3倍，以完全置换定量环内流 动相，消除管壁效应，确保进样准确度及 重现性。
一致。色谱柱的柱管外壁都以箭头显著地 标示了该柱的使用方向，安装和更换色谱 柱时要使流动相按箭头所指方向流动。
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色谱柱(尺寸)
分析型：Ø 4.6mm 制备型：Ø＞5mm以上 微径柱：Ø <2.1mm 柱长：10～25cm，30cm 少见 柱体：直型优质不锈钢柱管
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30
HPLC培训教程
W1/2
为便于测量，改用半峰宽： W1/2( 或2×△t1/2 ) 最常用的计算式： 另一计算式：
Wb
•
tR N ＝5 . 54 W 1/ 2
2
tR N ＝ 16 W b
2
( Wb不如W1/2容易测量，因而此式用的较少。)
• 理论塔板高度：
H ＝ L N
( L — 柱长)
• 经验式： H＝2dP ( dP＝10µ H＝20µ N＝5万 ) ( dP＝5µ H＝10µ N＝10万 ) dP—柱填料的颗粒直径。 • 提高柱效的方法： ①固定相填料要均一，颗粒细，装填均匀。 ②流动相粘度低。 ③低流速。 ④升高柱温。
• 3. 不对称因子“Tf”： 不对称因子“ ：
tR ( 2 ) α＝ ' tR ( 1 )
相对保留值α(分离因子)：
t' R (2) k ' (2) α＝ ＝ t ' R (1 ) k ' (1 )
( α＞1.5为好 )
• 2. 柱效率： 柱效率：
• 定义： 理论塔板数 ： N ＝ t R
2
σ
( 每米柱 )
2ơ
ơ—标准偏差，曲线拐点处峰宽的 1/2h 一半，即峰高0.607处峰宽的一半。 •
H h
⑵峰高分离度：
H－ h K 3＝ H
( K3＝1 基线分离，K3 更反映了实际分离度。)
5. 线速度：溶剂在柱中移动的速度。 线速度：溶剂在柱中移动的速度。
L u＝ t0
mm/sec ( L─柱长 t0 ─死时间)
H(µm) 粗粒
如右图所示，用实验可找到最佳的线速度： 细粒 即图中的A点：u＝1 mm/sec 此处不用流量而用线速度，是因为流量与 柱径有关，而线速度与柱径无关。 • 请记住不同柱内径的最佳流量： A B u(1mm/sec) 柱内径 流量 线速度 5 mm 1.0 mL/min 1 mm/sec ( B奌： u＝2 mm/sec ) 2 mm 0.2 mL/min 1 mm/sec 1 mm 50 µL/min 1 mm/sec 由 “1 mm/sec ” 最佳线速度可计算出适合各种柱径的最佳流量。 由上表可以看出，用5mm柱，一天要用一并昂贵的乙腈，若用1mm柱，则一 个月才用一并。
HPLC培训(峰与色谱条件)课件
高效液相 色谱
基本原理
加样
流动相
流动相
A
C
B
B
C
A
固定相 —— 柱内填料，流动相 —— 洗脱剂。
HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分 配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达 到分离的过程。
基本操作
1.打开泵电源，待自检完成后打开“Purge”阀进行排液以除去泵头之 前的气泡，排气完成后关闭“Purge”阀。按“Pump”键开启泵，然 后按“func”及数字键以0.2ml/min的速度慢慢将流速调1.0ml/min
色谱柱的良好使用规范
溶剂使用前必须过滤 运输中变干了的色谱柱要完全浸湿（预处理） 如果样品中含有无需考虑而保留强的组分时,必须进行前处理 清楚了解色谱柱填料适用的pH范围(3-7)，温度(<60),化学适应性 使用新鲜的水溶液,流动相现用现配制 定期用强极性溶剂冲洗色谱柱 储存色谱柱时,要将缓冲液冲洗干净,并保存在适合的溶剂中,如甲醇、
计算公式
或
重复性
用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。
采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连 续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标 准偏差应不大于2.0%。
相对标准偏差 RSD
采用内标法时，其相对标准偏差应不大于2.0%。
拖尾因子（T）
用于评价色谱柱的对称性。
反应峰
色谱柱故障诊断-- 峰形问题
拖尾峰－－对称因子>1.2
Normal
Tailing
Normal
Tailing
可能的原因
有些峰拖尾
1、二次保留效应，残留的硅羟基影 响
2、在大峰的尾部有小峰流出（DAD）
高效液相色谱法培训课件
进样方法
整个定量圈体积进样——为获得好的精密度， 进样量应大于定量圈量的2-5倍以上。由于
层流影响，需要有过量的样品液来取代管
壁上的流动相（见下图）。
Sample
Mobile phase
部分定量圈体积进样——当样品量少时， 采用部分体积进样，进样量由微量注射器 手动控制，要求：
不得超过定量圈体积的1/2量
最高操作温度60 ℃，最佳温度 ﹤40℃。
分离碱性物质，所用流动相pH值应高于被 测物pKa一个单位。
ZORBAX RP-HPLC系列柱的使用条件
柱
pH范围
最高温度
SB C18
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
C8
C3 苯基
腈基
XDB
Extend-C18
90℃ 60℃ 60℃ 60℃ 60℃ 60℃ 60℃
喷雾 蒸发 检测
色谱柱流出物
N2
组分的 气溶胶
溶剂 光 源
泵
pH
酸若性注 。调的意
节，： 不流
可能动 用含相 氨缓必 水冲须 、盐是 醋，挥
发
质 谱 检 测 器
Flu
10%
Ms
1%
other 4%
Conduc 5%
Elec 7%
Refra 8%
DAD 22%
检
测
器
UV-VIS
使
43% 用
统
计
色谱柱
注意！
一旦柱压升高，应停止测定，用水 冲洗数小时或更长时间，待压力下降后 再测定，如果不清楚堵在哪一段，则应 逐级检查，换泵头上滤芯，保护柱等。
柱效低的原因 频繁更换流动相组成——加速柱效降低。
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HPLC培训教程高效液相色谱我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：方法项目数量1985年版1990年版1995年版2000年版HPLC法鉴别9 34 150 检查12 40 160 含量测定7 60 117 387鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。
I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。
又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。
也称现代液相色谱。
二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2。
色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速——流速为0.1~10.0 ml/min。
高效——可达5000塔板每米。
在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
三、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。
气相色谱法适用于分离挥发性化合物。
GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC 应用最广。
液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。
LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。
此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。
按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。
（此外还有电泳。
）按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。
四、色谱分离原理高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
1．液固色谱法使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。
分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。
常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。
适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。
常用于分离同分异构体。
2．液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。
分离过程是一个分配平衡过程。
涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。
由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已很少采用。
现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。
正相色谱法采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。
为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。
但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。
有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。
正相色谱法与反相色谱法比较表正相色谱法反相色谱法固定相极性高～中中～低流动相极性低～中中～高组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。
3．离子交换色谱法固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。
被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。
被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的pH值和离子强度影响。
pH值可改变化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用。
流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。
离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。
4．离子对色谱法又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。
它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。
主要用于分析离子强度大的酸碱物质。
分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。
另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。
分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。
离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L 的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。
被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。
5．排阻色谱法固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。
小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。
它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。
常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。
被分离组分在柱中的洗脱原理II．基本概念和理论一、基本概念和术语1．色谱图和峰参数?色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。
?基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
?噪音(noise)——基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
?漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
?色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。
前者少见。
?拖尾因子(tailing factor，T)——T＝，用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。
?峰底——基线上峰的起点至终点的距离。
?峰高(peak height，h)——峰的最高点至峰底的距离。
?峰宽(peak width，W)——峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W＝4σ?半峰宽(peak width at half-height，Wh/2)——峰高一半处的峰宽。
Wh/2＝2.355σ?标准偏差(standard deviation，σ)——正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。
标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。
σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。
?峰面积(peak area，A)——峰与峰底所包围的面积。
A＝×σ×h＝2.507 σ h＝1.064 Wh/2 h 2．定性参数（保留值）?死时间(dead time，t0)——不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
?死体积(dead volume，V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。
它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。
其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。
为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
V0＝F×t0（F为流速）?保留时间(retention time，tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。