微生物学实验课件
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微生物学课件
无性繁殖
通过二分裂、出芽等方式进行繁殖， 新个体与母体遗传物质完全相同。
02
有性繁殖
通过接合、转化等方式进行繁殖，涉 及遗传物质的交换和重组，产生遗传 变异。
01
遗传物质传递
通过DNA或RNA的复制、转录和翻译 等过程，将遗传信息从亲代传递给子 代。
05
03
基因突变
由于DNA复制错误或外界因素（如紫 外线、化学物质）导致的基因结构改 变，产生新的性状。
温度、湿度、pH值、营养物质等环境因素对微生物的生长和代谢 有重要影响。
微生物对环境的影响
通过代谢活动改变环境条件，如产生酸、碱或改变氧化还原电位等 。
微生物之间的相互作用
包括竞争、共生、寄生和捕食等关系，形成复杂的微生物群落结构 。
微生物在环境保护中的应用
污水处理
利用微生物降解有机污染物，提高污水水质 。
命名规则
采用双名法，即属名和种名，属 名在前，种名在后。种名可以描 述微生物的某种特性或来源。
微生物的鉴定方法与技术手段
表型鉴定
通过观察微生物的形态 、培养特征、生理生化 特性等进行鉴定。
免疫学鉴定
利用抗原抗体反应进行 微生物的鉴定，如血清 学试验、免疫荧光技术 等。
生物化学鉴定
通过分析微生物的代谢 产物或酶活性进行鉴定 ，如API试剂条、 Biolog系统等。
子）
病毒的形态与结构
01
02
03
病毒的基本形态
球形、杆形、砖形、蝌蚪 形等
病毒的结构
核酸（DNA或RNA）、蛋 白质外壳、脂质膜（部分 病毒）
繁殖方式
吸附、注入核酸、合成病 毒蛋白、组装与释放
03 微生物的生长与繁殖
2.1-微生物的实验室培养-课件(选修1)
1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动
作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。 溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯
化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。 整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致 烧杯破裂。
培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ， 培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性 ， 培养细菌时需要将pH调节为 中性或微碱性 。
（2）获得纯净培养物的关键是什么？ （3）避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面 （4）什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？
无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着 和手进行 清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基 等器具进行 灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操 作应在 酒精灯火焰附近 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手 时，就可以进行倒平板了。
2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污染培养基。
3、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
灭菌的方法：
1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃ 下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤 7、如何倒平板？
三、实验操作
微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
微生物学实验(详细介绍)ppt课件
厚标本和薄标本
4 - 5 um 2um
基础知识
三、 实验步骤
•
(一) 显微镜的使用
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要 双眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。 (2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备 好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否 完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上
微生物学实验( 详细介绍)
课程组人员: 王淑军 暴增海 马桂珍
王洪斌 陈静
制作人员: 马桂珍
暴增海
课 程 简 介
微生物学实验课是微生物学课程教学中的一个重要环节。
本课程总计36学时，使用教材是沈萍主编的《微生物学试验》
（第三版）。通过本课程的学习，使学生了解微生物学的基 本知识；巩固和加深所学理论知识；掌握微生物学最基本的
DIC显微镜下的硅藻
（伪彩色）
8. 倒置显微镜
9. 透射电子显微镜
莱卡超薄切片机
JEM-1011透射电子显微镜
内质网透射电镜图（伪彩色）
冰冻蚀刻电镜照片
10. 扫描电子显微镜
JEOL扫描电子显微镜
人类血细胞SEM照片
11. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射 仪
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离， 分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨
操作技能。同时，通过实验，培养学生培养学生独立思考和
理论联系实际能力；养成实事求是、严肃认真的科学态度， 以及敢于创新的开拓精神；并在实验中进一步提高学生的科 学素质修养。
实 验 内 容
实验一 显微镜使用及微生物形态观察
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
动物微生物学实验PPT课件
培养结果分析包括培养基的选择、培养条件的控制、菌落形态观察等方面。通过对 这些方面的分析，可以初步判断微生物的种类和生长特性。
例如，在选择培养基时，可以选择适合某一类微生物生长的培养基，通过观察菌落 形态和颜色等特征，可以初步判断微生物的种类。
微生物分离结果分析
微生物分离是动物微生物学实验中的另 一个重要环节，通过分离可以得到较为 纯净的微生物样品，以便进行后续的实
验和分析。
分离结果的分析包括分离效率的评价、 分离得到的微生物种类的鉴定等方面。 通过对这些方面的分析，可以评估分离
方法的优劣和分离效果的好坏。
例如，在评价分离效率时，可以采用计 数法等方法对分离得到的微生物数量进 行统计，并与理论值进行比较，从而判
断分离效率的高低。
微生物鉴定结果分析
微生物鉴定是动物微生物学实验中的核心环节，通过鉴定可以确定微生物的种类和分类地位。
微生物分离
微生物分离是将混合菌样中的 不同微生物分离出来，获得纯 培养的过程。
分离方法包括划线分离、稀释 分离、选择性分离等，根据不 同微生物的特性选择合适的分 离方法。
分离过程中需注意无菌操作， 避免交叉污染，确保分离得到 的微生物纯度高、无杂菌。
微生物鉴定
微生物鉴定是通过观察微生物的 形态、染色、生化反应等特征， 对其种类进行鉴别和分类的过程。
培养基
选择性培养基、鉴别培养基等
实验器材
显微镜、接种环、培养皿、试 管等
04
试剂
染色剂、抗生素等
实验步骤
样本采集
采集动处理，如离心、过 滤等。
微生物分离
将处理后的样本接种于培养基上 ，进行微生物的分离。
结果分析
分析实验数据，得出结论。
例如，在选择培养基时，可以选择适合某一类微生物生长的培养基，通过观察菌落 形态和颜色等特征，可以初步判断微生物的种类。
微生物分离结果分析
微生物分离是动物微生物学实验中的另 一个重要环节，通过分离可以得到较为 纯净的微生物样品，以便进行后续的实
验和分析。
分离结果的分析包括分离效率的评价、 分离得到的微生物种类的鉴定等方面。 通过对这些方面的分析，可以评估分离
方法的优劣和分离效果的好坏。
例如，在评价分离效率时，可以采用计 数法等方法对分离得到的微生物数量进 行统计，并与理论值进行比较，从而判
断分离效率的高低。
微生物鉴定结果分析
微生物鉴定是动物微生物学实验中的核心环节，通过鉴定可以确定微生物的种类和分类地位。
微生物分离
微生物分离是将混合菌样中的 不同微生物分离出来，获得纯 培养的过程。
分离方法包括划线分离、稀释 分离、选择性分离等，根据不 同微生物的特性选择合适的分 离方法。
分离过程中需注意无菌操作， 避免交叉污染，确保分离得到 的微生物纯度高、无杂菌。
微生物鉴定
微生物鉴定是通过观察微生物的 形态、染色、生化反应等特征， 对其种类进行鉴别和分类的过程。
培养基
选择性培养基、鉴别培养基等
实验器材
显微镜、接种环、培养皿、试 管等
04
试剂
染色剂、抗生素等
实验步骤
样本采集
采集动处理，如离心、过 滤等。
微生物分离
将处理后的样本接种于培养基上 ，进行微生物的分离。
结果分析
分析实验数据，得出结论。
《微生物学实验》PPT课件
实验六
实验五 培养基的制备、 器具包扎和灭菌
编辑ppt
1
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
编辑ppt
2
实验原理
培养基
据组成成分可分为:
1.合成培养基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质 配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
编辑ppt
8
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可 溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O
等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀 菌灯。
其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角 瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
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16
高氏一号培养基
实验五 培养基的制备、 器具包扎和灭菌
编辑ppt
1
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
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2
实验原理
培养基
据组成成分可分为:
1.合成培养基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质 配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
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8
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可 溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O
等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀 菌灯。
其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角 瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
编辑ppt
16
高氏一号培养基
医学微生物学ppt课件完整版
病毒缺乏独立的代谢和能量系统 ，必须利用宿主细胞的酶系统、 原料和能量进行复制。
形态多样 结构简单 寄生生活
严格细胞内寄生
病毒粒子形态各异，有球形、杆 状、砖形、蝌蚪形等。
病毒必须寄生在活细胞内才能复 制和增殖。
病毒的复制与变异
复制周期
包括吸附、注入、脱壳、生物合 成、组装与释放等步骤。
变异机制
病毒的变异机制包括错误复制、 基因重组和基因重配等。
通过接种疫苗可以预防某些由微生物引起的疾病，如麻疹、流感等 。
微生物与药物的关系
微生物是药物的重要来源
许多抗生素、抗真菌药物等都来源于微生物或其代谢产物。
微生物在药物生产中的应用
利用微生物发酵技术可以生产多种药物，如青霉素、维生素等。
微生物与药物相互作用
某些药物可以影响微生物的生长和代谢，同时微生物也可以影响药 物的吸收、分布和代谢。
06
实验诊断与防治原则
Chapter
实验诊断方法与技术
细菌学诊断方法
包括细菌培养、生化反应、血 清学试验等，用于鉴定细菌种
类和检测细菌感染。
病毒学诊断方法
包括病毒分离、病毒抗原检测 、病毒核酸检测等，用于鉴定 病毒种类和检测病毒感染。
免疫学诊断方法
包括抗原抗体反应、免疫荧光 技术、酶联免疫吸附试验等， 用于检测病原体特异性抗原或 抗体。
03
人类通过培养有益微生物和消灭有害微生物来维护自身健康，
如疫苗接种、消毒灭菌等。
02
细菌学
Chapter
细菌的形态与结构
细菌的基本形态
球菌、杆菌、螺形菌
细菌的结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
特殊结构
荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢
形态多样 结构简单 寄生生活
严格细胞内寄生
病毒粒子形态各异，有球形、杆 状、砖形、蝌蚪形等。
病毒必须寄生在活细胞内才能复 制和增殖。
病毒的复制与变异
复制周期
包括吸附、注入、脱壳、生物合 成、组装与释放等步骤。
变异机制
病毒的变异机制包括错误复制、 基因重组和基因重配等。
通过接种疫苗可以预防某些由微生物引起的疾病，如麻疹、流感等 。
微生物与药物的关系
微生物是药物的重要来源
许多抗生素、抗真菌药物等都来源于微生物或其代谢产物。
微生物在药物生产中的应用
利用微生物发酵技术可以生产多种药物，如青霉素、维生素等。
微生物与药物相互作用
某些药物可以影响微生物的生长和代谢，同时微生物也可以影响药 物的吸收、分布和代谢。
06
实验诊断与防治原则
Chapter
实验诊断方法与技术
细菌学诊断方法
包括细菌培养、生化反应、血 清学试验等，用于鉴定细菌种
类和检测细菌感染。
病毒学诊断方法
包括病毒分离、病毒抗原检测 、病毒核酸检测等，用于鉴定 病毒种类和检测病毒感染。
免疫学诊断方法
包括抗原抗体反应、免疫荧光 技术、酶联免疫吸附试验等， 用于检测病原体特异性抗原或 抗体。
03
人类通过培养有益微生物和消灭有害微生物来维护自身健康，
如疫苗接种、消毒灭菌等。
02
细菌学
Chapter
细菌的形态与结构
细菌的基本形态
球菌、杆菌、螺形菌
细菌的结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
特殊结构
荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢
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电荷，而碱性染料电离时其分子的染色部分带正 电荷，染料易使细菌着色。
细菌的简单染色法
器材
菌种：枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液
操作步骤
涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操 作挑少许菌苔涂成薄膜
干燥：室温自然干燥 固定：热固定 载玻片涂面朝上通过火焰2-3次 染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约1min 水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液 干燥镜检
加热法
干热灭菌
火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、 金属用具、无菌操作时在火焰上短 暂灼烧瓶口等
热空气灭菌：玻璃器皿
加热法－－湿热灭菌
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌锅 15-30min 培养基、工作服、橡皮物品、玻璃
器皿等
常压蒸汽灭菌
某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基 不具备高压蒸汽灭菌条件的 仅能杀死大多数微生物、可用常压
干热灭菌
器材：
培养皿，试管，吸管，电烘箱等
操作步骤：
装入待灭菌的物品：避免物品太挤妨碍空气
流通
升温 恒温 降温 开箱取物：温度未降至70℃前勿开箱，防爆
高压蒸汽灭菌
一、目的要求：
１.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用 范围。
２.学习高压蒸汽灭菌的基本方法。
二、基本原理
高压使水的沸点增高，产生超过100℃的 高温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性
主要内容
细菌的简单染色法 革兰氏染色法 细菌的芽孢染色法 荚膜染色法
细菌的简单染色法
一、目的要求：
１.学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细 菌的简单染色法。
２.初步认识细菌的形态特征。 3. 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技
术。
二、基本原理
常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等 在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负
注意：切勿用手、其他纸擦拭镜 头
实验观察内容及实验报告
内容：观察金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌的染色标本
试验报告：绘出金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌在油镜下的形态。
链球菌
杆菌
培养基的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的制备 目的要求 1.明确培养基的制备原理 2.掌握配置培养基的一般方法与
二、基本原理
通过机械作用滤去液体或空气中的 细菌
微孔滤膜过滤除菌
器材
培养基、2%葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板 注射器、微孔滤膜过滤器、0.2灭菌 连接 压滤 无菌检查 清洗
试验报告
记录无菌检查结果
实验二 微生物的染色与形态结 构的观察
紫外线灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外 线灯
操作步骤
紫外线灯直接照射30min、检查培养基 37℃温箱培养24小时，无菌生长则可用
化学消毒剂与紫外线照射结合使用
试验报告
检查灭菌是否彻底
微孔滤膜过滤除菌
一、目的要求：
１.了解过滤除菌的基本原理。 ２.掌握过滤除菌方法。
6.加塞 7.包扎 8.灭菌 9.搁置斜面
注意事项
1.蛋白胨易吸水，称取要迅速 2.琼脂溶化过程中注意温度，勿
使过热溢出
消毒与灭菌
消毒与灭菌的概念
消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营养 体
灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子
消毒与灭菌的主要方法
加热法 过滤法 照射法 化学药品
水蒸气的穿透性强 湿热的蒸汽有潜热
高压蒸汽灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅
操作步骤
取出内层锅，向外层锅内加适量的水 放置内层锅及待灭菌物 加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽 加热同时打开排气阀 灭菌所需时间到后关闭电源，降温 取出灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，检查
重金属离子、抗生素、来苏尔、７５％ 的乙醇。
干热灭菌
目的要求：
１.了解干热灭菌的原理和应用范围 ２.学习干热灭菌的操作技术
基本原理：
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝 固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当 环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快， 反之，含水量越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌 相比，干热灭菌所需温度高（１６０～１７０ ℃），时间长。
步骤
培养基的制备原理
牛肉膏蛋白胨培养基是应用最广 泛的、最普通的细菌培养基,也称 普通培养基
组成
牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维 生素
蛋白胨：氮源、维生素 NaCl: 无机盐 水 琼脂：塑型
培养基的制备方法
1.称量(牛肉膏,蛋白
胨,NaCl)
2.溶化 3.调pH 4.过滤 5.分装
间歇灭菌法
加热法－－湿热灭菌
煮沸消毒法
注射器、解剖器械等 10-15 min可杀死细菌所有营养体、
部分芽孢
超高温杀菌
135-150℃、2-8s 牛奶及其他液态食品 杀死微生物、保存营养
其他方法
过滤除菌
血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消 毒灭菌
辐射灭菌
紫外线照射
化学药品灭菌
微生物学实验
实验一 微生物学实验基础
普通光学显微镜的使用 培养基的制备 消毒与灭菌 细菌三型的观察
普通光学显微镜的使用
目的要求 1.学习并掌握油镜的原理及使用
方法 2.复习普通台式显微镜的结构、
各部分的结构、使用方法
基本原理（油镜的原理）
1.增加照明亮度
在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相 近的介质（如：香柏油）减少光线的 折射与反射损失
无菌生长则可用
试验报告
检查灭菌是否彻底
紫外线灭菌
一、目的要求：
了解紫外线灭菌的基本原理及方法
二、基本原理
紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、 DNA链的交联，抑制DNA的复制
幅射使空气中的氧电离产生[o],使o2生成 臭氧（O3）或使H2O生成H2O2,利用 O3H2O2的氧化杀菌作用
2.增加显微镜的分辨率
油镜的使用方法
1.准备工作（复习）
显微镜的放置 光源的调节 目镜的调节 聚光器的调节
油镜的使用方法
2.显微观察
低倍镜观察 高倍镜观察
寻找观察目标
油镜观察
在观察目标区域滴加香柏油，仔细微 调，认真观察
油镜的使用方法
3.显微镜使用完毕的处理
上升镜筒，取下载玻片 用擦镜纸檫去油 用擦镜纸蘸无水乙醚乙醇 用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜 还原各部分
细菌的简单染色法
器材
菌种：枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液
操作步骤
涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操 作挑少许菌苔涂成薄膜
干燥：室温自然干燥 固定：热固定 载玻片涂面朝上通过火焰2-3次 染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约1min 水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液 干燥镜检
加热法
干热灭菌
火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、 金属用具、无菌操作时在火焰上短 暂灼烧瓶口等
热空气灭菌：玻璃器皿
加热法－－湿热灭菌
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌锅 15-30min 培养基、工作服、橡皮物品、玻璃
器皿等
常压蒸汽灭菌
某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基 不具备高压蒸汽灭菌条件的 仅能杀死大多数微生物、可用常压
干热灭菌
器材：
培养皿，试管，吸管，电烘箱等
操作步骤：
装入待灭菌的物品：避免物品太挤妨碍空气
流通
升温 恒温 降温 开箱取物：温度未降至70℃前勿开箱，防爆
高压蒸汽灭菌
一、目的要求：
１.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用 范围。
２.学习高压蒸汽灭菌的基本方法。
二、基本原理
高压使水的沸点增高，产生超过100℃的 高温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性
主要内容
细菌的简单染色法 革兰氏染色法 细菌的芽孢染色法 荚膜染色法
细菌的简单染色法
一、目的要求：
１.学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细 菌的简单染色法。
２.初步认识细菌的形态特征。 3. 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技
术。
二、基本原理
常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等 在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负
注意：切勿用手、其他纸擦拭镜 头
实验观察内容及实验报告
内容：观察金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌的染色标本
试验报告：绘出金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌在油镜下的形态。
链球菌
杆菌
培养基的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的制备 目的要求 1.明确培养基的制备原理 2.掌握配置培养基的一般方法与
二、基本原理
通过机械作用滤去液体或空气中的 细菌
微孔滤膜过滤除菌
器材
培养基、2%葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板 注射器、微孔滤膜过滤器、0.2灭菌 连接 压滤 无菌检查 清洗
试验报告
记录无菌检查结果
实验二 微生物的染色与形态结 构的观察
紫外线灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外 线灯
操作步骤
紫外线灯直接照射30min、检查培养基 37℃温箱培养24小时，无菌生长则可用
化学消毒剂与紫外线照射结合使用
试验报告
检查灭菌是否彻底
微孔滤膜过滤除菌
一、目的要求：
１.了解过滤除菌的基本原理。 ２.掌握过滤除菌方法。
6.加塞 7.包扎 8.灭菌 9.搁置斜面
注意事项
1.蛋白胨易吸水，称取要迅速 2.琼脂溶化过程中注意温度，勿
使过热溢出
消毒与灭菌
消毒与灭菌的概念
消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营养 体
灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子
消毒与灭菌的主要方法
加热法 过滤法 照射法 化学药品
水蒸气的穿透性强 湿热的蒸汽有潜热
高压蒸汽灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅
操作步骤
取出内层锅，向外层锅内加适量的水 放置内层锅及待灭菌物 加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽 加热同时打开排气阀 灭菌所需时间到后关闭电源，降温 取出灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，检查
重金属离子、抗生素、来苏尔、７５％ 的乙醇。
干热灭菌
目的要求：
１.了解干热灭菌的原理和应用范围 ２.学习干热灭菌的操作技术
基本原理：
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝 固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当 环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快， 反之，含水量越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌 相比，干热灭菌所需温度高（１６０～１７０ ℃），时间长。
步骤
培养基的制备原理
牛肉膏蛋白胨培养基是应用最广 泛的、最普通的细菌培养基,也称 普通培养基
组成
牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维 生素
蛋白胨：氮源、维生素 NaCl: 无机盐 水 琼脂：塑型
培养基的制备方法
1.称量(牛肉膏,蛋白
胨,NaCl)
2.溶化 3.调pH 4.过滤 5.分装
间歇灭菌法
加热法－－湿热灭菌
煮沸消毒法
注射器、解剖器械等 10-15 min可杀死细菌所有营养体、
部分芽孢
超高温杀菌
135-150℃、2-8s 牛奶及其他液态食品 杀死微生物、保存营养
其他方法
过滤除菌
血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消 毒灭菌
辐射灭菌
紫外线照射
化学药品灭菌
微生物学实验
实验一 微生物学实验基础
普通光学显微镜的使用 培养基的制备 消毒与灭菌 细菌三型的观察
普通光学显微镜的使用
目的要求 1.学习并掌握油镜的原理及使用
方法 2.复习普通台式显微镜的结构、
各部分的结构、使用方法
基本原理（油镜的原理）
1.增加照明亮度
在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相 近的介质（如：香柏油）减少光线的 折射与反射损失
无菌生长则可用
试验报告
检查灭菌是否彻底
紫外线灭菌
一、目的要求：
了解紫外线灭菌的基本原理及方法
二、基本原理
紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、 DNA链的交联，抑制DNA的复制
幅射使空气中的氧电离产生[o],使o2生成 臭氧（O3）或使H2O生成H2O2,利用 O3H2O2的氧化杀菌作用
2.增加显微镜的分辨率
油镜的使用方法
1.准备工作（复习）
显微镜的放置 光源的调节 目镜的调节 聚光器的调节
油镜的使用方法
2.显微观察
低倍镜观察 高倍镜观察
寻找观察目标
油镜观察
在观察目标区域滴加香柏油，仔细微 调，认真观察
油镜的使用方法
3.显微镜使用完毕的处理
上升镜筒，取下载玻片 用擦镜纸檫去油 用擦镜纸蘸无水乙醚乙醇 用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜 还原各部分