肿瘤耐药基因检测
外周血单个核细胞多药耐药相关基因含量监测在儿童恶性肿瘤中的应用
【 摘 要】 目的： 建立检测多药耐药（ ｍ ｕ ｌ ｔ ｉ — ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ， Ｍ Ｄ Ｒ ） 相关基因荧光定量 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ方法， 并动态监测肿瘤患者外周血
ＭＤ Ｒ相关 基因（ ＭＤ Ｒ１ 、 ＭＲ Ｐ １ 和Ｌ Ｒ Ｐ ） 含量 ， 探讨是否根据这些基 因含量来指导肿瘤化疗 。方法 ： 利用 Ｔ ａ ｑ — Ｍａ ｎ 探 针方法 ． 建立
与基因
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． １ ３ ４ ０ ６ ￣ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｃ ｙ ｘ ｂ ． ２ ０ １ ４ ． ０ １ ． ０ ０ １
外周血单个核 细胞 多药耐药相关基 因含量监测 在儿童恶性肿瘤中的应用
谭俊 杰 ， 张鹏辉 ， 邹 琳 ’
（ 重庆医科 大学附属儿童 医院 ： １ ． 临床分子 医学 中心 ； ２ ． 临床检验中心 ， 儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室 ， 儿科学重庆市重点实验 室 ， 重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作 基地 ， 重庆 ４ ０ ０ ０ １ ４ ）
【 关键词 】 多药耐药 ． 夕 周血 ； 荧 光定量 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ ； 儿童肿瘤 【 中图分 类号 】 Ｒ ７ ３ ７ ． ７ 【 文献标志码 】 Ａ 【 收稿 日期 】 ２ ０ １ １ － ０ ５ — １ ２
Ｍｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｇ ｅ ｎ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｍｏ ｎ ｏ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｏ ｆ ｐ ｅ ｒ ｉ ｐ ｈ ｅ ｒ ｙ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｉ ｎ ｃ ｈ ｉ ｌ ｄ ｍａ ｌ ｉ ｇ ｎ ａ ｎ ｔ ｔ ｕ ｍＯ ｒ
肿瘤组织基因检测不合格-概述说明以及解释
肿瘤组织基因检测不合格-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述肿瘤组织基因检测在近年来得到了广泛的应用和关注。
通过对肿瘤组织的基因检测，可以了解肿瘤的发生机制、遗传变异情况以及患者可能的治疗反应。
然而，随着肿瘤组织基因检测的普及，也出现了一些不合格的检测结果。
本文将对肿瘤组织基因检测不合格的问题进行探讨和分析。
首先，我们将介绍肿瘤组织基因检测的重要性，包括其在个体化治疗中的作用以及对临床决策的影响。
然后，我们将详细介绍肿瘤组织基因检测的流程和方法，以帮助读者更好地理解该技术的应用和潜在问题。
接下来，我们将探讨肿瘤组织基因检测不合格的可能原因。
这些原因包括样本采集和处理的问题、测试方法和设备的选择以及数据分析和解读的误差等。
我们将通过分析这些问题，帮助读者了解为何会出现不合格的检测结果，以及如何避免这些问题的发生。
最后，我们将探讨肿瘤组织基因检测不合格可能对临床治疗和患者带来的影响，并提出解决肿瘤组织基因检测不合格的方法。
这些方法包括对检测流程的优化、技术设备的升级以及专业人员的培训和规范化等。
通过采取这些措施，我们可以提高肿瘤组织基因检测的准确性和可靠性，为患者提供更加有效的个体化治疗策略。
本文的目的是希望引起人们对肿瘤组织基因检测不合格问题的重视，并提出相应的解决方案。
通过更好地了解和解决这些问题，我们可以更好地利用肿瘤组织基因检测的优势，为患者提供更好的治疗效果，并推动个体化医疗的发展。
1.2文章结构文章结构本文将从肿瘤组织基因检测的重要性、检测的流程和方法以及可能导致不合格结果的原因三个方面进行论述。
首先，我们将介绍肿瘤组织基因检测的重要性，说明其在肿瘤诊断、治疗选择以及预后评估中的作用。
其次，我们将详细介绍肿瘤组织基因检测的流程和方法，包括样本采集、DNA/RNA提取、基因检测技术的选择和数据分析等方面的内容。
最后，我们将探讨肿瘤组织基因检测不合格的可能原因，如技术问题、样本质量、数据解读等因素可能导致检测结果的不准确性。
恶性肿瘤多药耐药标记的检测及其临床意义
恶性肿瘤多药耐药标记的检测及其临床意义
罗克枢;黄晓赤
【期刊名称】《现代临床医学》
【年(卷),期】2004(030)002
【摘要】化学药物治疗(化疗)是恶性肿瘤综合治疗的主要手段之一。
患者对化疗药物原发性或继发性的耐受是大多数肿瘤化疗失败的主要原因，也是当今肿瘤治疗的一大难题。
肿瘤对化疗的耐药性可分为先天性耐药和获得性耐药；又根据耐药谱可分为原发耐药和多药耐药。
多药耐药(multidrug resistance，MDR)是指肿瘤细胞在对一种化疗药物产生抗药性的同时，会对许多结构上无关的、作用机理不同的其他抗癌药物产生交叉耐药性。
【总页数】2页(P110-111)
【作者】罗克枢;黄晓赤
【作者单位】成都军区总医院,四川,成都,610083;成都市第六人民医院,四川,成都,610051
【正文语种】中文
【中图分类】R730.21
【相关文献】
1.恶性肿瘤多药耐药标记的检测及其临床意义 [J], 罗克枢;黄晓赤
2.恶性肿瘤多药耐药标记的检测及其临床意义 [J], 罗克枢;黄晓赤
3.恶性肿瘤多药耐药标记的检测及其临床意义（试卷编号：00000011） [J],
4.多药耐药基因在淋巴——浆细胞系统恶性肿瘤中的表达及临床意义 [J], 孙延霞; 张凤春
5.恶性肿瘤多药耐药标记的检测及其临床意义（第2期第1套题） [J],
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多药耐药(MDR)基因检测
介绍
01 正常值
03 注意事项 05 相关症状
目录
02 临床意义 04 相关疾病
多药耐药(MDR)基因编码P-糖蛋白(P-170)，该蛋白位于细胞膜上，有药物泵作用，将进入细胞的药物泵出细 胞外而使细胞产生耐药。MDR阳性表示各种癌症的多药耐药。
正常值
ห้องสมุดไป่ตู้
正常范围：阴性。
感谢观看
临床意义
1.判断肿瘤病人对当前化疗用药是否产生耐药; 2.在化疗前可指导临床用药，以便选择或制定化疗发案。
注意事项
无绝对或相对禁忌症。
相关疾病
子宫内膜癌，多发性内分泌肿瘤综合征Ⅰ型，膀胱癌，皮肤癌，先天性肿瘤，男性尿道癌，肾盂肿瘤和输尿 管肿瘤，胰腺癌，肿瘤性息肉，大肠癌
相关症状
基因融合，脓肿，贫血，恶心与呕吐，消瘦，毛发异常，发烧
基因检测到底测多少个靶点为宜（以肺癌为例）
基因检测到底测多少个靶点为宜（以肺癌为例）⼀，哪些⼈群必须做基因检测靶向药的问世带来了患者⽣存的获益，选择合适的靶向药物需要进⾏相应的基因检测，因此基因检测成为了肿瘤治疗中必不可少的⼀个环节。
在NCCN的⾮⼩细胞肺癌指南⾥都把基因检测提升到和病理同等重要的⾼度。
总⾔之:★⾮⼩细胞肺癌患者都推荐去做检测，⽆论是早期，局部晚期或晚期。
★⼩细胞因为缺乏合适的药物靶点不推荐，对于神经内分泌类的也有可能发⽣突变，也推荐做。
★当然还有患者病理不明确且⽆法取到合适病理的患者，但基于肿瘤标志物和影像学已经基本确定为肿瘤的患者也可以考虑基因检测。
★其他患者要求进⾏基因检测的情况。
⼆，测多少靶点最为合适基本原则是越后越多：耐药后及多线治疗后的患者因为肿瘤的异质性和复杂的耐药机制建议靶点相对要多，例如⼀线埃克替尼（凯美纳）或吉⾮替尼、或厄洛替尼耐药后的患者⾄少要选择9-15个基因靶点，因为类似的⼀代EGFRtki耐药的机制包括T790m， HER2 ，MET扩增，RET等等，所以尽可能的选择覆盖以上靶点的套餐；⽽单纯的只选择T790m检测往往会错失更多的靶向治疗机会。
当然三线或三线后的治疗检测可能需要更多的pannel，考虑免疫治疗的患者需要测TMB和pd-1/L1表达。
初治患者多少为宜：按照NCCN指南⾄少需要测EGFR，ALK，ROS1，当然也有初治患者会合并tp53，kras等情况，所以根据情况需要3-8个为宜。
哪些患者需要⼤PANEL：合并多种瘤种，诊断不确切，多线治疗后希望渺茫，对于靶向治疗渴望度较⾼的。
三、抽⾎或组织哪种更优⼤型临床研究benefit告诉我们，⾎液可以替代组织，当然组织仍然是⾦标准。
没有组织或者⼆次三次或四次的动态监测⾎液更为可及，⾎液更能代表全貌。
参考⽂献：WCLC20171017 ，中国医学科学院肿瘤医院王洁教授在世界肺癌⼤会上汇报的BENEFIT 研究 (CTONG1405) 数据四、哪种检测技术更优⽬前普遍建议NGS，尤其对于⾎液样本不建议ARMS.今⽇分享1、PDF:最新2017NCCN指南⾮⼩细胞肺癌V9中⽂版。
肿瘤多药耐药基因 (MDR1)核酸检测试剂盒说明书
CatSA-67021MDR1(RNA)2010(第二版)1/2肿瘤多药耐药基因(MDR1)核酸扩增检测试剂盒说明书(PCR-荧光探针法)【名称】通用名：肿瘤多药耐药基因(MDR1)核酸检测试剂盒说明书英文名：Multidrug Resistance Gene (MDR1)Fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction (PCR)Diagnostic kit 汉语拼音：zhong liu duo yao nai yao ji yin (MDR1)he suan kuo zeng jian ce shi ji he shuo ming shu【目的】本试剂盒适用于检测肿瘤患者新鲜组织、全血等样本中多药耐药基因(MDR1)mRNA ，用于对化疗药物产生耐药的辅助诊断及其病人药物治疗的疗效监控。
其检测结果仅供临床参考。
【原理】本试剂盒选取一对肿瘤多药耐药基因(MDR1)特异性引物和一条特异性荧光杂交探针，应用Trizol 提取RNA ，经逆转录酶作用将RNA 转录成cDNA ，后者在、耐热DNA 聚合酶（Taq 酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg 2+、Tris-HCl 等)四种核苷酸单体（dNTPs ）等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对肿瘤多药耐药基因(MDR1)进行扩增，从而达到快速准确实时定量检测之目的。
【组成】名称数量规格RNA 提取液B 1管500μl/管逆转录酶系1管40μl/管MDR1-RT MIX 2管140μl/管Taq 酶系1管80μl/管MDR1-PCR MIX 1管960μl/管MDR1阳性质控品1管50μl/管(1×107Copies/ml)阴性质控品1管500μl/管DEPC 水1管2000μl/管备注：10×RCLB 、RNA 提取液A (500500μμl Trizol reagents reagents))等另行配备。
肿瘤基因检测的解读流程
从临床进入基因检测流程是入口，检测结果结合临床信息进行合理解读是出口，这一入一出之间需经历检测前临床咨询部分、实验室部分、信息分析部分、临床解读部分共四个环节。
其中的第四部分临床解读部分即是根据检测结果、患者信息、医生共识综合判断，临床和遗传咨询有效衔接、充分沟通，最终出具临床解读报告。
在做成临床解读报告之前，首先需要将解读的各个环节进行明确，包括解读的步骤流程，解读的技术细节。
这样才有可能真正的做到解读的规范化，使解读过程有据可依，有章可循，才能出具一份好的临床解读报告，基因检测才能更好的服务患者和临床医生。
从大的框架讲，基因检测数据解读可分为三个步骤：原始数据→分析数据、基于数据库的解读→与患者个体表征/临床病例结合的解读。
1、读懂原始数据将测序的原始序列数据（FASTQ）去除接头及低质量序列，经BWA软件比对至GRCh37/38（NCBI版本）或hg19/hg38（UCSC版本）人类基因组参考序列上，Picard 去除重复序列，使用GATK检测SNV与Indel变异，使用ANNOVAR进行变异注释。
最后获得一份.vcf文件（图1）。
Func.refGene：变异所处参考基因的功能区（exonic，intronic，UTR3，UTR5，splicing，upstream，downstream，intergenic）（此处的exonic特指外显子编码氨基酸区，不包括外显子的UTR区）Gene.refGene：变异所处参考基因名称（如果是基因间，则是两侧的基因）GeneDetail.refGene：非外显子区处于特定转录本中的具体位置（如果是基因间，则是距离两侧的基因的距离）ExonicFunc.refGene：外显子区的变异类型（frameshift insertion，frameshiftdeletion，stopgain，stoploss，nonframeshift insertion，nonframeshiftdeletion，synonymous SNV，nonsynonymous SNV），如果这一栏是一个“.”的话，就说明该变异不在外显子区AAChange.refGene：氨基酸水平的改变（同一个基因可能具有多个转录本，氨基酸改变的位置在不同的转录本中有可能不一样）经注释后的vcf文件还会包含如下信息：CLINSIG：该变异在ClinVar数据库中的临床意义（Benign，Likely benign，Uncertain significance，Likelypathogenic，Pathogenic，Drug-response）CLINDBN：该变异所引起的疾病名称CLINACC：该变异的登记号和版本号（VariantAccession and Versions）CLINSDB：该变异所引起疾病所在数据库名称CLINSDB：该变异所引起疾病所在数据库中的IDPopFreqMax：该变异人群中的最大等位基因频率1000_All：该变异在千人基因组计划数据库中的人群等位基因频率1000_AFR：该变异在千人基因组计划数据库中非洲人群的等位基因频率1000_AMR：该变异在千人基因组计划数据库中美国人群的等位基因频率1000_EAS：该变异在千人基因组计划数据库中东亚人群的等位基因频率1000_EUR：该变异在千人基因组计划数据库中欧洲人群的等位基因频率1000_SAS：该变异在千人基因组计划数据库中南亚人群的等位基因频率Snp138：该变异在dbSNP数据库中的IDCosmic70：该变异在癌症体细胞突变数据库COSMIC中的IDESP6500siv2_ALL：该变异在美国国家心肺血液研究所的ESP6500数据库中的人群等位基因频率ESP6500siv2_AA：该变异在美国国家心肺血液研究所的ESP6500数据库中的非洲裔人群等位基因频率ESP6500siv2_EA：该变异在美国国家心肺血液研究所的ESP6500数据库中的欧洲裔人群等位基因频率ExAC_All：该变异在ExAC数据库中的人群等位基因频率ExAC_AFR：该变异在ExAC数据库中非洲人群的等位基因频率ExAC_AMR：该变异在ExAC数据库中美国人群的等位基因频率ExAC_EAS：该变异在ExAC数据库中东亚人群的等位基因频率ExAC_FIN：该变异在ExAC数据库中芬兰人群的等位基因频率ExAC_NFE：该变异在ExAC数据库中非芬兰欧洲人群的等位基因频率ExAC_OTH：该变异在ExAC数据库中除已指定人群之外的人群等位基因频率ExAC_SAS：该变异在ExAC数据库中南亚人群的等位基因频率CG46：该变异在CG46数据库中的人群等位基因频率。
肿瘤个体化用药指导基因检测
第十五页，共28页。
化疗用药指导基因检测产品
化疗药物
铂类药物
吉西他滨 紫杉醇 甲氨碟呤 培美曲赛
检测位点 XRCC1(R194W) XRCC1(R399Q)
ERCC1(C118T)
GSTP1(I105V) CDA(A79C) CDA(G208A) MDR1(C3435T) MDR1(G2677T/A) MDR1(C3435T) MTHFR(C677T) TYMS mRNA表达量
靶向药物
吉非替尼（易瑞沙） 厄洛替尼（特罗凯） 埃克替尼（凯美纳） 西妥昔单抗（爱必妥） 帕尼单抗（维克替比） 维罗菲尼、曲美替尼、达拉非尼 伊马替尼（格列卫）
克唑替尼
曲妥珠单抗（赫赛汀）
拉帕替尼（泰克泊）
靶向治疗用药指导基因检测产品
检测基因
检测位点
EGFR
EGFR 18，19，20，21号外显子
CA：A Cancer Journal for Clinicians ，Cancer Statistics in China, 2015
第二页，共28页。
癌症的治疗手段
约90%肿瘤患者在治疗过程中 会用到抗肿瘤药物
第三页，共28页。
肿瘤临床用药存在的问题
• 化疗药物在杀灭肿瘤的同时，对增生活 跃的骨髓、胃肠道黏膜、生殖细胞、毛
结果解读 SNP-R194W:疗效CT、TT>CC SNP-R399Q:疗效GG>GA>AA SNP-C118T: 疗效CC>CT>TT
化疗药物 长春新碱
环磷酰胺
检测位点 MDR1(G2677T/A) MDR1(G2677T/A) XRCC1(R399Q)