中国鲎同工酶组织器官特异性表达
中华倒刺鲃同工酶组织特异性研究
中华倒刺鲃同工酶组织特异性研究张娟;王红叶;蔡焰值;卢涛;秦晓燕【摘要】运用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术,对中华倒刺鲃的6种组织(脑、眼睛、心脏、肝脏、肾脏、肌肉)中的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酯酶(EST)进行了初步研究,并对这3种酶在各组织中的同工酶位点及酶谱表型进行了分析.结果表明,中华倒刺鲃的3种同工酶系统具有组织特异性.LDH检测到经典的5条谱带,由3个基因位点编码,C位点仅在肝脏组织中表达；MDH在5种组织(除肌肉外)中检测到3条酶带,仅为细胞质型,肌肉组织中同时表达了细胞质型和线粒体型；EST至少由5个基因位点编码,同工酶酶谱复杂,肝和肾的活性表达较强.%By using the vertical polyacrylamide gel electrophoresis, lactate dehydrogenase (LDH), malate dehydrogenase (MDH) and esterase (EST) isozymes from six tissues (brain, eye, heart, liver, kidney and muscle) of adult Spinibarbus sinensis were preliminarily studied. The loci and phenotypes of the isozymes in every tissue were also analyzed. The results showed that all isozymes presented tissue specificity. Five classical LDH bands were foundin the tissues, which were encoded by three loci, and the site C was only found in liver. The number of MDH isozyme bands was three in five tissues except muscle, which were all s-MDH. Both s-MDH and m-MDH were found in muscle. EST isozyme was encoded by five loci at least. The isozyme pattern was complicated, and the stronger activity was pigmented in the liver and kidney.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2011(050)024【总页数】5页(P5206-5210)【关键词】中华倒刺鲃;同工酶;组织特异性【作者】张娟;王红叶;蔡焰值;卢涛;秦晓燕【作者单位】华中师范大学生命科学学院,武汉 430079;湖北省水产科学研究所,武汉 430071;华中师范大学生命科学学院,武汉 430079;湖北省水产科学研究所,武汉430071;湖北省水产科学研究所,武汉 430071;秭归县渔政船检港监管理站,湖北秭归 443600;秭归县渔政船检港监管理站,湖北秭归 443600【正文语种】中文【中图分类】S965.199同工酶的概念最早是由Markert和Moller［1］在1959年提出，是指催化相同化学反应，但其性质不尽相同的一类酶，它是普遍存在的，在同一物种的不同个体或同一细胞的不同部位，如细胞膜、细胞质和线粒体等细胞器，以及生物生长发育的不同时期和不同代谢条件下，都有同工酶的存在，这类酶对细胞的发育及代谢调节都很重要。
中华鳖MyD88部分序列克隆及其在组织中的表达差异分析
收稿日期 : 2010 04 08 修回日期 : 2010 05 06 资助项目 :国家“十一五 ”科技支撑计划 (2009BADB9B09 - 5) ;杭州市重大专项资助项目 (20082332Y03) 通讯作者 :李肖梁 , Tel: 0571 - 86971193, E2mail: xlli@ zju. edu. cn
天然免疫应答是脊椎动物抗感染免疫的第一 道防 线 , 机 体 依 赖 免 疫 细 胞 中 模 式 识 别 受 体 (pattern recognition recep tors, PRR s)对病原体相关 分子模式 ( pathogen associated molecular patterns, PAMPs)的识别激发机体的天然免疫反应 [ 1] 。 Toll 样受体 ( toll2like recep tors, TLR s)作为一类 PRR s在 对相应的 PAMPs识别后 ,使得 TLR s的 TIR结构域 构象改变 ,并与胞浆内的含有 TIR结构域的接头蛋 白分子结合 ,通过信号转导级联效应从而引起效应 分子的表达 [ 2 ] 。
第 34卷第 7期 2010年 7月
水 产 学 报
JOURNAL OF F ISHER IES OF CH INA
Vol. 34, No. 7 July, 2010
文章编号 : 1000 - 0615 (2010) 07 - 1018 - 07
DO I: 10. 3724 / SP. J. 1231. 2010. 06905
荧光定量 PCR 引物设计 根据 Genbank 上 β2actin 基因序列 (Accession No. EU727174. 1) 和已 克 隆 测 序 的 中 华 鳖 M yD88 基 因 序 列 , 用 Primer Exp ressµ software version 2. 0 ( App lied B iosystem s, USA )软件设计 2对引物 (β2actin2F,β2 actin2R 和 M yD882F,M yD882R ) (表 1)并用 BLAST ( http: ∥ blast. ncbi. nlm. nih. gov /B last. cgi) 进行 特异性分析验证 。
中国鲎几丁质酶的酶学性质研究
中国鲎几丁质酶的酶学性质研究林建城;王丽英;林娟娟【摘要】以中国鲎为材料,自内脏中提取几丁质酶(EC3.2.1.14),研究其酶学性质.结果表明,中国鲎几丁质酶的最适pH为5.4,最适温度为55℃;酶在pH4.6～6.0区域较为稳定,在20～60℃内具有较好的热稳定性.以胶体几丁质为底物测得中国鲎几丁质酶的米氏常数为2.175 m g/m L,最大反应速度为1.456μmol/(mL·min).金属离子Li+、Na+、K+、Mg2+和Fe2+对几丁质酶活力无影响;Ca2+和Ba2+对酶有微弱的激活作用;Co2+、Cu2+和Fe3+在低浓度时对酶有激活作用,随浓度增大则表现为抑制作用;Ni2+、Mn2+、Al3+、Cd2+、Pb2+、Zn2+和Hg2+对酶均具有不同程度的抑制作用,以Hg2+的抑制作用最显著,10 mmol/L Hg2+会使几丁质酶失活83.0％.甲醇、乙醇、异丙醇和正丙醇对几丁质酶的抑制作用均呈浓度效应,甲醇对酶的抑制作用较强;丙酮对酶有激活作用,而二氧六环和二甲亚砜在低浓度下对酶有微弱的激活作用,随浓度升高则表现为抑制作用.说明中国鲎几丁质酶活力易受环境中酸碱度、金属离子和有机溶剂的调控.【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2019(038)005【总页数】8页(P702-709)【关键词】中国鲎;几丁质酶;酶学性质;金属离子;有机溶剂【作者】林建城;王丽英;林娟娟【作者单位】莆田学院环境与生物工程学院 ,福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室 ,福建莆田351100;莆田学院环境与生物工程学院 ,福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室 ,福建莆田351100;莆田学院环境与生物工程学院 ,福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室 ,福建莆田351100【正文语种】中文【中图分类】S917Broadway等[1]根据几丁质酶作用机理不同，认为其至少包含内切几丁质酶(EC3.2.1.14)、外切几丁质酶和具外切酶性质的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52，NAGase)等3种组分。
中华鳖同工酶的组织特异性研究
中华鳖同工酶的组织特异性研究
赵金良;蔡完其
【期刊名称】《上海水产大学学报》
【年(卷),期】1998(007)004
【摘要】本文采用聚丙烯酰胺凝胶水平电泳和激光扫描法，研究了中华鳖ＬＤＨ、ＭＤＨ、ＥＳＴ、ＳＯＤ、ＩＤＨ、α－ＧＰＤＨ、Ｇ－６－ＰＨＤ同工酶在肌肉，肝脏，肾，心，脾，精巢，卵巢等组织器官中的表达，并对其遗传位点进行了分析。
在研究的７种同工酶中，除ＭＤＨ在各组织中表型一致外，其他同工酶均有明显的组织特异性。
【总页数】6页(P311-316)
【作者】赵金良;蔡完其
【作者单位】农业部水产增养殖生态生理重点开放实验室;农业部水产增养殖生态
生理重点开放实验室
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.630.5
【相关文献】
1.姚江水系中华鳖不同组织3种同工酶的表达差异 [J], 郑小青;梅依霞;洪飞;汪财生;唐伟;钱国英;李彩燕
2.中华倒刺鲃同工酶组织特异性研究 [J], 张娟;王红叶;蔡焰值;卢涛;秦晓燕
3.半胱胺对中华鳖生长性能和非特异性免疫功能的影响研究 [J], 赵燕;代兵;李传普;陆东海;王周;陈安国
4.特异性鸡蛋抗体防治中华鳖红脖子病的初步研究 [J], 林星;黄怀英;周建武
5.中华鳖同工酶研究 [J], 杨弘;夏德全
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鲎试剂的原理
鲎试剂的原理
鲎试剂是一种常用的实验试剂，广泛应用于生物医学领域。
它的原理主要是基于鲎酶的特性，通过鲎酶的催化作用来实现对特定物质的检测和分析。
下面我们将详细介绍鲎试剂的原理及其应用。
鲎酶是一种特殊的酶类，它具有高度的特异性和灵敏性，能够与特定的底物发生反应，并产生可测定的颜色反应。
这种特性使得鲎酶成为生物医学领域中常用的检测工具。
鲎试剂通常包含鲎酶、底物、缓冲液等成分，通过将待检样品与试剂混合反应，利用鲎酶的催化作用来实现对目标物质的定量或定性分析。
鲎试剂的原理主要包括两个方面，一是鲎酶的特异性识别，二是鲎酶的催化反应。
首先，鲎酶能够特异性地识别特定的底物，与之结合形成酶底物复合物，这种特异性识别是鲎试剂能够准确检测目标物质的关键。
其次，鲎酶能够催化底物的反应，将其转化成可测定的产物，产生可见的颜色变化或荧光信号，从而实现对目标物质的定量或定性分析。
在实际应用中，鲎试剂可以用于检测生物样品中的蛋白质、核酸、酶活性等多种生物分子。
例如，鲎试剂可以用于检测血清中的
蛋白质含量，通过测定颜色反应的强度来确定蛋白质的浓度，从而
实现对生物样品的定量分析。
此外，鲎试剂还可以用于检测细胞中
的酶活性，通过测定荧光信号的强度来分析细胞的代谢活性和生物
学特性。
总之，鲎试剂是一种基于鲎酶特性的实验试剂，其原理是基于
鲎酶的特异性识别和催化作用。
通过与特定底物的反应，鲎试剂可
以实现对生物样品中目标物质的检测和分析，具有广泛的应用前景。
希望本文能够帮助您更好地理解鲎试剂的原理及其应用。
中国的鲎（tachypleustridentatus）黄色结缔组织分析
，ｒ摘要、鲎是一种大型、古老的底栖海洋节肢动物，是我国珍贵海洋动物资源之一。
它具有极其重要的科研意义和经济价值。
鲎的黄色结缔组织是鲎体内一种引人注目的组织结构，几乎充满整个机体内部，填充在其内部器官之间。
鲎黄色结缔组织属类间充质组织，具有很强分化能力。
叶本文应用细胞生物学方法和技术重点研究由黄色结缔组织分化形成的血细胞、营养细胞的特点及其发生、营养细胞降解过程的规律。
鲎血细胞发生于黄色结缔组织，但并无固定的部位；以外周和后体部的黄色结缔组织中造血组织数量多且最常见，中肠腺部位造血组织较少。
在繁殖季节，生殖腺外周的黄色结缔组织分布有大量的造血细胞群，进行活跃的造血，形成大量血细胞。
衄细胞发生过程经历以下几个阶段：血母细胞（ｈｅｍｏｃｙｔｏｐｌａｓｔ）、原始血细胞（ｐｒｏｈｅｍｏｃｙｔｅ）、浆血细胞（ｐｌａｓｍａｔｏｃｙｔｅ）和颗粒血细胞（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）。
血母细胞位于造血组织中，被基膜包围，核质比大，细胞器少。
原始血细胞胞质有所增大，含有少量的膜泡。
浆血细胞内形成许多膜泡，沉积物在其中不断生成。
颗粒血细胞胞质内容物丰富，出现大量膜囊，随着细胞发育，膜囊为沉积物所充满，逐渐形成大小不同的颗粒。
高尔基体、粗面内质网及线粒体参与颗粒的形成。
成熟的颗粒血细胞逐渐脱离造血组织，移向血窦腔隙，在血淋巴中进一步成熟。
营养细胞同样由黄色结缔组织分化形成。
鲎的营养细胞体积大，胞质内容物丰富，其内储存有大量的营养颗粒和脂肪颗粒。
细胞化学染色表明，营养颗粒内含脂类、糖类和蛋白质。
在电镜下可观察到营养细胞有一个动态的生理变化过程。
营养细胞在发育过程中，胞质体积不断增大，形成巨大的细胞，其内质网大量膜泡化，数量众多的膜泡为脂肪颗粒和营养颗粒形成提供沉积的场所。
线粒体数量众多，积极参与颗粒的形成。
成熟的营养细胞内的营养颗粒可与溶酶体融合，成为次级溶酶体，其内涵物被水解酶分解，形成大量结构各异的残余体，并释放其所储存的营养，满足机体生理活动需要。
鲎实验实验报告
一、实验目的1. 了解鲎实验的基本原理和方法；2. 掌握鲎实验的操作步骤；3. 学会观察和分析实验结果；4. 培养实验操作技能和实验报告撰写能力。
二、实验原理鲎实验是一种检测细菌内毒素的方法。
鲎是一种生活在海洋中的生物，其血液中含有一种特殊的凝固蛋白，当与细菌内毒素接触时，会迅速凝固。
通过观察鲎血液凝固的时间，可以判断细菌内毒素的存在和含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鲎血液、细菌内毒素标准品、生理盐水、注射器、试管等；2. 实验仪器：恒温箱、显微镜、计时器等。
四、实验步骤1. 准备工作：将鲎血液和细菌内毒素标准品分别放入无菌试管中，加入适量生理盐水稀释；2. 设置实验组：将稀释后的鲎血液和细菌内毒素标准品分别加入两个无菌试管中，分别标记为实验组和对照组；3. 设置对照组：将稀释后的鲎血液和生理盐水分别加入两个无菌试管中，分别标记为实验组和对照组；4. 加入细菌内毒素：在实验组和对照组的试管中分别加入适量的细菌内毒素；5. 混匀：用无菌棉签轻轻搅拌试管中的混合液，使细菌内毒素充分溶解；6. 观察和记录：将实验组和对照组的试管放入恒温箱中，观察鲎血液凝固的时间，并记录实验结果；7. 结果分析：根据实验结果，判断细菌内毒素的存在和含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：实验组中，鲎血液在加入细菌内毒素后迅速凝固，对照组中，鲎血液在加入生理盐水后无明显变化；2. 结果分析：实验结果表明，细菌内毒素能引起鲎血液凝固，从而判断细菌内毒素的存在。
根据实验结果，可以推算出细菌内毒素的含量。
六、实验总结1. 鲎实验是一种检测细菌内毒素的有效方法，具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点；2. 在实验过程中，应注意无菌操作，避免污染；3. 通过本次实验，掌握了鲎实验的操作步骤，提高了实验操作技能和实验报告撰写能力。
七、注意事项1. 实验过程中，应严格遵守无菌操作原则，避免污染；2. 实验操作时应保持冷静，避免慌乱；3. 实验结果分析时，应结合理论知识，准确判断细菌内毒素的存在和含量；4. 实验报告撰写时，应清晰、简洁、有条理地表达实验过程和结果。
紫贻贝4种同工酶的组织特异性表达研究
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［ 关键词】 中国鲎 ；同工酶 ；电泳 ；组织特异性 ［ 中图分类 号］Ｑ９ ５ ５ ；Ｑ９ ６ ５ ［ 文献标志码 ］Ａ
清液，加入两倍体积的蔗糖溶液 （ 蔗糖 ）＝４ （ ０％ ），再加入 ２ 溴酚蓝 ，即制备好 了酶提取液 ， ０ 可直接用 于 电泳或 一 ４℃低 温短期保 存备 用．
［ 收稿 日期］２０ １ ｏ ０ ９— ２一 ９ ［ 修回 日期］２ １ ０ ２ ０ ０－ １－ ０ ［ 基金项 目］ 国家科技基础条件平台建设子项 目 （０ ６ Ｋ ３ ４０ ０７ Ｋ ３ ４０ ；福建省教育厅项 目 （００ ０ ） ２０ Ｄ ． ０７ ，２０ Ｄ Ａ ０７ ） ｇ ２６２ ６ ［ 作者简介］林文燕 （９ ８ ，女 ，实验师 ，从事水环 境分析与海洋生物研究 ．通讯作 者 ：翁朝 红 （９ １ ） １６ 一） １７ 一 ， 女 ，副教授 ，从事细胞遗传学研究 ，Ｅｍ ｉ ｅｇｈｏｏｇ ｍ ｄ． ｎ － ａ ：ｗ ｎｚａｈｎ＠ｊ ｍ ｅ ｕｅ ． ｌ
已成为濒危的海洋生物．中国鲎资源的枯竭必然带来中国鲎遗传多样性的丧失 ，而遗传多样性是物种
长期生存 和保护 进化潜 力 的物质 基础 ．有关 中国鲎 的研究 ，在 ２ ０世纪初 就引起 了人们 的广泛 兴趣 … ． 国内外学者 已经在 中国鲎形态 、发育 、生态 及药 用价 值等方 面做 了大量研究 ｕ Ｊ ，而有关 中国 鲎的酶 学 研究仅 见 Ｓｌ ｄｒ ｅ ｎ ｅ 等应 用 ｌ ａ ０种等位 酶分析 美洲 鲎 的遗 传 多样 性 Ｊ ，目前 对 中 国鲎 的酶 化学 研究 未 见 任何报道 ．本文 采用垂 直 聚丙烯酰胺 凝胶 电泳技 术 ，分析 中国鲎 ６种组织器 官 中的 ７种 同工 酶的酶
Ｏ 引言
中 国鲎 （ ａｈｐｅｓｔ ｄｎａｕ ）属 于节 肢 动物 门 （ ｒ ｒｐｄ ） Ｔ ｃｙ ｌｕ ｉｅｔｔｓ ｒ Ａ ｔ ｏｏ ａ 、肢 口纲 （ ｒｓ ｍ ｔ） ｈ Ｍｅ ｔ ａ 、剑 尾 目 ｏｏ ａ
（ ｉ ｏｕａ 、鲎科 （ ｉｕｉａ） Ｘｐ ｓｒ） ｈ Ｌｍ ｌ ｅ ，是 现存肢 口纲 仅有 ４个种类 之一 ． 中国鲎 主要分 布 于 日本 的 濑户 内 ｄ 海和 九州岛北 岸 、中 国的东 南沿海 、东南 亚等 地 ¨ ２． 中国鲎是 中 国东 南沿海 特色 的海产 品 ，其 血液 ＩＪ 制品 （ 鲎试剂 ）在 医药上具 有广泛 的应用 ． 由于过度 捕捞 和海 洋污 染 ，中 国鲎在 中国沿海 即将 消失 ，
・
３ ４・ ３
集 电泳 、染色及 固定 ．
采用不连续聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳 ，于 ４℃冰箱中进行．电泳条件参照文献 ［ ８ ，乙醇脱 ７— ］ 氢酶 （ Ｄ 、山 梨 醇脱 氢 酶 （ Ｄ 、酯 酶 （ Ｓ ） Ａ Ｈ） Ｓ Ｈ） Ｅ Ｔ 、过 氧 化 氢 酶 （ Ａ ） Ｃ Ｔ 、天 冬 氨 酸转 氨 酶 （Ａ ） Ａ Ｔ 、苹果 酸脱氢 酶 （ Ｒ） 和苹果 酸 酶 （ Ｅ） 的染 色方 法参 照 Ｈａ ｓ ＭＤ Ｍ ｍ ＿ 、曾呈 奎 等 ｍ 和王
谱表型 ， 探讨其同工酶系统的遗传基础 ，为进一步进行中国鲎遗传多样性分析和资源保护提供有价值
的生化遗传 指标 和理论基 础 ．
１ 材料 与 方 法
１ １ 材 料 的采集与样 品的 制备 ．
中国鲎 （ ａｈｐｅｓｔｄｎａｕ） 集 于浙 江温州 洞头 岛海域 ，采样 时 间为 ２０ Ｔ ｃｙｌ ｉｅｔｔｓ 采 ｕ ｒ ０ ８年 ７ － ．活体 一９月 运 回后 暂养 于集 美大 学水产 养殖试 验场 ，取每个 个体 的肝胰 腺 、心脏 、肠 、鳃 、肌 肉和黄色结 缔组织 等 ６种组 织器 官 ，置 于 一 ０℃冰箱保存 备用 ．取 样 品 ０５ｇ ８ ． 加入 约 ８０ｍＬ的预冷 Ｔｉ— Ｉ ０ ｒ ＨＣ 组织 缓 冲 ｓ 液 （．１ｍｏ Ｌ Ｈ： ． ） 冰浴研磨 匀浆 ，于 ４ｏ ００ ｌ ，ｐ ７０ ／ Ｃ冷冻离 心机 中 以 １ ０ ｍｉ ２００ｒ ｎ离心 １ ｎ ／ ５ｍｉ，取 上
中国鲎 同工 酶 组 织器 官特 异性 表 达
林文燕 ，翁朝 红 ，杨 江 东 ，李伟 文 ，孙 敏 ，冯宇月１ ， ２
（ ．集美大学水产学院，福建 厦 门 ３ １２ ；２ １ ６０ １ ．福建 省高校水产科学技术 与食 品安全重点实验室，福建 厦 门 ３１２ ） ６ ０ １
［ 摘要 ］采用垂直 聚丙烯 酰胺 凝胶 电泳技术 ，分析 了中国 鲎 ６种组织 器官 （ 肝胰腺 、心脏 、肠 、鳃 、 肌 肉和黄色 结 缔 组 织 ） 的 乙 醇 脱 氢 酶 （ Ｄ 、 山梨 醇脱 氢 酶 （ Ｄ 、酯 酶 （ Ｓ ） Ａ Ｈ） Ｓ Ｈ） Ｅ Ｔ 、过 氧 化 氢 酶 （Ａ ） Ｃ Ｔ 、天冬氨酸转化酶 （ Ｔ 、苹果 酸脱 氢 酶 （ Ｈ）和苹 果酸 酶 （ Ｅ）等 ７种 同工酶 的活性 和分 从 ） ＭＤ Ｍ 布 ，并对其酶谱 的表型进行了分析．结果表明 ，中 国鲎 的同工酶 系统存在 不同程度 的组织特异性 ．乙醇脱
第ｌ ５卷
第 ５期
集美大学学报 （ 自然科学版）
Ｊｕ ａ ｏ ｍ ｉ ｎ ｅｓｙ Ｎ ｔ ａ Ｓｉ ｃ） ｏｒ ｌ ｆ ｉｅ Ｕ ｉ ｒ ｔ（ ａ ｒｌ ｃ ｎｅ ｎ Ｊ ｖ ｉ ｕ ｅ
Ｖｏ． ５ Ｎ ． １ １ ｏ ５
Ｓｐ ０ ０ ｅ ．２ １
２１ ００年 ９月
［ 文章编号］１０ ０７—７０ （０ ０ ０ ０ ３ ０ ４５ ２ １ ｝５－ ３ ３— ５