采用LCTOFMS快速分析真菌粗提物中的次级代谢产物真菌
采用LC/TOF-MS 快速分析真菌粗提物中的次级代谢产物－真菌鉴定的新方法引言从食品安全的角度考虑需要鉴定从农产品中分离出来的霉菌（真菌），因为它们可能是食品中霉菌毒素污染的潜在来源。
鉴定真菌的传统方法以经典的真菌学为基础，包括真菌在不同培养基上的培养和随后依据形态学和生长行为特征进行的分类。
然而，这种分类鉴定耗时且带有一定的主观性，并依赖于真菌学家的经验和技艺。
此外，这种分类对实际次级代谢产物谱仅能提供参考性证据，因为这些判断是以前人研究的特定种类真菌的次级代谢为基础。
这种经验方法由于同种真菌既可能产生毒素又可能不产生毒素这一事实的存在而使人更加困惑，也就是说有些真菌容易产生霉菌毒素，而另外一些与其无差异的同种真菌从遗传上就不能产生毒素。
因此，仅靠对真菌物种进行分类不能真正判断霉菌毒素的产生。
过去，直接分析真菌培养基以确定是否存在霉菌毒素必然包括“目标”分析，不可避免地假定能找到那种毒素，而LC/TOF-MS 提供了一种可能的新方法用于研究真菌产生毒素的行为。
即使从基质中有效提取出的毒素表现出较大的极性差别，TOF-MS 的特异性意味着不需要再进行任何样品纯化。
而且，也不需要进行目标分析，因为仪器能测定在液相色谱分离中检测到的任何组分分子离子的精确质量数，这些组分可以通过检索数据库中相关次级代谢产物的精确质量数得以鉴定。
本文介绍从培养真菌中提取次级代谢产物的合适条件和随后进行LC/TOF-MS 分析的条件。
方法学验证采用在各种培养基中添加黄曲霉毒素、赭曲霉素A、单端孢霉烯、玉米赤霉烯酮和腐马素毒素，从低浓度基质中提取具有良好的回收率，随后通过检索比较数据库中465 种次级代谢产物进行鉴定。
本方法已应用于从培养物收藏单位获得的一种青霉菌和6 种曲霉菌的代谢物鉴定，其次级代谢产物已与预测的毒素谱进行了比较。
实验部分所有分析工作均使用Agilent 6210 TOF-MS 与Agilent 1200 系列HPLC联用完成。
霉菌毒素和其它真菌代谢物的分离也采用HPLC 系统完成（包括真空脱气机、自动调温进样器、二元泵和DAD检测器），色谱柱为反相C18 柱（ZORBAX Eclipse XDB 100 x 2.1 mm，1.8 μm)。
TOF-MS配置了双喷雾器电喷雾源、可以连续导入内标参比标样。
仪器的扫描范围对所有样品均为m/z 100 ~ 1,000，扫描速度在9,429 transient/scan下为1 cycle/sec。
此质量范围能够涵盖两个内标参比标样产生的离子，即m/z 121.0508 和922.0097。
进样体积5 μL。
HPLC 分析使用的流动相为乙腈和2 mM的乙酸铵的1% 甲酸水溶液，流速为0.3 mL/min。
梯度洗脱从15% 乙腈开始经20 分钟增加到100% 乙腈。
色谱柱采用100% 乙腈冲洗5 min，每次进样前平衡5 min。
紫外光谱采用二极管阵列检测器获得，每0.4秒从200 nm扫描到700 nm，分辨率为4 nm。
TOF-MS 的优化条件列于表1。
采集的数据采用具有精确质量数应用功能的Analyst-QS 软件处理。
465 种霉菌毒素和其他真菌代谢产物数据库根据参考文献数据采用Excel 创建[1,2]，这样创建的文件容易用于Agilent 软件的检索功能。
真菌提取已鉴定的A. paraciticus (NRRL 2999)分离菌来自USDA菌种保藏机构，分离菌A.flavus(200198)、A. ochraceus (200700)、A. oryzae (200828)、A. niger (200807)、A. fumigatus (200418)和P. citrinum (501862)来自TÜBITAK Mamara 研究中心的菌种保藏部门。
将真菌接种到分别装有麦芽提取物琼脂(MEA)、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、和酵母提取物蔗糖琼脂(YES)培养基的陪替氏培养皿中。
在25 °C 下培养7 至14 天，可以在培养基表面观察到典型的真菌菌落大量繁殖生长。
取样采用软木塞钻孔器垂直切下两个直径6 mm包含真菌菌丝体和其下培养基的塞状样品。
将塞状样品转移至5 mL的一次性旋盖瓶中。
提取条件在文献方法[3,4]的基础上进行改进。
一个样品依次采用2 mL含1%甲酸的乙酸乙酯和2 mL异丙醇提取两次；另一个样品依次采用2 mL含1%甲酸的乙酸乙酯和2 mL乙腈提取两次，随后旋涡混合1 min 并进行总计30 min 的超声振荡。
提取物过滤后用氮气吹干。
两个样品的残余物溶于1 mL甲醇，超声振荡10 min，经0.2 μL 一次性过滤器过滤后用于HPLC分析。
结果与讨论LC/TOF-MS 条件优化最重要的仪器参数，包括毛细管电压、喷雾器压力、干燥气、气体温度和锥孔体电压最初采用自动调谐达到最大灵敏度。
然而，碰撞电压也需要优化以提供最多的结构信息，因此常常需要采用折衷方案。
本文在不改变其他条件的前提下，通过将碰撞电压由55 V逐步增大到250 V 来进行优化。
确定能够产生裂解的最小碰撞电压为150 V。
整个过程的验证采用20 种商品化标物（黄曲霉毒素B1、B2、G1 和G2、黄曲霉毒素M1、赭曲霉素A、玉米赤霉烯酮、4-脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、蛇形菌素、镰刀菌酮X、新茄病镰刀菌烯醇、伏马菌素B1、B2 和B3、雪腐镰刀菌烯醇、HT-2 毒素、T-2 毒素和曲酸）和内标物（苯甲酮）混合物。
采用ESI 正离子模式，每个成分均得到质子化分子离子的精确质量数、保留时间和紫外光谱。
真菌代谢物精确质量数数据库的构建创建一个Excel 电子数据表，包含465 种霉菌毒素和真菌代谢物中每种成分的精确质量数及相应的实验分子式[1,2]。
理论上化合物的单一同位素精确质量数根据其分子式使用Excel 电子数据表（Agilent TOF 自带的，称为“分子式数据库生成器”）计算得出并转换成csv (comma-separated values)格式供Agilent TOF 数据自动分析软件使用。
每次样品测定完后LC/TOF-MS仪器自动检索csv 文件并生成报告给出从数据库中检索到的化合物。
数据分析方法是用数据分析编辑器创建的。
编辑器允许选择加合物（例如，与正离子H+,NH4+, Na+ 等）和中性丢失进行自动检索，也可以进行质量精度和保留时间限度、报告选项和其它检索与测定标准。
通常不需要保留时间，除非明确其可增加鉴定的可信度。
我们使用添加了20 种霉菌毒素混合标物的各种培养基作为样品测定保留时间。
反复进样10 次以确定这些成分保留时间的重现性。
鉴定采用的标准需满足如下要求：M+1离子精确质量数的质量精度为± 5 ppm；保留时间匹配为± 0.2 min（有标样可用）；最小峰高计数，即化合物的阈值为1000 计数（或信噪比为~10:1，或0.06% 相对量）；如果存在预测的成分，则应与预测的加合物和中性碎片丢失有良好的一致性（在± 5 ppm以内）。
方法验证和分析根据上述测定标准，当在培养基中添加25-100 μg/kg浓度的标物时所有20 种标物均能正确鉴定，分析按上述要求进行。
方法用于测定已鉴定真菌的代谢物上述技术已应用于各种培养基培养的已鉴定真菌代谢物的测定，而非只是简单地通过添加培养基进行理论上的考察。
一种青霉菌种和6 种曲霉菌种在三种不同的培养基上进行培养后，使用上述简单的溶剂萃取法进行提取，粗提物直接采用LC/TOF-MS 进行分析。
图1 所示的是A. flavus 提取物的总离子流色谱图，结果表明检测到大约20 种成分。
在8.9 min 的色谱峰进行数据库检索时采用测定的精确质量m/z313.0712。
按M+H+离子推算与黄曲霉毒素B1 一致，与数据库中黄曲霉毒素B1 的精确质量数相比，质量匹配仅差0.2 ppm。
软件使用分子特征(MFE)算法去掉所有非真实离子峰并将真实离子分组组成“分子特征”。
这些分子特征能够根据他们相互间的关系进行鉴定并推导其加合物、二聚体、三聚体及其同位素（表示为+1、+2 等）等。
将保留时间为8.9 min 的色谱峰鉴定为黄曲霉毒素B1 所依据的分子特征和各离子测定的精确质量数总结于表2。
选择一个分子特征，软件将计算其可能的实验分子式并给出预测的分子式相应的同位素组成的得分；结果列于表2。
得分为100 的分子式就是黄曲霉毒素B1。
随后此分子式被自动转化，采用NIST、ChemIndex 和Medline 进行网络连接搜索。
如图2 所示，在NIST 中的检索结果给出黄曲霉毒素B1 的分子式和结构。
作为A. flavus 的次级代谢产物，除了鉴定黄曲霉毒素B1，也发现该真菌产生了黄曲霉毒素B2、B3 和G1，这与该真菌已知的代谢行为一致。
表3 给出5 ppm质量精度内数据库检索的结果，并将一些相应于其他已知化合物的精确质量数一起作为筛选结果表示出来。
曲酸和甲氧基柄曲霉素匹配好，两者均为已知的真菌代谢产物，也可以预期能从A. flavus 中找到。
匹配好的还有肉桂酸，但不是已知的代谢物。
当将该新方法应用于从菌种保藏机构获得且在三种不同基质中培养的总计7 种不同真菌的初步研究时，得到了表4 所示的结果。
在大多数情况下找到了预测的代谢产物，这增强了方法学的可信度。
一些初步的研究结果表明没有检测到预测的霉菌毒素而发现了未预料到的代谢产物。
识别错培养物的可能性或检测到以前未见报道的代谢物的可能性是存在的。
虽然这说明了该方法的能力，但这些研究结果需要进一步更深入的研究。
展望将LC/TOF-MS 的精确质量数测定与数据库检索结合使用是新的通用鉴定技术中的一个强有力的工具，能够用于目标物的分析。
在真菌代谢物领域，已展现其通过一系列代谢物筛选真菌的潜力，目前尚无其它专门方法可用。
本文提供了一种新的可能的用于以代谢物产生为基础的真菌分类和用于以食品安全为目的的农产品中霉菌毒素的快速筛选的方法。
尽管LC/TOFMS能给出一些判断，但在检测到文献未报道的代谢产物时需要采用液相色谱/四级杆-飞行时间串联质谱联用系统(LC/QTOF-MS)进一步进行结构推导。
结论本文建立了一种简单快速的LC/TOF-MS 方法用于测定各种培养条件下真菌的次级代谢产物谱。
该方法通过在固体培养物中添加典型代谢物进行验证，表明具有良好的回收率且通过检索对比代谢物数据库中精确质量数进行鉴定。
一系列来自菌种保藏机构的已鉴定真菌的研究结果表明预测的毒素能够很容易地被检测出来。
MALDI-TOF-MS技术在临床分离丝状真菌鉴定中的应用研究
MALDI-TOF-MS技术在临床分离丝状真菌鉴定中的应用研究谢春霞;孙玉娟;马艳辉;赵自云【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2022(43)8【摘要】目的探究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术在临床分离丝状真菌鉴定中的应用。
方法收集2019年1-12月该院临床标本中分离培养的230株常见丝状真菌,行MALDI-TOF-MS技术鉴定,并与传统形态学及DNA基因测序结果进行综合对比,评价MALDI-TOF-MS技术在丝状真菌鉴定中的能力。
结果临床分离230株丝状真菌包括曲霉菌属183株(79.6%)、青霉菌属23株(10.0%)、镰刀菌属13株(5.7%)、石膏样小孢子菌6株(2.6%)、根毛霉3株(1.3%)、米根霉2株(0.9%);主要来源于痰液及肺泡灌洗液,其次为角膜分泌物和耳道分泌物。
传统形态学鉴定到种水平的准确率为69.1%,主要为烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉等常见曲霉菌,其余均鉴定到属水平。
DNA基因测序分析鉴定到种水平的准确率为100.0%。
MALDI-TOF-MS技术鉴定丝状真菌到种水平的准确率为88.7%,主要为曲霉菌属和镰刀菌属;其鉴定丝状真菌曲霉菌属中烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉及镰刀菌属到种水平的准确率为100.0%,与DNA测序方法结果符合一致。
以DNA测序结果为准,MALDI-TOF-MS技术鉴定丝状真菌到种水平的准确率显著高于传统形态学鉴定(χ^(2)=26.455,P<0.001)。
结论MALDI-TOF-MS技术鉴定临床丝状真菌符合率高,快速、准确且操作便捷,可作为临床真菌实验室鉴定的有效补充手段,为真菌鉴定提供了新的选择。
【总页数】6页(P950-955)【作者】谢春霞;孙玉娟;马艳辉;赵自云【作者单位】青岛市中心医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.5【相关文献】1.MALDI-TOF-MS鉴定丝状真菌研究进展2.MALDI-TOF-MS技术快速鉴定丝状真菌的临床评价3.MALDI-TOF-MS技术在酵母样真菌鉴定中的临床应用评价4.河北地区临床实验室丝状真菌分离鉴定情况分析5.MALDI-TOF MS自建数据库对丝状真菌临床分离株鉴定能力的评估因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黑曲霉代谢组学研究进展
黑曲霉代谢组学研究进展靳梦琦;李军;朱凤妹;刘畅【摘要】代谢组学作为系统生物学的重要研究领域,近年来黑曲霉的代谢组学研究也越来越受到人们的关注.随着研究技术的不断发展,黑曲霉的基因组学、转录组学、蛋白质组学的研究数据不断增多,对于黑曲霉代谢组学的研究方法也在逐渐完善.以黑曲霉代谢组学为例,对代谢组学研究中有关样品制备、分析鉴定和数据分析等方法进行了概述,并对黑曲霉代谢组学研究运用实例进行了介绍,最后对黑曲霉代谢组学研究中潜在的问题和未来的发展趋势进行了讨论.【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2017(000)004【总页数】5页(P1-4,37)【关键词】黑曲霉;代谢组学;研究进展【作者】靳梦琦;李军;朱凤妹;刘畅【作者单位】河北科技师范学院食品科技学院,河北昌黎066600;河北省果品加工工程技术研究中心,河北昌黎066600;河北科技师范学院食品科技学院,河北昌黎066600;河北省果品加工工程技术研究中心,河北昌黎066600;河北科技师范学院食品科技学院,河北昌黎066600;河北省果品加工工程技术研究中心,河北昌黎066600;河北科技师范学院食品科技学院,河北昌黎066600;河北省果品加工工程技术研究中心,河北昌黎066600【正文语种】中文【中图分类】TS201.2+5黑曲霉是一种广泛存在于自然界中的丝状子囊真菌，属于真核生物。
黑曲霉的分生孢子头呈黑褐色放射状，顶囊呈球形，双层小梗，多见于粮食、植物性产品以及土壤中，生长的适宜pH值为3～7。
黑曲霉是重要的工业发酵菌种，在有机酸发酵和工业酶制剂方面有着广泛的应用，同时在生物技术开展过程中发挥了很大的作用，很多产品来自于丝状真菌的初级和次级代谢产物。
由于美国食品和药物管理局（FDA）已经认定许多来自黑曲霉的产物是安全的，所以黑曲霉被广泛用于食品级产物的生产过程中。
代谢组学是指对生物体内一切代谢物进行定性定量分析，它是关于生物体系内源代谢物质种类、数量及其变动规律的科学，研究生物整体、系统或器官的内源性代谢物质及其与内在或外在因素的相互作用，并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系，其在系统生物学研究中占据着极其重要的地位。
两株红树内生真菌混合发酵液提取物抗植物病原菌活性及LC—MS研究
［ 章￣ － ］０ ７ １６ （０源自０ １—０ ７０ 文 Ｎ １ ０ ・８ ５２ １） ２０ ０ —３ －
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２１ ０ ０年 第 ｌ ２期 第 ３ 卷 总 第 ２ ２期 ７ １
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两株 红树 内生真 菌 混合 发 酵 液 提 取 物 抗 植 物病 原 茵
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丁唯 嘉 ， 张杰 ，黎 荣 棠 ，李 春 远
（ 南农 业大 学 理 学 院 生物 材料 研 究所 ，广东 广州 ５ ４ ） 华 ６ ２ １ ０
海 洋 微 生 物 已 成为 寻找 新 药 先导 化 合 物 的新 源 泉 …。红树 林 独 特 的 生理 和 生态 使 其 成 为 了海 洋微 生 物 （ 别 是 海 洋 真 菌 ） 特 丰 富 的聚 集 地 ， 红 树 林 内生 真 菌 的研 究表 明 ，从 中有 可 能 找 对 到 新 的 生物 控 制 剂 和 药 物 。 内 生真 菌 Ｋ ８ Ｅ ３ 别 采 集 自我 ３和 ３分 国湛 江 湿 地 红 树 植 物 秋 茄 叶 片 及麒 麟 菜枝 干 ， 们 曾 系统 研 究 我 过 两 株 真 菌 的 代 谢 产物 』 。由于 两 株 菌 在相 同培 养条 件 （ ＹＴ Ｇ 培 养 基 ，室 温 ） 均 生长 良好 ，为 寻找 更 多 的 有 活 性 化 合 物 ， 下 文 章 将 混 合 发 酵技 术 引 入 到 两株 茵 的培 养 中 ， 别 测 试 了两 株 分 菌 单 独 发 酵 及 混 合 发 酵 的 乙 酸 乙酯 和 正 丁 醇 提 取 物 对 小 麦 赤
LC-MS在真菌毒素检测中的研究进展
分析检测LC-MS在真菌毒素检测中的研究进展张婉梨，叶靖怡（广东省食品检验所，广东广州 510435）摘 要：液相色谱串联质谱法是色谱分离结合质谱进行检测的方法，具有选择性好、灵敏度高等优势。
本文列举了近几年国内外液质联用技术在食品检测领域的主要应用，通过对这些检测方法和实验结果的阐述和分析，展望了液质联用技术在真菌毒素检测中的应用前景，为食品检测领域中的快速、便捷的多毒素检测发展提供参考。
关键词：真菌毒素；液质联用；食品检测；研究进展真菌毒素（Mycotoxin）是真菌在适宜条件下产生的次生代谢物[1]，真菌毒素可能会在种植、收获、运输、储存过程中污染粮食、蔬果和饲料，通过食物链危害禽畜生产安全以及人类健康。
目前已发现的真菌毒素有400多种，而我国食品安全重点关注具有强毒性和高频率污染等特点的真菌毒素。
从“十五”到“十二五”规划期间，国家越来越重视真菌毒素的污染问题，随着检测标准制修订工作的推进，相关检测技术的研究也同步开展与深入[2]。
液相色谱串联质谱法具有适用性强、灵敏度高、选择性好等有点，被广泛应用于食品检测领域。
本文对液相色谱串联质谱法在真菌毒素检测的应用进行收集和整理，按照重点关注的4类真菌毒素进行分类汇总，直观地了解近年该领域的研究进展与应用，为进一步开展真菌毒素检测研究提供便利。
1 液相色谱串联质谱法液相色谱串联质谱法是将液相色谱与质谱结合用于检测的手段，兼具了液相高分离性能、高灵敏度的特点和质谱仪结构解析及组分鉴定能力强等优势，通过前处理和色谱分离实现去除样品中的杂质，质谱提供分子结构信息[3]。
液相色谱串联质谱法成为检测领域中灵敏、高效的手段，被广泛应用在食品中毒素及其代谢物的定性确证和定量分析中。
2 LC-MS在真菌毒素检测中的应用在实际应用中，食品中常见的真菌毒素主要包括黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）、呕吐毒素（脱氧雪腐镰刀菌烯醇，Deoxynicalenol，DON）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）、赭曲霉素（Ochracin，OTA）等。
MALDI-TOF-MS技术快速鉴定丝状真菌的临床评价
MALDI-TOF-MS技术快速鉴定丝状真菌的临床评价吴友伟;石红;刘万静;答嵘【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2017(014)021【摘要】目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术在丝状真菌快速鉴定中的临床应用价值.方法对西安交通大学第一附属医院2015年3月至2017年1月分离自临床的丝状真菌进行聚合酶链式反应(PCR)测序鉴定与MALDI-TOF-MS鉴定,同时回顾形态学方法鉴定结果 ,对丝状真菌菌种分布、标本来源进行分析,采用Kappa值一致性评价方法对质谱鉴定与形态学方法鉴定结果进行统计分析.结果本研究共包含分离自临床的丝状真菌102株,非重复分离株83株.烟曲霉50株(60.24%),黄曲霉26株(31.33%).标本来源主要为呼吸道标本,其中痰液68株(81.93%),支气管灌洗液11株(13.25%).MALDI-TOF-MS技术与形态学方法鉴定结果比对,Kappa值为0.1410.结论 MALDI-TOF-MS技术在丝状真菌鉴定正确性与时效性优于形态学方法.%Objective By comparing the identification results of clinical strains of filamentous fungi using MALDI-TOF-MS and morphological identification ,explore the clinical application value of MALDI-TOF-MS in the rapid identification of filamentous fun-gi .Methods The st udy was conducted in the First Affiliated Hospital of Xi′an Jiaotong University between March 2015 and Janu-ary 2017 .Eighty-three clinical strains of filamentous fungi were identified using PCR and sequencing as well as the MALDI-TOF-MS .Morphological identification results was reviewed in LIS ;species distribution and specimen source of filamentousfungi were an-alyzed .The consistent of mass spectrometry and morphological identification were appraised with Kappavalue consistent evaluation method .Results This study enrolled 102 strains of filamentous fungi ,including 83 non-repeated strains .Aspergillus fumigates was the most common strains ,including 50 strains(60 .24% ) ,followed by Aspergillus flavus of 26 strains(31 .33% ) .Specimen source were mainly respiratory specimens ,including sputum of 68 strains(81 .93% ) and bronchial lavage of 11 strains(13 .25% ) .The re-sults of MALDI-TOF-MS and morphology method were appraised and the Kappavalue was0 .141 .Conclusion MALDI-TOF-MS was a rapid detection method and was better in accuracy of identification of filamentous fungi than morphological method .【总页数】3页(P3155-3156,3159)【作者】吴友伟;石红;刘万静;答嵘【作者单位】西安交通大学第一附属医院检验科 ,西安710061;西安交通大学第三附属医院消化内二科 ,西安710068;西安交通大学第一附属医院检验科 ,西安710061;西安交通大学第一附属医院检验科 ,西安710061;西安交通大学第一附属医院检验科 ,西安710061【正文语种】中文【相关文献】1.MALDI-TOF-MS鉴定丝状真菌研究进展 [J], 武静2.MALDI-TOF-MS技术快速鉴定临床酵母样真菌的应用评价 [J], 梁铮;柏彩英;罗娅莎;张文;蓝锴;李苗苗;周强3.丝状真菌的快速鉴定及药敏试验 [J], 彭阳;许超;王玉月;何彩珍;许昕;毛易捷;史伟峰4.质谱技术快速鉴定临床分离丝状真菌的应用 [J], 曹敬荣;王岩;谢威;李文军;陈典典;段园园;刘云屹;闵嵘;王培昌5.MALDI-TOF MS对临床侵袭性丝状真菌的快速鉴定技术的研究 [J], 张景;姜斌;彭娜;欧阳鹏文;徐文;宁兴旺;刘琼;谢良伊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
MALDI-TOF-MS在病原微生物鉴定中的研究进展
MALDI-TOF-MS在病原微生物鉴定中的研究进展陈信忠;龚艳清;郭书林【摘要】基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF-MS)是鉴定多种致病性细菌的快速、可靠的方法,具有较好的稳定性和可重复性,在快速和准确性方面的总体表现明显好于传统的细菌生化鉴定方法.适合于一些致病菌的快速、高通量的检测和鉴定.综述MALDI-TOF-MS技术在普通病原菌、多血清型病原菌、非发酵性细菌,以及植物病原菌等病原微生物鉴定方面的最新研究进展.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】6页(P43-48)【关键词】基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS);微生物;鉴定;进展【作者】陈信忠;龚艳清;郭书林【作者单位】厦门出入境检验检疫局,厦门361026;厦门出入境检验检疫局,厦门361026;厦门出入境检验检疫局,厦门361026【正文语种】中文基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrixassisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）技术是近年来发展起来的一种软电离新型有机质谱，通过引入基质分子，使待测分子不产生碎片，解决了非挥发性和热不稳定性生物大分子解吸离子化的问题［1］。
2002年，诺贝尔化学奖获得者美国科学家约翰·芬恩、日本科学家田中耕一和瑞士科学家库尔特·维特里希发明了对生物大分子进行识别和结构分析的方法。
芬恩和田中开发出了对生物大分子进行质谱分析的“软解吸附作用电离法”，维特里希则开发出了用来确定溶液中生物大分子三维结构的核磁共振技术［2］。
这些研究成果已成为检测和鉴定多肽、蛋白质的强有力工具，被广泛应用于生物技术和制药企业的药物开发、化学物质和生物病原体的监测等。
MALDITOF-MS具有灵敏度高、准确度高、分辨率高、图谱简明、质量范围广及速度快等特点，在测定生物大分子和合成高聚物应用方面有特殊的优越性。
《三株植物内生真菌次级代谢产物及其生物活性研究》
《三株植物内生真菌次级代谢产物及其生物活性研究》一、引言植物内生真菌是生态系统中不可或缺的组成部分，它们与宿主植物之间形成了复杂的共生关系。
近年来，随着对植物内生真菌的深入研究，越来越多的次级代谢产物被发现并展现出独特的生物活性。
本文将针对三株植物内生真菌的次级代谢产物及其生物活性进行详细研究，旨在为相关领域的研究提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料本研究选取了三株具有代表性的植物内生真菌，分别来自不同地区和不同种类的植物。
这些真菌经过分离、纯化后，用于后续的实验研究。
2. 方法（1）次级代谢产物的提取与分离：采用适当的溶剂对内生真菌进行提取，通过柱层析、薄层扫描等技术分离出次级代谢产物。
（2）生物活性检测：通过体外实验和体内实验，检测次级代谢产物的生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗氧化等。
（3）结构鉴定：利用现代分析技术，如核磁共振、质谱等，对次级代谢产物的结构进行鉴定。
三、实验结果1. 次级代谢产物的提取与分离结果通过适当的溶剂提取和柱层析、薄层扫描等技术，成功分离出三株内生真菌的次级代谢产物。
这些产物在紫外灯下呈现不同的荧光特性，表明其化学结构具有多样性。
2. 生物活性检测结果（1）抗菌活性：三株内生真菌的次级代谢产物均表现出不同程度的抗菌活性，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用。
其中，某株真菌的代谢产物对某种病原菌的抑制效果尤为显著。
（2）抗肿瘤活性：通过体外实验，发现某株内生真菌的次级代谢产物具有显著的抗肿瘤活性，能够抑制肿瘤细胞的生长。
这一结果为抗肿瘤药物的研究提供了新的思路。
（3）抗氧化活性：三株内生真菌的次级代谢产物均具有一定的抗氧化活性，能够清除自由基，减轻氧化应激对机体的损伤。
3. 结构鉴定结果通过现代分析技术，成功鉴定了三株内生真菌次级代谢产物的化学结构。
这些产物包括多种酮类、酚类、萜类等化合物，具有不同的生物活性。
四、讨论本研究发现的三株植物内生真菌的次级代谢产物具有丰富的生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗氧化等。
2022北京海淀区高二下学期期末生物试题和答案
10. 下列关于生物学概念的包含关系及概念间交叉内容的图示，不．正．确．的．是．（． ）．
A.
B.
C.
D.
11. 下列关于高中生物学实验的叙述，正确的是（ ） A. 提取绿叶中光合色素时，加入碳酸钙以帮助迅速、充分研磨 B. 观察洋葱根尖制作的临时装片，仅部分细胞中可观察到染色体 C. 培养离体菊花组织，再分化使细胞形成不定形 薄壁组织团块
C. 反对利用转基因技术研制病菌、病毒类生物武器 D. 与传统作物的味道、色彩不相同的产品都不安全
9. 下列关于四种有机小分子的叙述，正确的是（ ）
①葡萄糖
②核苷酸
③氨基酸
④腺嘌呤
A. 都是含 N 和 P 元素的物质
B. 都存在于真核和原核细胞中
C. 都可以缩合成生物大分子
D. 都是细胞内的主要能源物质
2022 北京海淀高二（下）期末
生物
.1. 某同学尝试利用苹果发酵制作苹果醋，具体流程如下图。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 过程①②的发酵菌种均有细胞核 C 过程①②均需保证无菌、无氧条件
B. 过程①②需要保持相同的发酵温度 D. 过程①需要排气，②需要提供氧气
2. 饮用被细菌污染的水后，细菌在消化道内会繁殖并产生毒素，引起急性肠胃炎。某同学利用图 1 所示方
A. 过程①需要调控细胞分裂素和生长素的比例 B. 过程①②每天都需要在光照条件下进行 C. 过程②③需要转接到生根培养基上培养 D. 过程①②③体现出红豆杉细胞具有全能性 4. 下列关于 DNA 粗提取与鉴定实验的叙述，不．正．确．的．是．（． ）． A. 可选择香蕉、菜花、猪血等新鲜材料提取 DNA B. 加入预冷的酒精溶液后析出的丝状物是 DNA C. 提取的 DNA 可溶解在 2 mol/L 的 NaCl 溶液中
一株红树内生真菌Penicillium sp.(ZZF29#)次级代谢产物的分离与鉴定
（广东 医学 院药学 院 。
魏美 燕。 李 志华。 佘 志刚 林永成
东莞 ５３ ０ ；中山大学化 学与化学工程学院 ２ ８ ８ 广州 ５０ ７ ） １２５
摘
要 研究 了一株药用红树 内生真 菌 Ｐ ｎｃ ｌ ｍ ｓ． Ｚ Ｆ ９ ） ｅｉｌｕ ｐ （ Ｚ ２ ＃ 的次级代 谢产物 。用硅 胶柱层析 、 ｉｉ 制备 薄层
第２ ９卷 第 ６期
２１ ０ ２年 ６月
应 用 化 学
Ｃ Ｎ ＥＪ ＨＩ ＥＳ ０ＵＲＮＡＬ ＯＦ ＡＰ Ｌ ＥＤ ＣＨＥＭＩ ＴＲ Ｐ Ｉ Ｓ Ｙ
Ｖ １２ ｓ． ｏ ． ９ Ｉｓ ６ Ｊ ｎ ０ ２ ｕ ｅ２ １
一
株 红 树 内生 真 菌 Ｐ ｎｃｌｕ ｓ ． Ｚ Ｆ ９ ） ｅｉｉｉｍ ｐ （ Ｚ ２ ＃ ｌ 次 级 代 谢 产 物 的分 离 与鉴 定
发酵液的乙酸乙酯萃取相经硅胶柱层析、 制备薄层层析和重结晶法分离， 获得 ８ 种单体化合物（ｃｅ ｅ１ 。 Ｓｈｍ ） 通 过 波谱解 析 及文 献对 照 ， 确定 结构 为环 （ 丙一 ） 肽 （ ） 环 （ 丙 － ） 肽 （ ） 环 （ 苯 丙 二 １ 、 苯 甘 二 ２ 、 苯丙 一 苯丙 ） 二
文献 数据 基 本 吻合 ， 确定 化合 物 １为环 （ 丙一 ） 苯 丙 二肽 。
２ １－ － 收稿 ， １ － － 修 回 ０ ｌ ９２ ０ ８ ２ ２ ３６ ０ ０ ０ 湛 江市科 技攻关计划项 目（ ０９ ３ ０ ０ １ ； ２０ Ｃ １６ １ ） 广东医学院面上基金资助项 目（ ２ １０ ２ Ｍ ０ ００ ） 通 讯联 系人 ： 李尚德 ， 副教授 ； ｅ／ ：７ ９ ８ ６ ６ ；Ｅｍａ ：ｓａｇ ｅ ｄ ｃ ｅｕ ｃ ； Ｔ ＬＦ ０ ６ ￣２ ９ ５ ７ ． ｉ ｌｈｎ ｄ＠ｇ ｍ ．ｄ ．ｎ 研究方 向： ｌｉ 天然产物化学
北细辛内生真菌的分离鉴定及代谢产物的生物活性
北细辛内生真菌的分离鉴定及代谢产物的生物活性包丽霞1,殷 瑜2,杨 天2,杨和行1,钱秀萍1*(1.上海交通大学药学院,上海 200240;2.上海来益生物药物研发中心,上海 201203)摘 要 采用表面消毒法分别从3种北细辛中分离获得10株形态特征不同的优势内生真菌,经形态学和18S rDNA I T S分子分类学分析鉴定为小丛壳属(G lo m erella sp.)、叶点霉属(Phyllosticta sp.)、柄孢壳菌属(P o dosp ora sp.)、刺盘孢属(Colletotrichu m sp.)和镰孢属(Fusariu m sp.)。
对北细辛优势内生真菌的发酵产物进行体外抗肿瘤和抗菌活性检测,结果表明:除菌株E3、E4和E10外,其余菌株均有不同程度的抗肿瘤和抗菌活性;镰孢属(Fu sari um sp.)菌株E9对A549、M DA M B 231和PAN C 1肿瘤细胞抑制率达75%以上;小丛壳属(G lo m erell a sp.)菌株E1和叶点霉属(Phy llostict a sp.)菌株E2靶向FabI的抗菌活性较强,抑制率达59%。
关键词 北细辛;内生真菌;分离;抗肿瘤活性;抗菌活性中图分类号 Q939.5 文献标识码 A 文章编号 1005-7021(2010)05-0001-06Isol ation,Identification and M etabolite B ioactivity of Endophytic Fungi fro mA saru m heterotro poi des var.m andshuri cu m.BAO Li x ia1,Y IN Yu2,YANG T ian2,YANG H e x i n g1,Q IAN X iu ping1(1.S ch.o f Pharm.,Shangha i Jiaot ong Un i.,Shangha i200240;2.ShanghaiH ealth Creation C tr.for B iophar m.R&D,Shangha i201203)A bstrac t 10do m i nant endophy tic f unga l strains o f different character i sti cs mo rpho l og i ca lly w ere i solated from threek i nds o f A saru m heterotrop oi d es by t he surface sterilized m ethod,and they w ere i dentified as G lo m erella sp.,Phyllos ticta sp.,Podo spora sp.,Co lletotr ichu m sp.and Fusar i um sp.by m orphology,18S rDNA i nte rna l transcri bed spacer (ITS)m olecu lar taxolog i ca l ana l yses.T he antitu m or and anti bacter i a l acti v iti es of t he ir m etabo lites of t hese predo m i nant endophy ti c f ung iw ere detected in vitro.T he resu lts i ndicated t hat a ll of the endophytic f ung i ex cept the stra i ns o f E3,E4and E10show ed the antit umo r acti v ities and anti bacter i a l activ iti es t o d ifferent deg rees.The i nh i bition rates o f t he m etabo lites of F usariu m sp.E9w ere over75%on t u m o r cells o f A549,M DA and PAN C1.T he m etabo lites o f Glom erella sp.E1and Phy llo sticta sp.E2show ed strong i nh i b iti on e ffect targeti ng FabI and the i nh i b iti on rate was 59%.K eywords A saru m hetero tropo i des;endophytic fung;i i so lati on;antitu m or acti v ities;anti bacter i a l acti v ities细辛为马兜铃科细辛属药用植物,应用历史悠久,功效显著,史载于 神农本草。