堆型艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究
211026737_中药防治鸡柔嫩艾美尔球虫病的研究进展
动物生产中药防治鸡柔嫩艾美尔球虫病的研究进展丁小鹏（北票市动物疫病预防控制中心，辽宁 北票 122100）柔嫩艾美尔球虫病是鸡球虫病的一种，其球虫卵囊毒力最强，球虫寄生于鸡盲肠内，是鸡类养殖中发病率和死亡率极高的一种疾病。
目前，预防与治疗鸡柔嫩艾美尔球虫病主要依靠抗生素与化学制剂，其在鸡肉中的药物残留，及抗药虫株的出现，备受养殖户的关注。
我国中草药资源较为丰富，根据鸡柔嫩艾美尔球虫病的临床特征，结合我国中医药理论进行该病的预防与治疗，为中药有效防治鸡柔嫩艾美尔球虫病提供参考。
1 临床表现柔嫩艾美耳球虫感染鸡之后，表现为精神萎靡、生长迟缓、腹泻、盲肠有出血症状。
病鸡畏寒扎堆，口渴喜饮，鸡冠发白，衰竭而亡。
柔嫩艾美耳球虫寄生于鸡肠内，并迅速繁殖，造成上皮细胞受损，鸡肠黏膜屏障损伤严重，影响营养物质的吸收，消化功能紊乱等症状。
该病对雏鸡危害最为严重，易引发雏鸡大量死亡。
即使治愈后，仍表现为生长受阻，并对成年鸡平均日增重与产蛋带来负面影响。
2 致病机理2.1 发病机制柔嫩艾美耳球虫侵入鸡体后，吸收鸡体内的营养物质大量繁殖，并对鸡体造成机械损伤与化学损伤。
鸡体应对损伤，做出细胞免疫反应与体液免疫反应两种生物化学反应。
柔嫩艾美耳球虫的卵囊侵入鸡体后，卵囊在盲肠上皮细胞内生殖，通过裂殖生殖的形式进行无性生殖，雌雄细胞在两性细胞融合后，进行配子生殖。
合子形成卵囊后，逐步发育成孢子。
子孢子随禽类粪便排出，再通过传播媒介侵入新的宿主，如此循环往复。
通常情况下，柔嫩艾美耳球虫感染5天左右为该病的潜伏期，卵囊排出量在感染7天左右达到最大值，当禽类盲肠上皮细胞内的卵囊增殖到一定数量是，上皮细胞受损严重，染病禽类便会发病。
2.2 致病因素第一，球虫因素。
柔嫩艾美耳球虫是已发现的鸡球虫致病力最强的种类。
球虫致病力越强，鸡体感染球虫卵囊数量越多。
研究者发现，随卵囊量的增多，球虫间会引发“拥挤效应”，具体表现为，当卵囊繁殖达到一定规模后，卵囊排出量反而减少，究其原因为，球虫在繁殖过程中不断产生干扰素，卵囊数量越多，干扰素越多。
鸡球虫耐药性的研究进展
鸡球虫耐药性的研究进展张步彩,叶亦见,CharlesM u l eke ,李祥瑞(南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095)[收稿日期]20050524 [文献标识码]A [文章编号]10021280(2005)11003904 [中图分类号]S852.723[摘 要] 目前,人们对鸡球虫病的防治仍然依赖于抗球虫药的应用,但是大量抗球虫药的使用,使得鸡球虫耐药性的产生已成为无法避免的问题。
笔者综述了鸡球虫耐药性的主要特点、耐药性的检测方法、球虫耐药性虫株的诱导、球虫耐药性的产生机理等方面的研究进展。
[关键词] 鸡球虫;耐药性;抗球虫药作者简介:张步彩(1976年~),男,在读硕士,研究方向为动物细胞因子克隆与应用及寄生虫分子免疫。
通讯作者:李祥瑞,男,教授,博士生导师。
鸡球虫病(Coccidiosis)是由顶复器亚门(Ap i co m plexa)孢子虫纲(Sporozoasida)真球虫目(Eueoc cidiori d a)艾美耳科(E i m eriidae)艾美耳属(E i m eria )的多种球虫引起的严重危害家禽生长发育和造成严重环境污染的疾病。
目前,防治鸡球虫病的主要手段仍是用药,自上世纪40年代Lev ine [1]发现磺胺类药物具有抗球虫作用以来,至今已有30多种药物投入实际应用。
抗球虫药物对于减轻鸡球虫病的危害,确保养鸡业的发展起到了极大作用,但研究表明,球虫几乎对所有使用过的抗球虫药物都有耐药性。
迄今为止,已从养鸡场分离到了几乎对所有使用过的抗球虫药有耐药性的虫株。
1 鸡球虫耐药性的主要特点1.1 能耐受药物的极高浓度 球虫一旦产生对某种药物的耐药性,便可耐受其连续使用浓度的4~8倍甚至更高浓度,此时再提高药物浓度,即使对鸡造成毒副作用,也不能消除球虫的耐药性,只会使球虫的耐药能力更强[2]。
1.2 具有交叉耐药性 球虫的某一耐药虫株还可能对具有相同作用机理的一些从未接触过的药物产生耐药性,即交叉耐药性。
5株堆型艾美耳球虫顶质体rpoB基因的扩增及序列分析
６ ７ ． ２ ３ ％和 ６ ４ ． ６ ２ 。首 次报 道 了堆 型艾 美耳球 虫 ｒ ｐ ｏ Ｂ序 列 ， 显示 ｒ ｐ ｏ Ｂ基 因序 列保 守 ， 不 同来 源
堆型 艾 美耳球 虫 虫株 的序 列没 有 差异 ， 为进 一步 研 究艾 美耳 球 虫的群 体遗 传 学奠 定 了基 础 。
刘国昌 ， 林 瑞 庆 ， 严 浩 ， 胡 钱 江 ， 刘 丽 丹 ， 翁 亚彪
（ １ ． 华南农业大学 兽 医学院 ， 广东 广 州 ５ １ ０ ６ ４ ２ ； ２ ． 佛 山 市 正 典 生 物 技 术 有 限公 司 ， 广东 佛 山 ５ ２ ８ １ ３ ８ ）
摘 要 ：以 ５株堆 型 艾 美耳 球 虫为研 究对 象 ， 对 其顶 质体 ｒ ｐ ｏ Ｂ基 因的部 分序 列进行 了 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增 、 测
ａ ｖ ａ ｉ ｌ ａ ｂｌ ｅ ｉ ｎ Ｇｅ ｎ Ｂａ ｎ ｋ ｄ ａ ｔ ａ ｂａ ｓ ｅ ｓ ｈｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈａ ｔ ｔ ｈｅ ｒ ｅ ｗａ ｓ ｎｏ ｎ ｕｃ ｌ ｅ ｏ ｔ ｉ ｄｅ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎｃ ｅ ａ ｍｏｎ ｇ ｔ ｈｅ ｒ ｐｏ Ｂ ｇｅ ｎｅ ｓ ｏ ｆ ｆ ｉ ｖ ｅ Ｅ．ａｃ ｅ ｒ ｖｕ ｌ ｉ ｎ ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎｓ， ａ ｎｄ ｔ ｈｅ ｓ ｅ ｑ ｕｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｉ ｍｉ ｌ ａ ｒ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ９ ２ ．７５ ， ６７ ．２ ３ ，ａ ｎ ｄ
ｍｅ ｎ ｔ ｗａ ｓ ｏ ｂｔ ａ ｉ ｎｅ ｄ ｆ ｒ ｏｍ ｆ ｉ ｖ ｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎｓ ｏ ｆ Ｅ． ａ ｃ ｅ ｒ ｖ ｕｌ ｉ ｎ ａ． Ｓｅ ｑ ｕｅ ｎｃ ｅ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｉ ｓ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｍｐａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎａ ｌ —
中草药防治鸡球虫病的研究概况
有养鸡的地方就存在鸡球虫。 无论鸡场设备及管理技术多么
先进 ， 防疫措施多么严格 ， 鸡球虫病还是照样发生。 设施及管 理落后的地方 球虫病更 为厉 害 。造成鸡球 虫病广泛 流行的主要原 因 是 ：鸡球 虫病 病原发育方式 为直接发 育型 ，潜伏期一般 为
美耳球虫（ ．ｔ ｅ ａ； ） Ｅ ｅ ｌ）（ 哈氏艾美耳球虫（ ｎｌ ８ Ｅ．ｈｇｎ ； ） ａａｉ （ 变位 ）９
艾美耳球虫（ Ｅ．ｍｖｔ。其 中（ ～（ 种 已为全世界球虫学家 ｉｉ ａ） １ ７ ） ）
们 所 公 认 。 氏艾 美 耳 球 虫 和变 位 艾 美 耳 球 虫虽 是 较 多 国家 哈
４ ５ ， 流 行 不 受 中 间 宿 主 分 布 的 限 制 ， 虫 卯 囊 具 有 极 强 —ｄ其 球
ｌ ｂ ｃｅ ｎ ｅ ｔ ｎ ａ ｄ Ｃ ｍｐ ｌｂ ｃｅ ｓ ｌｔ ｓ ｆ ｍ ｒ ｓ ， ｏ ａ ｔｒ ｉｆ ｃｉ ｎ ａ ｙｏ ａ ｔｒ ｉ ａｅ ｒ ｏ ｏ ｏ ｆ ｈ ｅ
２ 鸡 球 虫 病 的特 点
巨大经济损失 ， 其数 目肯定是惊人 的。本文就 中草药在鸡球
虫病防治中的应用作一简要概述。
１ 球 虫 的 种 类
２１ 常见 多发 ．
鸡球虫是一种分 布极其广泛的寄生虫 ， 几乎
鸡球虫在分类上隶 属于原生动物界 ， 顶复器门（ｐｅｍ Ａｉ — ｏ ｐｅａ、 ｌ ）孢子虫纲（ｐｒｚａｉａ、 ｘ Ｓ ｏｏｏｓ ）真球虫 目（ｕｏｃ ｉ ｉａ、 ｄ Ｅ ｃｃｉ ｏ ｄ）艾美 ｄｒ 耳科（ｉｅｉ ａ）艾美耳属（ｉｅ ａ。自从 Ｒ ｉ ｅ 和 Ｌ ｅｔ Ｅｍ ｒｄｅ、 ｉ Ｅｍ ｒ ） ｉ ａｌ ｔ ｕｅ 于 ｌ ｉ １９ 年首次 鉴定 出的肓肠球虫 以来 ，迄今全 世界已记载而 ８１
畜禽常用抗球虫药的中毒诊断 常用抗球虫药的用法与用量 - 种养技术
畜禽常用抗球虫药的中毒诊断常用抗球虫药的用法与用量-种养技术畜禽饲养常受到一些寄生虫的危害,其中球虫病是危害最严重的,同时球虫病的传播速度也是最快的。
球虫病多发于气候潮湿而温度又较高的夏季,经常发生在鸡、鸭、兔、羊等畜禽,是普遍存在、危害性较大的肠道寄生虫病,死亡率高达20%以上。
由于该病防治困难,给养殖业带来了严重的经济损失。
目前国内畜禽抗球虫药缺乏,而且球虫对药物易产生耐药。
畜禽常用抗球虫药的中毒诊断常用抗球虫药的用法与用量。
1、氯羟吡啶氯羟吡啶对鸡的毒性较小，雏鸡口服，按体重半数致死量( LDjo)为720 mg/kg，但用量过大可引起中毒。
临床表现为精神萎顿，翅下垂，痉挛，肝脏肿大、质脆、有出血点，淋巴结肿大，肾脏出血，严重者可引起死亡。
动物上市前5天必须停药；产蛋鸡及肉用火鸡禁止使用。
2、二硝甲苯酰胺二硝甲苯酰胺对小肠球虫中的毒害艾美耳球虫效力最高，对柔嫩艾美耳球虫、波氏艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫也有一定效果。
主要抑制球虫的无性裂殖阶段，药效高峰在感染后第三天，不影响宿主免疫力：II。
雏鸡口服，按体重LD50为275 mg/kg，火鸡口服LD:。
为528 mg/kg。
该药一般比较安全，偶尔中毒时，可出现神经症状。
3、氨丙啉本药对柔嫩、堆型艾美耳球虫有效，作用高峰期在感染后第三天，稍影响宿主免疫力。
本品最安全，鸡口服时LD50为按体重5700 mg/kg，可作为蛋鸡饲料添加剂。
本品结构与维生素BI类似，长期使用易产生维生素B1缺乏症，可出现多发性神经炎和脑皮质坏死。
4、氯苯胍该药对各种球虫全部无性生殖期都有效。
药效高峰在感染后第2～3天，低剂量（每千克饲料30 mg）不影响动物免疫力，可治疗急、慢性球虫病，并可改善机体增重。
大剂量（每千克饲料66 mg）使用时，母鸡产的蛋具有异味。
10倍治疗浓度时，可使鸡群出现白细胞增多，β一球蛋白升高，生长延迟。
本品对鸡的LDoO为按体重计算450 mg/kg。
毒害艾美耳球虫-田间分离株的致病性试验
毒害艾美耳球虫-田间分离株的致病性试验刘梅;李建梅;刘丹丹;王尚尚;程旭;沈欣悦;戴亚斌;陶建平【摘要】毒害艾美耳球虫扬州田间分离株以不同的剂量(10000,30000,50000,70000,90000个卵囊/羽)感染28日龄黄羽肉雏鸡,以平均增重、死亡率、病变记分等指标评价其致病性.结果显示,除10000个卵囊组外,其余4个剂量组均显著影响增重(P＜0.05),并引起鸡的死亡,死亡率分别为37.5％～50％、37.5％～50％、62.5％、75％～87.5％；各感染组均出现肠道病变,其中10000个卵囊组的病变值显著小于其余4个剂量组(P＜0.05),但与不感染对照组相比有显著差异(P＜0.05).结论表明,该毒害艾美耳球虫田间分离株有很强的致病性.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2012(048)006【总页数】3页(P18-20)【关键词】毒害艾美耳球虫;致病性;死亡率;增重;病变记分【作者】刘梅;李建梅;刘丹丹;王尚尚;程旭;沈欣悦;戴亚斌;陶建平【作者单位】扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室,江苏扬州225009;中国农业科学院家禽研究所,江苏扬州225125;扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室,江苏扬州225009;中国农业科学院家禽研究所,江苏扬州225125【正文语种】中文【中图分类】S852.72+3鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）的一种或数种球虫寄生于鸡肠道黏膜内引起的一种寄生性原虫病，给养鸡业造成巨大的经济损失。
兔球虫病免疫研究进展
２ ＣｉｓＪ ｒ ｔ Ｒｂｔａ ｉ ６２ ７ ８ ｈｅ ｕ ａｏ ａ ｉ ｒ ｎ ｎｅｏ ｎ ｂ ｍ ｇ ｆ Ｆ ／０ ０
一 综述 与译 文 一
兔 球 虫 病 免 疫 研 究 进 展
尹秀 凤 。薛家宾
（ １南京天 邦 生物技 术有 限公 司生物技 术研 究所 ， 苏南京 ２ ｌ０ ） 江 ｌ １ ２ （ 江 苏省农业 科 学院兽 医研 究所 ， ２ 江苏 南京 ２ ０ １ ） １０４
国， 每年因兔球虫病造成的经济损失巨大 ， 研究一个 有效 的兔球 虫病疫苗 显 得尤为重 要 。张龙现 已将 兔 球虫疫苗前些年的研究进展做了综述 ［， ｚ 笔者将近 ｌ 几 年兔球 虫疫 苗 的研 究进展 进行 简单介 绍 。 １ 兔球 虫活苗研 究进 展
张龙现 等用黄艾 美耳球 虫 活虫重 复免疫 ２月 龄
攻毒 ， 测兔 的肝功 能 。 照组 兔攻 虫后排 出大 量的 检 对
虫 卵 ，并且 ＾—Ｇ Ｔ ＇一谷氨 酰转移 酶 ）活性增 加 ， ｙ Ｇ（ ｙ
量时， 无致病 性 ， 有较好 的免疫 原性 ） ２ 但 在 ５日龄 ， 进行 窝 内喷 洒卵 囊 ，试 验 了 ３个剂 量 ： ４×１ ０。４×
同时 也 减 弱 它 的 免疫 原 性 。其 程 度 取 决 于辐 射 剂
量 。 过 辐射卵囊 和未受辐 射 卵囊 的 比较试 验， 为 通 认
用辐 射致 弱的球 虫 卵单位 苗研 究进展
Ｓ ａ ａａ等用 感 染斯 氏艾 美 耳球 虫兔 胆 汁中 ．Ｈ ｎｄ 的可 溶性抗 原免 疫兔 ，研究 了肝 功 能紊乱 和抗感染
种可 以使用 低剂量 疫苗 。 Ｃ ｕ ｅｔ ｏ ｄｒ Ｐ等 用 Ｓ Ｆ兔评 价 了肠 艾 美 耳 球 虫 的 Ｐ 致病性 和免疫 原性 。用 ６ ６×１ ６×１ ６×１４ 、 ０、 ０和 ０ 个孢子化 卵囊 ４个 免疫剂 量免疫 ５周 龄 断奶兔 ；免
柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)“早熟株”对雏鸡免疫保护力的影响
柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)“早熟株”对雏鸡免疫保
护力的影响
姜悦平;田晶华;谭又红;丁熙成;申红
【期刊名称】《石河子大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】1999(3)4
【摘要】实验采用人工培育的不同剂量柔嫩艾美耳球虫( E.tenella) “早熟株”接种雏鸡,测定出雏鸡血钠、血钾、血钙、血糖、血红蛋白的变化。
结果表明,不同剂量的“早熟株”对所测定的雏鸡生理生化指标均有影响,其中2-0 ×104/ 只指标基本与对照组相同,对雏鸡有较好的保护作用,该剂量可作为未来弱毒苗的参考剂量。
【总页数】5页(P315-319)
【关键词】雏鸡;早熟株;免疫保护力;生理;柔嫩艾美耳球虫
【作者】姜悦平;田晶华;谭又红;丁熙成;申红
【作者单位】石河子大学农学院动物科学系
【正文语种】中文
【中图分类】S858.315.9
【相关文献】
1.三株柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的繁殖力和免疫原性的比较研究 [J], 刘群;蒋金书;韩谦
2.柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)早熟株与亲本株致病性和繁殖力的研究 [J], 古少鹏;韩克光;韩春来;曹宏卿;郑明学
3.15株柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella对五种抗球虫药的抗… [J], 孔繁瑶;宁长申
4.宿主日龄对艾美耳球虫 (Eimeria)早熟虫株感染力及雏鸡球虫免疫力的影响(英文) [J], 段嘉树;李秋明
5.柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)BJ株SO7重组抗原的免疫试验 [J], 李安兴;
蒋金书
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堆型艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究舒凡帆;薛璞;邹丰才;黄兵;董辉;赵其平;李婷;朱顺海;韩红玉;姜连连;孔春林;王晔【摘要】为确定堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株合适的免疫剂量,设立7个早熟株免疫攻虫组、7个母株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,7个早熟株/母株免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1 000、2 000个/羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以1.5×105个/羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以增重、肠道病变记分和卵囊减少率为试验指标.并对早熟株中免疫保护效果较好的2个免疫剂量进行重复试验,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验,攻虫剂量为2×105个/羽的同源母株.结果显示,免疫期间,各免疫组的增重与不免疫组差异不显著(P＞0.05)；攻虫期间,早熟株400、600、800、1 000个/羽和母株600、800、1 000个/羽免疫组的相对增重与不免疫不攻虫组差异不显著(P＞0.05)；肠道病变记分,除2 000免疫组明显低于不免疫攻虫组(P＜0.05)外,其余各免疫组虽低于不免疫攻虫组,但与其差异不显著(P＞0.05)；卵囊减少率,早熟株和母株400～2 000个/羽免疫组均达90％以上,其中600、800个/羽免疫组达97％以上.用早熟株600、800个/羽进行免疫重复试验,两个免疫组攻虫期间的相对增重和肠道病变记分均与不免疫不攻虫组差异不显著(P＞0.05),而与不免疫攻虫组差异显著(P＜0.05),其卵囊减少率均在88％以上.研究结果表明,该堆型艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中以600、800个/羽的免疫效果更好,可考虑以600个/羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)011【总页数】5页(P51-55)【关键词】球虫;堆型艾美耳球虫;早熟株;免疫;鸡【作者】舒凡帆;薛璞;邹丰才;黄兵;董辉;赵其平;李婷;朱顺海;韩红玉;姜连连;孔春林;王晔【作者单位】云南农业大学动物科技学院,云南昆明650201;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;云南农业大学动物科技学院,云南昆明650201;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S855.9鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）球虫引起的一种原虫病，能引起鸡生长发育停滞，饲料报酬降低，甚至死亡，对全球养鸡业每年造成大约20亿英镑损失［1］。
长期以来，抗球虫药是预防和控制球虫病的主要方法，但药物无节制的使用导致球虫抗药性的大量产生。
另一方面，政府和消费者希望药物添加剂能逐步被淘汰。
幸运的是，用球虫活疫苗来代替药物已经被证明是可行的方法，目前欧盟约80%的鸡群是通过使用商品化球虫活疫苗来免疫预防球虫病［2］。
堆型艾美耳球虫（E.acervulina）对鸡致病力中等，主要寄生于鸡十二指肠，分布广、感染率高，对养鸡业的危害仅次于柔嫩艾美耳球虫［3］。
在中国，堆型艾美耳球虫是肉鸡养殖中最常见的3种球虫之一，也是球虫活疫苗常包含的虫种之一［4］。
通过前期研究，已获得一株堆型艾美耳球虫早熟株。
该早熟株致病力比母株弱，免疫原性与母株相当，遗传稳定性好，对7种常见抗球虫药物敏感［5－6］。
本文拟研究该早熟株不同免疫剂量的保护效果，为确定推荐免疫剂量和制备球虫活疫苗奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验用动物二黄鸡，购自上海市郊某孵化场。
饲养于严格控制的无球虫的隔离笼舍中，饲喂不添加任何抗球虫药的全价饲料。
试验前连续2 d检查粪便，确认无球虫感染。
1.1.2 虫株堆型艾美耳球虫母株（资源号CAAS 2111101），由黄兵等用单卵囊分离技术分离于上海郊区某大型鸡厂，潜在期99 h。
堆型艾美耳球虫早熟株（资源号CAAS 2111105），由中国农业科学院上海兽医研究所诱导获得，潜在期84 h［5］。
2个虫株孢子化卵囊置于25 g／L的重铬酸钾溶液中4℃保存，试验前经鸡体传代获得新鲜卵囊后保存备用。
1.2 方法1.2.1 第一批试验将480只6日龄雏鸡逐只称重，按每组30只鸡随机分为16组，调整各组体重基本相同。
7日龄进行首免，其中第1组～第7组用早熟株免疫，免疫剂量分别为每只鸡100、200、400、600、800、1 000及2 000个孢子化卵囊；第8组～第14组用母株免疫，免疫剂量与早熟株相同。
第15组为阳性对照组（不免疫攻虫组），第16组为空白对照组（不免疫不攻虫组）。
14日龄进行二免，各组免疫剂量与首免相同。
二免后7 d称重，计算6日龄～21日龄期间（免疫期间）各组的增重。
除第16组外，各组分别用母株进行攻虫，剂量为每只鸡15×104个孢子化卵囊。
攻虫后4 d～7 d，每天收集粪便称重，用麦氏虫卵计数法计每克粪便卵囊数（OPG），统计各组平均每只鸡的卵囊排出总量，计算卵囊减少率。
28日龄结束试验，逐只称重、处死，取十二指肠进行肠道病变记分，并计算21日龄～28日龄期间（攻虫期间）的增重。
试验期间观察记录各组鸡的精神、食欲、饮水、发病、死亡及粪便状况。
1.2.2 第二批试验根据第一批试验结果，对获得的两个免疫效果较好的剂量进行重复试验。
取120只鸡称重，按每组30只鸡随机分为4组，调整各组体重基本相同。
第1组和第2组为第一批试验免疫效果较好的两个免疫组，第3组为不免疫攻虫组，第4组为不免疫不攻虫组。
7日龄首免，14日龄二免，21日龄称重后，除了第4组外，其余各组每只鸡接种母株20×104个孢子化卵囊。
攻虫后处理措施、试验周期等与第一批试验相同。
1.2.3 观测指标用3项指标综合判断：①病变记分，依据肠道病变程度分别记为0～4分。
②相对增重率，以攻虫后7 d间各组的增重占不免疫不攻虫组增重的百分率，即相对增重率＝（各组平均增重÷不免疫不攻虫组平均增重）×100。
③卵囊减少率，以各组平均每只鸡在攻虫后4 d～7 d排出卵囊量计算卵囊减少率，卵囊减少率＝（不免疫攻虫组排出卵囊总量－免疫攻虫组排出卵囊总量）÷不免疫攻虫组排出卵囊总量×100。
1.2.4 数据处理采用SPSS 11.5统计软件对各组的相对增重及病变记分进行方差分析，其中，P＜0.05为差异显著。
2 结果2.1 第一批试验堆型艾美耳球虫早熟株试验结果见表1。
由表1可知，在增重方面，各免疫组在免疫期间的增重和不免疫组相当（P＞0.05）；攻虫期间免疫剂量为400个／羽～2 000个／羽的增重均与健康对照组相当（P＞0.05），其中600、800个／羽的增重更接近健康对照，而免疫剂量为100个／羽～200个／羽的增重明显低于健康对照组（P＜0.05）。
在肠道病变记分方面，各免疫组病变记分相当，均轻于感染对照组，但差异不显著。
在卵囊减少率方面，免疫剂量400个／羽～2 000个／羽的卵囊减少率超过90%，而免疫剂量100个／羽和200个／羽的卵囊减少率相对偏低。
综合免疫剂量、免疫期间与攻虫期间的增重、卵囊减少率等指标分析，拟将600、800个卵囊／羽作为堆型艾美耳球虫早熟株的推荐免疫剂量，进行第二批试验。
表1 堆型艾美耳球虫早熟株不同免疫剂量的保护效力Table1 The effectiveness of different immunizing dosages with precocious line of E.acervulina注：同列数据上标相同字母表示差异不显著（P＞0.05）；不相同字母表示差异极显著（P＜0.05）。
Note：Data marked with same letters in the same columns represent insignificant difference（P＞0.05）；data marked with different letters mean significant difference（P＜0.05）.免疫剂量Dosage immunized 免疫期间增重／g Weight gains during immunization攻虫期间增重／g Weight gains after challenge相对增重率／%Relative weight gain肠道病变记分Intestinal lesion score每只鸡排卵囊总量×107个Total oocysts per chicken 卵囊减少率%Reduction rate of oocysts 100 155.56±22.58a 76.89±15.37b 68.09 1.25±0.50ab 19.14 66.63 200 140.10±40.29a 68.40±28.46b 60.571.29±0.76ab 10.87 81.05 400 149.11±44.64a 89.13±40.49a 78.941.33±0.82ab 5.01 91.26 600 146.56±49.50a 97.68±36.92a 86.511.66±0.52ab 1.03 98.20 800 148.50±44.03a 111.13±33.96a 98.411.60±0.55ab 0.82 98.57 1 000 137.43±18.28a93.39±33.76a 82.611.20±0.84ab 3.4 94.07 2 000 130.25±35.89a 80.08±16.57ab 70.920.88±0.60b 0.13 99.77阳性对照组Positive control group 148.43±23.65a 74.50±22.94b 65.98 2.00±0.76a 57.37 100空白对照组Blank control group 143.00±37.78a 112.92±13.88a 100 0c 0－堆型艾美耳球虫母株试验结果见表2。