支原体培养检验操作程序
支原体化验的方法
支原体化验的方法支原体化验的方法有多种，其中包括直接培养法、PCR法、免疫学方法等。
下面将详细介绍这些方法的原理、步骤和应用。
直接培养法是最常用的支原体化验方法之一。
该方法主要通过将患者标本（如呼吸道分泌物、尿液、眼结膜刮片等）接种于富含营养物质的培养基上，培养出支原体，然后通过染色或PCR等方法进行鉴定。
直接培养法的步骤如下：1. 收集标本：根据患者的病情选择合适的标本，如痰液、尿液和血液等。
2. 准备培养基：根据支原体的生长要求选择相应的培养基，可以添加抑菌剂以防止其他细菌的污染。
3. 接种标本：将标本取出涂于培养基表面或混合于培养基中。
4. 培养条件：根据支原体的特性，确定合适的培养条件，如温度、湿度和气体成分等。
通常情况下，支原体需要在35-37摄氏度下进行培养。
5. 鉴定支原体：经过一段时间的培养后，观察培养基上是否有支原体生长的迹象，如颜色变化或菌落形成等。
可以使用染色技术（如吉姆萨染色）来直接观察支原体的形态特征，或者使用抗原检测方法（如免疫荧光法）来检测支原体的特异性抗原。
直接培养法的优点是可以获得活体支原体，可以对其进行进一步的生物学研究；缺点是该方法需要较长的时间来等待支原体的生长，并且对培养条件的控制要求较高。
PCR法（聚合酶链反应法）是一种通过扩增支原体特异性基因来鉴定支原体的方法。
该方法的优点是快速、准确、敏感，并且不需要进行支原体的培养。
PCR法的步骤如下：1. 提取核酸：从支原体的标本中提取核酸，一般使用商业化的核酸提取试剂盒进行提取。
2. PCR试剂的配制：将PCR所需的试剂进行配制，包括引物（特异性扩增支原体基因产物的引物）、核酸模板、酶和缓冲液等。
3. 扩增反应：将提取的核酸样品与PCR试剂混合，通过PCR仪进行扩增反应。
扩增的条件包括温度、时间和环境等。
4. 电泳分析：将扩增产物与DNA分子量标准物一同进行琼脂糖凝胶电泳，通过分析扩增产物的条带大小和强度来判断是否存在支原体。
支原体测试操作方法
支原体测试操作方法
支原体测试操作方法包括以下步骤：
1. 制备标本：向6孔板内滴加待检细胞上清液约1ml，注意设立对照组（已证实的支原体阳性和阴性细胞上清液），培养48h后（VERO细胞汇合前）将细胞爬片从平皿中取出。
2. 漂洗：将细胞爬片置于培养皿中，用不含酚红、NaHCO3的Hanks溶液（或PBS）漂洗3次。
3. 固定：用乙酸：甲醇（1：3）固定液固定10min。
4. 漂洗：待固定液自然风干后用去离子水漂洗3次。
5. 染色：置于Hoechst33258工作液（μg/ml）中染色10min。
6. 漂洗：去离子水中漂洗3次，每次1~2min。
7. 封片，紫外激发，观察。
以上步骤仅供参考，建议咨询专业医生获取准确信息。
PCR方法 支原体检测
PCR检测支原体方法如下：
1、吸取待检细胞的培养液100ul，转移入无菌的1.5ml 离心管中。
请注意：待检
细胞必须换液24小时以上，否则会有假阴性结果。
2、将盛有100ul待检培养液的 1.5ml 离心管用金属浴或空气浴在95℃加热
5min。
请注意：加热过程中，要保持离心管的盖子是盖紧的。
（因为在加热时，盖子会自己崩开，可以在离心管上放置书本之类的物品压住盖子）
3、高速离心，13200rpm，1min。
4、配制PCR反应体系：
1）待检样品数量+1个阳性对照+1个阴性对照=总的样品数量。
2）阳性对照是以往确定被支原体污染的样品，阴性对照是灭菌超纯水。
3）PCR反应体系：
H2O（灭菌超纯水）13 ul
Buffer 10×（必须含Mg2+） 2 ul
dNTP0.8 ul
Primer(+) (10uM)0.5 ul
Primer(-)(10uM)0.5 ul
Polymerase0.2 ul
Sample 3 ul
4)PCR反应程序：
94℃2min
94℃30sec
55℃30sec
72℃20sec
GOTO step 2 , 36 times
72℃7min
5、配制2%的琼脂糖胶，上样量5-10ul。
6、20-30min后观察结果，阳性条带在200-300bp。
引物序列：
Primer(+)：’GGGAGCAAACAGGATTAGATACCCT3’
Primer(-)：5’TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC3’。
支原体培养检验操作程序
支原体培养检验操作程序一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。
二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。
1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。
3、将混有标本的培养液各100μL 加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。
第24、48小时分别观察记录结果。
结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。
培养基不变色为阴性。
B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。
药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。
当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。
结果一：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。
结果二：第24小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。
报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。
结果三：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。
结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。
检验技术操作程序
添加标题
02
PEPORT ON WORK
实验操作
1
2
3
4
结果判断 阴性反应（—）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。 弱阳性反应（+～++）：可见较小的黑色凝集物。 阳性反应（+++～++++）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。
注意事项
RPR试剂在使用前应充分摇匀。 血清中加入试剂后充分振荡使其混匀。 定性试验呈弱阳性或阳性者必须做定量试验才能了解患者血清中的抗体滴度，然后对每个稀释度的血清再进行测定并判断结果。 定性试验呈弱阳性或阳性反应者，需结合临床进行综合分析判断，同时再做特异性密螺旋体试验加以确诊。因为此试验是梅毒非特异性反应素试验，麻风等患者可出现生物学假阳性反应。 试剂盒中的专用滴管、针头只能用来吸取RPR试剂，不能用来吸取血清或作他用。
添加标题
如标本中含有大量血液或者脓液，会出现假阳性结果。
02
03
添加标题
本检测结果如有阴性，而临床症状持续存在，可以进行其他方法来进一步明确诊断。
梅毒操作程序 梅毒快速血浆反应素诊断（RPR）
添加标题
01
PEPORT ON WORK
静脉采血
50ul血清+RPR试剂
注意事项 用阳性培养液接种需早期在颜色稍转红时接种为佳，因支原体在碱性环境下易死亡。 若混合孔变红，尿素孔、人型孔均不变色，说明标本中支原体浓度<104，属正常范围，可报阴性。 解脲支原体24小时报结果，人型支原体48小时报结果。
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沙眼衣原体C-C板操作程序
水平旋转8分钟
支原体检验标准操作规程记录
支原体检验标准操作规程记录
支原体是一种细菌，可以引起一些疾病，例如支原体肺炎。
支原体检验通常是通过采集患者的呼吸道分泌物样本进行检测。
下面是支原体检验的标准操作规程记录：
1. 样本采集，首先，医务人员需向患者解释采集支原体样本的过程，并确保患者理解并同意。
然后，使用标本采集棒从患者的咽部或鼻腔采集分泌物样本。
确保采集的样本足够用于后续的检测。
2. 样本保存和运输，采集完样本后，将其置于适当的容器中，并尽快送往实验室进行检测。
在运输过程中，需要确保样本的稳定性和完整性，避免样本污染或损坏。
3. 样本检测，实验室技术人员根据标准操作规程，使用适当的检测方法对支原体样本进行检测。
常见的检测方法包括PCR（聚合酶链反应）和培养法。
在检测过程中，需要严格遵守操作规程，确保结果的准确性和可靠性。
4. 结果记录和报告，一旦检测完成，实验室应当及时记录检测结果，并按照相关规定向医务人员报告。
检测结果应当包括阳性或
阴性的判定，以及可能的数量或浓度信息。
5. 结果解读和处理，医务人员在收到检测结果后，应当结合患
者的临床症状和其他检查结果进行综合分析和判断。
根据检测结果，及时采取相应的治疗措施，并告知患者相关信息。
以上是支原体检验的标准操作规程记录，这些步骤和规程的严
格执行对于确保支原体检验的准确性和可靠性非常重要。
希望这些
信息能够对你有所帮助。
支原体(培养法)检测程序
1.目的指导并规范直接培养法检测小牛血清支原体的操作。
2.适用范围本程序包括初次接种培养、第7天转种培养、结果判定标准及培养基的最终处理。
适用于小牛血清支原体直接培养法检查的全过程。
3.职责3.1 质控部负责本程序的起草3.2 总经理负责本程序的审批3.3 质控检验人员负责本程序的操作4.定义5.引用标准《中华人民共和国药典》四部 2015版6.材料及设备6.1 试剂6.1.1 供试品小牛血清，8ml以上6.1.3 效期内灭活小牛血清，使用前确认批号、有效期，并填写相应记录。
6.1.4 阴性对照：无菌生理盐水（安瓿瓶2ml/瓶）10ml6.2 培养基6.2.1 效期内支原体肉汤培养基8ml /支（中管），4支（初种）和8支（转种）。
记录批号及有效期。
6.2.2 效期内支原体半流体培养基8ml /支（中管），4支（初种）和8支（复种）。
记录批号及有效期。
6.3 用具1ml刻度吸管、10ml 刻度吸管。
清洗、灭菌参《玻璃器皿的清洗灭菌程序》6.4 设备6.4.1 生物安全柜。
6.4.2 35～37℃孵箱。
6.4.3 电磁炉6.5 其它6.5.1 无菌医疗用品无菌帽、无菌口罩和橡胶检查手套。
记录批号。
6.5.2 75%酒精棉，参见《75%酒精棉配制程序》SXRS-SOP 02-1-0-70。
记录批号。
7.流程图无8.内容8.1 初次接种和培养观察8.1.1 操作前准备——支原体半流体培养基融化：8.1.1.1 将支原体半流体培养基放入不锈钢锅内。
8.1.1.2 用电磁炉加热10～15分钟，使其完全融解。
8.1.1.3 冷却至触摸不烫手8.1.1.4 供试品、培养基、小牛血清、灭菌物品、75%酒精棉、记号笔、试管架放在操作间。
8.1.1.5 标记培养基：用记号笔在支原体肉汤培养基和支原体半流体培养基中管外壁注明阴性对照和供试品名称、批号、接种日期。
8.1.1.6 补加灭活小牛血清：8.1.1.6.1 用75%酒精棉擦拭小牛血清瓶。
支原体检测流程
支原体检测流程
支原体检测流程详解
一、准备工作
1. 收集患者的前置分泌物，用于后续的检测分析。
2. 准备必要的实验器材，如试管、移液器、离心机等。
3. 确保实验室环境符合卫生标准，以避免干扰检测结果。
二、样本处理
1. 将收集到的前置分泌物放入无菌试管中，并做好标记。
2. 尽快将样本送至实验室进行检测。
三、实验室检测步骤
1. 样本接种：将样本接种到支原体培养基上，进行培养和观察。
2. 支原体鉴定：通过形态学、分子生物学等方法，对培养出来的支原体进行鉴定。
3. 结果判断：根据支原体生长情况、形态学特征等，结合经验进行结果判断。
四、注意事项
1. 确保实验室环境的卫生标准，以避免干扰检测结果。
2. 注意样本的采集和保存方法，确保样本的质量。
3. 在进行支原体检测时，应注意与其他类似疾病的鉴别，以免误诊。
五、报告出具
根据检测结果，出具支原体检测报告，告知患者是否感染了支原体及相应的治疗建议。
以上就是支原体检测的详细流程，希望对大家有所帮助。
支原体的培养方法
支原体的培养方法
支原体的培养方法如下：
1.支原体的分离与培养：首先，将疑似支原体感染的样本（如呼吸道分泌物、∗∗道分泌物等）进行分离。
常用的分离方法有离心、滤过等。
2.培养基：支原体培养需要特定的培养基，如含抗生素的支原体专用培养基。
培养基的pH值应控制在7.2-7.4，以满足支原体的生长需求。
3.培养条件：将分离后的样本接种到培养基上，置于37℃的恒温培养箱中，培养时间通常为2-6天。
需要注意的是，支原体对湿度有一定要求，培养箱内湿度应保持在50%-70%。
4.观察结果：在培养过程中，如果出现典型的支原体菌落，即可判断为支原体感染。
支原体菌落特征为透明或半透明，中心部位呈颗粒状。
5.鉴定：对于疑似支原体感染的患者，需进行进一步的鉴定，如生化试验、血清学试验等。
此外，分子生物学方法（如PCR）也可用于支原体的鉴定。
需要注意的是，支原体的培养方法因实验室条件、样本来源等因素而异，具体操作需参照相关实验室手册进行。
支原体检测药敏法实验操作流程
支原体检测药敏法实验操作流程1.预先准备所需的支原体培养基和培养皿。
Prepare the required culture medium and culture dishes for Mycoplasma testing.2.将待测样品加入含有支原体培养基的培养皿中。
Add the test sample to the culture dish containing Mycoplasma culture medium.3.将培养皿放入培养箱中，利用恒温箱将温度保持在37摄氏度，以促进支原体的生长。
Place the culture dish in the incubator and maintain the temperature at 37 degrees Celsius to promote the growth of Mycoplasma.4.在培养皿中加入药敏试剂，可以是抗菌药物或抗生素。
Add the sensitivity reagent to the culture dish, which can be an antibiotic or antibacterial drug.5.观察培养皿中是否有支原体的生长。
Observe whether there is growth of Mycoplasma in the culture dish.6.通过显微镜观察支原体的数量和形态。
Observe the quantity and morphology of Mycoplasma under a microscope.7.根据支原体的形态和数量，判断药敏试剂的效果。
Based on the morphology and quantity of Mycoplasma, evaluate the effectiveness of the sensitivity reagent.8.记录实验结果和观察到的支原体生长情况。
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支原体培养检验操作程序
一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。
二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。
1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。
3、将混有标本的培养液各100μL 加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。
第24、48小时分别观察记录结果。
结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。
培养基不变色为阴性。
B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。
药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。
当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。
结果一：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。
结果二：第24小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。
报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。
结果三：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。
结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。
结果五：第24、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无支原体生长或浓度极低，报告未培养出解脲及人型支原体。