新鲜冰冻血浆中凝血因子检测结果与分析
新鲜冰冻血浆凝血因子Ⅷ监测结果分析
Ｄ ： ０ ３ ６ ／．ｓｎ １ ７ —４ ５ ２ １ ． ９ ０ ８ 文 献 标 志码 ： 文 章 编 号 ： ６ ２９ ５ （ ０ １ １ ４ ４ ０ Ｏ１ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ． ６ ２ ９ ５ ． ０ １ １ ． ７ ｓ Ｂ １ ７ ４ ５ ２ ｌ ） ９２ ２ —２
１ Ｐ 数 量 少 ， 积 异 常 并 存 在 异 常 聚 集 ， 析 仪 计 数 的 可 。 Ｉ Ｔ 体 分 信 度 降低 ， 要 人 工 复 检 才 能 准 确 。 需 ３ ４ ＷＢ ． Ｃ分 类 的 推 片 复 检 推 片 复 检 是 根 据 ＷＢ Ｃ直 方 图 上 单 核 细胞 区 域 （ ０ １ ０ ｆ ） 高 和 仪 器 没 有 给 出 分 类 结 果 ９ ～ ６ Ｌ 增
综 上 所 述 ， 者认 为 ， 作 自动 血 液 分 析 仪 因 工 作 环 境 、 工作 状 态 、 本 采 集 及 血 液 成 分 的 复 杂 性 不 同 ， 检 率 也 有 一 定 的 差 标 复 异 。分 析 仪 还 不 能 克 服 各 种 颗 粒 的 干扰 ， 能 通 过 复检 才 能 纠 只 正 偏 差 ， 以 复检 是保 证 仪 器 检 验 质 量 的关 键 。 所
本 影 响更 大 。技 术 操 作 熟 练 者 复 检 率 较 低 。某 些 疾 病 如 糖 尿 病 、 管 性 疾 病 、 小 球 肾 炎 性 疾 病 等 Ｐ 活 化 程 度 较 高 ， 血 肾 Ｉ Ｔ 容 易 聚集 ， 至 在 体 内 已 经 活 化 聚 集 。 另 外 ， 二 胺 四 乙 酸 能 甚 ］ 乙 够 诱 导 Ｐ Ｉ Ｔ抗 体 与 Ｐ 结 合 ， 起 Ｐ 聚 集 ， 些 均 能 导 致 Ｉ Ｔ 引 Ｉ Ｔ 这 Ｐ Ｔ 计 数 假 性 降低 。Ｐ Ｌ Ｉ Ｔ聚 集 成 为血 液分 医学 与 临 床 ２ １ ０ １年 １ Ｏ月 第 ８卷 第 １ ９期 Ｉ ｂ Ｍｅ ｌ Ｏ ｔｂ ｒ２ １ ， １８ Ｎｏ １ ｄＣ ｉ ｃｏ ｅ ０ １ Ｖｏ． ， ． ９ ａ ｎ，
不同温度、时间制备新鲜冰冻血浆中的凝血因子含量分析
不同温度、时间制备新鲜冰冻血浆中的凝血因子含量分析目的：观察不同温度和不同时间制备新鲜冰冻血浆对血浆中凝血因子含量的影响。
方法：在15 ℃和2 ℃～6 ℃的温度下制备血浆各25份，每一试管留取血液5 ml。
将同一温度的血浆分别在6、8、10 h速冻标本，72 h内将速冻成固体的血浆在37 ℃的水中解冻，立即采用血凝法检测各凝血因子的活性。
结果：15 ℃下保存的血液在6～10 h纤维蛋白原、FⅦ、FⅨ、FⅩ等因子活性降低不明显，FⅤ和FⅧ因子在6～10 h活性下降显著，与其他同一温度下的因子活性降低值相比差异有统计学意义（P＜0.05）。
2 ℃～6 ℃下保存的血浆在6、8和10 h 内FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纤维蛋白原等均在正常范围内，各凝血因子降低不明显。
结论：在2 ℃～6 ℃环境下制备的新鲜冰冻血浆中凝血因子活性优于15 ℃下制备的新鲜血浆中凝血因子的活性，2 ℃～6 ℃冷藏环境6～10 h及15 ℃下8 h内制备的新鲜冰冻血浆可作为制备冷沉淀的原料血浆。
标签：温度；时间；新鲜冰冻血浆；凝血因子含量血浆是血液中的非细胞成分，其含有多种成分，主要包括水分、糖类、无机物、非蛋白含氮化合物、蛋白质等。
临床中所用血浆多为血站提供，用于制造血液制品的主要是血浆站提供，血站主要为临床提供新鲜冰冻血浆、病毒灭活冰冻血浆、普通冰冻血浆等[1]。
新鲜冰冻血浆主要指采集后储存在冷藏环境中的全血，时间最好在6 h以内。
血浆站采集后的血浆放置于-35 ℃以下的冷库在2 h 内速冻成形。
不同时间和温度制备的新鲜冰冻血浆中的凝血因子有所不同。
本次研究旨在探讨不同温度、时间制备新鲜冰冻血浆中的凝血因子含量的差异，现报告如下。
1 材料与方法1.1 标本来源随机抽取2015年5-8月笔者所在血浆站采集符合《药典》健康要求的580 ml 血浆，血浆分别放置在2 ℃～6 ℃和15 ℃的温度下各取样本血浆25份。
将血浆放置在制备室，采用十万级净化密闭环境中取样，每个试管中留样5 ml，2 ℃～6 ℃的血浆在6、8、10 h内冰冻，将其保存在储存冰箱中，15 ℃的血浆在6、8、10 h内冰冻，温度由室内空调设定和调控。
病毒灭活FFP提取冷沉淀凝血因子中主要成分含量分析
病毒灭活FFP提取冷沉淀凝血因子中主要成分含量分析目的：探讨病毒灭活新鲜冰冻血浆（FFP）提取的冷沉淀凝血因子中主要成分含量的改变。
方法：采集45袋400 ml全血，然后用CR-7型大容量低温血液成分离心机（3800 r/min，10 min）分离出血浆（200ml/袋），每袋再平均分为100 ml两袋，分别作为对照组液体血浆和试验组液体血浆。
对照组（FFP组）立即置于低温血浆速冻机中速冻保存备用；实验组（病毒灭活FFP组）用亚甲蓝/光化学法进行病毒灭活后，再速冻保存备用。
将两组FFP分别提取两组冷沉淀凝血因子速冻保存备用，而后分批用START-4全自动血液凝固检测仪，快速测定凝血因子Ⅷ（FⅧ）和纤维蛋白原（Fg）的含量。
结果：经两组对比可见，用亚甲蓝/光化学法进行病毒灭活后FFP制备的冷沉淀凝血因子中，凝血因子Ⅷ（F Ⅷ）和纤维蛋白原（Fg）含量都有一定幅度的减少，但仍然符合国家标准。
结论：以病毒灭活FFP提取冷沉淀凝血因子，对FⅧ和Fg的含量无显著影响，因此病毒灭活FFP提取冷沉淀凝血因子是可行的。
标签：病毒灭活；冷沉淀；成分分析冷沉淀凝血因子是FFP在4 ℃条件下水浴中解冻，收集到的不溶冷沉淀物，其主要成分为凝血因子Ⅷ（FⅧ）、纤维蛋白原（Fg）等，是局部止血药纤维蛋白胶的主要成分。
广泛应用于FⅧ和Fg等凝血因子缺乏的疾病，如因FⅧ缺乏或活性下降的甲型血友病、VWF缺乏或分子结构异常的血管性血友病、凝血因子I（Fg）缺乏症等。
对于以上患者，输注的冷沉淀凝血因子中凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原的活性对治疗效果产生重要影响[1]。
在亚甲蓝/光化学法病毒灭活血浆广泛应用于临床以来，它的效果与安全已被验证。
所以用亚甲蓝/光化学法病毒灭活FFP为原料提取冷沉淀凝血因子，对进一步减少因输血传播疾病的发生率有积极作用。
为发现病毒灭活FFP提取的冷沉淀凝血因子中主要成分含量的改变，笔者分别对实验组FFP和对照组FFP提取的冷沉淀凝血因子中凝血因子Ⅷ（FⅧ）、纤维蛋白原（Fg）进行了含量分析比较，现将结果报道如下。
两种方法制备冷沉淀凝血因子质量的比较
中外医疗China &Foreign Medical Treatment冷沉淀凝血因子是临床上常用的血液制品之一,含有凝血因子Ⅷ、纤维结合蛋白(Fibronectin,Fn)、血管性血友病因子(Von Willebrand Factor,VNF)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB),非常适用于抢救临床大出血或大量输血的患者,如甲型血友病、纤维蛋白缺乏症等,它的制备是指保存期内的新鲜冰冻血浆在1~6℃融化后,DOI:10.16662/ki.1674-0742.2021.07.178两种方法制备冷沉淀凝血因子质量的比较王惟,柴婷婷,李云强,韩瑜长春市中心血站,吉林长春130033[摘要]目的通过两种方法制备冷沉淀凝血因子的质量比较,选择合适制备冷沉淀凝血因子的方法。
方法将2019年12月采集的96袋400mL 合格血液制备的新鲜冰冻血浆96袋,随机分为A、B 两组,每组48袋。
A 组采用的方法为,将新鲜冰冻血浆先放到4℃血液保存冰箱融化5h 左右,再放入4℃数字控制水浴式血浆融化箱,继续水浴融化50min 左右,取出离心、分离、速冻;B 组采用的方法为,将新鲜冰冻血浆放到4℃血液保存冰箱融化16h 左右取出直接离心、分离、速冻。
对两组制备的冷沉淀凝血子质控检测结果进行对比。
结果A、B 两组制备冷沉淀凝血因子,其Ⅷ因子含量分别为(100.09±15.84)IU/袋、(102.02±19.15)IU/袋;纤维蛋白原含量分别为(233.93±53.61)mg/袋、(238.28±62.81)mg/袋,均达到GB18469-2012《全血及成分血质量要求》,差异无统计学意义(t=-0.529、-0.349,P>0.05)。
结论两种方法制备冷沉淀凝血因子均符合国家标准,但将新鲜冰冻血浆放到4℃血液保存冰箱融化16h 左右取出直接离心、分离、速冻的方法制备冷沉淀凝血因子Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量略高,操作方法简单,效率更高,更适宜推广。
新鲜冰冻血浆4℃保存24h内凝血因子活性变化观察
１１ 取样方 法 随机抽取 普洱市 中心血站提 供的新鲜 冰冻 ． 血浆 （ Ｆ ）２ Ｆ Ｐ ０袋 （ 每袋 １０ｍ１ ，３ ℃水 浴溶化 后立 即 ０ ） ７
血凝仪 ，试剂 为由希森美康 医用 电子 （ 上海 ）有 限公司提
供 的 德 国 ＳＥ Ｎ ＩＭＥ Ｓ产 品 。 日立 ７０ —１ 全 自 动 生 化 分 析 ６０ １０ 仪 ，血浆 蛋 白试 剂 为 中生 北 控 生 物科 技 股 份 有 限公 司生 产 。
＞ ．５ ，但整体实验结果与其变化 率呈正相关发展 ，说明 ００ ）
参考文献 ：
新 鲜 冰冻 血 浆 融 化 后 ２ ４ｈ内 凝 血 因 子 变 化 见 表 １ ４ ，２ ｈ 化率情况见表 ２ Ｔ ｒ Ｉ 变 。Ｐ 、Ｔ 、ＦＢ、Ｆ 放 置 时 间 在 ６～２ Ｖ ４ ｈ内无 明显 改 变 （ ０ ０ ） Ｐ ｒｈ与 １ 、２ Ｐ＞ ．５ 。Ａ Ｔ Ｏ ２ｈ ４ｈ比较 具 有统 计 学 意 义 （ ＜ ．５ ，６ｈ与 １ 、２ Ｐ ００ ） ２ｈ ４ｈ比 较 具 有 统
平随着放置 时间的延长而明显降低 （ ００ ） Ｐ＜ ．５ ，同时显示 Ｆ Ⅷ半 衰期 为 １ ２ ｈ ２— ４ 。结论
Ｆ Ｐ融化后 随着放置 时间的 Ｆ
延长 ，部分凝血 因子会 有活性 水平的 降低 ，为确保输血质量 ，提高临床 疗效 ，Ｆ Ｐ融化后应尽可能立即输 注。 Ｆ
【 关键词 】 新 鲜冰冻血浆 白细胞除滤 凝血 因子
新鲜冰冻血浆
1.ABO血型同型输注；
2.融化温度不可超过37C；
⑴避免因子忸失活；
⑵37C加温后，不能完全融化，提示纤维蛋白原已变性为纤维蛋白而不能使用；
3.融化后应尽快输用，以免因子忸失活；
4.融化后不能再冻存；
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5.推注时最好在注射器内加入少量枸橼酸钠溶液，以免注射时发生凝集而堵塞针头，因为 冷沉淀的粘度较大。小弟学习
精选文档推注时最好在注射器内加入少量枸橼酸钠溶液以免注射时发生凝集而堵塞针头因为冷沉淀的粘度较大
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一新鲜冰冻血浆（FFP）
适应症
1.单个凝血因子缺乏的补充（无相应浓缩剂时） ；
2.肝病患者获得性凝血功能障碍；
3.大量输血伴发的凝血功能障碍；
4.口服抗凝剂过量引起的出血；
5.抗凝血酶川（AT』）缺乏；
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2普通冰冻血浆
制品性质：与FFP相比，缺少不稳定的凝血因子V因子和忸因子。
适应症：
用于V和忸因子以外的凝血因子缺乏患者的替代治疗。
要求比FFP松点，但一经融化，不可再冻；4C保存，不能超过24小时
3冷沉淀
由新鲜冰冻血浆通过冰融法制备的富含凝血因子的浓缩制剂；
适应症：
1.甲型血友病（儿童） ；
2.血管性血友病；
6.血栓性血小板减少性紫癜（TTP）；
7.免疫缺陷综合症。
用法
⑴37C水浴融化；
⑵ 融化后，24小时内用输血器输注；
⑶ 输注速度为每分钟5~10ml。
注意事项： 不能室温下自然融化，以免有大量纤维蛋白析出；
新鲜冰冻血浆不同保存时间凝血因子变化
新鲜冰冻血浆
采血后8小时之内，完成分离、速冻并保存于-20℃或更低 的温度下的血浆。 规格： 200mL全血制备的新鲜冰冻血浆为100mL±10% 含有全部凝血因子、水、电解质和蛋白质(主要是白蛋白)， 保存期限为一年
血浆蛋白为 60～80g /L 纤维蛋白原2～4g /L 其他凝血因子0.7～1单位/ml 质量要求（血浆蛋白含量≥50g/L，Ⅷ因子含量≥0.7IU/mL）
围手术期输血指南-冷沉淀
条件许可，应先测定纤维蛋白原浓度再输注冷沉淀 纤维蛋白原浓度>150mg/dl，一般不输注冷沉淀 以下情况应考虑输冷沉淀：
1 存在严重伤口渗血且纤维蛋白原浓度小于 80-100mg/dl 2 存在严重伤口渗血且已大量输血，无法及时测定纤维蛋白原浓度 儿童及成人轻型甲型血友病、血管性血友病、纤维蛋白原缺乏症及 凝血 因子Ⅷ缺乏症患者 严重甲型血友病需加用Ⅷ因子浓缩剂。
普通冰冻血浆
三种来源，
从保存已超过8小时的全血中分离出来的血浆 在全血的有效期（21-35d）以内分离出来的血浆 保存期超过一年的新鲜冰冻血浆
除缺少因子V和因子Ⅷ外，其他的含量与FFP无区别 -20℃以下的条件下可保存5年 只有凝血因子V和凝血因子Ⅷ缺乏的患者，不适合输 注普通冰冻血浆(凝血因子Ⅷ缺乏的患者，应当首选 输注冷沉淀，而不是新鲜冰冻血浆)
凝血因子含量随时间变化
新鲜冰冻血浆Vs 24h冰冻血浆
24h冰冻血浆：采血后24小时之内，完成分离、速冻并 保存的血浆
25%, p<0.05 9%, p>0.05
Blood Transfus 2012; 10: 191-3
冷沉淀解冻后凝血因子变化的实验研究
结合 蛋 白（ ｎ 和凝血 因子 Ｘ １ （ ＸＩ ）广 泛应用 于治 疗血友 Ｆ） １Ｆ Ｉ ， Ｉ Ｉ 病 、Ｉ ＦＢ缺乏 、 充 Ｆ 补 ｎ等 和 纠 正凝 血 功 能 障碍 以及 外 科 手术 等方 面『 】 １ 而 ， 临床 输 注上 ． 常 出现 融 解后 的 Ｃ 。然 在 时 Ｐ因输
ｉ ｄａｅｙｔ ａｅｔｂ ｉｒ ｕｅ ｔ ｍｕｔ ｌ ｓｍ ｌｓ （ ／ ｂ）ｆ ｚｎ ｉ ３ ￣． ｈ ａ ｌ ｗ ｓｄｖｄ ｄｉｔ ｔ ｏ ｍｍｅ ｉｔ ｓｖ ｅｄｓ ｂ ｔ ｉ ｏ ｌｐｅ ａ ｐｅ ２ｍＬｔ ｅ，ｒ ｅ ｌ ｏ ｕ ｔ ｉ ｄｎ ｉ ｕ ｏ ｎ－ ０Ｃ Ｔ ｅｓｍｐｅ ａ ｉｉｅ ｏ ｗ ｎ
ＬＡＮ ｌｎ ，ＬＡＮ ｕ ｇ Ｃ Ｎ Ｌ ｎ ｕ Ｇ Ｎ ａｇ ｉ ｇ ＵＸｕ ｌ ／ Ｇ Ｑｉ ｇ Ｉ Ｇ Ｒ ｏ ｕ ＨＥ ｏ ｇ Ａ Ｆ ｎ ｘａ Ｆ ｅ ＨＵ ＮＧ Ｙ ｎ Ｃ ｏｉ ｏ ｆ ｎ ｌ Ａ ｏ ＨＥＨｕｊ ｏ ａ Ｄ ｐ ｒ ｎ ｆ ｕｌｙＭａ ａｅ ｎ， ｏ ｎ ｉ ｅｔ ｌ ｌｏ ｔｔ ｎ Ｇｕ ｎｄ ｎ ｒｖ ｃ ， ｏ ｎ ５ ５ ０ ， ｈｎ ｅ ａｔ ｔ ａｉ ｎ ｇｍｅ ｔＭａｍｉｇＣｔ Ｃ ｎｒ ｏ ｄＳａｉ ， ａｇ ｏ ｇＰ ｏｉ ｅ Ｍａｍｉｇ ２ ０ ０ Ｃ ｉａ ｍｅ ｏ Ｑ ｔ ｙ ａＢ ｏ ｎ 【 ｓｒ ｃ］０ｂ ｅｔ ｅＴ ｘｌｒ ｈ ｈｎ ｅ ｆ ｌｔｎ ｃｏ ｃｉｉ ｆ ｒｚｎ ｃｙｐｅｉｉ ｔ ａｔｒｔａ ｉｇ ｉ ｄｆ ｒｎ Ａｂ ｔａ ｔ ｊｃｉ ｏｅ ｐｏｅｔｅ ｃａ ｇ ｓｏ ｏｔ ｇｆ ｔｒａｔ ｔ ｏ ｏｅ ｒｏ ｒｃｐｔ ｅ ｆ ｗ ｎ ｎ ｉｅｅ ｔ ｖ ｃ ｉ ａ ｖｙ ｆ ａ ｅ ｈ ｆ
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【关键词】新鲜冰冻血浆; 凝血因子; 活性
根据卫生部临床输血技术规范要求，新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,ffp)自血液采集后6～8 h之内经分离放入-50℃速冻成块，在-30℃保存1年内几乎含有全部凝血因子，包括不稳定因子ⅴ和ⅷ[1 2]。
而血液凝血因子易受血浆制备、储存、运输等条件的影响而失活，从而导致血液疗效的降低。
但由于ffp仍是目前临床预防和治疗出、凝血功能障碍的血制品之一，所以了解和掌握ffp中血液凝血因子的含量及活性显得极为重要。
我们针对市中心血站提供我院的ffp随机抽查10份，进行部分凝血因子的检查，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料来源本次抽查10份ffp均来自蚌埠市中心血站，acd a抗凝全血分离制备而成。
实验仪器：teco coatron 1800全自动血凝分析仪。
试剂均有dade beh ring公司生产。
标准血清(lot.no.102518):pt试剂(lot.no.102627)：aptt(lot.no.103128)：fib 试剂(lot.no.102511);tt试剂(lot.no.101465);fⅷ(lot.no.103821)，fⅶ(lot.no.100708),fⅸ(lot.no.100181)。
1.2 取样方法随机抽取10份ffp，37℃水浴融化，融化后立即按无菌操作抽取血浆2 ml，随即在自动血凝仪上测定凝血因子。
凝血因子测定方法严格按照co 1800全自动血凝仪操作说明和试剂要求，采用凝结光学检测法原理，对不同的检测项目利用不同的稀释度标准血浆凝结时间与相应的凝血因子活性率标绘于对数图上，绘制成标准曲线，然后测定受检血浆凝结时间与相应因子活性率所或获得数据带入回归方程，计算受检血浆中凝血因子活性水平。
选用观察的指标为：pt、aptt、fib、tt、fⅶ、fⅷ、fⅸ等。
2 结果
ffp凝血因子测定结果，见表1。
表1 10份ffp凝血因子测定结果注：inr是pt用国际标准化比值的表示。
3 讨论
血浆中不稳定的凝血因子(如fⅷ)因在体外半衰期较短，多为8～12 h，易丧失活性，加之血液离体后血浆凝血因子接触异物表面会有不同程度被激活而失去活性[1]。
在ffp制备的同时，应尽量缩短ffp在室温的停留时间，在制作采血标签时，将即刻时间打在标签上，以便在成分分离血浆时，保证在6 h内把ffp放入-50℃。
速冻血浆是保存血浆内各种有效蛋白成分及生物活性因子的重要条件。
为了达到快速冷冻的目的，将制备的ffp直接放入-50℃冰柜中速冻。