鼠疫实验室检测技术课件
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鼠传疾病及检测方法 ppt课件
ppt课件 2
Mode of disease spread from mouse
1 Parasites from mouse bite
2 Mouse feces pollution and machinery to carry ： 3 Mouse bimpling --Place：Huashan town of Huadu district
ppt课件
7
4 lungs
Test item : plague , angiostrongylus cantonensis
ppt课件
8
5 Liver
Test items： hemorrhagic fever The cat tail banded tapeworm猫泡尾带状绦虫
ppt课件
9
6 kidney
ppt课件
4
1 Anesthesia of the mouse
ppt课件
5
恙虫Leptus、蜱tick和跳蚤fleas
2 The fleas and other parasite
ppt课件
6
3 Blood sampling from arteria femoralis
Tset item： 抗体检测：鼠疫、出血热 等所有鼠传疾病的抗体。 Antibody of plague, hemorrhagic fevers and other disease
Test items：
virus ，baecterial，and parasites ------Hymenolepis nana短膜壳绦虫
ppt课件
12
9 faeces
Test items: virus ，baecterial，and parasites eggs, resistance gene (ESBL)of Ecoli and campylobacter fitus 耐药
Mode of disease spread from mouse
1 Parasites from mouse bite
2 Mouse feces pollution and machinery to carry ： 3 Mouse bimpling --Place：Huashan town of Huadu district
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7
4 lungs
Test item : plague , angiostrongylus cantonensis
ppt课件
8
5 Liver
Test items： hemorrhagic fever The cat tail banded tapeworm猫泡尾带状绦虫
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9
6 kidney
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4
1 Anesthesia of the mouse
ppt课件
5
恙虫Leptus、蜱tick和跳蚤fleas
2 The fleas and other parasite
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6
3 Blood sampling from arteria femoralis
Tset item： 抗体检测：鼠疫、出血热 等所有鼠传疾病的抗体。 Antibody of plague, hemorrhagic fevers and other disease
Test items：
virus ，baecterial，and parasites ------Hymenolepis nana短膜壳绦虫
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12
9 faeces
Test items: virus ，baecterial，and parasites eggs, resistance gene (ESBL)of Ecoli and campylobacter fitus 耐药
鼠疫演示ppt课件
气候变化、生态破坏和城市化等因素增加了人类与鼠类及其跳蚤接触 的风险，从而加剧了鼠疫的传播。
未来发展趋势预测
1 2
加强全球合作与信息共享
国际社会将加强合作，共同应对鼠疫等传染病的 威胁，包括信息共享、技术交流和资源互助等方 面。
疫苗研发与应用
随着生物技术的不断发展，未来有望研发出更加 安全、有效的鼠疫疫苗，提高人群的免疫力。
02
治疗与预防
鼠疫的治疗主要包括抗菌药物治疗和支持性治疗。预防方面，改善卫生
条件、灭鼠灭蚤、接种疫苗等措施可以有效降低感染风险。
03
对社会和经济的影响
鼠疫的爆发不仅会对人类健康造成严重影响，还会对社会和经济产生负
面影响。例如，疫情爆发可能导致旅游业、农业等产业受损，同时需要
投入大量资源进行疫情防控和治疗。
对症支持治疗
01
02
03
发热处理
对于高热患者，可采用物 理降温或药物降温措施， 如使用解热镇痛药等。
疼痛缓解
对于疼痛明显的患者，可 使用镇痛药物缓解疼痛。
营养支持
加强患者的营养支持，提 供高热量、高蛋白、高维 生素的食物，以增强患者 免疫力。
预防措施及疫苗接种
预防措施
加强鼠疫疫源地的管理，做好灭鼠、 灭蚤工作；加强个人防护，避免接触 染疫动物及其制品；保持良好的个人 卫生习惯，如勤洗手、戴口罩等。
鼠疫
汇报人：XXX 2024-01-19
contents
目录
• 鼠疫概述 • 鼠疫的病原学与发病机制 • 诊断方法与标准 • 治疗措施与方案 • 鼠疫的防控策略与措施 • 总结与展望
01
鼠疫概述
定义与传播途径
定义
鼠疫是一种由鼠疫耶尔森菌引起的烈 性传染病，主要通过带菌的鼠类及其 寄生虫（如跳蚤）传播给人类。
未来发展趋势预测
1 2
加强全球合作与信息共享
国际社会将加强合作，共同应对鼠疫等传染病的 威胁，包括信息共享、技术交流和资源互助等方 面。
疫苗研发与应用
随着生物技术的不断发展，未来有望研发出更加 安全、有效的鼠疫疫苗，提高人群的免疫力。
02
治疗与预防
鼠疫的治疗主要包括抗菌药物治疗和支持性治疗。预防方面，改善卫生
条件、灭鼠灭蚤、接种疫苗等措施可以有效降低感染风险。
03
对社会和经济的影响
鼠疫的爆发不仅会对人类健康造成严重影响，还会对社会和经济产生负
面影响。例如，疫情爆发可能导致旅游业、农业等产业受损，同时需要
投入大量资源进行疫情防控和治疗。
对症支持治疗
01
02
03
发热处理
对于高热患者，可采用物 理降温或药物降温措施， 如使用解热镇痛药等。
疼痛缓解
对于疼痛明显的患者，可 使用镇痛药物缓解疼痛。
营养支持
加强患者的营养支持，提 供高热量、高蛋白、高维 生素的食物，以增强患者 免疫力。
预防措施及疫苗接种
预防措施
加强鼠疫疫源地的管理，做好灭鼠、 灭蚤工作；加强个人防护，避免接触 染疫动物及其制品；保持良好的个人 卫生习惯，如勤洗手、戴口罩等。
鼠疫
汇报人：XXX 2024-01-19
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目录
• 鼠疫概述 • 鼠疫的病原学与发病机制 • 诊断方法与标准 • 治疗措施与方案 • 鼠疫的防控策略与措施 • 总结与展望
01
鼠疫概述
定义与传播途径
定义
鼠疫是一种由鼠疫耶尔森菌引起的烈 性传染病，主要通过带菌的鼠类及其 寄生虫（如跳蚤）传播给人类。
鼠疫PPT演示课件
细菌学检查
采集患者淋巴结穿刺液、血液、 痰液等标本进行细菌培养，分离
出病原菌即可确诊。
血清学检查
采用酶联免疫吸附试验（ELISA） 等方法检测患者血清中特异性抗体， 用于辅助诊断和流行病学调查。
分子生物学检查
应用PCR等技术检测病原菌特异性 基因片段，具有快速、灵敏、特异 的优点。
03
临床表现与诊断
流行病学史
患者发病前10天内有鼠类接触史或居 住于鼠疫流行区。
临表现
突发高热、淋巴结肿痛、皮肤损害及全 身中毒症状。
诊断依据及鉴别诊断
• 实验室检查：血培养或淋巴结穿刺液培养可分离出鼠疫耶 尔森菌。
诊断依据及鉴别诊断
急性淋巴结炎
常有局部红、肿、热、痛， 但全身症状较轻，无流行 病学史。
败血症
全身中毒症状严重，但无 淋巴结肿痛和皮肤损害。
鼠疫PPT演示课件
contents
目录
• 鼠疫概述 • 鼠疫病原学 • 临床表现与诊断 • 治疗与预防措施 • 鼠疫的流行病学特征 • 总结与展望
01
鼠疫概述
定义与传播途径
定义
鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的烈性 传染病，主要借鼠蚤传播，表现为 发热、严重毒血症症状、淋巴结肿 大、肺炎、出血倾向等。
治疗期间需密切观察患者病情变 化，及时调整治疗方案。
预防控制措施
控制传染源
保护易感人群
对患者进行隔离治疗，对病死鼠及其 污染物进行无害化处理。
加强个人防护，避免接触病死鼠及其 污染物；对高危人群进行预防性服药。
切断传播途径
加强环境卫生整治，消除鼠类栖息场 所，降低鼠密度。
疫苗接种策略
疫苗种类
目前主要有灭活疫苗和减毒活疫 苗两种类型。
采集患者淋巴结穿刺液、血液、 痰液等标本进行细菌培养，分离
出病原菌即可确诊。
血清学检查
采用酶联免疫吸附试验（ELISA） 等方法检测患者血清中特异性抗体， 用于辅助诊断和流行病学调查。
分子生物学检查
应用PCR等技术检测病原菌特异性 基因片段，具有快速、灵敏、特异 的优点。
03
临床表现与诊断
流行病学史
患者发病前10天内有鼠类接触史或居 住于鼠疫流行区。
临表现
突发高热、淋巴结肿痛、皮肤损害及全 身中毒症状。
诊断依据及鉴别诊断
• 实验室检查：血培养或淋巴结穿刺液培养可分离出鼠疫耶 尔森菌。
诊断依据及鉴别诊断
急性淋巴结炎
常有局部红、肿、热、痛， 但全身症状较轻，无流行 病学史。
败血症
全身中毒症状严重，但无 淋巴结肿痛和皮肤损害。
鼠疫PPT演示课件
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目录
• 鼠疫概述 • 鼠疫病原学 • 临床表现与诊断 • 治疗与预防措施 • 鼠疫的流行病学特征 • 总结与展望
01
鼠疫概述
定义与传播途径
定义
鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的烈性 传染病，主要借鼠蚤传播，表现为 发热、严重毒血症症状、淋巴结肿 大、肺炎、出血倾向等。
治疗期间需密切观察患者病情变 化，及时调整治疗方案。
预防控制措施
控制传染源
保护易感人群
对患者进行隔离治疗，对病死鼠及其 污染物进行无害化处理。
加强个人防护，避免接触病死鼠及其 污染物；对高危人群进行预防性服药。
切断传播途径
加强环境卫生整治，消除鼠类栖息场 所，降低鼠密度。
疫苗接种策略
疫苗种类
目前主要有灭活疫苗和减毒活疫 苗两种类型。
鼠疫诊疗课件
（一）腺鼠疫 腺鼠疫是最常见的临床类型，主要表现为高热、淋巴结肿大，以
腹股沟、腋下、颈部等单侧淋巴结为多见，主要特征为淋巴结迅速弥 漫性肿胀，大小不等，质地坚硬，疼痛剧烈，与皮下组织粘连，失去 移动性，周围组织亦可充血、出血。
（二）肺鼠疫 肺鼠疫可分为原发性肺鼠疫和继发性肺鼠疫两种类型。 1.原发性肺鼠疫：发病急骤，主要表现为寒战、高热，体温可达
鼠疫为《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病。
二、病原学
鼠疫的病原菌为鼠疫耶尔森菌（以下简称鼠疫菌），属于肠杆菌科 、耶尔森菌属。在光学显微镜下为革兰染色阴性、两端钝圆、两极浓 染的短小杆菌，菌体长约 1-3μm，宽0.5-0.8μm，有荚膜，无鞭毛， 无芽孢。
鼠疫菌没有血清分型。依据鼠疫菌生化反应、生态学特征等，我国 的鼠疫菌可分为17个生态型。
个叶段；随着病情进展，可迅速发展为双肺大片实变。
七、诊断
（一）疑似病例 具有上述临床表现，且存在可能的鼠疫流行病学史。 流行病学史：患者在发病前 10 天内到过动物鼠疫流行区；在发
病前 10 天内接触过来自鼠疫疫区的疫源动物、动物制品，进入过鼠 疫实验室或接触过鼠疫实验用品；在发病前 10 天内接触过具有上述 临床表现（见“五、临床表现”）或明确诊断鼠疫的患者。
（一）一般检查 6.脑脊液：脑膜炎型病例可表现为脑脊液压力升高，外观混浊，
白细胞常大于 4.0×10^9/L，多形核细胞为主，蛋白明显增加，葡萄 糖和氯化物明显下降。
（二）病原学检查 1.细菌培养：样本中可培养到鼠疫菌。 2.显微镜检查：样本涂片、革兰染色，镜下可见革兰染色阴性、两
极浓染的短小杆菌。 3.核酸检测：聚合酶链式反应（PCR）或实时荧光 PCR方法检测上
鼠疫培养或核酸检测阴性。
2024鼠疫培训ppt课件
01鼠疫基本概念与流行病学Chapter鼠疫定义及历史背景定义历史背景流行病学特点与传播途径流行病学特点传播途径鼠疫主要通过带菌的鼠类和其他啮齿动物传播，人类主要通过接触感染动物或污染的物品而感染。
此外，肺鼠疫患者也可通过呼吸道飞沫传播。
临床表现与诊断标准临床表现诊断标准预防措施及重要性预防措施加强疫源地管理，控制传染源；切断传播途径，如灭鼠、灭蚤等；保护易感人群，如疫苗接种等。
重要性鼠疫是一种烈性传染病，预防措施对于控制疫情、保护人类健康至关重要。
通过加强宣传教育、提高公众防护意识、加强国际合作等措施，共同应对鼠疫疫情的挑战。
02实验室检测与诊断技术应用Chapter细菌学检测血清学检测分子生物学检测030201实验室检测方法介绍诊断技术应用场景分析疑似病例筛查针对具有鼠疫临床症状和流行病学史的患者，进行实验室检测以确诊。
疫情监测与预警在鼠疫疫源地或高风险地区，定期开展实验室检测，及时发现并控制疫情。
疗效评估与预后判断对治疗过程中的患者进行实验室检测，评估治疗效果及预后情况。
根据细菌培养、分离和鉴定的结果，判断患者是否感染鼠疫耶尔森菌。
细菌学检测结果解读血清学检测结果解读分子生物学检测结果解读注意事项结合患者临床表现和流行病学史，分析特异性抗体的检测结果，辅助诊断鼠疫。
根据PCR 等技术的检测结果，快速判断患者是否感染鼠疫耶尔森菌。
实验室检测过程中需严格遵守操作规程，确保样本采集、保存和运输等环节的质量控制。
检测结果解读及注意事项01020304实验室生物安全等级样品处理与废弃物管理个人防护措施消毒与灭菌实验室安全防护措施03临床治疗与护理规范操作流程Chapter01020304确诊后应立即开始治疗，首选链霉素等有效抗生素。
早期治疗根据病情选择多种抗生素联合治疗，提高治愈率。
联合用药确保药物剂量足够，疗程充足，避免复发。
足量、足疗程遵循抗生素使用原则，注意药物不良反应和禁忌症。
药物使用原则治疗方案选择及药物使用原则护理规范操作流程演示隔离消毒症状护理心理护理饮食护理并发症预防和处理策略密切观察病情变化，及时发现并处理可能出现的并发症。
鼠疫培训讲义PPT课件
鼠疫的传播方式
01
02
03
直接接触
与感染鼠疫的病人或动物 直接接触，通过飞沫或接 触传播。
间接接触
接触了被鼠疫杆菌污染的 物品或环境，如衣物、食 物、水源等。
媒介传播
通过跳蚤等媒介动物叮咬 传播。
鼠疫的症状与危害
症状
发热、寒战、头痛、咳嗽、胸痛、淋 巴结肿大等，严重时可出现休克和呼 吸衰竭。
危害
康复指导
康复指导主要包括对患者及其家属进行健康教育，指导他们如何预防鼠疫的再次发生，以及如何保持 良好的生活习惯和卫生习惯。同时，对于康复期的患者，应给予适当的康复训练和心理支持。
06 鼠疫的国际合作与交流
国际组织与合作机制
世界卫生组织（WHO）
作为全球公共卫生领域的领导机构，WHO在鼠疫防治方面发挥着 核心协调作用，推动国际合作与交流。
对可能存在鼠疫菌的环境进行消毒处理。
预防措施
疫苗接种 对于高风险人群，如医务人员、野外工作者等，应接种鼠疫疫苗，提高免疫力。
预防措施
疫情监测与报告 建立健全的疫情监测系统，及时发现并报告疑似病例。
对疑似病例进行隔离和治疗，防止疫情扩散。
控制策略
迅速隔离
对疑似病例和确诊病例进行隔离治疗，防止疫情 扩散。 对疑似病例的密切接触者进行医学观察和隔离。
最佳实践交流
各国在应对鼠疫时采取了不同的策略和措施，通过交流最佳实践， 可以相互借鉴、优化防控策略。
经验教训总结
对过去的鼠疫爆发进行总结，分析防控过程中的不足和教训，为 今后的防控工作提供借鉴。
国际合作项目与成果
国际合作项目
各国政府、国际组织和民间团体通过合作开展鼠疫防控项目，如疫 苗研发、疫情监测、防控策略研究等。
【全面版】鼠疫细菌学检验PPT文档
鼠疫反向间接血凝试验反向血凝试验是一种快速敏感的血清诊断方法有较高的特异性用于检查活菌死菌和可溶性抗原可在污染和腐败材料中发现鼠疫菌抗原物质用鼠疫抗体致敏的血球当被检材料每ml含2510万鼠疫菌时即可检出当每ml含有105ugfi抗原时反向血凝可出现阳性结果由于醛化血球的应用制备的戊二醛化致敏血球在冰箱保存2年不失其敏感性和特异性且反向血凝可通过反向血凝抑制试验排除非特异性故目前已常规用于疫源地调查腐败材料的检查鼠疫的快速诊断等
–鼠疫菌在低温情况下不易死亡。在冰冻 的尸体中可存活5--12个月。
–鼠疫菌对高温相当敏感，在干热160℃ 时仅忍受1分钟，145℃5分钟，但煮沸时 数秒钟即死亡。
–对鼠疫菌常用的消毒剂有升汞、来苏儿、 石碳酸、漂白粉、新洁尔灭、甲醛以及 环氧乙烷等。
• 对抗菌药物的敏感性 –一般认为磺胺类药物对鼠疫菌只有抑 制作用，而无杀灭作用。
• 也有认为是由于鼠疫菌具有坚固的荚膜，内含 水份将菌体本质压缩至两端，或者说两端有易 着色的小颗粒，故而呈现两极浓染。
• 鼠疫菌虽有其典型的形态和染色特征， 但变形杆菌、大肠杆菌、假结核菌、结 肠炎菌、鼠伤寒沙门氏菌等肠道杆菌也 有类似形态。所以镜检形态仅其中之一。
鼠疫菌的营养需求
• 鼠疫菌在生长发育过程中需要一定的营养成份， 其中最基本的是氨基酸、糖和金属离子。
• 根据国内外学者研究结果证实，鼠疫菌在28℃ 生长时必需的氨基酸是苯丙氨酸、甲硫氨酸和 胱氨酸。缬氨酸、异亮氨酸和甘氨酸可作为生
长刺激剂。其氨基氮的含量不能低于 50mg%(75mg%) 还需加入适当的刺激剂。
培养特性
• 鼠疫菌为需氧菌或兼性厌氧菌。在氧气 充足时发育良好，但氧压过高则对其生 长有不利影响。在厌氧环境中亦可生长， 但较缓慢，常出现变形。
–鼠疫菌在低温情况下不易死亡。在冰冻 的尸体中可存活5--12个月。
–鼠疫菌对高温相当敏感，在干热160℃ 时仅忍受1分钟，145℃5分钟，但煮沸时 数秒钟即死亡。
–对鼠疫菌常用的消毒剂有升汞、来苏儿、 石碳酸、漂白粉、新洁尔灭、甲醛以及 环氧乙烷等。
• 对抗菌药物的敏感性 –一般认为磺胺类药物对鼠疫菌只有抑 制作用，而无杀灭作用。
• 也有认为是由于鼠疫菌具有坚固的荚膜，内含 水份将菌体本质压缩至两端，或者说两端有易 着色的小颗粒，故而呈现两极浓染。
• 鼠疫菌虽有其典型的形态和染色特征， 但变形杆菌、大肠杆菌、假结核菌、结 肠炎菌、鼠伤寒沙门氏菌等肠道杆菌也 有类似形态。所以镜检形态仅其中之一。
鼠疫菌的营养需求
• 鼠疫菌在生长发育过程中需要一定的营养成份， 其中最基本的是氨基酸、糖和金属离子。
• 根据国内外学者研究结果证实，鼠疫菌在28℃ 生长时必需的氨基酸是苯丙氨酸、甲硫氨酸和 胱氨酸。缬氨酸、异亮氨酸和甘氨酸可作为生
长刺激剂。其氨基氮的含量不能低于 50mg%(75mg%) 还需加入适当的刺激剂。
培养特性
• 鼠疫菌为需氧菌或兼性厌氧菌。在氧气 充足时发育良好，但氧压过高则对其生 长有不利影响。在厌氧环境中亦可生长， 但较缓慢，常出现变形。
最新鼠疫临床 诊断 治疗ppt课件
13.04.2021
这几种侵入部位的损伤，都伴有淋巴结 炎。在腺肿发展过程中，鼠疫菌突破淋 巴结，继之侵入血循环，成为临床上继 发性败血型鼠疫。通过血循环侵入到肺 脏，成为继发性肺鼠疫。侵入到脑部成 脑膜炎型鼠疫。如果大量鼠疫菌自呼吸 道侵入肺脏，则造成原发性肺鼠疫。如 果大量鼠疫菌直接侵入血循环，顺血行 引起全身感染，在各脏器官及组织内形 成多发性感染病灶，则成为原发性败血 型鼠疫
13.04.2021
原发性肺鼠疫 是鼠疫临床上最重的病型， 不仅病死率高，而且在流行病学方面危害 也最大。除具有严重的一般临床症状之外， 还有呼吸道感染的特殊症状。潜伏期短， 发病急剧，恶寒，高热达40-41℃，脉搏 细速每分钟120-130次，呼吸促迫，每分 钟24—32次或更快。病人颜面潮红，眼结 膜充血，由于呼吸困难、缺氧，导致口唇、 颜面及四肢皮肤发绀，甚至全身发绀，故 有“黑死病”之称
13.04.2021
旱獭疫源地鼠疫病型(1991-2005)
7.56% 0.84%
10.08% 20.17%
肺
腺
败
61.34%
肠
扁
13.04.2021
(二) 鉴别诊断
在鼠疫疫区流行时具有典型临床症状者诊断不 困难。但在非鼠疫疫区首发病例尤其是症状不 典型往往容易误诊。在国内、外都曾经发生过 误诊，因此贻误疫区处理的时机，或不是鼠疫 而误诊为鼠疫，进行疫区的封锁隔离，都使人 民生命财产受到损失。临床医生是最先接触病 人的，所以应熟悉鼠疫临床知识，结合流行病 学、细菌学、血清学结果进行综合判断，及早 做出确切诊断，它不仅关系到病人的预后，而 且对防止疫情扩大蔓延也具有决定性意义
13.04.2021
三 鼠疫临床
（一）鼠疫的临床分型 根据鼠疫菌的毒力强弱，侵入机体的部 位及感染途径，以及病人机体抵抗力的 强弱的不同，病原体在机体内的定位也 有所不同，临床上一般将鼠疫病分为下 列几型
这几种侵入部位的损伤，都伴有淋巴结 炎。在腺肿发展过程中，鼠疫菌突破淋 巴结，继之侵入血循环，成为临床上继 发性败血型鼠疫。通过血循环侵入到肺 脏，成为继发性肺鼠疫。侵入到脑部成 脑膜炎型鼠疫。如果大量鼠疫菌自呼吸 道侵入肺脏，则造成原发性肺鼠疫。如 果大量鼠疫菌直接侵入血循环，顺血行 引起全身感染，在各脏器官及组织内形 成多发性感染病灶，则成为原发性败血 型鼠疫
13.04.2021
原发性肺鼠疫 是鼠疫临床上最重的病型， 不仅病死率高，而且在流行病学方面危害 也最大。除具有严重的一般临床症状之外， 还有呼吸道感染的特殊症状。潜伏期短， 发病急剧，恶寒，高热达40-41℃，脉搏 细速每分钟120-130次，呼吸促迫，每分 钟24—32次或更快。病人颜面潮红，眼结 膜充血，由于呼吸困难、缺氧，导致口唇、 颜面及四肢皮肤发绀，甚至全身发绀，故 有“黑死病”之称
13.04.2021
旱獭疫源地鼠疫病型(1991-2005)
7.56% 0.84%
10.08% 20.17%
肺
腺
败
61.34%
肠
扁
13.04.2021
(二) 鉴别诊断
在鼠疫疫区流行时具有典型临床症状者诊断不 困难。但在非鼠疫疫区首发病例尤其是症状不 典型往往容易误诊。在国内、外都曾经发生过 误诊，因此贻误疫区处理的时机，或不是鼠疫 而误诊为鼠疫，进行疫区的封锁隔离，都使人 民生命财产受到损失。临床医生是最先接触病 人的，所以应熟悉鼠疫临床知识，结合流行病 学、细菌学、血清学结果进行综合判断，及早 做出确切诊断，它不仅关系到病人的预后，而 且对防止疫情扩大蔓延也具有决定性意义
13.04.2021
三 鼠疫临床
（一）鼠疫的临床分型 根据鼠疫菌的毒力强弱，侵入机体的部 位及感染途径，以及病人机体抵抗力的 强弱的不同，病原体在机体内的定位也 有所不同，临床上一般将鼠疫病分为下 列几型
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鼠疫实验室检测技术
PPT学习交流
1
鼠疫实验室检测
• 针对病原体本身的生长繁殖、生理生化特性的检测： 鼠疫菌的染色检查；鼠疫菌的培养及鼠疫噬菌体试 验；鼠疫菌的生化检查、营养需求、毒素检测、毒 力测定等。
• 针对病原体特异性抗原结构的检测：鼠疫F1抗原抗 体检测；鼠疫菌外膜蛋白的检测。
• 针对病原体遗传基因的检测：鼠疫菌的质粒检测； 鼠疫菌特异性核酸片断的检测；鼠疫菌全基因组测 定；插入序列的检测。
PPT学习交流
7
鼠疫噬菌体试验
➢在培基上密集平行划线培养鼠疫菌，鼠疫噬菌体滴 于上端划线中部，直立平板，使噬菌体液垂直划线 自然流下，置20℃培养24h,有明显的噬菌带。
➢在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假 结核菌，具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异 性)，是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。
OPD或TMB)蔽光反应30min显色后 液37℃静置1h洗板，加HRP标记的羊
加终止液。
抗小鼠IgG 37℃反应1h洗板,加底物
用肉眼观察结果并用酶标仪检测每孔 OPD蔽光反应30min显色，加终止液。
的吸光度值(A)
肉眼观察结果并用酶标仪检测每孔的
吸光度值(A)
PPT学习交流
14
胶体金免疫层析法(GICA)
PPT学习交流
11
间接红血球凝集试验(IHA)
• 鼠疫菌特异性F1抗原致敏经单宁酸鞣化 处理的醛化绵羊红血球，制备成F1抗原 致敏血球，检查鼠疫特异性F1抗体。试 验方法和结果判定均为常规操作。
• IHA微量Leabharlann 结果：PPT学习交流12
反向血球凝集试验(RIHA)
• 用F1抗体致敏血球，检查鼠疫特异性F1 抗原。试验方法和结果判定与IHA相同。
• 夹心法测抗体：固定于膜上的鼠疫F1抗原＋标本中的相 应抗体＋金标记的SPA显色。
PPT学习交流
15
GICA双抗体夹心法—测抗原
标本
G区：金标特异性抗体 (鼠型F1McAb)
T区：特异性单 克隆抗体
(F1McAb)
吸水纸
C区：羊抗 小鼠Ig
PPT学习交流
16
免疫荧光技术(IFT)
• 标记物-荧光素(如异硫氰荧光素 FITC)
➢鼠疫噬菌体试验可快速诊断鼠疫菌。对被检材料作 细菌分离培养的同时作噬菌体裂解试验，20h左右即 可获得结果。
➢分离到鼠疫噬菌体，可以间接判定检材中存在鼠疫 菌。
PPT学习交流
8
鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验
• 典型鼠疫菌菌落形态
• 噬菌带
PPT学习交流
9
鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验
• 鼠疫菌培养特征
PPT学习交流
2
一、鼠疫菌菌体形态检查
• 典型的鼠疫菌呈短而粗，菌体长1~2µm，宽0.5~0.7µm, 中段膨大，两端钝圆，且两极浓染的卵圆形小杆菌， 有荚膜，无鞭毛，无芽胞。革兰氏染色阴性。
• 染疫动物或患者及其尸体的新鲜脏器制备的压印片， 可见到两端钝圆、两极浓染的典型鼠疫菌。压印标本 中可在吞噬细胞内外见到鼠疫菌，对于鉴别杂菌污染 材料极有价值。
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二、鼠疫菌的培养特性
鼠疫菌是典型的异养菌。 鼠疫菌为需氧菌，亦为兼性厌氧菌。 鼠疫菌在普通培基上生长良好，培养的最适温度为28℃，最适
pH为6.9-7.1，发育初期的最适氧化还原电位（Eh）约为 100~150mV，接种后至少20h以上才能形成肉眼可见的菌落， 一般24~48h形成肉眼可见的小菌落。 强毒鼠疫菌对钙离子有半依赖性，缺乏时生长不良。37℃缺钙 条件下强毒鼠疫菌生长受限并释放大量Yops,表现很强的表达和 分泌毒力蛋白V抗原（LcrV）。此现象称为低钙反应，受 70kb(45MD)质粒上的遗传基因控制。 典型鼠疫菌培养18-20h光镜下呈透明的碎玻璃片状。培养24h 以上菌落在透过光线下呈灰白色略带淡青色，反射光线下菌落圆 形隆起呈淡灰白色，镜下见菌落中心发暗，有黄褐色粗糙颗粒， 周边围绕一圈宽窄不等，边缘不整呈锯齿状、薄而透明的花边。
• 鼠疫菌染色方法有革兰氏染色（菌体染成红色）、美 兰染色（菌体染成兰色，两极浓染明显）、姬姆萨染 色（菌体染成色，荚膜染成色）
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鼠疫菌染色检查(脏器压印片)
• 革兰氏染色
• 美兰染色
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鼠疫菌染色
• 鼠疫菌涂片的革兰氏染色
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鼠疫菌染色检查
• Wayson stain(魏申氏染 • 荚膜染色—墨汁负染色 色)呈现的两极浓染特征
• 检测鼠疫菌特异性抗原、抗体的金标技术以GICA广泛 用于实践。基本原理均为夹心法。
• 双抗体夹心法测抗原：固定于NC膜上的单抗 (F1McAb)+标本中待测抗原(F1Ag)+金标记的另一株单 抗(金标-F1McAb)显色。
• 双抗原夹心法测抗体：固定于NC膜上的鼠疫F1抗原 (F1Ag)+标本中待测抗体(F1Ab)+金标记的F1抗原(金标F1Ag)显色。
• 鼠疫噬菌体试验
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三、鼠疫F1抗原、抗体检测
• 鼠疫F1抗原检测 1.反向血球凝集试验(RIHA) 2.酶联免疫吸附试验(ELISA) 3.胶体金免疫层析法(GICA) 4.免疫荧光技术(IFT)
• 鼠疫F1抗体检测 1.间接血球凝集试验(IHA) 2.酶联免疫吸附试验(ELISA) 3.胶体金免疫层析法(GICA)
• Yersinia pestis 免疫荧光染色
• 荧光素标记抗体检测相应抗原-直 接法：如FITC-FIMcAb为异硫氰酸 荧光黄标记鼠疫F1单克隆抗体。
入底物OPD蔽光反应30min后加终止 底物OPD蔽光反应30min后加终止液。
液(2mol/L硫酸)。
双抗体夹心法(改良法-美国CDC鼠疫诊
间接法： 已知F1抗原包被反应板， 断技术实验室操作手册)：鼠疫免疫血
加标本37℃反应1h洗板，加入酶标 二抗37℃反应1h洗板，加入底物(如
清特异性抗体( F1Ab)包被反应板，加 标本37℃反应1h洗板，加小鼠F1McAb
• RIHA微量法结果：
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酶联免疫吸附试验(ELISA)
• 测抗体.
• 测抗原
双抗原夹心法：F1抗原包被反应板， 加入待测标本28℃反应1.5h洗板，加 入HRP-F1抗原28℃反应1h洗板，加
双单抗夹心法： F1-McAb包被反应板， 加入标本28℃反应1.5h洗板，加入 HRP-F1McAb 28℃反应1h洗板，加入
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1
鼠疫实验室检测
• 针对病原体本身的生长繁殖、生理生化特性的检测： 鼠疫菌的染色检查；鼠疫菌的培养及鼠疫噬菌体试 验；鼠疫菌的生化检查、营养需求、毒素检测、毒 力测定等。
• 针对病原体特异性抗原结构的检测：鼠疫F1抗原抗 体检测；鼠疫菌外膜蛋白的检测。
• 针对病原体遗传基因的检测：鼠疫菌的质粒检测； 鼠疫菌特异性核酸片断的检测；鼠疫菌全基因组测 定；插入序列的检测。
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鼠疫噬菌体试验
➢在培基上密集平行划线培养鼠疫菌，鼠疫噬菌体滴 于上端划线中部，直立平板，使噬菌体液垂直划线 自然流下，置20℃培养24h,有明显的噬菌带。
➢在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假 结核菌，具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异 性)，是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。
OPD或TMB)蔽光反应30min显色后 液37℃静置1h洗板，加HRP标记的羊
加终止液。
抗小鼠IgG 37℃反应1h洗板,加底物
用肉眼观察结果并用酶标仪检测每孔 OPD蔽光反应30min显色，加终止液。
的吸光度值(A)
肉眼观察结果并用酶标仪检测每孔的
吸光度值(A)
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胶体金免疫层析法(GICA)
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间接红血球凝集试验(IHA)
• 鼠疫菌特异性F1抗原致敏经单宁酸鞣化 处理的醛化绵羊红血球，制备成F1抗原 致敏血球，检查鼠疫特异性F1抗体。试 验方法和结果判定均为常规操作。
• IHA微量Leabharlann 结果：PPT学习交流12
反向血球凝集试验(RIHA)
• 用F1抗体致敏血球，检查鼠疫特异性F1 抗原。试验方法和结果判定与IHA相同。
• 夹心法测抗体：固定于膜上的鼠疫F1抗原＋标本中的相 应抗体＋金标记的SPA显色。
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GICA双抗体夹心法—测抗原
标本
G区：金标特异性抗体 (鼠型F1McAb)
T区：特异性单 克隆抗体
(F1McAb)
吸水纸
C区：羊抗 小鼠Ig
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免疫荧光技术(IFT)
• 标记物-荧光素(如异硫氰荧光素 FITC)
➢鼠疫噬菌体试验可快速诊断鼠疫菌。对被检材料作 细菌分离培养的同时作噬菌体裂解试验，20h左右即 可获得结果。
➢分离到鼠疫噬菌体，可以间接判定检材中存在鼠疫 菌。
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鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验
• 典型鼠疫菌菌落形态
• 噬菌带
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鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验
• 鼠疫菌培养特征
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一、鼠疫菌菌体形态检查
• 典型的鼠疫菌呈短而粗，菌体长1~2µm，宽0.5~0.7µm, 中段膨大，两端钝圆，且两极浓染的卵圆形小杆菌， 有荚膜，无鞭毛，无芽胞。革兰氏染色阴性。
• 染疫动物或患者及其尸体的新鲜脏器制备的压印片， 可见到两端钝圆、两极浓染的典型鼠疫菌。压印标本 中可在吞噬细胞内外见到鼠疫菌，对于鉴别杂菌污染 材料极有价值。
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二、鼠疫菌的培养特性
鼠疫菌是典型的异养菌。 鼠疫菌为需氧菌，亦为兼性厌氧菌。 鼠疫菌在普通培基上生长良好，培养的最适温度为28℃，最适
pH为6.9-7.1，发育初期的最适氧化还原电位（Eh）约为 100~150mV，接种后至少20h以上才能形成肉眼可见的菌落， 一般24~48h形成肉眼可见的小菌落。 强毒鼠疫菌对钙离子有半依赖性，缺乏时生长不良。37℃缺钙 条件下强毒鼠疫菌生长受限并释放大量Yops,表现很强的表达和 分泌毒力蛋白V抗原（LcrV）。此现象称为低钙反应，受 70kb(45MD)质粒上的遗传基因控制。 典型鼠疫菌培养18-20h光镜下呈透明的碎玻璃片状。培养24h 以上菌落在透过光线下呈灰白色略带淡青色，反射光线下菌落圆 形隆起呈淡灰白色，镜下见菌落中心发暗，有黄褐色粗糙颗粒， 周边围绕一圈宽窄不等，边缘不整呈锯齿状、薄而透明的花边。
• 鼠疫菌染色方法有革兰氏染色（菌体染成红色）、美 兰染色（菌体染成兰色，两极浓染明显）、姬姆萨染 色（菌体染成色，荚膜染成色）
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鼠疫菌染色检查(脏器压印片)
• 革兰氏染色
• 美兰染色
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鼠疫菌染色
• 鼠疫菌涂片的革兰氏染色
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鼠疫菌染色检查
• Wayson stain(魏申氏染 • 荚膜染色—墨汁负染色 色)呈现的两极浓染特征
• 检测鼠疫菌特异性抗原、抗体的金标技术以GICA广泛 用于实践。基本原理均为夹心法。
• 双抗体夹心法测抗原：固定于NC膜上的单抗 (F1McAb)+标本中待测抗原(F1Ag)+金标记的另一株单 抗(金标-F1McAb)显色。
• 双抗原夹心法测抗体：固定于NC膜上的鼠疫F1抗原 (F1Ag)+标本中待测抗体(F1Ab)+金标记的F1抗原(金标F1Ag)显色。
• 鼠疫噬菌体试验
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三、鼠疫F1抗原、抗体检测
• 鼠疫F1抗原检测 1.反向血球凝集试验(RIHA) 2.酶联免疫吸附试验(ELISA) 3.胶体金免疫层析法(GICA) 4.免疫荧光技术(IFT)
• 鼠疫F1抗体检测 1.间接血球凝集试验(IHA) 2.酶联免疫吸附试验(ELISA) 3.胶体金免疫层析法(GICA)
• Yersinia pestis 免疫荧光染色
• 荧光素标记抗体检测相应抗原-直 接法：如FITC-FIMcAb为异硫氰酸 荧光黄标记鼠疫F1单克隆抗体。
入底物OPD蔽光反应30min后加终止 底物OPD蔽光反应30min后加终止液。
液(2mol/L硫酸)。
双抗体夹心法(改良法-美国CDC鼠疫诊
间接法： 已知F1抗原包被反应板， 断技术实验室操作手册)：鼠疫免疫血
加标本37℃反应1h洗板，加入酶标 二抗37℃反应1h洗板，加入底物(如
清特异性抗体( F1Ab)包被反应板，加 标本37℃反应1h洗板，加小鼠F1McAb
• RIHA微量法结果：
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酶联免疫吸附试验(ELISA)
• 测抗体.
• 测抗原
双抗原夹心法：F1抗原包被反应板， 加入待测标本28℃反应1.5h洗板，加 入HRP-F1抗原28℃反应1h洗板，加
双单抗夹心法： F1-McAb包被反应板， 加入标本28℃反应1.5h洗板，加入 HRP-F1McAb 28℃反应1h洗板，加入